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- 2 篇 教育学

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11 篇 金黄色葡萄球菌
11 篇 黏菌素
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10 篇 生物被膜
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9 篇 hplc
9 篇 肠球菌
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机构

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36 篇 东北农业大学
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19 篇 青岛农业大学
19 篇 广西大学
17 篇 福建农林大学
17 篇 中国农业科学院兰...
14 篇 湖南农业大学
13 篇 沈阳农业大学
13 篇 华中农业大学
12 篇 内蒙古农业大学
10 篇 北京食品营养与人...
10 篇 西北农林科技大学
10 篇 河南农业大学
10 篇 中国农业科学院兰...

作者

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29 篇 刘雅红
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27 篇 杨亚军
27 篇 沈建忠
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排序：

峨眉千里光水提物对SD大鼠肝损伤的研究

峨眉千里光水提物对SD大鼠肝损伤的研究

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：林居纯何丽霞何雪梅曹光秀金山周建瑜四川农业大学动物医学院 625014

[目的]为了解峨眉千里光水提物对肝脏的毒性作用.[方法]将40只SD大鼠,随机分为4组.经口灌胃峨眉千里光水提物剂量分别为5.444g/kg、1.633g/kg、0.544g/kg,同时设灌服等体积蒸馏水为阴性对照,1次/d,连续100天.试验结束时检测各组大鼠血... 详细信息

[目的]为了解峨眉千里光水提物对肝脏的毒性作用.[方法]将40只SD大鼠,随机分为4组.经口灌胃峨眉千里光水提物剂量分别为5.444g/kg、1.633g/kg、0.544g/kg,同时设灌服等体积蒸馏水为阴性对照,1次/d,连续100天.试验结束时检测各组大鼠血液生理和生化指标;对所有大鼠进行病理解剖,观察肝组织病理学及肝细胞超微结构的变化.[结果]峨眉千里光组大鼠的血液生理指标与阴性对照组无显著性差异(P＞0.05);除5.444g/kg组大鼠ALT、ALP比对照组有显著升高(P＜0.05)外,其余各组,以及其他生化指标与对照无差异(P＞0.05);肝脏病理变化主要发生在5.444g/kg组,表现为大鼠肝色泽深,呈暗红色,轻微肿大,肝指数比对照高,但无统计学意义(P＞0.05).肝细胞出现肿胀,有的呈空泡变性,肝窦扩张瘀血严重;肝细胞超微结构主要表现为细胞线粒体和粗面内质网发生变化明显,线粒体嵴消失、肿胀破裂、膜模糊不清.粗面内质网断裂、聚集,包绕线粒体、微体等,形成指纹轮状结构.[结论]峨眉千里光水提物对SD大鼠肝功能有影响,主要通过改变肝细胞线粒体和粗面内质网的结构造成肝损伤.

关键词：峨眉千里光水提物 SD大鼠 100天喂养肝损伤

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苘麻叶总多酚和总黄酮的提取工艺及抗菌活性研究

苘麻叶总多酚和总黄酮的提取工艺及抗菌活性研究

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：田春莲张德显付喜爱周维刘明春沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866

[目的]本研究旨在优化苘麻叶总多酚和总黄酮的最佳提取工艺,并评价两者的抗菌活性,为兽医临床抗菌中药的开发和研究奠定一定的基础.[方法]采用超声波提取法,通过乙醇浓度、料液比和提取时间三个单因素试验和正交试验(L9 34),明确苘麻叶... 详细信息

[目的]本研究旨在优化苘麻叶总多酚和总黄酮的最佳提取工艺,并评价两者的抗菌活性,为兽医临床抗菌中药的开发和研究奠定一定的基础.[方法]采用超声波提取法,通过乙醇浓度、料液比和提取时间三个单因素试验和正交试验(L9 34),明确苘麻叶总多酚和总黄酮的提取工艺;采用微量肉汤稀释法测定苘麻叶总多酚和总黄酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌标准株及11个分离株的MIC值.[结果]苘麻叶总多酚的最佳提取工艺为A3B3C1,即乙醇浓度40％、料液比m苘麻∶V乙醇=1∶30 (g/mL)、提取时间20 min、提取两次;其中B因素即料液比对总多酚的提取具有显著性影响(P＞0.05).在此条件下,测得苘麻叶总多酚的含量为(9.76 ±0.10) mg/g.总黄酮的最佳提取工艺为A2B3C1,即乙醇浓度60％、料液比m苘麻∶V乙醇=1∶30 (g/mL)、提取时间20 min、提取两次;其中A因素即乙醇浓度对总多酚的提取具有显著性影响(P＞0.05).在此条件下,测得苘麻叶总黄酮的含量为(16.79 ±0.19) mg/g.苘麻叶总多酚对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值范围分别为2.45 ～4.9 μg/mL和1.225～ 4.9 μg/mL;苘麻叶总黄酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值范围分别为8.7 μg/mL和2.175 ～ 8.7 μg/mL.[结论]本研究通过单因素试验和正交试验确定了苘麻叶总多酚和总黄酮的最佳提取工艺,苘麻叶总多酚和总黄酮对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性,为临床中兽药的开发和研究奠定了基础.

关键词：苘麻叶总多酚总黄酮提取工艺抗菌活性

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N-乙酰半胱胺酸通过恢复自噬保护黏菌素诱发的小鼠肾毒性

N-乙酰半胱胺酸通过恢复自噬保护黏菌素诱发的小鼠肾毒性

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：代重山张朝明李继昌汤树生肖希龙中国农业大学动物医学院药理与毒理教研室北京海淀100193 东北农业大学动物医学学院药理与毒理教研室黑龙江哈尔滨150030

目的探究自噬在黏菌素对小鼠亚急性肾毒性中的角色及N-乙酰半胱胺酸(NAC)对其保护的相关分子机制.方法 30只雌性昆明系小鼠随机分为对照组、黏菌素组、黏菌素+ NAC组,黏菌素组小鼠静脉注射硫酸黏菌素15 mg·kg-1·d-1,分2次给... 详细信息

目的探究自噬在黏菌素对小鼠亚急性肾毒性中的角色及N-乙酰半胱胺酸(NAC)对其保护的相关分子机制.方法 30只雌性昆明系小鼠随机分为对照组、黏菌素组、黏菌素+ NAC组,黏菌素组小鼠静脉注射硫酸黏菌素15 mg·kg-1·d-1,分2次给药(间隔12 h),黏菌素+NAC组在此基础上腹腔注射NAC150 mg/kg,对照组给予等量的生理盐水,连续给药7d后,试剂盒检测小鼠血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)含量变化及小鼠肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,组织学变化进行半定量评价(SQS),western-blot法测定肾脏组织中Bcl-2、p53及自噬相关标志物LC3、Beclin1.结果与对照组相比,模型组小鼠Cre及BUN含量均显著升高(均p ＜0.01),MDA含量显著升高(p＜0.01),SOD活性显著降低(p＜0.01),SQS评分显著增加(p＜0.01),Bcl-2、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白含量显著降低(p＜0.01、0.05和0.05),p53蛋白表达显著升高(p＜0.01);当小鼠联合给予NAC后,与黏菌素组相比,小鼠血清Cre、BUN,肾组织中MDA含量、p53蛋白表达及SQS评分均显著降低(均p＜0.01),SOD活性显著升高(p＜0.01),LC3、Beclin1蛋白表达显著加(p＜0.05).结论黏菌素可通过上调小鼠肾组织中p53蛋白,抑制Bcl-2、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达,表明自噬活性的下调与凋亡能力的上调参与黏菌素肾毒性调控;NAC可通过上调自噬活性、抑制凋亡保护黏菌素对小鼠的肾毒性作用.

关键词：黏菌素小鼠自噬凋亡

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mIgY,一种新型的抗体及抗体药物研发平台

mIgY,一种新型的抗体及抗体药物研发平台

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：张小莺陈红秀江雪梅仇华吉西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,... 详细信息

目的：通过构建猪IFN-γ的噬菌体展示禽源scFv抗体文库,制备高特异性的scFv抗体.方法：1、构建猪IFN-γ的禽源噬菌体展示抗体文库.免疫SPF鸡4次后,提取SPF鸡脾脏mRNA,反转录为cDNA后,以cDNA为模板扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,并进一步经融合PCR扩增单链抗体(scFv)基因.scFv与pCATAB5E均通过SfiI/NotI酶切后,scFv克隆至pCATAB5E噬菌粒载体,构建噬菌体展示抗体文库,随机挑取的10个克隆;2、抗体基因的大量表达.将随机挑取的10个克隆的抗体基因克隆至原核表达载体pET30a,优化诱导表达条件,并用Ni+柱进行纯化.结果：在噬菌体展示抗体文库中随机挑取的10个克隆,反应性均很高;诱导表达结果显示20℃,0.4mM IPTG,10h为最佳表达条件;可溶性scFv抗体的终浓度为5mg/mL,经ELISA、Western blot和间接免疫荧光检测反应性良好,与鼠源单抗平行比较发现,鸡scFv反应性较鼠源单抗高.结论：本研究构建了猪IFN-γ的噬菌体展示鸡源scFv抗体文库,并制备高特异性的scFv抗体;同时与鼠源单抗进行比较,初步确认了禽源单抗的特殊优势;这些研究结果支持了构建禽源单克隆抗体研发平台的设想,不失为一种有效的抗体研发替代途径.

关键词：禽源单克隆IgY抗体药物开发猪干扰素-γ 噬菌体展示技术

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喹烯酮及其代谢物在鸡可食性组织的残留消除规律研究

喹烯酮及其代谢物在鸡可食性组织的残留消除规律研究

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：雍燕张桂君徐立萧张亚平杨德学方炳虎华南农业大学兽医学院/国家兽药残留基准实验室广州510642

目的:喹烯酮(Quinocetone)是由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所开发的一类新兽药,迄今无残留靶组织、残留标示物等食品安全性标准.本研究采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS),开展喹烯酮及其代谢物N1-脱氧喹烯酮(Q2),脱二氧喹烯... 详细信息

目的:喹烯酮(Quinocetone)是由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所开发的一类新兽药,迄今无残留靶组织、残留标示物等食品安全性标准.本研究采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS),开展喹烯酮及其代谢物N1-脱氧喹烯酮(Q2),脱二氧喹烯酮(Q4),脱二氧羰基还原喹烯酮(Q43),3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)在鸡可食性组织的残留消除规律研究.方法:采用78只健康科宝-500白羽肉鸡,随机均分成13组,一组作为空白对照.其余各组以50mg/kg b.w.剂量连续灌服喹烯酮7天,每天2次,分别于停药后4、6、12h、1、3、5、7、9、11、14、17、21d随机宰杀一组并采集鸡可食性组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮脂),HPLC-MS/MS测定喹烯酮及其代谢物在各组织的残留量.并计算喹烯酮及其代谢物在各组织的消除动力学参数.结果:喹烯酮原形和Q2均在四种组织中检出,在肾脏中残留量最多,残留时间最长;Q4在皮脂中未检出,肝脏残留量最多,但消除迅速;Q43仅在停药后6h肝脏中检出微量,其它组织未检出;MQCA在各组织中的残留量都明显高于其它化合物,并在肾脏中含量最多,在肝脏的残留时间最长.结论:喹烯酮及其代谢物均主要在鸡肝脏或肾脏中残留,且MQCA残留量最多,消除最慢.建议将MQCA作为残留标示物的重要考查对象,肾脏和肝脏作为残留监控的靶组织.

关键词：食品安全鸡可食性组织喹烯酮代谢物残留消除规律

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2012年山东省猪源葡萄球菌cfr基因流行情况及遗传环境研究

2012年山东省猪源葡萄球菌cfr基因流行情况及遗传环境研究

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：赵琴汪洋吴聪明沈建忠中国农业大学动物医学院 100193

[目的]为调查多药耐药基因cfr在山东省猪源葡萄球菌中的流行情况及遗传环境,[方法]采用常规PCR检测山东青岛,济宁,临沂等5个猪场或屠宰场所采集的298株耐氟苯尼考(MIC≥16mg/L)猪源细菌中cfr基因的存在情况,并结合随机引物扩增分析其遗...

[目的]为调查多药耐药基因cfr在山东省猪源葡萄球菌中的流行情况及遗传环境,[方法]采用常规PCR检测山东青岛,济宁,临沂等5个猪场或屠宰场所采集的298株耐氟苯尼考(MIC≥16mg/L)猪源细菌中cfr基因的存在情况,并结合随机引物扩增分析其遗传环境,同时通过Southern印记杂交定位cfr基因.[结果]检测出5株含有cfr基因的细菌,16S rRNA测序表明其均为葡萄球菌属细菌,包括2株科氏葡萄球菌,2株马胃葡萄球菌,1株产色葡萄球菌,其中马胃葡萄球菌和产色葡萄球菌均是第1次发现有多药耐药基因cfr的存在.Southern印记杂交结果显示除了1株科氏葡萄球菌定位于染色体,其余均定位质粒.序列分析发现5株cfr阳性菌中有3株(2株科氏葡萄球菌和1株马胃葡萄球菌)的cfr侧翼均与pSS02一致.而在临沂发现的马胃葡萄球菌的cfr遗传环境与已报道的均不一致,它的上游存在一个转座酶和插入序列IS21-558,下游携带一个阳离子排外蛋白以及ABC-Ⅱ型运输系统通透酶蛋白.而对于在济宁发现的1株产色葡萄球菌的cfr基因遗传环境,我们通过多次随机引物扩增以及反向PCR均为未能得到其侧翼序列.结果表明：质粒在多药耐药基因cfr的传播中发挥了重要作用,而且即使定位在不同的位置上,其基因传播途径也可能一致.同时随着养猪业的发展,多药耐药基因cfr的遗传环境越来越呈现多样化.

关键词：

来源：评论

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实验室模拟鸡毒支原体-大肠杆菌混合感染模型

实验室模拟鸡毒支原体-大肠杆菌混合感染模型

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：肖霞华南农业大学 510642

[目的]鸡毒支原体流行于全世界鸡场中,在中国也非常普遍.根据血清学调查,其在我国的感染率为70％-80％,当其与大肠杆菌同时感染时便可引起鸡群慢性呼吸道病,造成生长速度下降,产蛋量降低,饲料转化率降低,病死率升高.本文通过实验室人工... 详细信息

[目的]鸡毒支原体流行于全世界鸡场中,在中国也非常普遍.根据血清学调查,其在我国的感染率为70％-80％,当其与大肠杆菌同时感染时便可引起鸡群慢性呼吸道病,造成生长速度下降,产蛋量降低,饲料转化率降低,病死率升高.本文通过实验室人工感染肉鸡使其发病,为对该病的进一步研究打下基础.[方法]首先将实验室冻存的鸡毒支原体强毒标准株S6接种5日龄鸡腹腔气囊进行复壮,3天后从该小鸡气囊,气管等处分离鸡毒支原体.分离的菌株通过显微镜鉴定,并纯化.从无鸡毒支原体病史的鸡场中购买30只35日龄三黄鸡,通过平板凝集试验检测其鸡毒支原体抗体为阴性后,饲养5天,通过左右腹腔气囊各接种培养36h的鸡毒支原体菌液1.5ml,再通过点眼滴鼻1ml;同时通过胸肌注射培养4h的大肠杆菌O78 0.15ml.用锥形瓶装氨水放于鸡舍的四个角落,每天更换一次,用于提供一个氨气浓度比较高的环境.[结果]5天后可观察到鸡群颜面肿胀,眼中含泪水,张口呼吸,可听到明显罗音,翅膀下垂,精神抑郁,拉稀便.通过平板凝集试验检测鸡毒支原体抗体,阳性率为90％,剖解进行病理组织学检查发现气管充血,气囊增厚,有黄色样物质附着,心包炎,肝增大.5天内发病率为85％,死亡率为7％.2周后死亡率为55％.[结论]各项指标表明,该病理模型可模拟临床鸡毒支原体合并大肠杆菌感染.

关键词：鸡毒支原体鸡慢性呼吸道疾病病理模型

来源：评论

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沃尼妙林对金黄色葡萄球菌的体外PK/PD特性研究

沃尼妙林对金黄色葡萄球菌的体外PK/PD特性研究

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：赵东豪于洋周宇峰刘雅红华南农业大学兽医学院广东广州510642

[目的]本研究采用体外模拟静脉注射给药,对比沃尼妙林单次给药和多次给药对金黄色葡萄球菌的抗菌效果,找出该药的主要PK/PD参数,判断沃尼妙林的PK/PD分类.[方法]体外模型的中央室培养基体积维持在150mL,半衰期为3h.将新鲜培养基瓶、带... 详细信息

[目的]本研究采用体外模拟静脉注射给药,对比沃尼妙林单次给药和多次给药对金黄色葡萄球菌的抗菌效果,找出该药的主要PK/PD参数,判断沃尼妙林的PK/PD分类.[方法]体外模型的中央室培养基体积维持在150mL,半衰期为3h.将新鲜培养基瓶、带滤菌功能的中央室和废液瓶依次用软管连接,由两台蠕动泵以34.65mL/h的流速模拟静注给药单室模型的消除过程.给药剂量分别为1.5,3,4.5,6,7.5,9,12,24和48 ×MIC,单次给药或分为每天3次(0,8和16h)给药.通过C=C0 ·e-k·t和Cn=C0·e-k·t分别计算单次和多次给药后的药物浓度,用WinNonlin软件计算各药动学参数.将过夜培养的细菌接种至中央室,使其初始菌量约为106.5 CFU/mL.预培养1h以使细菌适应新环境.依次在给药前及给药后2,4,6,8,16和24h采样,悬滴于MH平板,细菌计数,制作杀菌曲线.每种给药方案做2个平行.将各PK/PD参数与AlogCFU24h用sigmoid Emax方程拟合,计算其相关性.[结果]沃尼妙林作用于金黄色葡萄球菌时,产生抑菌效果,其抗菌作用呈非浓度依赖性.多次给药的抗菌效果明显优于单次给药.AUC24h/MIC,Cma/MIC和％T ＞MIC与AlogCFU24h的R2值分别为0.88,0.57和0.87.[结论]沃尼妙林的主要PK/PD参数是AUC24h/MIC,％T ＞MIC与药效也具有良好的相关性,沃尼妙林属于时间依赖性抗生素(长PAE).

关键词： PK/PD模型沃尼妙林金黄色葡萄球菌浓度/时间依赖性体外模型

来源：评论

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聚赖氨酸的小鼠精子畸形和骨髓微核及Ames试验

聚赖氨酸的小鼠精子畸形和骨髓微核及Ames试验

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：金之源李维静王雅琴陈秀云卜仕金扬州大学兽医学院江苏扬州225009

[目的]通过聚赖氨酸的小鼠精子畸形和骨髓微核及Ames试验,检测受试品的遗传毒性和致突变性,为聚赖氨酸的进一步开发利用奠定基础.[方法]①小鼠精子畸形试验：50只清洁级昆明小鼠随机分为五组.聚赖氨酸按1/2 LD50(2500 mg/kg b.w.)作为... 详细信息

[目的]通过聚赖氨酸的小鼠精子畸形和骨髓微核及Ames试验,检测受试品的遗传毒性和致突变性,为聚赖氨酸的进一步开发利用奠定基础.[方法]①小鼠精子畸形试验：50只清洁级昆明小鼠随机分为五组.聚赖氨酸按1/2 LD50(2500 mg/kg b.w.)作为高剂量组经口灌服染毒,中剂量组、低剂量组经口染毒的剂量分别为1/4 LD50 (1250 mg/kg b.w.)和1/8 LD50(625 mg/kg b.w.).另分别设一阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg)和阴性对照组(无菌水).小鼠连续经口给予受试物5天,从首次染毒计第35天颈椎脱臼处死动物,取双侧附睾制片,每只动物计数1 000个精子中的畸形数,计算畸形率.②微核试验：50只清洁级昆明小鼠随机分为五组.聚赖氨酸按1/2 LD50(2500 mg/kg b.w.)作为高剂量组经口染毒,中剂量组、低剂量组染毒剂量分别为1/4LD50(1250 mg/kg b.w.)、1/8 LD50(625 mg/kg b.w.)的剂量经口灌服染毒,另分别设一阳性对照组和阴性对照组.采用30 h两次给药法,于第二次给药后6h取材、制片,计算微核率.③Ames试验：利用TA97、TA98、TA100和TA102鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型试验菌株,按GB15193.4-2003鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验方法,测定受试物诱发组氨酸缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌回复突变情况.[结论]试验结果显示,聚赖氨酸对小鼠精子和微核率无影响,聚赖氨酸在500 μg ～0.8 μg范围内,有或无代谢活化系统(S9)时,4种鼠伤寒沙门氏菌试验株的每皿平均回变菌落数均在溶剂(灭菌蒸馏水)对照的两倍以内,未见剂量反应关系.[结论]初步判定聚赖氨酸对生殖细胞无遗传毒性和致突变性.

关键词：聚赖氨酸小鼠精子畸形试验

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成年鸡肝离体灌流与鸡肝细胞原代培养

成年鸡肝离体灌流与鸡肝细胞原代培养

引用

2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会

作者：刘丽吉利伟江善祥南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]本实验利用8-12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞作为实验对象,建立成年鸡肝细胞原代培养的体外模型,为以后利用肝原代细胞模型开展其他实验研究奠定基础.[方法]以改进的胶原酶二步灌流法分离鸡肝细胞,使用胶原酶对鸡肝脏进行消化;利用台... 详细信息

[目的]本实验利用8-12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞作为实验对象,建立成年鸡肝细胞原代培养的体外模型,为以后利用肝原代细胞模型开展其他实验研究奠定基础.[方法]以改进的胶原酶二步灌流法分离鸡肝细胞,使用胶原酶对鸡肝脏进行消化;利用台盼蓝染色法对分离纯化后的肝细胞染色,1 min后在血细胞计数板上进行细胞计数,计算出获得的肝细胞产量和肝细胞实时存活率;用四种不同的细胞基础培养基DMEM培养基、1640培养基、Williams'medium E培养基和Leibovitz's L-15(L-15)培养基对鸡肝细胞进行体外培养,观察在不同的培养基中培养后肝细胞的生长情况;利用MTT法绘制生长曲线,检测细胞存活和生长,以便研究肝细胞的生长周期.[结果]通过结扎肝脏周围血管,将肝脏完整取出后用2％浓度的双抗冲洗浸泡肝脏,不仅缩短了操作时间,还避免了原位灌流时鸡自身可能给肝脏带来的污染,而且肝内血液一直保持抗凝状态,灌流结束后,肝脏呈土黄色,肝包膜内呈糊状;通过细胞计数,计算出从每个肝脏获得的肝细胞总量为(9.2±0.2)×108个,以台盼蓝拒染实验得到肝细胞实时存活率为93％±1％.Williams'medium E培养基贴壁最好,DMEM和L-15次之,1640略差,在长期培养过程中DMEM培养基中细胞稳定周期长,可长期培养2-3周,在DMEM培养条件下,鸡肝细胞体外培养8日内的OD值显示,原代培养3-5d,细胞数量大且稳定,随后有所降低.[结论]改进的二步离体灌流法操作简便,获得的细胞活率高达90％以上;用含胰岛素、转铁蛋白、双抗和10％胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,更经济,效果更好,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程;生长曲线显示3-5d时细胞稳定.

关键词：成年鸡离体灌流鸡肝细胞原代培养

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