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6 篇 临沂师范学院
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6 篇 青岛康地恩药业有...
6 篇 浙江大学
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作者

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287 篇 中文
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小鼠的P-glycoprotein shRNA表达载体的构建与鉴定

小鼠的P-glycoprotein shRNA表达载体的构建与鉴定

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：孙英健龙鼎新张银花沈建忠北京农学院动物科学与技术系中国科学院动物研究所农业虫鼠害国家重点实验室中国农业大学动物医学院

【目的】P-glycoprotein(P-gp)是由MDR1a编码的多药物耐药蛋白,属于ATP酶依赖的ABC转运蛋白超家族(ATP-binding-cassette transporter superfamily),与多种药物的耐药性有关。本文构建了小鼠的P-gp shRNA表达载体,并转染入小鼠的神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)。为研究大环丙酯类药物的耐药性与P-gp蛋白的相互关系建立细胞平台。【方法】根据GenBank中小鼠的P-gp mRNA(NM011076)序列,化学合成引物并直接与载体pGenesil-1连接,酶切鉴定后,转染N2a细胞,然用G418筛选获得了稳定表达的单克隆细胞株后对细胞株进行RT-PCR和Western Blot检测鉴定。【结果】酶切鉴定结果显示干扰质粒构建成功,将其转入N2a细胞并获得稳定表达的该质粒的细胞克隆后,进行鉴定,结果显示我们合成的shRNA干扰质粒对靶基因的抑制效果和蛋白质表达水平均显著下调,蛋白质的表达抑制率在80%以上,转染shRNA的N2a细胞的细胞的形态与相应的对照细胞相比,均没有发生明显变化。【结论】成功构建了针对小鼠的P-gp的高效、特异、作用持久的shRNA表达载体,用RNAi技术构建P-gp低表达的细胞系,为进一步研究P-glycoprotein的功能奠定了基础,同时为研究药物特别是大环丙酯类药物的作用机制和P-gp蛋白与药物作用关系的研究的建立技术平台。

关键词： P-glycoprotein RNA干扰 N2a细胞

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崇明岛养殖场土壤中四环素类抗生素残留的检测

崇明岛养殖场土壤中四环素类抗生素残留的检测

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郑文丽李倩薛飞群中国农业科学院上海兽医研究所兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室

【目的】为了解兽药及其代谢物在养殖场附近环境土壤中残留情况,以崇明岛养猪场为主要检测对象,采集崇明岛前卫村猪场附近的土壤,考察土壤中6种四环素类抗生素(土霉素、四环素、金霉素、4-差向土霉素、4-差向四环素、4-差向金霉素)残留... 详细信息

【目的】为了解兽药及其代谢物在养殖场附近环境土壤中残留情况,以崇明岛养猪场为主要检测对象,采集崇明岛前卫村猪场附近的土壤,考察土壤中6种四环素类抗生素(土霉素、四环素、金霉素、4-差向土霉素、4-差向四环素、4-差向金霉素)残留状况,评估和预测可能存在的兽药污染及其危害,初步建立环境兽药浓度的检测技术。【方法】建立了固相萃取的前处理方法,超高效液相色谱串联质谱的检测方法。土壤的前处理采用EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取,用MAX小柱纯化和富集,用2%甲酸水(含15%甲醇)洗脱进一步减小天然有机质的影响。采用乙腈和0.2%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,10min内分离6种抗生素。【结果】土壤中土霉素、四环素、金霉素、4-差向土霉素、4-差向四环素及4-差向金霉素残留量分别在检测限下至18.766、48.042、37.398、11.028、39.946、46.736mg/kg。检出的高浓度都在表层土壤中。【结论】猪养殖过程中喂食了四环素类抗生素,随粪便排出可在周围土壤中检测到。

关键词：固相萃取超高效液相色谱质谱四环素类抗生素

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中药灰兜巴有效化学成分分析及降糖实验研究

中药灰兜巴有效化学成分分析及降糖实验研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：伍艳田淑琴赵劲航西南民族大学生命科学与技术学院基础兽医实验室

【目的】本文对传统中药灰兜巴治疗糖尿病的有效化学成分进行研究。【方法】实验采用水提和醇提法分别对灰兜巴有效成分进行提取、分离、浓缩、纯化,最后制得冻干粉。通过单向薄层色谱技术对灰兜巴的各种成分进行鉴定,比较出两种提取方... 详细信息

【目的】本文对传统中药灰兜巴治疗糖尿病的有效化学成分进行研究。【方法】实验采用水提和醇提法分别对灰兜巴有效成分进行提取、分离、浓缩、纯化,最后制得冻干粉。通过单向薄层色谱技术对灰兜巴的各种成分进行鉴定,比较出两种提取方法上成分的差异,水提物中有多肽、氨基酸、多糖、生物碱、有机酸等6种化合物;醇提物中多了萜类与甾体化合物、酚类、酮类3种化合物。利用四氧嘧啶致糖尿病小鼠动物模型,对灰兜巴提基成分进行筛选,选择出降血糖活性最强的组分。【结果】实验表明灰兜巴降糖作用主要成分迁移值Rf值较高的依次是氨基酸类与肽类、多糖、生物碱类、机酸类、醛类与酮类、萜类与甾体化合物等。造模成功后,其中蛋白质组、多糖组和生物碱组费分别与模型对照组比较,在给药第七天的血糖值分别达到10.76±2.18、10.56±3.46和11.17±0.68,差异极显著和显著。【结论】从中药灰兜巴原材料中分离鉴定出三个主要成分,且均为首次从本中药分离出的化合物。通过四氧嘧啶模型小鼠降糖实验、醛糖还原酶抑制活性实验,结果表明蛋白质、多糖、生物碱类化合物均为其活性成分,具有很好的降糖效果。

关键词：灰兜巴糖尿病薄层色谱成分分析醛糖还原酶

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动物可食性组织中硝呋烯腙残留检测方法液相色谱串联质谱法

动物可食性组织中硝呋烯腙残留检测方法液相色谱串联质谱法

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：陶燕飞陈冬梅黄玲利袁宗辉国家兽药残留基准实验室（HZAU）/农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

【目的】硝呋烯腙被列为禁止使用的药物,在各可食性组织中必须不得检出。本研究建立了动物性食品中硝呋烯腙残留的高效液相色谱串联质谱法。【方法】组织样品用乙酸乙酯提取,旋转蒸干后加正己烷去脂,再采用OasisTMHLB柱净化,洗脱液N2吹... 详细信息

【目的】硝呋烯腙被列为禁止使用的药物,在各可食性组织中必须不得检出。本研究建立了动物性食品中硝呋烯腙残留的高效液相色谱串联质谱法。【方法】组织样品用乙酸乙酯提取,旋转蒸干后加正己烷去脂,再采用OasisTMHLB柱净化,洗脱液N2吹干后流动相定容,液相色谱串联质谱检测,采用C18色谱柱（150mm×2.1mm,粒径5μm,或相当者）,流动相为乙腈/水（40/60,V/V）,离子源采用电喷雾离子源,正离子扫描,选择反应监测,喷雾电压为4000V,离子传输管温度为330℃,鞘气压力为40arb,辅助气压力为6arb,硝呋烯腙的定性离子对分别为361.0＞221.9,361.0＞196.7。【结果】由线性实验和回收率实验结果表明该方法测定可食性组织中的硝呋烯腙残留量准确可靠,各组织中定量限为0.5μg/kg,在猪、鸡的肌肉和肝脏组织中分别添加硝呋烯腙浓度为0.5μg/kg～2μg/kg的回收率为64.6%to 91.3%。【结论】该法分析时间短,有机试剂用量少,前处理简单,回收率高,可用于猪、鸡各组织中硝呋烯腙残留量的定量测定。

关键词：硝呋烯腙可食性组织残留检测固相萃取液相色谱串联质谱

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头孢噻呋钠在鸭体内的药动学及生物利用度研究

头孢噻呋钠在鸭体内的药动学及生物利用度研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：余祖功刘利锋南京农业大学动物医学院

【目的】建立鸭血浆中头孢噻呋钠的SPE-HPLC测定方法,对头孢噻呋钠在鸭体内的生物利用度进行初步研究。【方法】选用鸭30只,进行单次不同给药剂量肌注(3 mg·kg-1、6 mg·kg-1)和静注(3 mg·kg-1)头孢噻呋钠溶液。血浆药物... 详细信息

【目的】建立鸭血浆中头孢噻呋钠的SPE-HPLC测定方法,对头孢噻呋钠在鸭体内的生物利用度进行初步研究。【方法】选用鸭30只,进行单次不同给药剂量肌注(3 mg·kg-1、6 mg·kg-1)和静注(3 mg·kg-1)头孢噻呋钠溶液。血浆药物提取后经SPE柱净化,用反相高效液相色谱法测定血浆中药物浓度。DAS2.0药动学计算软件处理血浆药物浓度-时间数据。【结果】本试验条件下,健康鸭肌注给药的药时数据适合一级吸收二室模型,3 mg·kg-1、6 mg·kg-1剂量组主要药动学参数分别为T1/2α(1.68±0.10);(1.71±0.11)h.T1/2p(6.21±0.85);(6.35±0.47)h,CL/F(z)(0.035±0.001);(0.04±0.00I)L·kg·h-1,V/F(z)(0.71±0.11);(0.63±0.06)mg·Kg-1,Tmax:2h,Cmax(8.56±0.17);(16.48±0.12)μg·mL-1,AUC0-t(79.38±3.21):.27±5.24)mg·L-1·h,AUC0-∞(82.52±2.22);(144.43±5.39)mg·L-1·h。静注给药的主要药动学数据为T1/2a(0.98±0.55)h,T1/2b(1.85±0.44)h,AUC0-t(82.42±2.36)mg·L-1·h,AUC0-∞(87.34±2.19)mg·L-1·h,CL(z)(0.043±0.002)L·kg·h-1。【结论】单次肌注头孢噻呋钠后吸收迅速,持效时间较长,肌肉注射生物利用度为94.48%。

关键词：头孢噻呋钠生物利用度 SPE-HPLC 健康鸭

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头孢喹诺与恩诺沙星对鸡大肠杆菌的联合药敏试验

头孢喹诺与恩诺沙星对鸡大肠杆菌的联合药敏试验

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郭永刚万荣峰江善祥郑州牧业工程高等专科学校南京农业大学动物医学院兽医药理研究室

【目的】头孢喹诺(Cefquinome)是第一个专用于动物的第四代头孢菌素类抗生素,对革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌具有广谱强效作用,在我国兽医临床应用上也具有广阔的应用前景。恩诺沙星(Enrofloxacin)是第三代氟喹诺酮类动物专用药物,在兽... 详细信息

【目的】头孢喹诺(Cefquinome)是第一个专用于动物的第四代头孢菌素类抗生素,对革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌具有广谱强效作用,在我国兽医临床应用上也具有广阔的应用前景。恩诺沙星(Enrofloxacin)是第三代氟喹诺酮类动物专用药物,在兽医临床上对大多数革兰氏阳性和阴性菌都具有良好的抗菌活性,但随着其广泛应用,目前已出现细菌对该药的耐药性。本试验将头孢喹诺与恩诺沙星联合应用,观测二者联合应用对鸡大肠杆菌的效果。【方法】试验采用肉汤稀释棋盘法,用头孢喹诺和恩诺沙星对鸡大肠杆菌标准株和临床分离株进行联合药敏试验。【结果】结果表明,头孢喹诺对标准菌株和临床分离株的MIC分别为0.25μg/mL、4μg/mL,恩诺沙星对标准菌株和临床分离株的MIC分别为1μg/mL、64μg/mL;两药联用头孢喹诺和恩诺沙星对鸡大肠杆菌标准株的MIC分别为0.063μg/mL和0.25μg/mL;头孢喹诺和恩诺沙星对鸡大肠杆菌临床分离株的MIC分别为1μg/mL和32μg/mL。两药联用对鸡大肠杆菌标准菌株FIC指数为0.5,呈现协同作用;对鸡大肠杆菌临床分离株FIC指数为0.75,呈现相加作用。【结论】头孢喹诺和恩诺沙星联用时的MIC仅为单药对照的1/4,说明两药联用时可以减少两种药物单用的剂量,在保证治疗效果的前提下降低治疗成本,为临床合理用药提供了有益的帮助。

关键词：头孢喹诺临床分离株鸡大肠杆菌恩诺沙星联合药敏试验

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HPLC-MS/MS法检测猪肉中8种β-内酰胺类抗生素残留方法研究

HPLC-MS/MS法检测猪肉中8种β-内酰胺类抗生素残留方法研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郭春娜黄显会华南农业大学兽医学院

【目的】建立阿莫西林、青霉素、氨苄西林、苯唑西林、头孢唑啉、氯唑西林、头孢氨苄及头孢羟氨苄等8种β-内酰胺类药物在猪肉组织中的高效液相色谱-电喷雾串联质谱多残留检测方法。【方法】猪肉样品用乙腈-水(80+20,VN)提取,经HLB柱净... 详细信息

【目的】建立阿莫西林、青霉素、氨苄西林、苯唑西林、头孢唑啉、氯唑西林、头孢氨苄及头孢羟氨苄等8种β-内酰胺类药物在猪肉组织中的高效液相色谱-电喷雾串联质谱多残留检测方法。【方法】猪肉样品用乙腈-水(80+20,VN)提取,经HLB柱净化,氮气吹干,用水定容,正己烷除脂后,进行LC-MS/MS检测。含0.1%甲酸的乙腈-甲醇(50+50,V/V)和0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱外标法定量。【结果】8种β-内酰胺类抗生素在5.00～100μg/L范围内,峰面积与浓度呈现很好的线性,相关系数大于0.99。在猪肉中添加25、50及100μg/kg三个浓度水平,处理后测定,8种药物的回收率、批内变异系数、批间变异系数分别为阿莫西林60.00%～74.4%、1.1%～13%、12%～17%,青霉素82.1%～98.2%、1.6%～13%、10%～17%,氨苄西林74.2%～85.6%、2.3%～10%、7.3%～11%,苯唑西林78.6%～97.7%、2.9%～14%、14%～17%,头孢唑啉85.1%～105.0%、2.1%～13%、13%～14%,氯唑西林75.6%～89.3%、3.1%～14%、12%～16%,头孢氨苄68.7%～75.8%、2.2%～9.8%、6.8%～18%,头孢羟氨苄54.2%～68.6%、4.1%～14%、11%～16%。8种β-内酰胺类药物在猪肉中的检测限(LOD)和定量限(LOQ)范围为:0.5μg/kg～2.5μg/kg。【结论】本研究建立的高效液相色谱-电喷雾串联质谱法检测猜肉组织中的8种β-内酰胺类抗生素,方法灵敏度高、特异性强、重现性好,前处理方法简单易行,符合残留检测的要求。

关键词： β-内酰胺类抗生素 HPLC-MS/MS 多残留猪组织

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头孢喹肟对大肠杆菌PK-PD同步模型的研究

头孢喹肟对大肠杆菌PK-PD同步模型的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：杨大伟柳焜耀丁焕中徐夙素陈杖榴华南农业大学兽医学院中国兽医药品监察所

【目的】利用PK-PD同步模型研究抗菌药物头孢喹肟对大肠杆菌的抗菌效果,并将PK-PD参数和抗菌指标进行拟合,建立一个合理的给药方案,既能产生最大的药效又使耐药菌产生的几率降到最低。【方法】10头健康杂种猪,按1mg·kgb.w.的剂量... 详细信息

【目的】利用PK-PD同步模型研究抗菌药物头孢喹肟对大肠杆菌的抗菌效果,并将PK-PD参数和抗菌指标进行拟合,建立一个合理的给药方案,既能产生最大的药效又使耐药菌产生的几率降到最低。【方法】10头健康杂种猪,按1mg·kgb.w.的剂量进行颈部肌肉单点注射给药。反相高效液相色谱法测定血清中头孢喹肟的药物浓度,用3P97分析程序计算药动学参数;同时测定猪血清中头孢喹肟对大肠杆菌ATCC25922的体外及半体内（Ex-vivo）抗菌活性。将PK参数与MIC相结合,求得T>MIC;测定PK-PD参数和抗菌指标,并将两者进行拟合,获得抑菌、杀菌和细菌清除等各项指标。【结果】肌注给药后,猪血清中CEQ的药时数据符合一级吸收二室模型,其主要药动学参数为:t为0.08h,t为0.84h,t为2.76h,t为0.32h,C为1.80μg·mL,AUC为4.12μg·mL·h。T>MIC为12h,即血清中头孢喹肟的药物浓度约有占给药间隔（24h）50%以上时间维持在MIC之上。含药血清对ATCC25922体外生长抑制试验表明:AUC与Δ1g值数据拟合符合抑制型DoseResp方程,血清中AUC值分别为2.13、3.05、3.93μg·mL·h时,可以产生抑菌、杀菌和细菌清除等抗菌效应。【结论】按照0.95mg·kgb.w.剂量猪肌内注射给予头孢喹肟后,可以有效清除MIC值为O.032μg·mL的病原菌,并防止细菌产生耐药性。

关键词：头孢喹肟 PK-PD同步模型大肠杆菌半体内

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复方氟康唑软膏家兔皮肤刺激性实验

复方氟康唑软膏家兔皮肤刺激性实验

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郝智慧张瑞丽刘元元卜仕金张桂贤青岛康地恩药业有限公司中国农业大学动物医学院扬州大学兽医学院临沂师范学院生命科学学院

【目的】复方氟康唑软膏为新研制的用于治疗皮肤及耳道内的真菌及细菌感染的宠物药制剂,其主要成分为氟康唑和硫酸新霉素。为了观察动物完整皮肤和破损皮肤接触复方氟康唑软膏后的刺激反应情况,进行了复方氟康唑软膏对皮肤的刺激性的研... 详细信息

【目的】复方氟康唑软膏为新研制的用于治疗皮肤及耳道内的真菌及细菌感染的宠物药制剂,其主要成分为氟康唑和硫酸新霉素。为了观察动物完整皮肤和破损皮肤接触复方氟康唑软膏后的刺激反应情况,进行了复方氟康唑软膏对皮肤的刺激性的研究。【方法】选用家兔为实验动物,观察记录去除受试物后1、24、48、72h家兔涂抹部位有无红肿、水肿等反应,并评价受试物的刺激性强度、恢复程度和时间。【结果】实验结果表明,复方氟康唑软膏剂与对照品耳肤灵软膏对完好皮肤与损伤皮肤的平均反应分值无明显差异,其中对正常皮肤组的动物,复方氟康唑软膏剂与耳肤灵软膏的平均反应分值均低于0.5分,表明两者对正常皮肤无刺激性。对破损皮肤组动物,复方氟康唑软膏剂与耳肤灵软膏的平均反应分值在用药后1h和24h均>0.5分,但低于3.0分,表明两者对破损皮肤有轻度刺激性,但给药48h后,反应平均分值均低于0.5分,这种刺激性消失。实验过程中家兔无任何中毒反应以及死亡情况。皮肤毛发以及眼和粘膜、呼吸、活动、循环、中枢神经系统活动等均正常。【结论】复方氟康唑软膏对正常皮肤组无刺激性,对破损皮肤组在24h内有轻度刺激,但48h后刺激作用消失。

关键词：复方氟康唑软膏真菌感染皮肤刺激性耳肤灵软膏

来源：评论

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低浓度恩诺沙星对离体恒化器模型中人体肠道菌群的影响

低浓度恩诺沙星对离体恒化器模型中人体肠道菌群的影响

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：秦玉玲赵静静陈杖榴曾振灵刘健华广东省兽药与饲料监察总所华南农业大学兽医学院国家兽药残留基准实验室广东省兽药研制与安全评价重点实验室

【目的】应用离体恒化器模型评价低浓度恩诺沙星对人体肠道菌群的影响,为制定微生物学日允许摄入量（ADI）提供依据。【方法】四套接种人体肠道菌群的离体恒化器模型中连续添加0、0.2mg.L、2mg.L及20mg.L恩诺沙星8天,采用细菌培养计数和... 详细信息

【目的】应用离体恒化器模型评价低浓度恩诺沙星对人体肠道菌群的影响,为制定微生物学日允许摄入量（ADI）提供依据。【方法】四套接种人体肠道菌群的离体恒化器模型中连续添加0、0.2mg.L、2mg.L及20mg.L恩诺沙星8天,采用细菌培养计数和PCR-DGGE方法研究细菌数量、耐药性、菌群结构和定植抗力的变化。【结果】2mg.L及20mg.L恩诺沙星可抑制肠道总厌氧菌、总需氧菌和兼性厌氧菌、大肠杆菌、肠球菌的生长（P<0.05或P<0.01）;0.2mg.L、2mg.L及20mg.L恩诺沙星均使总需氧和兼性厌氧菌、大肠杆菌耐药百分率增加（P<0.05或P<0.01）,停药7天后,总需氧和兼性厌氧菌、大肠杆菌耐药百分率呈下降趋势,但与对照组相比仍处于较高水平（P<0.01）。20mg.L恩诺沙星对肠道菌群结构的影响较大,使PCR-DGGE图谱发生明显变化,条带数、菌群多态性和相似性参数降低（P<0.05或P<0.01）;2mg.L和20mg.L恩诺沙星可使肠道菌群对外源沙门氏菌的定植抗力明显下降。【结论】0.2mg.L恩诺沙星(相当于3.67μ***体重)可对离体恒化器模型中的人体肠道菌群耐药性产生显著影响,说明我国现行规定的恩诺沙星和环丙沙星的ADI(6.2μ***体重)可能会对人体肠道菌群产生影响,主要为选择出耐药需氧和兼性厌氧菌。

关键词：恩诺沙星离体恒化器模型人体肠道菌群残留安全评价

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