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隐丹参酮对金黄色葡萄球菌表达谱的影响

隐丹参酮对金黄色葡萄球菌表达谱的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：冯海华于录向华郭娜金晶邓旭明吉林大学畜牧兽医学院吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室吉林大学军需科技学院

【目的】隐丹参酮是天然的唇形科植物丹参的主要成分之一,对金黄色葡萄球菌有极强的抑杀作用,但是关于隐丹参酮抑制金黄色葡萄球菌的作用机制还不十分清楚。通过分析亚抑制浓度的隐丹参酮对金黄色葡萄球菌全基因组表达谱的影响,研究隐... 详细信息

【目的】隐丹参酮是天然的唇形科植物丹参的主要成分之一,对金黄色葡萄球菌有极强的抑杀作用,但是关于隐丹参酮抑制金黄色葡萄球菌的作用机制还不十分清楚。通过分析亚抑制浓度的隐丹参酮对金黄色葡萄球菌全基因组表达谱的影响,研究隐丹参酮的抗菌作用机制。【方法】本研究应用寡核苷酸芯片从全基因组水平考察了隐丹参酮对金黄色葡萄球菌基因组表达谱的影响。用隐丹参酮标准品(2μg·mL)处理金黄色葡萄球菌ATCC25923细胞30min后,应用Affymetrix金黄色葡萄球菌基因芯片检测全基因组表达谱的变化,聚类分析基因芯片数据。根据基因芯片结果数据选择13个基因（ribA,isdA,modA,seo,SA1831,srtB,glpT,oppF,SA2135,msmX,opp-1F,dps,SA0302）,通过定量real-time（RT）-PCR方法验证芯片结果。【结果】基因芯片分析显示隐丹参酮作用后引起金黄色葡萄球菌185个基因发生显著变化,其中,100个基因显著上调,85个基因显著下调。一些关键基因受到影响,有21.1%的转运子基因,5.4%的毒力基因,5.4%的氨基酸代谢相关基因。定量RT-PCR验证结果为2个基因表达上调,11个基因表达下调,与基因芯片结果一致。【结论】基因芯片分析结果表明隐丹参酮对金黄色葡萄球菌的抑菌作用能够同时影响不同途径的基因,尤其是调节与转运和毒力相关的基因表达来实现抗菌作用。

关键词：隐丹参酮金黄色葡萄球菌寡核苷酸芯片基因组表达谱

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纯中药制剂“菌毒清”研发及安全性评价

纯中药制剂“菌毒清”研发及安全性评价

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：周绪正张继瑜李金善李剑勇于蓝牛建荣魏小娟李冰中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室

【目的】确定纯中药制剂"菌毒清"的制备工艺路线并对其安全性作出客观评价【方法】制备工艺采用水提醇沉法,安全性评价采用急性毒性试验结合临床用效果综合评述【结果】水提和离心初步除杂后浓缩,再用梯度乙醇可基本将该口服... 详细信息

【目的】确定纯中药制剂"菌毒清"的制备工艺路线并对其安全性作出客观评价【方法】制备工艺采用水提醇沉法,安全性评价采用急性毒性试验结合临床用效果综合评述【结果】水提和离心初步除杂后浓缩,再用梯度乙醇可基本将该口服液中的淀粉、多糖类、蛋白质除去;大鼠及小白鼠口服急性毒性试验结果显示按5、10、15g/kg体重的剂量经口一次给药,连续7天观察,无论waster大鼠还是昆明小白鼠均无任何不良反应,各剂量组动物被毛光滑、反应明锐、饮食欲及大小便正常,观察期内无一例死亡,按毒性分级标准"菌毒清"应属于实际无毒范畴;按照简化寇氏法,我们测得waster大鼠口服"菌毒清"最大耐受量（LD值）≥180g/kg体重,昆明小白鼠口服"菌毒清"最大耐受量（LD值）≥100g/kg体重;自2000～2008年以来,我们用"菌毒清"按1%的量饮水或拌料,连续用药5—7天,所有临床试用的鸡（10000余例）、鸽（500余只）无一例出现药物不良反应。【结论】药物含量100%纯中药制剂"菌毒清"采用水提醇沉法制备工艺简单、明确,易于工业化生产:按1%治疗量和0.5%预防量饮水或拌料应用,具有高效、安全、低毒、使用方便的优点。

关键词：菌毒清制备工艺安全性

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质粒介导喹诺酮耐药基因qnrS在大肠杆菌中分子遗传背景的研究

质粒介导喹诺酮耐药基因qnrS在大肠杆菌中分子遗传背景的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：黄思扬吴聪明沈建忠中国农业大学动物医学院农业部兽用化药和中草药创制与评价重点开放实验室

【目的】要研究介导多重耐药的质粒的产生,就必须阐明耐药基因的遗传环境。通过解析耐药基因的分子遗传环境,来了解该基因转移扩散的规律及特点,进而阐明多重耐药质粒的形成过程。本研究在已有的研究基础上,以qnrS基因为研究对象,通过... 详细信息

【目的】要研究介导多重耐药的质粒的产生,就必须阐明耐药基因的遗传环境。通过解析耐药基因的分子遗传环境,来了解该基因转移扩散的规律及特点,进而阐明多重耐药质粒的形成过程。本研究在已有的研究基础上,以qnrS基因为研究对象,通过明确其分子遗传环境,期望探索其产生、转移扩散及其变迁的分子机制。【方法】选取10株含有qnrS基因的菌株作为本实验的研究对象,通过药敏试验测定其最小抑菌浓度(MIC):建立多重PCR方法检测qnrS、blaTEM、blaCTX-M等耐药基因:提取临床菌株的质粒,绘制菌株质粒指纹图谱:通过接合转移及由转化实验获得接合子/转化子;运用Southern杂交进一步确定含有目的基因qnrS的质粒的大小:将含有目的基因qnrS的片段构建到pBluescriptSK+载体中,通过primer walking获得目的基因的DNA序列绘制该片段的分子遗传图谱。【结果】本实验所选取的10株大肠杆菌中,只有两株表现出相似的质粒指纹图谱,其他8株表现出特异的质粒指纹图谱。同时经过Southern杂交定位携带qnrS基因的质粒,得出qnrS基因位于不同大小的质粒上,其中获得了两株细菌中qnrS基因的遗传背景,这两株菌qnrS基因所处的遗传位置存在很大差异,但二者qnrS基因的上下游均存在tnpA基因,同时存在与转座相关的插入序列IS2。【结论】该研究证实了qnrS基因遗传背景多样化的特性,并通过分析两株菌qnrS基因的分子遗传图谱,猜测qnrS基因能够通过转座的方式整合到不同的质粒上。该研究为阐明qnrS基因传播扩散的分子机制奠定了基础。

关键词：质粒介导喹诺酮耐药遗传图谱接合转移 qnrS基因

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奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因的调查

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因的调查

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：汪宇吴聪明王绍琛沈建忠中国农业大学动物医学院

【目的】本研究的目的足调查奶牛中葡萄球菌超抗原毒素基因在我国的分布情况。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种重要的临床病原菌,能产生多种毒素蛋白和毒力因子,对动物器官造成严重的伤害。金黄色葡萄球菌作为导致奶牛乳... 详细信息

【目的】本研究的目的足调查奶牛中葡萄球菌超抗原毒素基因在我国的分布情况。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种重要的临床病原菌,能产生多种毒素蛋白和毒力因子,对动物器官造成严重的伤害。金黄色葡萄球菌作为导致奶牛乳房炎的主要病原菌之一,临床和隐性乳房炎奶牛的牛奶中包含大量能排放外毒素的金黄色葡萄球菌,对人类健康造成不小的危害。【方法】我们从上海和内蒙古的临床和隐性乳房炎奶牛中采集了牛奶样品,并分离出了283株金黄色葡萄球菌,其中内蒙古154株,上海129株。随后用pcr方法调查了9种新近报道的超抗原毒素基因在上述菌株中的分布,分别为seg,seh,sei,selj,selk,sell,selm,seln和selo。【结果】在调查的283株金黄色葡萄球菌中,165株(58.3%)含有至少一种毒素基因,出现频率最高的是sei(31.8%),seg(31.4%)和selm(26.9%),而selk或selo基因没有在任何一株中发现。在这些菌株中一共有14种葡萄球菌超抗原基因型,其中seg-sei-selm和seg-sei-selm-seln占主导,分别为8.8%和7.4%。【结论】毒素基因携带情况在上海和内蒙古两地的菌株中有显著差距,采自内蒙古的菌株中有102株(66.23%)携带至少一个基因,而上海仅为63株(48.84%),这种差距可能是地理差异或饲养管理水平不同所致,而超抗原毒素在奶牛乳房炎的发生中可能发挥重要作用。

关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌超抗原毒素基因

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阿莫西林与硫酸粘菌素联合抗菌活性的研究

阿莫西林与硫酸粘菌素联合抗菌活性的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：李兰何家康汤树生张朝明郭召绪肖希龙中国农业大学动物医学院

【目的】为了考察阿莫西林与硫酸粘菌素的联合抗菌活性,进行了阿莫西林与硫酸粘菌素单用及联用对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌以及巴氏杆菌的体外药敏试验。【方法】采用微量稀释法测定两药对5种病原菌的最小抑菌浓度,依... 详细信息

【目的】为了考察阿莫西林与硫酸粘菌素的联合抗菌活性,进行了阿莫西林与硫酸粘菌素单用及联用对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌以及巴氏杆菌的体外药敏试验。【方法】采用微量稀释法测定两药对5种病原菌的最小抑菌浓度,依据所测结果,用棋盘稀释法测定两药联用时的FIC指数,判断其联合抗菌活性。【结果】阿莫西林与硫酸粘菌素单用MIC结果:阿莫西林对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌以及巴氏杆菌的MIC范围分别为2.0～512.0μg/mL,0.125～2.0μg/mL,0.5～512.0μg/mL,0.015～0.5μg/mL,0.031～0.50μg/mL;硫酸粘菌素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、链球菌以及巴氏杆菌的MIC范围分别为0.125～4.0μg/mL,8.0～128.0μg/mL,0.125～8.0μg/mL,128.0～1024.0μg/mL,4.0～128.0μg/mL。阿莫西林与硫酸粘菌素联合药敏试验结果:57株受试菌株中4株呈协同作用,所占比例7.02%:49株呈相加作用,所占比例85.96%.4株呈无关作用,所占比例7.02%;无拮抗作用。阿莫西林与硫酸粘菌素联用对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,沙门菌,链球菌,巴氏杆菌FIC指数的平均值分别为0.80,0.59,0.91,0.87,0.98。对所有受试菌FIC指数的平均值为0.82。【结论】FIC指数主要分布在0.5-1范围内。表明阿莫西林和硫酸粘菌素联用后对5种受试菌的抗菌效果以相加作用为主,两者联用可以增强药效,扩大抗菌谱,有效防治畜禽混合感染或继发感染,并可减少给药剂量,减少耐药株的产生。

关键词：阿莫西林硫酸粘菌素联合抗菌 FIC指数

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抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库的构建

抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库的构建

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：温凯吴聪明沈建忠张素霞中国农业大学动物医学院

【目的】基因重组抗体具有分子量低、均一性好、特异性和亲和力较强等特点,已受到广泛关注。基因重组抗体技术不仅能够大幅度缩减抗体的制备周期及成本,还能够设计、制备出性能优良的新型抗体分子。本研究选择在我国兽药残留监控中问题... 详细信息

【目的】基因重组抗体具有分子量低、均一性好、特异性和亲和力较强等特点,已受到广泛关注。基因重组抗体技术不仅能够大幅度缩减抗体的制备周期及成本,还能够设计、制备出性能优良的新型抗体分子。本研究选择在我国兽药残留监控中问题较多的恩诺沙星为对象,构建噬菌体抗体库,为低成本制备目的抗体提供新的途径。【方法】采用混合酸酐法制备免疫原ENR-BSA,对BALB/c小鼠进行免疫,Trizol法提取其脾脏总RNA。根据Kabat和IMGT数据库设计全套引物,通过RT-PCR扩增获取抗体轻、重链可变区基因,以编码柔性多肽（Glyer）的基因序列为接头,通过重叠延伸PCR技术,将轻、重链基因组装为完整的scFv基因,将之克隆入pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07对其进行超感染,从而构建噬菌体抗体库。【结果】结果显示:免疫原ENR-BSA偶联比为25:1,小鼠血清效价为1:40000;所得总RNA完整性良好,浓度约为1.5μg/μL,A/A值为2.05,轻连、重链、scFv基因大小约为320bp、340bp、750bp,与文献报道相符,经测序比对,其与所公布的小鼠抗体基因同源性为80%,多样性完好;重组噬菌粒scFv-pcANTAB5e电击转化XL1-Blue后,产生约7.8×10～4个克隆,重组率约为70%,初级抗体库库容量约为7.8×10～4的,其噬菌体滴度为1×10～6CFU/μL;以ENR-OVA为包被原,对初级抗体库进行3轮固相化抗原免疫亲和富集,每轮富集后抗体库的噬菌体滴度分别为2.8×10～7、5.8×10～8和8×10～9 CFIJ/μL;经Phage-ELISA分析鉴定,得到10株具有抗ENR免疫活性的噬菌体克隆。

关键词：恩诺沙星噬菌体抗体库单链抗体

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中药复方制剂对多重耐药大肠埃希菌的影响研究

中药复方制剂对多重耐药大肠埃希菌的影响研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：任玲玲鞠玉琳苗春光平家奇延边大学农学院动物医学系

【目的】探讨中药复方制剂对多重耐药大肠埃希菌的抑制作用。【方法】通过琼脂平板点种法研究中药复方制剂连黄(粗提、精提)对多重耐药大肠埃希菌的体外抑制作用,判断其抑制耐药性作用效果。提取大肠埃希菌基因组DNA,从GenBank中得到大... 详细信息

【目的】探讨中药复方制剂对多重耐药大肠埃希菌的抑制作用。【方法】通过琼脂平板点种法研究中药复方制剂连黄(粗提、精提)对多重耐药大肠埃希菌的体外抑制作用,判断其抑制耐药性作用效果。提取大肠埃希菌基因组DNA,从GenBank中得到大肠杆菌AcrA基因序列,借助计算机软件设计引物,通过PCR法扩增大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的片段,并对PCR扩增特异性进行检测。【结果】经亚抑菌浓度精提和粗提中药复方制剂作用后的多重耐药大肠埃希菌耐药性均降低,但对不同菌株的耐药性作用效果不同。并且精提制剂比粗提制剂抑制耐药性效果更佳。大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的PCR扩增产物电泳分析表明,各受试大肠埃希菌均含有多重耐药基因AcrA。PCR法扩增特异性检测结果表明,多重耐药大肠埃希菌DLI在1005bp处扩增出较亮的电泳条带,耐药金黄色葡萄球菌、耐药沙门氏菌、链球菌都没有扩增出任何的电泳条带。说明引物具有较好的特异性,能够扩增大肠埃希菌耐药基因AcrA,【结论】中药复方制剂连黄在亚抑菌浓度条件下(粗提、精提)对大肠埃希菌耐药性均有明显抑制作用,但精提制剂对各个受试菌株耐药性抑制率均高于粗提制剂;PCR法可用于检测耐药基因AcrA。

关键词：中药复方制剂大肠埃希菌多重耐药性抑制作用

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猪肌肉组织中头孢噻呋残留的液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)检测方法研究

猪肌肉组织中头孢噻呋残留的液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)检测方...

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：孟辉程林丽张素霞中国农业大学国家兽药残留基准实验室/国家兽药安全评价中心

【目的】建立猪肌肉组织中头孢噻呋及其代谢产物去呋喃甲酰基头孢噻呋的液相色谱-串联质谱残留检测方法。【方法】肌肉组织样品用含有二硫赤藓醇的硼酸盐缓冲液提取,提取液经离心净化,用14%的碘乙酰胺溶液室温避光衍生化60min,衍生完毕... 详细信息

【目的】建立猪肌肉组织中头孢噻呋及其代谢产物去呋喃甲酰基头孢噻呋的液相色谱-串联质谱残留检测方法。【方法】肌肉组织样品用含有二硫赤藓醇的硼酸盐缓冲液提取,提取液经离心净化,用14%的碘乙酰胺溶液室温避光衍生化60min,衍生完毕后用磷酸调节pH值至2.5-3.0,离心取上清液。将提取上清液过C18固相萃取小柱,用5%甲醇水溶液洗涤,真空抽干后,冉用甲醇洗脱于刻度试管中,45℃下氮气吹干,用1mL甲酸水溶液复溶,涡动1min,0.45μm水系针孔滤膜过滤,进LC-MS-MS分析,用外标法定量。LC-MS-MS的条件如下,离子源:电喷雾离子源(ESI);扫描方式:正离子扫描:检测方式:多反应监测(MRM):去呋喃甲酰头孢噻呋的母离子(m/z):486.8;去呋喃甲酰头孢噻呋的子离子(m/z):240.9、166.5;保留时间:3.47 min。【结果】去呋喃甲酰基头孢噻呋的检测限为0.03μg·g-1,定量限为0.1μg·g-1。空白肌肉组织在0.1μg·g-1、0.5μg·g-1、1μg·g-1、2μg·g-1四个浓度进行样品添加的回收率范围在74.4-83.6%之间,变异系数在3.1-5.8%之间。【结论】添加回收率及变异系数符合相关研究的要求,且重现性较好。本方法检测限低,分析灵敏稳定准确,定量限和检测限符合残留分析的要求,适合用于头孢噻呋的残留检测。

关键词：头孢噻呋去呋喃甲酰基头孢噻呋猪肌肉残留检测液相色谱-串联质谱法

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不同紫锥菊提取物对肉仔鸡免疫调节功能的研究

不同紫锥菊提取物对肉仔鸡免疫调节功能的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郝智慧邱梅王吉才王春元曹蕾张桂贤邹明青岛康地恩药业有限公司临沂师范学院生命科学学院青岛农业大学动物科技学院

【目的】研究了不同紫锥菊提取物对肉仔鸡免疫机能的作用。【方法】:采用270只1日龄肉仔鸡,分为9组,通过测定肉仔鸡生长性能、免疫器官指数、血液生化指标、新城疫抗体滴度以及超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活... 详细信息

【目的】研究了不同紫锥菊提取物对肉仔鸡免疫机能的作用。【方法】:采用270只1日龄肉仔鸡,分为9组,通过测定肉仔鸡生长性能、免疫器官指数、血液生化指标、新城疫抗体滴度以及超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)的含量,探讨了不同紫锥菊提取物对肉仔鸡体液免疫、细胞免疫和抗氧化能力的影响。【结果】:结果显示,日粮中添加进口和康地恩紫锥菊提取物能够显著增加肉仔鸡的平均日增重,降低料重比,提高胸腺和法氏囊指数,并且能够显著改变肉仔鸡的白细胞数、红细胞数及红细胞压积,提高机体的抗氧化能力和新城疫抗体效价,以上指标总体上好于万适宁、转移因子和紫锥疫毒清组:紫锥菊提取物组的作用效果均明显优于环磷酰胺组和环磷酰胺+康地恩紫锥菊提取物组,且环磷酰胺+康地恩紫锥菊提取物组的作用比环磷酰胺组较好。【结论】:以上研究表明,紫锥菊提取物均能够显著增强肉仔鸡的免疫机能,康地恩紫锥菊提取物的总体免疫调节效果与进口紫锥菊提取物的效果一致,均优于国产紫锥菊提取物、万适宁、转移因子和紫锥疫毒清,并且康地恩紫锥菊提取物能够提高由于环磷酰胺引起的免疫水平下降。

关键词：紫锥菊提取物肉仔鸡免疫调节功能

来源：评论

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盐酸头孢噻呋混悬注射液对猪的安全性研究

盐酸头孢噻呋混悬注射液对猪的安全性研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：邹淑当黄显会曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】本研究通过观察临床症状、检测血常规和生理生化指标,以及镜检病理组织学病变,来研究和评价长效盐酸头孢噻呋注射液对猪的安全性。【方法】试验中选取20头健康猪,分成4组,设1组对照;试验组设该注射液的低、中、高剂量分别为5、1... 详细信息

【目的】本研究通过观察临床症状、检测血常规和生理生化指标,以及镜检病理组织学病变,来研究和评价长效盐酸头孢噻呋注射液对猪的安全性。【方法】试验中选取20头健康猪,分成4组,设1组对照;试验组设该注射液的低、中、高剂量分别为5、15、25mg/kg·b.w.,连续给药2次,间隔3天,分别进行耳后颈部深层肌内注射。在给药前、第1次给药后1天、第2次给药前、第2次给药后的1、3、5、7、10、15天为试验生猪测量体温、称重,并在前腔静脉采血,检测红细胞等8种血常规和总蛋白等20种生化指标。【结果】长效盐酸头孢噻呋注射液对猪的体温、体重没有影响。各给药组的红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度、平均红细胞容积、血小板计数、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总蛋白、白蛋白、γ-谷氨酪转肽酶、总胆红素、尿素氮、尿酸、甘油三酯、总胆固醇、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、钙离子、镁离子、氯离子、铁离子、磷相比均没有显著性差异。在第1次给药后,高剂量组猪体内的白细胞计数值显著升高。第1次给药后1天,各剂量组的血糖值与对照组相比差异显著(P<0.01),隔天后,低剂量组恢复到正常水平。第2次给药后1天至7天,中、高剂量组与对照组相比差异显著(P<0.01),低剂量组与对照组相比无差异(P>0.05)。到第2次给药后10天,中、高剂量组的GLU值恢复到正常水平,与对照组相比无差异(P>0.05)。病理组织学结果表明,长效盐酸头孢噻呋注射液对猪的肝脏、肾脏、脾脏等主要器官组织无明显影响。【结论】长效盐酸头孢噻呋注射液对猪应用安全。

关键词：头孢噻呋猪血常规生化指标安全评价

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