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排序：

动物组织中苯并咪唑类药物残留检测的LC-MS/MS法的研究

动物组织中苯并咪唑类药物残留检测的LC-MS/MS法的研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郭强贺利民曾振灵华南农业大学兽医学院

【目的】建立可食性动物组织中阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜,噻苯咪唑及其代谢物5-羟基噻苯咪唑,奥芬达唑的代谢物奥芬达唑砜7种苯并咪唑类药物及其代谢物的多残留检测的高效液相色谱-串联质谱法。... 详细信息

【目的】建立可食性动物组织中阿苯达唑及其代谢物阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜,噻苯咪唑及其代谢物5-羟基噻苯咪唑,奥芬达唑的代谢物奥芬达唑砜7种苯并咪唑类药物及其代谢物的多残留检测的高效液相色谱-串联质谱法。【方法】首先将可食性动物组织样品与高浓度的弱碱性溶剂(2mol/L,碳酸钠溶液)匀浆,用乙酸乙酯提取,苯并咪唑类药物属于弱碱性化合物,在弱碱性条件下,药物呈游离分子状态,能促进乙酸乙酯的萃取。提取液经减压浓缩后用酸性乙醇溶解,经正己烷分配脱脂,MCX固相萃取柱净化,5%氨化甲醇洗脱,氮气吹干。加入流动相溶解定容后上机检测,以乙腈和0.1%甲酸溶液作为流动相,梯度洗脱。采用电喷雾也离正离子模式(ESI+)和多反应监测(MRM)进行定性和定量分析。【结果】7种苯并咪唑类药物在5～500ng/mL范围内,峰面积与浓度呈现良好的线性,相关系数均大于0.99。在肌肉、肝脏、肾脏和脂肪的空白组织中添加10μg/kg、20μg/kg、50μg/kg三个浓度的水平,动物组织中7种药物的回收率、批内变异系数及批问变异系数分别为:5-羟基噻苯咪唑70.09%～103.7%、1.62%～8.66%、1.30%～6.34%,噻苯咪唑70.42%～111.3%、1.91%～8.39%、1.17%～6.92%,阿苯达唑-2-氨基砜69.82%～102.6%、1.47%～8.41%、1.23%～7.47%,阿苯达唑亚砜73.06%～100.3%、1.91%～9.48%、1.35%～6.90%,阿苯达唑砜74.52%～102.9%、2.35%～10.92%、1.24%～6.52%,奥芬达唑砜72.98%～98.68%、1.78%～8.88%、1.21%～5.17%,阿苯达唑70.92%～95.13%、1.93%～8.23%、1.51%～6.37%。各种药物的检测限和定量限:5-羟基噻苯咪唑和噻苯咪哗的检测限为2μg/kg,定量限为10μg/kg;阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、奥芬达唑砜和阿苯达唑的检测限均为2μg/kg,定量限均为8μg/kg。【结论】实验结果表明,本研究建立的方法前处理和净化过程简单易操作。方法稳定性强、重现性好,检测限低于农业部规定的最高残留限量,能满足动物组织中苯并咪唑类药物残留检测的要求。

关键词：苯并咪唑类药物 HPLC-MS/MS 多残留动物组织

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阿莫西林、硫酸粘菌素复方注射用混悬剂的研制

阿莫西林、硫酸粘菌素复方注射用混悬剂的研制

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：何家康汤树生李兰张朝明赵晖万仁玲肖希龙中国农业大学动物医学院农业部兽用化药和中草药创制与评价重点开放实验室中国兽医药品监察所

【目的】研制阿莫西林、硫酸粘菌素注射用混悬剂,并考察其质量和稳定性。【方法】根据阿莫西林（AMO）、硫酸粘菌素（COS）的微粒大小、晶型等性质,筛选混悬剂的分散媒、助悬剂、润湿剂等;然后以助悬剂和润湿剂为考察因素,选择正交表L（... 详细信息

【目的】研制阿莫西林、硫酸粘菌素注射用混悬剂,并考察其质量和稳定性。【方法】根据阿莫西林（AMO）、硫酸粘菌素（COS）的微粒大小、晶型等性质,筛选混悬剂的分散媒、助悬剂、润湿剂等;然后以助悬剂和润湿剂为考察因素,选择正交表L（3～4）优选处方:采用固体分散技术并借助胶体磨优化处方、工艺:对混悬剂的沉降体积比（F）、重分散性和粒度大小等进行了考察,并建立了制剂中的AMO、COS检测的HPLC分析方法:最后进行了稳定性研究。【结果】经过单因素试验,筛选得注射用大豆油和油酸乙酯为混合分散媒:适宜的助悬剂、润湿剂和抗氧剂分别为:单硬脂酸铝和卵磷脂、氧化蓖麻油和维生素E。正交试验结果表明,影响制剂稳定的因素依次为助悬剂Ⅰ、助悬剂Ⅱ和润湿剂;本制剂为白色、稍黏稠的混悬型液体,静置3 h的F值大于0.9,制剂经振摇数次后,沉降物易消失,表明重分散性良好:药物粒径均小于30μm。其中粒径小于15μm所占比例为91.3%,符合要求。建立了制剂中主药的HPLC分析方法,其中AM0在25～400μg/mL和COS在50～800μg/mL浓度范围内线性关系良好,AMO和COS的回收率分别为99.1%～100.2%和99.3%～101.3%,RSD小于0.52%。制剂经恒温恒湿放置6个月后,其外观、粒度、重分散性、沉降体积比等均未有变化:AMO和COS的含量下降范围小于1.6%。【结论】所选择的混合分散媒对两种主药分散作用良好,助悬剂Ⅰ和助悬剂Ⅱ的最优配比能使混悬剂的稳定性、通针性良好,而润湿剂则有重分散作用;本文建立了制剂中COS的HPLC方法,弥补了传统效价法特异性不高,误差较大的缺点;湿温加速试验结果表明,制剂在恒温恒湿条件下放置6个月稳定性良好。

关键词：阿莫西林硫酸粘菌素混悬剂研制质量控制

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复方氟康唑软膏临床药效试验(Ⅱ期、Ⅲ期临床试验)

复方氟康唑软膏临床药效试验(Ⅱ期、Ⅲ期临床试验)

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：郝智慧张桂贤侯加法张瑞丽刘元元青岛康地恩药业有限公司中国农业大学动物医学院临沂师范学院生命科学学院南京农业大学动物医学院

【目的】复方氟康唑软膏是青岛康地恩药业有限公司针对犬耳道真菌、细菌感染而研发的一种新制剂,为进一步验证该药的疗效和可能的不良反应,提出科学的给药方案和注意事项,进行了Ⅱ期和Ⅲ期临床试验。【方法】选用犬为实验动物,根据病犬... 详细信息

【目的】复方氟康唑软膏是青岛康地恩药业有限公司针对犬耳道真菌、细菌感染而研发的一种新制剂,为进一步验证该药的疗效和可能的不良反应,提出科学的给药方案和注意事项,进行了Ⅱ期和Ⅲ期临床试验。【方法】选用犬为实验动物,根据病犬搔抓耳部、摇头甩耳,耳道内渗出物,耳道表皮增生及耳部是否有压痛感等临床症状和试验室检查进行评估,判断病犬的治疗情况。临床疗效一般分为痊愈、显效、好转、无效。【结果】Ⅱ期临床药效试验主要针对人工细菌和真菌感染的犬,试验结果显示空白对照组临床症状基本未见改变,试验犬耳部感染严重,分泌物较多,时常甩头、挠耳。对照组、推荐剂量减半组、推荐剂量组、推荐剂量加倍组用药后,症状人多得到明显改善,试验犬挠耳、甩头症状逐渐减少,分泌物也逐渐减少,部分试验犬临床症状消失,部分试验犬症状有显著改善,部分试验犬症状有所改善,根据临床观察结果和病原检查结果,在用药后第42d综合判定疗效,结果复方氟康唑软膏对由真菌和细菌引起的耳道感染治愈率+显效率均大于等于90%,且与空白对照组相比,差异极显著,因此可以用于犬耳道真菌和细菌感染的治疗。Ⅲ期临床药效试验数据表明,复方氟康唑软膏对耳道感染的治愈率+显效率均大于90%,复方氟康唑软膏和对照组耳肤灵对犬外耳道感染治疗的效果差异不显著,但有优于耳肤灵的趋势。复方氟康唑连续治疗4周后,病情处于稳定状态,因此连续治疗4周后不管疗效如何,均可以停药。【结论】复方氟康唑对细菌、真菌引起的外耳道感染治疗效果较好,用药前须先清理耳内分泌物,然后以0.5mL(约黄豆大小)/耳/次/d,挤入耳道内,按摩耳根,使药物充分与患部接触,连续治疗4周,效果较好,可以在临床中推广使用。

关键词：复方氟康唑软膏给药方案临床试验

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喹烯酮在大鼠体内代谢物产物的研究

喹烯酮在大鼠体内代谢物产物的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：杨春燕冯培生张素霞中国农业大学动物医学院

喹烯酮（quinocetone,QCT）,化学名为3-甲基-2-肉桂酰基-喹噁啉-1,4-二氧化物（3-methy-2-cinnamicacyl-quinoxaline-1,4-dioxide）,属于喹噁啉-1,4-二氧化合物类,是由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所开发的拥有自主知识产权的一类... 详细信息

喹烯酮（quinocetone,QCT）,化学名为3-甲基-2-肉桂酰基-喹噁啉-1,4-二氧化物（3-methy-2-cinnamicacyl-quinoxaline-1,4-dioxide）,属于喹噁啉-1,4-二氧化合物类,是由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所开发的拥有自主知识产权的一类新药。研究表明喹烯酮的潜在毒性作用可能与体内代谢产物有关。目前关于喹烯酮体内代谢途径的研究较少,本试验利用LC-MS/MS法研究喹烯酮在大鼠体内的主要代谢产物识别和确证。试验用6-8周龄Wistar大鼠,雌雄各半,体重170-220g,以300mg/kg的剂量单次灌胃给药,收集大鼠灌胃喹烯酮后6h、12h、24h粪便,称取2g粪样经乙腈提取,离心取上清,氮吹浓缩,流动相复溶,过0.22ηm滤膜后供LC-MS/MS分析。采用色谱柱:Waters Symmetryc18,2.1×150mm,5μm粒径:柱温30℃,流速为0.2ml/min,进样量10μl。流动相C:0.1%甲酸-乙腈,流动相D:0.1%甲酸-水。梯度洗脱:0-5min,20～30%C:5-15min,30～70%C;15-18rain,70～100%C:18～23min,100%C:23～23.1min,20%C:23.1～30min,20%C的色谱条件。质谱条件为ESI正离子模式,毛细管电压为3kv:离子源温度为100℃;去溶剂温度为300℃;反吹气流速（N）为30Lh,去溶剂气（N）流速为430Lh,碰撞气压力（Ar）:2×10mbar。碰撞能量30ev。锥孔电骶30v。试验通过比较给药样品和空白样品全手扫描总离子流色谱图,结合喹烯酮在体内可能的代谢途径,得到给药样品和空白样品提取离子流色谱图,对比寻找喹烯酮在大鼠粪便中的可能代谢产物,再对可能代谢产物进行二级子离子扫描,通过对其碎片离子和原药的碎裂途径比较分析,确定了这些代谢产物的分子结构。并通过中性碎片丢失扫描、母离子扫描和多反应监测对代谢产物进行确证。最终确证的喹烯酮在大鼠粪便中的五种代谢产物为:双键还原产物、羰基还原产物、苯环羟基化产物、双键还原羟基化产物和水解产物。

关键词：喹烯酮代谢产物 LC-MS/MS

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动物可食性组织中糖皮质激素类药物多残留检测方法高效液相色谱-串联质谱法

动物可食性组织中糖皮质激素类药物多残留检测方法高效液相色谱-...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：陈冬梅陶燕飞刘振利王玉莲袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点开放实验室国家兽药安全评价实验室华中农业大学动物医学院

【目的】糖皮质激素类药物属于皮质甾类化合物,具有抗炎和促生长等作用,广泛应用于畜牧生产中。为了控制糖皮质激素类药物在可食性动物中的滥用,避免其在组织中的残留影响消费者的健康,因此,通过有效的技术手段对动物可食性组织中糖皮... 详细信息

【目的】糖皮质激素类药物属于皮质甾类化合物,具有抗炎和促生长等作用,广泛应用于畜牧生产中。为了控制糖皮质激素类药物在可食性动物中的滥用,避免其在组织中的残留影响消费者的健康,因此,通过有效的技术手段对动物可食性组织中糖皮质激素类药物残留量进行检测是必要的。本方法旨在应用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)建立动物可食性组织中泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、倍他米松、氟氢可的松、甲基泼尼松、倍氯米松、氢化可的松的多残留检测方法。【方法】组织样品采用碱水解,乙酸乙酯提取,硅胶固相萃取柱净化。采用C18色谱柱分离,乙腈、水与甲酸溶液为流动相,高效液相色谱-串联质谱检测。【结果】糖皮质激素的标准曲线的线性范围为0.2～200μg/L,在猪、牛、羊肌肉添加0.5～6μg/kg浓度时回收率在50%～120%,在肝脏中添加1.0～16μg/kg浓度时回收率在60%～120%;批间变异系数小于20%;定量限为0.5～4.0μg/kg。【结论】本方法采用常规色谱柱和甲酸/水/乙腈流动相,成功地分离了地塞米松和倍他米松同分异构体;对样品中分析物采用碱解、液液萃取和固相萃取净化,样品前处理简单;本方法可以同时检测动物可食性组织中多种糖皮质激素类药物残留,方法回收率高,检出限低。本方法的建立可为动物可食性组织样品中糖皮质激素类药物的监测与控制提供有效的手段。

关键词：糖皮质激素高效液相色谱-串联质谱动物可食性组织多残留分析

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草鱼体内恩诺沙星及其代谢物的残留消除规律

草鱼体内恩诺沙星及其代谢物的残留消除规律

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：罗永煌刘莉莉罗雷西南大学药学院

【目的】恩诺沙星（Enrofloxacin）为动物专用抗菌药,近年来广泛用于防治水产鱼类的消化道及鳃细菌性疾病,但其在草鱼体内的残留及消除情况未见报道。本试验旨在研究恩诺沙星在草鱼体内的残留消除规律,为制定休药期提供依据。【方法】... 详细信息

【目的】恩诺沙星（Enrofloxacin）为动物专用抗菌药,近年来广泛用于防治水产鱼类的消化道及鳃细菌性疾病,但其在草鱼体内的残留及消除情况未见报道。本试验旨在研究恩诺沙星在草鱼体内的残留消除规律,为制定休药期提供依据。【方法】选取健康草鱼,试验组150尾,对照组50尾,平均体重50g,水温24℃±0.5,放养密度15尾/m。将恩诺沙星原粉与饵料混合均匀,制成含0.4%恩诺沙星的药饵颗粒,试验组按草鱼体重的1%投给药饵（即恩诺沙星剂量为每1kg鱼体重40mg）,分早晚两次投喂,连续投喂5d。对照组投喂未添加药物的饵料。分别于每天最后一次给药后3h及停药后3h,6h,12 h,24 h,48 h,96 h,144 h,192 h,240 h,288 h,382 h,528 h,720 h,960 h,1104 h,1176 h取样。每次采集鱼5尾,去鳞,沿背脊取肌肉（包括皮肤）,所取样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块,放置于-20℃冰箱保存。高效液相色谱法检测恩诺沙星及其代谢物的残留量:以磷酸-乙腈作提取液,液-液萃取法前处理样品,55℃真空旋转蒸发浓缩,正己烷脱脂净化,甲磺酸达氟沙星作内标物。色谱条件为:Hypersil BDS-C柱（200mm×0.46mm,5μm）;流动相:0.05mol/L磷酸溶液（pH3）-乙腈混合液（87:13,v/v）;柱温:30℃:流速:1.0mL/min:检测器:荧光检测器;检测波长:激发波长280nm,发射波长450nm:进样量:10μL。【结果】恩诺沙星在草鱼体内代谢为环丙沙星。恩诺沙星和环丙沙星在0.01-10μg/g范围内线性良好,二者的检测限均为0.006μg/g,二者的回收率分别为87.41%-92.16%和79.89%-84.15%。给药期间恩诺沙星含量呈锯齿形上升,停药后6h达到最高值（8.0209±0.7760）μg/g,528h恩诺沙星与环丙沙星之和消除至最高残留限量以下（0.1μg/g）,1176h未检出。【结论】在本试验条件下,恩诺沙星对草鱼的休药期为22天（528度日）;在实际养殖上,考虑到水温、水质、养鱼密度、摄入药饵的均匀性等因素影响,建议恩诺沙星在草鱼上的休药期应在本试验所得休药期基础上适度延长。

关键词：草鱼恩诺沙星环丙沙星残留消除

来源：评论

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新兽药“氢溴酸槟榔碱”的含量测定及稳定性考察

新兽药“氢溴酸槟榔碱”的含量测定及稳定性考察

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：周绪正张继瑜金德磊李剑勇李金善魏小娟牛建荣李冰中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所中国农业科学院新兽药工程重点开放实验室

【目的】确定快速高效的新兽药"氢溴酸槟榔碱"原料药及制剂含量检测方法;稳定性试验的目的是考察原料药或药物制剂在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律,为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供科学依据。【方法】含... 详细信息

【目的】确定快速高效的新兽药"氢溴酸槟榔碱"原料药及制剂含量检测方法;稳定性试验的目的是考察原料药或药物制剂在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律,为药品的生产、包装、贮存、运输条件提供科学依据。【方法】含量检测采用反相高效液相色谱法,按新兽药稳定性试验要求,对氢溴酸槟榔碱原料及片剂进行稳定性试验,包括原料的影响因素试验、加速试验与长期试验;片剂的加速试验与长期试验。【结果】含量测定在确定的色谱条件下（色谱柱:Waters symmetry C18柱3.9mm×150mm,5μm;流动相:水:甲醇:乙腈=70:20:10;检测波长:215nm;流速:1ml/min:柱温:20℃）其回归方程为Y=5.0492×10～4-4.5346×10～4（r=0.9999）,线性范围0.010～0.100mg·m1:氢溴酸槟榔碱原料药含量为95.6%,氢溴酸槟榔碱片剂平均含量为15.70mg/片,为其标示量16 mg/片的98.125%。稳定性试验结果发现其原料对高温、强光照稳定,但具有引湿性,其原料及片剂在密封包装条件下于温度25℃,RH60±5%考察36个月,其外观、含量皆无明显变化,亦无降解产物产生。【结论】通过氢溴酸槟榔碱原料药及其片剂稳定性考察,发现其原料及片剂在未包装情况下对高热和强光照稳定,含量无变化,但具有较强引湿性;在市售密封包装下置常温下放置三年,其原料及片剂含量无明显变化,亦未见潮解现象:采用反相高效液相色谱分析方法动态检测原料及制剂中氢溴酸槟榔碱的含量及降解产物以之考察药物的稳定性具有快速、客观、精确等特点。

关键词：氢溴酸槟榔碱反相高效液相色谱法稳定性

来源：评论

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伊维菌素聚乳酸纳米粒的制备及质量评价

伊维菌素聚乳酸纳米粒的制备及质量评价

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：胡颖欧阳五庆西北农林科技大学动物医学院

【目的】伊维菌素(IVM)是一种新型高效、广谱、低毒、安全的抗生素,对家畜体内外寄生虫均有效,而且与其它抗寄生虫药物无交叉耐药性。但是该药的普通制剂,每次给药维持时间短,需多次给药,存在应用不便、耗费大量人力物力等缺点。因此,... 详细信息

【目的】伊维菌素(IVM)是一种新型高效、广谱、低毒、安全的抗生素,对家畜体内外寄生虫均有效,而且与其它抗寄生虫药物无交叉耐药性。但是该药的普通制剂,每次给药维持时间短,需多次给药,存在应用不便、耗费大量人力物力等缺点。因此,开发长效控释制剂是畜牧业发展的客观需要。纳米粒具有控制释药、靶向给药和降低毒副作用的特点。近年来,具有可生物降解和相容性的聚乳酸作为载体材料的纳米控释系统的研究异常活跃。对于脂溶性药物,其聚合物纳米粒常采用溶剂蒸发法制备。但此法最大的缺点是使用毒性较大的有机溶剂和高能量设备,不利于药剂的开发和工业化生产,自乳化溶剂蒸发法能克服以上的不足,而且操作简单、方便。本文选择聚乳酸作为药物载体,采用改良的自乳化溶剂蒸发法制备伊维菌素聚乳酸纳米粒(IVM-PLA-NPs),以期研制出伊维菌素新型制剂,以解决以上问题。【方法】以聚乳酸(PLA)为载体材料,采用改良自乳化溶剂挥发法制备了伊维菌素聚乳酸纳米粒(IVM-PLA-NPs);取适量纳米粒混悬液置于铜网上,用2%磷钨酸溶液染色,于透射电子显微镜下观察纳米粒的形态并拍照,另取适量以蒸馏水稀释后,测定平均粒径及其分布;采用紫外分光光度法测定纳米粒的包封率和载药量;考察伊维菌素的体外释放特性。【结果】制备所得的伊维菌素纳米粒呈圆形、表面圆滑、粒径均一性好、纳米粒之间未见粘连,平均粒径为(67.9±2.7)nm;包封率及载药量分别为98.2%和9.4%;伊维菌素的体外释放分为两相,前4h处于突释期,伊维菌素在此阶段累积释放量达到35.3%。此后进入缓释期,14h末累积释放量达42.5%,到24h末累积释放量达到52%。【结论】本试验所采用的工艺制得的伊维菌素纳米粒成球性佳,粒径均匀,具有缓释作用,并且该制备工艺简便稳定,具有应用前景。

关键词：伊维菌素聚乳酸自乳化溶剂蒸发法纳米粒

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山豆根多糖对小鼠免疫功能的调节与体内自由基水平关系的实验观察

山豆根多糖对小鼠免疫功能的调节与体内自由基水平关系的实验观察

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：帅学宏胡庭俊曾芸韦英益李跃华刘洪丽苏子杰广西大学动物科学技术学院甘肃农业大学动物医学院

【目的】观察山豆根多糖(Sophora subprostrate polysaccharide,SSP)对免疫功能低下小鼠免疫指标、自由基水平和抗氧化能力的影响。【方法】将50只昆明种小鼠随机分成5组,每组10只,雌雄各半。空白对照组:腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)0.5 ... 详细信息

【目的】观察山豆根多糖(Sophora subprostrate polysaccharide,SSP)对免疫功能低下小鼠免疫指标、自由基水平和抗氧化能力的影响。【方法】将50只昆明种小鼠随机分成5组,每组10只,雌雄各半。空白对照组:腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)0.5 mL/只,每天1次,连用7天;地塞米松(Dexamethasone,Dex)组:于第1,3,5d按1.25mg/kg体重皮下注射地塞米松:多糖低、中、高剂量组:小鼠于1～7d分别腹腔注射山豆根多糖(50mg/kg、100mg/kg或200mg/kg),并于第1,3,5d皮下注射Dex(1.25mg/kg)。首次用药后第8天采血并扑杀小鼠,称体重、脾脏和胸腺重量,计算脾脏指数、胸腺指数;分离血清测定白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和血清中溶菌酶(LZM)活力;将脾脏和胸腺制成组织匀浆。测定胸腺组织匀浆中羟自由皋(OH)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平、黄嘌呤氧化酶(XOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和脾脏组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活力。【结果】小鼠皮下沣射Dex后,胸腺指数明显降低(P<0.01),不同剂量的山豆根多糖对Dex所引起的胸腺指数下降无显著影响(P>0.05)。应用不同剂量的多糖后均能显著提高小鼠脾脏指数(P<0.01)。中、高剂量组小鼠血清中LZM活力和IL-6水平极显著升高(P<0.01):低剂量的SSP能显著升高小鼠血清中IL-12水平(P<0.01):高剂量SSP能显著提高小鼠血清中TNF-α水平(P<0.01)。低剂量山豆根多糖能显著提高小鼠胸腺清除羟自由基能力(P<0.05);中、低剂量SSP可显著升高胸腺GSH水平(P<0.05),与Dex组比较差异显著(P<0.05):SSP能显著降低小鼠MPO活力(P<0.05):Dex可显著降低正常小鼠胸腺XOD活力(P<0.05),应用SSP后小鼠胸腺XOD活力亦显著下降(P<0.05);多糖低、中、高剂量组与Dex组相比,GSH-PX活力均显著提高(P<0.05)。【结论】山豆根多糖对Dex引起的免疫抑制有一定的拮抗作用,可通过调节血清细胞因子含量和免疫器官自由基水平,影响机体免疫系统的功能。

关键词：山豆根多糖免疫调节自由基细胞因子

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猪细胞色素CYP3A29异源表达及其功能活性研究

猪细胞色素CYP3A29异源表达及其功能活性研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：姚敏戴梦红陈冬梅黄玲俐袁宗辉国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部食品安全评价重点实验室国家兽药安全评价实验室华中农业大学动物医学院

【目的】研究表明,猪肝脏中存在有CYP3A4相似功能的P450代谢酶CYP3A29,本研究旨在通过异源表达的方式获得单一CYP3A29代谢系统,为探索猪CYP3A29介导的药物代谢反应特点、CYP3A29蛋白结构与功能的关系奠定基础。【方法】以猪肝脏为材料,... 详细信息

【目的】研究表明,猪肝脏中存在有CYP3A4相似功能的P450代谢酶CYP3A29,本研究旨在通过异源表达的方式获得单一CYP3A29代谢系统,为探索猪CYP3A29介导的药物代谢反应特点、CYP3A29蛋白结构与功能的关系奠定基础。【方法】以猪肝脏为材料,用RT-PCR的方法分离获得猪CYP3A29、NADPH-P450氧化还原酶(NPR)和细胞色素b5基因编码区DNA序列。再利用限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ将CDs插入到pFastBacⅠ穿梭质粒中,经筛选和鉴定后,通过mini-attTn7转座元将目的基因片段转座到杆状病毒基因组DNA中,得到重组的Bacmid。再通过转染sf9细胞,获得包含有目的基因DNA片段的重组杆状病毒。经过2次重复感染,得到高滴度的病毒液。将一定比例混合的包含有CYP3A29,NPR和b5基因的重组病毒按照一定的感染复数感染对数生长期sf9细胞,并于24小时补加3ug/mL氯化高铁血红素,72小时收集细胞。经超声破碎,差速离心分离细胞微粒体碎片。Westernblot和光谱分析蛋白的表达情况。【结果】分离获得的CYP3A29、NPR及b5基因序列与NCBI中EST拼接序列一致。构建的重组病毒经多次感染细胞,均达到10～8的滴度。CYP3A29、NPR及b5重组病毒以2:5:1的比例混合,以MOI为5来感染sf9细胞,可使3个基因都得到表达。差示光谱和还原光谱法测得每10～6个细胞可产生P4503A29 50pmol,NPR 20 U/min和细胞色素b5 110 pmol。【结论】本研究为首次利用Bac to Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统,成功共表达3个蛋白产物,并检测到较高的光谱活性,表达量可用于药物代谢研究。本研究为单一P450底物特异性,抑制剂选择性和酶促动力学特点研究莫定了基础,并为该酶的结构与功能关系研究的实现提供路径。

关键词：细胞色素 NPR CYP3A29 猪肝脏重组病毒异源表达功能活性

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