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6 篇 青岛康地恩药业有...
6 篇 浙江大学
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作者

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兽用缓释制剂研究现状

兽用缓释制剂研究现状

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：昌莉丽张春辉肖传斌河南农业大学牧医工程学院郑州牧业工程高等专科学校药物工程系

缓释制剂由于其安全,长效,价廉,便利而得到越来越多的兽医工作者的肯定,成为当前兽药研发的一个主要方向。为了更好的发挥该类制剂在兽医临床的作用,本文就缓释制剂的释药原理,应用概况及展望等进行综述。①缓释制剂的释药原理缓释制剂... 详细信息

缓释制剂由于其安全,长效,价廉,便利而得到越来越多的兽医工作者的肯定,成为当前兽药研发的一个主要方向。为了更好的发挥该类制剂在兽医临床的作用,本文就缓释制剂的释药原理,应用概况及展望等进行综述。①缓释制剂的释药原理缓释制剂又称长效制剂,是指能延缓药物的释放,并控制释药速率的符合动力学过程的给药系统。缓释制剂主要有骨架型和贮库型两种,药物以分子或微晶、微粒的形式均匀分散在各种载体材料中,形成骨架型缓释制剂:药物被包裹在高分子聚合物膜内,则形成贮库型缓释制剂。两种类型的缓、控释制剂所涉及的释药原理主要有溶出、扩散、溶蚀、渗透压、离子交换作用等。一般情况,对于一个具体的制剂往往是溶出和扩散,溶蚀,渗透压等原理同时起作用而达到缓释的作用。②缓释制剂的类型及其在兽医临床上的研究应用兽药临床上应用较多的是注射缓释制剂,目前常见的注射用缓释剂型多为混悬剂、注射用微乳等。根据其分散介质不同,又分为水性混悬液和油性混悬液:口服缓释制剂主要应用在抗菌药、抗寄生虫药和微量元素添加剂上,在防治动物细菌性疾病,动物寄生虫病和微量元素缺乏症及动物育肥方面得到了广泛应用:植入控释给药系统(ICRDDS)系一类经手术植入皮下或经穿刺针导入皮下的控制释药的制剂。是指将药丸或药片植于皮下组织使其缓慢释放而起到长效作用的一种缓释剂型。可较长时间维持有效的血药浓度,如吡喹酮缓释包埋剂是一种有希望的预防动物血吸虫病的新剂型:透皮缓释制剂可以不断地经皮扩散、渗透后进入血液循环,能长时间维持稳定的血药浓度,避免口服和注射给药时的"峰谷"现象。透皮缓释制剂不但起到了治疗作用,避免了肝脏、胃肠道的首过效应,还提高了药物的生物利用度,减少了吸收代谢的个体差异及给药频率,且应用方便。随着各种新的药用辅料、设备、医学理论、药物制剂工艺的发展,越来越多的缓释制剂新技术出现并开始用于临床治疗,而发挥双重缓释作用。③缓释制剂的应用现状及展望近年来制剂工艺技术的提高和新型高分子载体材料的发明应用,使得缓释制剂的理论和技术不断发展并成熟。在目前的全国兽药市场上传统的粉散剂,注射剂剂型占据较大份额,真正意义上的高科技含量的缓释制剂品种所占份额。与发达国家相比还存在着很大的差距。原因主要有:(一)我国兽药市场不规范,兽药企业的研发生产管理水平均较低;(二)对技术人员要求较高,资金周转期长,限制了缓释制剂的开发。(三)缓释制剂本身存在的一些问题如用药剂量的灵活调节等。随着我国兽药工业的发展,缓释制剂研发生产水平的不断提高,兽药缓释制剂的发展必定有广阔的空间,在畜禽的疫病防治方面发挥巨大的作用。

关键词：兽药缓释制剂应用

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复方呋喃西林纳米乳的制备及体外抗菌活性比较

复方呋喃西林纳米乳的制备及体外抗菌活性比较

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：孙江才欧阳五庆许利耕杨雪峰西北农林科技大学动物医学院

【目的】纳米乳作为药物载体具有不良反应少、安全性高、可极大增加药物的溶解度、提高药物的稳定性以及增强药物的疗效等优点。本试验,将呋喃西林、替硝唑配合溶于油,加入适量的表面活性剂、助表面活性剂,通过转相乳化法制备复方呋喃... 详细信息

【目的】纳米乳作为药物载体具有不良反应少、安全性高、可极大增加药物的溶解度、提高药物的稳定性以及增强药物的疗效等优点。本试验,将呋喃西林、替硝唑配合溶于油,加入适量的表面活性剂、助表面活性剂,通过转相乳化法制备复方呋喃西林纳米乳。并考察其基本的理化性质及其体外抗菌活性,以期研制出一种质量稳定、抗菌活性高的复方呋喃西林纳米乳新制剂,为兽医临床治疗子宫内膜炎等疾病提供新的途通过体外抑菌试验考察该复方制剂的体外抗菌活性。【方法】用紫外分光光度计测定呋喃西林和替硝唑在3种油(IPM、橄榄油、石蜡油)和2种表面活性剂(RH40、Tween80)中的溶解度,采用转相乳化法确定出纳米乳的最佳配方,制备出复方呋喃西林纳米乳;利用透射电子显微镜(TEM)和激光粒度测定仪分别考察其形态和粒径;通过恒温加速试验分别在温度为40℃、60℃和4℃条件下于5 d、10d、20d和60d,考察其稳定性;通过紫外分光光度计法测定复方呋喃西林纳米乳中呋喃西林的含量;试验分为0.5%聚维酮碘组、宫炎清溶液纽、呋喃西林水溶液组、空白纳米乳组和复方呋喃西林纳米乳,通过体外抑菌试验考察其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和沙门氏菌的抗菌活性。【结果】制备的复方呋喃西林纳米乳最佳配方为呋喃西林-替硝唑、Tween80、Span80和橄榄油:制备的复方呋喃西林纳米乳为黄色澄清透明液体,电镜下纳米乳的液滴形态为球形,激光粒度分析仪分析结果显示纳米乳粒径分布范围窄,粒径较均匀,平均粒径为67.2nm;在温度为40℃、60℃和4℃条件下于5 d、10 d、20 d和60d,纳米乳均未出现分层、絮凝或药物析出等现象,药物含量测定结果也未见有显著下降;体外抗菌试验结果显示:常规制剂0.5%聚维酮碘和宫炎清溶液对上述四种细菌均有抑制作用,抑菌圈直径>10mm;传统的呋喃西林水溶液对上述细菌的抑菌圈直径>10mm,与常规制剂没有显著性差异;空白纳米乳对4种细菌均表现较强的抑制作用,与传统制剂之间的差异极显著(P<0.01):复方呋喃西林纳米乳对4种细菌的抗菌活性极强,显著的高于上述常规制剂(P<0.01)。【结论】制备的复方呋喃西林纳米乳是一种质量稳定、高效的抗菌剂,与传统制剂和水溶液剂型相比,其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的抗菌活性更强,在兽医临床上具有广阔的应用前景。

关键词：复方呋喃西林米乳稳定性抗菌活性

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金荞麦抗菌及免疫调节活性及其血清药理学研究

金荞麦抗菌及免疫调节活性及其血清药理学研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：乔红杰王贵平孙永学华南农业大学兽医药理研究室广东省农科院兽医研究所

【目的】金荞麦(Fagopyrum Dibotrys)是我国民间的一种常用中草药,含有大量的黄酮类化含物,在古代已用于治疗多种疾病。本文主要研究了金荞麦根不同提取物的抗菌和免疫作用,并用血清药理学的方法探讨了金荞麦根含药血清的抗菌及免疫调... 详细信息

【目的】金荞麦(Fagopyrum Dibotrys)是我国民间的一种常用中草药,含有大量的黄酮类化含物,在古代已用于治疗多种疾病。本文主要研究了金荞麦根不同提取物的抗菌和免疫作用,并用血清药理学的方法探讨了金荞麦根含药血清的抗菌及免疫调节活性。旨在为其在兽医临床上的应用提供依据。【方法】(1)金荞麦根不同溶剂提取物的制备:采用索氏提取法,用水和不同浓度的乙醇对金荞麦根中的有效成分进行了提取,并以芦丁为标准品、硝酸铝-亚硝酸钠为显色剂,采用紫外分光光度法对金荞麦根各提取物中总黄酮类成分进行了含量测定:(2)采用试管法测定金荞麦根各提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌和鸡沙门氏菌的体外抑菌活性。为评价金荞麦根提取物的免疫调节活性,将各提取物按照不同的浓度加入到培养的鸡脾淋巴细胞中,培养48h后,用MTT法测定淋巴细胞增值的变化:(3)应用60%的乙醇根提取物制备含药血清,首先通过预实验确定最佳的含药血清制备方案,包括给药剂量、给药方案和采血时间点的确定。设立3个剂量组(高40g生药/kg/d、中24g生药/kg/d、低6g生药/kg/d)和对照组(生理盐水),每天给药2次,连续给药10d,末次给药后40、80、120和180min分别翅下静脉采血,无菌分离血清,经56℃、30min灭活备用。观察血清不同添加量对鸡脾淋巴细胞增值活性的影响等指标确定了体外试验系统的血清最佳添加量;(4)为探讨含药血清对机体免疫调节活性的影响,用含药血清进行鸡脾淋巴细胞增值活性和鸡外周血T细胞分泌IL-2、IFN-γ活性免疫功能检测:(5)运用血清药理学的方法测定了含药血清的抗菌活性,采用纸片扩散法测定了含药血清对各受试菌的体外抗菌活性。【结果】金荞麦根不同溶剂提取物的制备中,60%的乙醇根提取液中总黄酮的含量最高,60%的乙醇根提取液亦对各受试菌的抗菌活性最强。同时60%的乙醇根提取液免疫调节活性为最好。金桥麦根含药血清对鸡脾淋巴细胞增值活性的影响呈明显的时-效及量-效关系,其中以中剂量组120min时相含药血清对鸡脾淋巴细胞的增值活性为最高。60%的金荞麦根乙醇提取物在灌胃40-180min时相的含药血清有免疫增强作用,但含药血清对各受试菌无体外抗菌活性。【结论】金荞麦根的60%的乙醇根提取液中总黄酮的含量最高,对各受试菌的抗菌活性和对鸡脾淋巴细胞的增值活性为最强。金荞麦根含药血清对鸡脾淋巴细胞增值活性和对鸡外周血T淋巴细胞IL-2mRNA、IFN-γmRNA的表达的影响呈明显的的时-效和量-效关系。

关键词：金荞麦根血清药理学抗菌活性免疫调节活性

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纳米银的制备及其复乳的体外抑菌活性

纳米银的制备及其复乳的体外抑菌活性

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：许利耕欧阳五庆李树珍何欣西北农林科技大学动物医学院

【目的】纳米银在催化、磁学、光学、电学及抗菌领域显示出优异的性能,近年来逐渐成为研究的热点。目前,已有许多方法用于纳米银的合成,主要分为物理法和化学法。物理法由于需要特殊的条件而限制了它的应用。化学法则操作简单、易控制,... 详细信息

【目的】纳米银在催化、磁学、光学、电学及抗菌领域显示出优异的性能,近年来逐渐成为研究的热点。目前,已有许多方法用于纳米银的合成,主要分为物理法和化学法。物理法由于需要特殊的条件而限制了它的应用。化学法则操作简单、易控制,但得到的纳米银颗粒不易转移和组装,容易发生团聚。生物还原法则反应速度很慢,且难以控制反应环境。在诸多的合成方法中,微乳液法具有操作简单、粒子可控性好、不易发生团聚等优点,逐渐成为合成纳米材料的一种有效方法。本研究探讨了以微乳体系合成纳米银的方法【方法】将AOT、IPM以适当比例[m（AOT）:m（IPM）=5:95]混合均匀,加入适量c（AgNO）=0.2mol/L硝酸银水溶液,搅拌至澄清。以W表示反胶束的含水量[W=c（水）:c（表面活性剂）],W=7.5。同样方法,向AOT/IPM混合体系中加入与硝酸银水溶液等体积的c（NH·HO）=0.6mol/L水合肼水溶液,搅拌至澄清。之后在搅拌的同时,将水合肼微乳逐滴加入到硝酸银微乳液中,继续搅拌约4h,从而制得纳米银。取纳米银W/O微乳适量,加入到聚氧乙烯氢化蓖麻油（Cremophor RH40）与茶油的混合体系中[m（RH4O）:m（茶油）=9:1],之后逐滴加入双蒸水,搅拌至澄清透明。此时形成纳米银复乳体系。用透射电子显微镜、紫外一可见分光光度计对纳米银进行表征,并对纳米银复乳的体外抑菌实验。【结果】在整个反应过程中,随着反应进行,微乳体系的颜色逐渐由无色变为浅黄色,表明有纳米银的生成。影响纳米银粒径大小的因素包括水核半径,表面活性剂、反应物浓度等。本方法所制备纳米银的最大吸收峰为417nm,符合纳米银等离子共振吸收峰特征,且吸收峰在417nm左右的一段狭窄波段内,说明该方法制得的纳米银粒径均匀。纳米银复乳的体外抑菌结果显示,纳米银复乳对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的最小抑菌质量浓度分别为50μg/L、100μg/L、50μg/L,说明其具有很强的抑菌活件。【结论】通过AOT/IPM/水油包水微乳体系,制备了纳米银。TEM分析显示,纳米银呈球状、粒径分布均匀。当W=7.5,c（AgNO）:c（NH·HO）=1:3时,所制备纳米银分散性好,粒径小,平均粒径30nm,且纳米银的生成量较高。纳米银复乳的体外抑菌结果显示。其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的最小抑菌质量浓度分别为50μg/L、100μg/L、50μg/L,具有很强的抑菌活性。所用的微乳体系无毒、无刺激性,无需将纳米银从微乳中分离出来,将其制备成复乳,即可用水无限稀释而用于医学抗菌领域,极大地降低了成本,且解决了微乳液法所制备纳米银在临床上应用不便的问题。

关键词：银纳米颗粒复乳抑菌活性

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复方丁香酚纳米乳的抗炎镇痛试验研究

复方丁香酚纳米乳的抗炎镇痛试验研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：阳卫超欧阳五庆何欣许利耕西北农林科技大学动物医学院

【目的】丁香酚具有解热、镇痛、抗炎、抗氧化等药理活性,抑菌效果显著,具有显著的祛蚊效果,并对蚊虫叮咬的局部皮肤有杀菌止痒的效果,且气味芳香,透皮吸收作用强。研究具有抗炎镇痛作用的复方丁香酚纳米乳的制备,并对其进行质量评价。... 详细信息

【目的】丁香酚具有解热、镇痛、抗炎、抗氧化等药理活性,抑菌效果显著,具有显著的祛蚊效果,并对蚊虫叮咬的局部皮肤有杀菌止痒的效果,且气味芳香,透皮吸收作用强。研究具有抗炎镇痛作用的复方丁香酚纳米乳的制备,并对其进行质量评价。【方法】准确称取定量的丁香酚、桉叶油、薄荷油、香茅油等多种天然植物提取液,混合均匀后作为油相,以RH40为表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂,称取定量的樟脑溶解于无水乙醇中,以蒸馏水为水相,制备复方丁香酚纳米乳;对复方丁香酚纳米乳进行稳定性研究;使用透射电镜和粒度分析仪对复方丁香酚纳米乳的形态学进行检测;根据复方丁香酚纳米乳对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响,研究复方丁香酚纳米乳的抗炎作用;根据复方丁香酚纳米乳对化学刺激性疼痛的影响以及其对热板致痛模型的作用,研究复方丁香酚纳米乳的镇痛作用。【结果】以混合表面活性剂与油相比例为9:1、8:2时可形成水包油型复方丁香酚纳米乳,其外观透明,澄清,流动性良好:复方丁香酚纳米乳在电镜下均呈圆球形,形态均匀;粒度分析结果表明平均粒径为75.1±3.7 nm;复方丁香酚普通混合液和复方丁香酚纳米乳均可抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀,在使用相同剂量时,抑制率分别为68.8%和90.9%,表明复方丁香酚纳米乳的抗炎效果优于普通混合液:复方丁香酚普通混合液和复方丁香酚纳米乳均可使30min内小鼠的扭动次数减少,对化学刺激性疼痛的抑制率分别为37.9%和60.5%,表明复方丁香酚纳米乳的镇痛作用比相同剂量下的复方丁香酚普通混合液强;复方丁香酚普通混合液和纳米乳均可提高小鼠在热板上的痛阈,在使用相同剂量时,对热板致痛的有效率分别为54.4%和96.5%,表明复方丁香酚纳米乳的镇痛效果显著优于复方丁香酚普通混合液。【结论】以丁香酚、桉叶油、薄荷油、丹皮酚等多种天然植物提取液为主要药物成份,以RH40为表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂,蒸馏水为水相,制备的复方丁香酚纳米乳透皮制剂经质量检测,结构稳定,黏度低,平均粒径为75.1±3.7 nm。镇痛实验结果表明复方丁香酚纳米乳能极显著提高小鼠的痛阈与扭体反应出现时间。抗炎实验结果表明复方丁香酚纳米乳能极显著减少二甲苯所致的小鼠耳廓炎症肿胀度。

关键词：复方丁香酚纳米乳抗炎镇痛

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紫苏子油纳米乳的制备及其对小鼠急性高血脂症的药效学研究

紫苏子油纳米乳的制备及其对小鼠急性高血脂症的药效学研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：吴旭锦欧阳五庆西北农林科技大学动物医学院

【目的】临床上应用的降血脂药对肝、肾多有不良反应。紫苏子油是唇形科紫苏的干燥成熟果实压榨而得的脂肪油,现代医学研究发现紫苏子油中不含胆固醇,而富含α-亚麻酸,可降血脂、抗动脉硬化、预防心血管疾病、预防老年痴呆症,具有极强... 详细信息

【目的】临床上应用的降血脂药对肝、肾多有不良反应。紫苏子油是唇形科紫苏的干燥成熟果实压榨而得的脂肪油,现代医学研究发现紫苏子油中不含胆固醇,而富含α-亚麻酸,可降血脂、抗动脉硬化、预防心血管疾病、预防老年痴呆症,具有极强的医用价值。但紫苏子油属干性油,在加工和储藏过程中极易氧化而失去生理活性,从而降低了其药效。因而防止紫苏子油氧化的方法是其生产、贮存中最关键的问题。纳米乳是粒径为1～100nm的乳滴分散在另一种液体中形成胶体分散系统,是一种新型的药物载体,对易挥发、易氧化的药物有保护作用,本实验以纳米乳为药物载体,制备紫苏子油纳米乳,并对其进行全面质量评价,以期寻找一种安全、高效的紫苏子油用药系统。【方法】选择合适的表面活性剂,助表面活性剂和油相,采用伪三元相图法进行处方筛选,制备出透明的紫苏子油纳米乳,取所制备的紫苏子油纳米乳0.1mL,稀释10倍后,经过2%磷钨酸染色,待样品干燥后在透射电子显微镜下观察其形态,另取该纳米乳20mL,用蒸馏水稀释5倍,用激光粒度测定仪测定其粒径;恒温加速试验:取紫苏子油纳米乳于-4℃、40℃、60℃及相对湿度在75%的条件下保存,分别于5d、10d后,取样观察纳米乳的外观,取该纳米乳于离心试管中,10 000 r/min离心5min,考察纳米乳的外观:采用腹腔注射蛋黄乳的方法建立小鼠急性高血脂症模型,并进行紫苏子油纳米乳对抗小鼠急性高血脂症的药效学研究。【结果】以RH40为表面活性剂,小麦胚芽油为油相,制备出的紫苏子油纳米乳外观澄明,有淡蓝色乳光;透射电子显微镜下紫苏子油纳米乳形态为圆球形,分布均匀,见图2。平均粒径为58nm;恒温加速试验表明,紫苏子油纳米乳于—4℃、40℃、60℃及相对湿度在75%下经5 d、10 d后仍澄清、透明,紫苏子油纳米乳经10 000 r/min离心5min后也保持澄清、透明。表明该纳米乳稳定性好;小鼠急性高血脂症模型实验表明,正常组与模型组血脂水平存在统计学上的差异显著,可以确定造模成功,紫苏子油纳米乳能显著降低血浆胆固醇水平包括TC,TG和LDL-C,并提高HDL-C,对高脂血症状有所缓解。【结论】制备的紫苏子油纳米乳是一种质量稳定、高效的抗高血脂乳剂。

关键词：紫苏子油纳米乳质量评价高血脂

来源：评论

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特比萘芬纳米乳的制备及其质量评价

特比萘芬纳米乳的制备及其质量评价

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：杨宝平欧阳五庆吴旭锦西北农林科技大学动物医学院

【目的】针对特比萘芬现有剂型的不足和纳米乳作为药物载体的优点,以纳米乳为特比萘芬药物的载体,提供一种特比萘芬的纳米乳抗真菌药物,并对特比萘芬纳米乳的质量进行评价。【方法】制定不同的特比萘芬纳米乳配方,将配方中的①、②混合... 详细信息

【目的】针对特比萘芬现有剂型的不足和纳米乳作为药物载体的优点,以纳米乳为特比萘芬药物的载体,提供一种特比萘芬的纳米乳抗真菌药物,并对特比萘芬纳米乳的质量进行评价。【方法】制定不同的特比萘芬纳米乳配方,将配方中的①、②混合搅拌混匀,以备用;将③溶入④(缓慢搅拌以至完全溶解)以备用。然后将①②的混合液与③④的混合液混合,充分搅拌作为油相以备用。将⑤慢慢的滴加到上述油相中,边滴加水边搅拌,直至形成均匀透明的分散体系,即得特比萘芬纳米乳。在透射电镜下观察了其粒径的大小及分布,光稳定性试验和温度稳定性试验考察了其稳定性。【结果】特比萘芬纳米乳呈圆形或椭圆形,均匀透明,粒径在10～100nm之间,平均粒径约为50nm,说明特比萘芬纳米乳粒径小、分部均匀、分散性好。高速离心试验结果为经4000r/min的转速25min离心,特比萘芬纳米乳仍保持澄清透明,未见到有特比萘芬晶体的析出和分层现象。光稳定性试验结果为在室温光照10d后,特比萘芬纳米乳仍保持澄清透明,无浑浊、分层现象。温度稳定性试验结果为在4℃、25℃和37℃三种温度条件下留样观察30d后,特比萘芬纳米在此三种温度条件下均保持澄清透明,未见分层、浑浊和结晶析出的现象。以上结果表明萘芬纳米乳光稳定性、热力学稳定好。【结论】转相乳化法是制备微乳的常用方法,其制备微乳的工艺简单、不需要特殊设备。本试验就采用转相乳化法制备的o/w微乳粒径在10nm～100nm之间,纳米乳液均匀透明、略带乳光,粘度低、流动性好,表面张力低、吸附性强,是各相均一的热力学稳定的油水混合系统。本试验所制的纳米乳乳滴呈圆形或椭圆形,粒径在10nm～100nm,粒径均匀分散性好,平均粒径小。从纳米乳的稳定性试验可看出,本试验所制的纳米乳十分稳定。特比萘芬纳米乳在经4000r/min 25min离心未有分层和品体的析出,证明其各相均一、热力学稳定性好。在光照10d后,仍保持澄清透明、无浑浊现象,说明其光稳定性好;在4℃、25℃和37℃三种温度条件下30d后,依然澄清透明、无分层、浑浊和晶体析出现象,其对温度的耐受性好、对温度稳定性强。试验中还发现搅拌速度和滴加蒸馏水的速度对微乳的形成和粒径的影响很大,搅拌速度越快、滴加蒸馏水的速度越慢,制得的纳米乳粒径越小、粒径分布越均匀。

关键词：纳米乳特比萘芬制备质量评价

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黄藤素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及体外释药研究

黄藤素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及体外释药研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会

作者：李云让欧阳五庆西北农林科技大学动物医学院宝鸡职业技术学院

【目的】制备黄藤素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（F-PBCA-NP）对其进行质量评价,并进行体外释药特性研究。【方法】使用单因素实验初选制备条件,确定表面活性剂、附加剂、pH、温度和搅拌速度。参照CarilineO等的乳化聚合法,并作适当改进... 详细信息

【目的】制备黄藤素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（F-PBCA-NP）对其进行质量评价,并进行体外释药特性研究。【方法】使用单因素实验初选制备条件,确定表面活性剂、附加剂、pH、温度和搅拌速度。参照CarilineO等的乳化聚合法,并作适当改进制备黄藤素纳米粒。称取黄藤素加到2蒸馏水中,在37℃恒温水浴中加热溶解配成A液。称取表面活性剂右旋糖酐D-70分散在蒸馏水中加热溶解,冷却后再加入表面活性剂泊洛沙姆F-68,加蒸馏水配成B液。A液和B液分别用盐酸调pH至2.0,在搅拌条件下将氰基丙烯酸正丁酯（BCA）缓慢滴入B液中,搅拌20min后再将A液逐步加入,在电磁搅拌器上搅拌7h,加入附加剂NasSO继续搅拌3h。用1N氢氧化钠溶液调pH至5.0,用孔径为0.45μm微孔滤膜抽滤,低温超速离心（4℃,50000r/m,150min）后得沉淀物,冷藏备用。用磷钨酸染色法,在透射电镜下观察纳米粒的形态。用激光粒度分析仪测定粒径及分布。用紫外分光光度计在273nm处测定低温超速离心后上清液中黄藤素的含量,计算包封率和载药量。进行体外释药实验。【结果】不同的表面活性剂对纳米粒形态及粒径的影响不同,右旋糖酐D-70+泊洛沙姆F-68（1:1）要比单独使用右旋糖酐D-70、泊洛沙姆F-68能得到成球性好、粒径小、分布窄的纳米粒;pH值对粒径的影响较大,温度和搅拌速度的影响不大:用NaSO作附加剂制得的纳米粒载药量最高:按优化条件制备黄藤素纳米粒,所得纳米粒形态圆整、表面光滑、大小均匀、纳米粒之间无黏连:平均粒径为64nm,载药量50.996,包封率67.8%;根据黄藤素各制剂的体外累积释放曲线可知,黄藤素片剂释药速率出现明显的阶段性变化即先缓再快后平:黄藤素胶囊和纳米粒的释药都较平缓。纳米粒的释放曲线可分为突释、扩散和降解阶段,突释阶段纳米粒释药量为31%;扩散阶段纳米粒释药持续时间最长,释药稳定增长,释药量>65%。【结论】表面活性剂不仅影响BCA的分散程度还对成球后的纳米粒有稳定作用:药物/BCA的比率影响纳米粒的载药量和包封率,故处方优化中以这三个因素为重点。体外释药研究表明,载药纳米粒在体内的吸收依赖于载体的理化特性而与药物无关,载药聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒的缓释可长达50h,故黄藤素纳米比胶囊有更高的生物利用度和缓释效果。

关键词：黄藤素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒体外释药

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毛蕊花糖苷抑制肺炎链球菌溶血素寡聚体形成及其致病力

毛蕊花糖苷抑制肺炎链球菌溶血素寡聚体形成及其致病力

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：赵小然李洪恩柳博文郭岩邓旭明吉林大学动物医学学院

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)感染在世界各地的严重发病率和死亡率均十分严重,引起一系列疾病包括中耳炎、肺炎、脑膜炎、菌血症等,由于抗β-内酰胺抗生素菌株、甚至抗万古霉素菌株的出现,使得这些感染性疾病越来越难以治疗炎... 详细信息

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)感染在世界各地的严重发病率和死亡率均十分严重,引起一系列疾病包括中耳炎、肺炎、脑膜炎、菌血症等,由于抗β-内酰胺抗生素菌株、甚至抗万古霉素菌株的出现,使得这些感染性疾病越来越难以治疗炎。链球菌溶血素(PLY)是一个53-kDa的蛋白,属于胆固醇依赖溶细胞素家族,是肺炎链球菌的一个主要毒力因子。内分泌蛋白PLY释放到细胞外环境后结合于细胞质膜胆固醇,插入细胞膜后便形成相对较大的寡聚孔,靶细胞在孔形成过程中溶解。基于这一点,寡聚体的形成在PLY作用机制中十分关键。因此,以PLY为靶标的溶血素活性抑制剂的发现极可能为肺炎链球菌感染的治疗提供新途径。构建PET28a-PLY表达载体,得到重组PLY蛋白,通过药物筛选选定毛蕊花糖苷(VBS),进行最小抑菌浓度(MIC)试验和免疫印迹试验。进行VBS干预PLY对人肺腺癌上皮细胞(A549)乳酸脱氢酶(LDH)释放试验。肺炎链球菌D39(NCTC 7466)和PLN(肺炎链球菌溶血素敲除株)鼻腔接种小鼠肺炎模型造模,VBS治疗组皮下注射100 mg/kg每3小时一次,对照组及PLN组注射等量无菌PBS。取肺组织制作病理组织切片、计算肺菌落数,取肺泡灌洗液测定炎症因子水平。毛蕊花糖苷(VBS)不具备体外抑菌作用,不影响病原菌溶血素的表达量,但影响PLY寡聚体的形成,并剂量依赖性地抑制溶血素溶血活性。分子动力学模拟和突变分析表明VBS可结合于PLY的3、4结构域之间,阻碍PLY寡聚体形成并影响其溶血活性。此外,VBS可有效抑制PLY引起的人肺腺癌上皮细胞(A549)的细胞损伤(P<0.01),VBS对肺炎链球菌肺炎小鼠模型肺损伤表现出显著的保护作用,降低小鼠死亡率,VBS治疗组肺炎小鼠模型肺组织内菌落数减少(P<0.01)、TNF-α和IL-1β炎症因子水平降低(P<0.05)。本研究的结论对于抗肺炎链球菌感染的药物设计可起到一定帮助,而抗毒力治疗策略因其不加重细菌生存压力也可成为有力的抗菌治疗辅助措施,即VBS可作为治疗肺炎链球菌感染新策略的有力备选。

关键词：毛蕊花糖苷肺炎链球菌溶血素寡聚

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16S rRNA甲基化酶RmtE在中国的首次报道

16S rRNA甲基化酶RmtE在中国的首次报道

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：夏菁孙坚李亮廖晓萍刘雅红华南农业大学兽医学院药理实验室

【目的与意义】氨基糖苷类药物在临床上通常和β-内酰胺类药物连用,用于治疗由G和G致病菌引起的严重感染。然而,细菌通过不同的耐药机制来应对氨基糖苷类药物,使得其应用蒙上阴影。近年来,16S rRNA甲基化酶的研究日趋增多,因其可以介导... 详细信息

【目的与意义】氨基糖苷类药物在临床上通常和β-内酰胺类药物连用,用于治疗由G和G致病菌引起的严重感染。然而,细菌通过不同的耐药机制来应对氨基糖苷类药物,使得其应用蒙上阴影。近年来,16S rRNA甲基化酶的研究日趋增多,因其可以介导对氨基糖苷类药物的高度耐药,也成为人医关注的焦点。从2003年的首次报道以来,目前已经有十种16S rRNA甲基化酶基因被发现。而在已知的16S rRNA甲基化酶的报道中,只有两例rmtE基因的报道,分别是由美国分离的牛源和人源大肠杆菌。我们在对实验室保存的2002-2012年分离的963株食品动物源大肠杆菌进行药物敏感性实验时发现,猪源大肠杆菌S68和87（分别分离于2005和2010年）对阿米卡星和庆大霉素表现出高度耐药（MIC>256μg/mL）,通过PCR和测序验证发现,这两株菌都携带16S rRNA甲基化酶RmtE。进一步序列对比发现rmtE基因第20个碱基发生突变（T→C）,导致第7位氨基酸的替代（Val→Ala）。根据16S rRNA甲基化酶推荐的命名规则,我们将它命名为rmtE2。【方法与结果】对两株菌进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）和种族进化关系分析细菌的亲缘关系。结果显示两株菌拥有一样的PFGE谱型,且都属于系统发育组A组。多位点序列分析（MLST）结果表明两株菌都属于ST898型。同时,通过接合转移实验、复制子分型、限制性片段多态性分析（RFLP）、S1-PFGE及Southern杂交和rmtE基因环境的检测,分析产rmtE大肠杆菌的分子传播机制。结果显示,两株菌均成功进行接合转移,两个质粒都属于IncI1型,并且拥有同样的EcoRI酶切图谱。S1-PFGE和Southern杂交的结果表明,rmtE位于约110 kb大小的质粒上。通过PCR-mapping和RETS-PCR的方式对rmtE上下游基因进行检测的结果表明,其上下游分别是ISCR20型和ISVs1型的转座酶,这与已报道的rmtE的基因环境不一致,提示中国的rmtE基因可能具有不同的进化和整合方式。【结论】这是rmtE在中国的首次报道,实验结果表明,rmtE基因既可以进行垂直传播,也可以进行水平传播。我们建议在耐药性监测时,要加强对这类不常见基因的检测,以防耐药性风险被低估。

关键词： 16SrRNA甲基化酶 rmtE 大肠杆菌 IncI1 ST898

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