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机构

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13 篇 四川大学
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10 篇 辽宁省辽阳市宏伟...
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9 篇 河北农业大学
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8 篇 云南农业大学

作者

39 篇 金宁一
39 篇 丁壮
23 篇 王川庆
20 篇 程安春
20 篇 陈陆
18 篇 汪铭书
18 篇 陈焕春
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16 篇 鲁会军
15 篇 常洪涛
15 篇 刘红英
15 篇 金梅林
14 篇 曹三杰
14 篇 徐明
14 篇 文心田
14 篇 王红宁
14 篇 夏咸柱
14 篇 黄小波
13 篇 杨松涛
13 篇 李昌

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629 篇 中文
3 篇 英文

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鹅黄病毒E蛋白的克隆与原核表达

鹅黄病毒E蛋白的克隆与原核表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：黄欣梅李银赵冬敏刘宇卓张敬峰韩凯凯钮慧敏江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

禽黄病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。本研究选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计... 详细信息

禽黄病毒是新发现的一种可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的黄病毒属病毒。本研究选取鹅黄病毒囊膜蛋白(E蛋白)基因进行克隆、表达和纯化,以获得能应用于血清学诊断和可作为亚单位疫苗的重组蛋白。根据鹅黄病毒JS804株全基因序列设计了一对引物,采用RT-PCR方法扩增出了鹅黄病毒的E基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-E,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。结果表明,鹅黄病毒E基因在大肠杆菌中获得高效表达,融合蛋白分子量约为70kDa,主要以包涵体形式存在于菌体中。WesternBlot和间接免疫荧光试验发现,重组E蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。鹅黄病毒E蛋白的原核表达为进一步研究该蛋白功能、建立血清学检测方法及研制亚单位疫苗奠定了基础。

关键词：重组蛋白原核表达全基因序列间接免疫荧光试验大肠杆菌亚单位疫苗禽黄病毒重组表达质粒包涵体黄病毒属病毒反应原性抗组氨酸抗体囊膜蛋白免疫原性重组质粒产蛋下降

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猪附红细胞体的体外培养研究

猪附红细胞体的体外培养研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：吴志明闫若潜刘光辉赵雪丽张志凌张健河南省动物疫病预防控制中心

为了研究猪附红细胞体(***)的综合防控技术,建立快速诊断方法、筛选有效药物及研制有效疫苗等,本实验进行了***的体外培养方法研究。用RPMI-1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作为体外培养猪附红细胞体(***)的基础培养基,以无附红细... 详细信息

为了研究猪附红细胞体(***)的综合防控技术,建立快速诊断方法、筛选有效药物及研制有效疫苗等,本实验进行了***的体外培养方法研究。用RPMI-1640和胎牛血清按比例混合并添加肌苷作为体外培养猪附红细胞体(***)的基础培养基,以无附红细胞体感染的兔红细胞泥作为培养寄生载体,置于含5%CO2的37℃生化恒温培养箱进行猪附红细胞体的体外培养研究。培养时每24h换培养液一次,每36h传代一次,可连续传代40次以上,并能保持最高感染率90%以上;感染***的猪红细胞在4℃条件下可保持30d以上而不发生溶血;兔红细胞接种新鲜制备的自然感染***的猪红细胞,36h后感染率可达90%左右并一直维持到96h,96h后有少量细胞开始出现溶血;接种4℃条件下保存30天(d)以内自然感染***的猪红细胞与新鲜制备的自然感染***的猪红细胞对兔红细胞的感染率影响差异不显著。成功建立了***的体外培养方法,该培养方法虫体感染率高,可传代,易于操作,便于推广应用。

关键词：猪附红细胞体体外培养传代感染率

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猪2型链球菌安徽分离株的毒力基因、溶血性及耐药性分析

猪2型链球菌安徽分离株的毒力基因、溶血性及耐药性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：许大文赵洪武程谦郑浩刘军军马建华魏建忠孙裴王桂军李郁安徽农业大学动物科技学院

为了解猪2型链球菌(*** 2)安微分离株的毒力基因分布特征以及溶血性和耐药性,针对19株*** 2安徽分离株,采用PCR方法检测cps2.J、mrp、epf、sly4种毒力基因,PA法和microE LISA法检测溶血类型和溶血价,K-B法检测对25种抗生素的敏感性。结... 详细信息

为了解猪2型链球菌(*** 2)安微分离株的毒力基因分布特征以及溶血性和耐药性,针对19株*** 2安徽分离株,采用PCR方法检测cps2.J、mrp、epf、sly4种毒力基因,PA法和microE LISA法检测溶血类型和溶血价,K-B法检测对25种抗生素的敏感性。结果显示,11株毒力基因型为cps2J+/mrp+/epf+/sly+,占57.9%,为优势基因型;8株呈α溶血、溶血价为1:8～1:32,8株呈不典型β溶血、溶血价为1:4～1:32,3株呈β溶血、溶血价为l:64～1:128;对利福平、头孢他啶、氟苯尼考、先锋霉素V的敏感率较高,分别达到89.5%、89.5%、78.9%、78.9%,对强力霉素、四环素、杆菌肽和磺胺异噁唑的耐药率较高,分别为84.2%、84.2%、84.2%、78.9%,多重耐药谱为强力霉素、四环素、杆菌肽和磺胺异噁唑。结果表明,安徽省猪群中流行的*** 2毒力基因的分布特征与国内外报道的相似,CPS、MRP、EPF和SLY是重要的毒力因子;*** 2的溶血类型与其SLY的溶血价相关,但sly基因的不完整性变化并非影响*** 2的溶血性;*** 2安徽分离株的多重耐药性严重,耐药谱与其他地区存在一定差异。

关键词：猪2型链球菌毒力基因溶血性耐药性安徽

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猪链球菌2型新型保护性抗原HP0197与宿主细胞相互作用的研究

猪链球菌2型新型保护性抗原HP0197与宿主细胞相互作用的研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：陈博张安定许仲旻陈焕春金梅林农业微生物学国家重点实验室病毒室华中农业大学动物科学与动物医学学院

猪链球菌(Streptococcus suis,***)是一种重要的细菌性猪病病原,其常给全球的养猪业造成巨大损失。当感染***后,病猪通常会出现脑膜炎,关节炎,心内膜炎,以及败血症等症状。尽管***已在全球引起了高度的关注,然而当前对其致病机理的研究... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis,***)是一种重要的细菌性猪病病原,其常给全球的养猪业造成巨大损失。当感染***后,病猪通常会出现脑膜炎,关节炎,心内膜炎,以及败血症等症状。尽管***已在全球引起了高度的关注,然而当前对其致病机理的研究还很有限。在本研究前期的工作当中,HP0197蛋白已被鉴定为SS2新型的保护性表面抗原和毒力相关蛋白。然而该蛋白的生物学功能尚不清楚,其在致病过程中的作用还有待于进一步证实。在本研究中,我们试图通过鉴定HP0197与宿主细胞的相互作用过程,进而为阐明该蛋白的生物学功能提供理论依据。首先,我们通过间接免疫荧光实验证实了HP0197能够与Hep-2细胞发生相互作用。进一步实验显示,这种相互作用可以被肝素和胰酶完全阻断,其暗示着宿主细胞表面的类肝素的分子是HP0197的细胞受体。另外,HP0197还被发现能够与葡萄糖相结合,因此HP0197可能参与着***的能量代谢。为了证实这个推测,我们比较了△hp0197菌株和亲本株在不同培养时期的HPr蛋白的生物学活性。结果显示:当hp0197基因缺失后,菌株体内的HPr蛋白的磷酸化随之改变,因此能够进而影响碳代谢调节基因CcpA的功能。

关键词：宿主细胞保护性抗原猪链球菌 HP0197

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传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的克隆及变异分析

传染性支气管炎病毒中国分离株S1基因的克隆及变异分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：胥翠萍张国中赵继勋中国农业大学动物医学院

2003年至2005年间,从中国各地不同的免疫发病鸡群分离到多株传染性支气管炎病毒(IBV)。选取其中的四个典型毒株对其S1基因进行了克隆和测序分析。四株分离毒S1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性介于88.98%和99.28%之间,与14株IBV标准株的... 详细信息

2003年至2005年间,从中国各地不同的免疫发病鸡群分离到多株传染性支气管炎病毒(IBV)。选取其中的四个典型毒株对其S1基因进行了克隆和测序分析。四株分离毒S1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性介于88.98%和99.28%之间,与14株IBV标准株的核苷酸和氨基酸序列同源性为70.06～81.40%。选取14株IBV标准株和2003～2005年已在GenBank上登录序列的其它31株中国分离株绘制的系统进化树显示,近几年中国IBV分离株可基本上划分成四个主要的基因群,中国分离株中61.29%属于第四基因群,该群与4/91株具有一定的相关性,尤其在免疫原性和中和位点上,是目前中国IBV流行的主要类型,揭示4/91型疫苗对中国养禽生产具有重要作用。

关键词：传染性支气管炎病毒分离株 S1基因序列分析

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不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：张安云王红宁雷昌伟刘必慧四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室 “985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台生物资源与生态环境教育部重点实验室

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种,对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况,并对qnrD基因进行克隆,原核表达。2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株),沙门氏菌(31株),... 详细信息

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种,对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况,并对qnrD基因进行克隆,原核表达。2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株),沙门氏菌(31株),肺炎克雷伯氏菌(46株),奇异变形杆菌(20株),共238株,采用微量稀释法测定试验菌株对环丙沙星(CIP)等四种喹诺酮类药物的MIC值;运用PCR方法调查qnrD基因的流行、分布情况;将qnrD基因定向克隆到表达载体pET-30b(+)中,转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测qnrD基因的表达。试验菌株的总耐药率分别为:沙门氏菌(88.41%),奇异变形杆菌(82.65%),肺炎克雷伯氏菌(78.36%),大肠杆菌(60.25%);qnrD基因的检出率分别为大肠杆菌(42.19%),沙门氏菌(28.57%),肺炎克雷伯氏菌(28.57%),奇异变形杆菌(20.37%);SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-qnrD可成功的在大肠杆菌中表达qnrD蛋白。本研究首次报道了qnrD基因在不同细菌中的流行情况,首次在大肠杆菌,肺炎克雷伯氏菌中发现了qnrD基因,对qnrD基因进行原核表达为后续试验提供了基础材料。

关键词：喹诺酮 qnrD基因耐药表型原核表达

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2010-2011年华中地区猪流行性腹泻病毒流行毒遗传进化分析

2010-2011年华中地区猪流行性腹泻病毒流行毒遗传进化分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：霍金耀陈陆赵军常洪涛王新卫杨霞郑逢梅刘红英姚惠霞王川庆河南农业大学牧医工程学院

2010年,猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)再次在中国出现严重暴发。为探明该病再次流行的原因,对2010年10月至2011年12月之间收集的15份来自中国中部不同地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒... 详细信息

2010年,猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)再次在中国出现严重暴发。为探明该病再次流行的原因,对2010年10月至2011年12月之间收集的15份来自中国中部不同地区猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株M和ORF3基因进行RT-PCR扩增、克隆、测序及分析。序列分析显示,与参考毒株相比,15株PEDV毒株M和ORF3基因部分核苷酸及氨基酸位点发生改变。基于M和ORF3基因的遗传进化分析显示,这些流行毒株和参考株可以分为3个群(G1、G2、G3),15株中国中部毒株均属于第3群,与2007年韩国株、2007-2008年泰国株、2010年越南株及2010-2011年中国其它地区流行毒株亲缘关系密切,而与欧洲株(CV777、Brl/87)及中国现用疫苗株亲缘关系较远。另外,15株中国中部毒株与2003-2007年中国分离株(LJB-03、JS-2004-2、DX、QH、LZC)不在同一亚群,推测PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势,最近在华中地区广泛流行的PEDV是一个新的基因型。

关键词：猪流行性腹泻病毒分子流行病学系统进化分析 ORF3基因 M基因

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H5N1亚型AIV HA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析

H5N1亚型AIV HA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：庞耀珊谢芝勋谢丽基邓显文谢志勤刘加波谢体三广西壮族自治区兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁市蓝光生物技术有限公司

血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIVHA基因编码... 详细信息

血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIVHA基因编码的氨基酸序列进行分析,在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后,构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a(+)-HA。经测试,该重组质粒在1 mmol/L IPTG诱导剂作用下诱导过夜,能在大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)中高效表达,并得到48.1 kD大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后,与福氏佐剂等量混合制备成抗原,以200μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次,采血分离血清。Western-Blot试验结果表明,该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应,在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,保留了HA蛋白的抗原活性,提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。

关键词：禽流感病毒(AIV) H5N1亚型抗原表位表达

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鸭病毒性肝炎爆发流行的病原分离和鉴定

鸭病毒性肝炎爆发流行的病原分离和鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈海军程安春汪铭书朱德康杨苗周毅陈孝跃动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心

2006年四川成都、西昌等地爆发流行具有鸭病毒性肝炎(DVH)典型临床症状和病变的传染病,从间接免疫荧光检测呈阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30-40nm,对氯仿、pH3.0、50℃60min的处理不敏... 详细信息

2006年四川成都、西昌等地爆发流行具有鸭病毒性肝炎(DVH)典型临床症状和病变的传染病,从间接免疫荧光检测呈阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30-40nm,对氯仿、pH3.0、50℃60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24-60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV)高免血清中和。分离毒人工感染1日龄雏鸭后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化,并能重新分离到相同病毒。间接免疫组化检测自然病例和人工感染雏鸭的肝、脾、肾等均出现阳性结果。结果表明分离到的3株病毒均为Ⅰ型DHV,为DVH有效预防提供了有用的实验数据。

关键词：鸭病毒性肝炎爆发流行病原分离鉴定

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清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒VP1-VP4抗原中的作用

清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒VP1-VP4抗原中的作用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：高云欢李娜安鹏丽董昌海李丽敏王家鑫河北农业大学动物科技学院免疫学实验室

目的:研究清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒抗原中的作用。方法:构建pET-32a-VP1-VP4原核表达载体,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白VP1-VP4。制备骨髓源树突状细胞(BMDC)和淋巴结T细胞,通过蛋白酶体抑制剂、溶酶体抑制剂和清道夫受... 详细信息

目的:研究清道夫受体在树突状细胞提呈口蹄疫病毒抗原中的作用。方法:构建pET-32a-VP1-VP4原核表达载体,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白VP1-VP4。制备骨髓源树突状细胞(BMDC)和淋巴结T细胞,通过蛋白酶体抑制剂、溶酶体抑制剂和清道夫受体抑制剂以不同组合处理骨髓源树突状细胞(BMDCs)然后将VP1-VP4融合蛋白质负载处理后的BMDCs,与淋巴结T细胞共培养,以单独的BMDCs组和T细胞组为对照,收集不同时间点共培养上清液,ELISA检测其中IFN-γ含量。结果:本实验成功构建了pET-32a-VP1-VP4原核表达载体,并获得了VP1-VP4融合蛋白质。经poly(Ⅰ)处理的试验组S4组除24h和经乳胞素和poly(Ⅰ)共同处理的试验组S1组无统计学差异(P>0.05)之外,在每个时间点产生的IFN-γ含量均明显高于其他各组,且差异极显著(P<0.01);S1组在每个时间点产生的IFN-γ含量均高于经乳胞素和氯喹及poly(Ⅰ)处理的试验组S3组、经氯喹和poly(Ⅰ)处理的试验组S2组、BMDCs组及T组,且差异极显著(P<0.01)。结论:清道夫受体在BMDCs提呈VP1-VP4抗原进而活化淋巴结T细胞过程中发挥负调节作用。

关键词：口蹄疫病毒 VP1-VP4融合蛋白质树突状细胞抗原提呈 T细胞

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