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5 篇 期刊文献

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- 1 篇 教育学

主题

21 篇 序列分析
20 篇 elisa
19 篇 prrsv
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14 篇 禽流感病毒
13 篇 原核表达
13 篇 单克隆抗体
13 篇 rna
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11 篇 禽流感
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11 篇 鉴定
10 篇 口蹄疫
10 篇 新城疫病毒
10 篇 分离鉴定
10 篇 rt-pcr

机构

77 篇 吉林大学
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42 篇 军事医学科学院军...
30 篇 河南农业大学
24 篇 华中农业大学
22 篇 中国农业科学院哈...
20 篇 南京农业大学
19 篇 吉林农业大学
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16 篇 河南省动物疫病预...
13 篇 四川大学
10 篇 黑龙江八一农垦大...
10 篇 辽宁省辽阳市宏伟...
9 篇 华南农业大学
9 篇 河北农业大学
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8 篇 新疆畜牧科学院兽...
8 篇 上海市畜牧兽医站
8 篇 辽宁益康生物制品...
8 篇 云南农业大学

作者

39 篇 金宁一
39 篇 丁壮
23 篇 王川庆
20 篇 程安春
20 篇 陈陆
18 篇 汪铭书
18 篇 陈焕春
16 篇 杨霞
16 篇 鲁会军
15 篇 常洪涛
15 篇 刘红英
15 篇 金梅林
14 篇 曹三杰
14 篇 徐明
14 篇 文心田
14 篇 王红宁
14 篇 夏咸柱
14 篇 黄小波
13 篇 杨松涛
13 篇 李昌

语言

629 篇 中文
3 篇 英文

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H3、H9亚型流感病毒多表位核酸疫苗毒构建及其表达研究

H3、H9亚型流感病毒多表位核酸疫苗毒构建及其表达研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈义锋金宁一赵建增田明尧鲁会军南文龙赵翠青霍晓伟大北农集团生物制品事业部动物医学研究中心

构建流感病毒多表位的的核酸疫苗,并研究表位基因在BHK细胞内表达产物的生物学活性。筛选流感病毒主要抗原(HANANP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感通用多表位基因(Epi),然后定向克隆至真核表达载体pVAX1的... 详细信息

构建流感病毒多表位的的核酸疫苗,并研究表位基因在BHK细胞内表达产物的生物学活性。筛选流感病毒主要抗原(HANANP M)优势抗原表位基因,以生物信息学软件优化其排列结构合成流感通用多表位基因(Epi),然后定向克隆至真核表达载体pVAX1的CMV启动子下游,构建多表位核酸疫苗pVAX1-Epi。最后将该重组质粒转染BHK细胞,提取细胞全RNA,以RT-PCR方法目的基因;以间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白免疫印迹分析(Westblott ing)检测其表达产物抗原性。RT-PCR检测到目的基因;IFA检测到特异性荧光存在;Westblotting检测到目的蛋白条带。本试验所构建的重组质粒pVAX1-Epi,在真核细胞内均获了有效地转录和表达;而且其表达产物均能与相应的抗体特异性结合,证明了其具有一定的生物学活性和抗原性,有望能针对H3、H9亚型流感病毒提供保护。

关键词：多表位流感病毒核酸疫苗

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检测禽白血病病毒的荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

检测禽白血病病毒的荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：李佳桃汤承岳华西南民族大学生命科学与技术学院

gag基因是禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)的群特异性基因,根据GenBank中公布的gag基因的保守序列,按照real-time PCR引物的要求设计合成了1对引物,建立了基于SYBR Green I模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该... 详细信息

gag基因是禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)的群特异性基因,根据GenBank中公布的gag基因的保守序列,按照real-time PCR引物的要求设计合成了1对引物,建立了基于SYBR Green I模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增;扩增效率为94.6%;组内的为0.28%～1.45%;组间CV%为2.13%-3.84%;最低可检测82个拷贝的病毒DNA,在8.2×102～8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(r=0.9994);可在5h内完成样品检测;与普通PCR方法相比,灵敏度高出103倍。对10例临床疑似样本的检出率为4/10,高于普通PCR的3/10。将4份阳性样本测序,结果证明为ALV的特异序列,与ALV gag基因核苷酸同源性为97.8～98.9%。对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1%,带毒鸡群的阳性率为14/14。本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。本方法的建立属于十一五国家科技支撑计划(2006BAD06A11).

关键词：禽白血病病毒 gag基因实时荧光定量RT-PCR

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球虫(菌)清缓释剂防治仔猪球虫病及大肠杆菌病效果分析

球虫(菌)清缓释剂防治仔猪球虫病及大肠杆菌病效果分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：杨琳芬王庭林徐明满邓丁友毛俊方桂林张传辉吴立群占清标江西省农业厅上饶市农业局横峰县农业局玉山县农业局

目的:寻求控制仔猪球虫病及大肠杆菌病的有效方法。方法:1、选病猪40头,分注射球虫清缓释剂组(1组)、球菌清缓释剂组(2组)和拌料日常饲喂伯氨喹啉组(3组)、地克珠利+氟哌酸组(4组),投药后5、20、30、40、60天粪检查球虫卵囊、大肠杆菌,... 详细信息

目的:寻求控制仔猪球虫病及大肠杆菌病的有效方法。方法:1、选病猪40头,分注射球虫清缓释剂组(1组)、球菌清缓释剂组(2组)和拌料日常饲喂伯氨喹啉组(3组)、地克珠利+氟哌酸组(4组),投药后5、20、30、40、60天粪检查球虫卵囊、大肠杆菌,观察治愈率;2、选正常10日龄仔猪150头分5组,前4组分别按上述方法投药,第5组为空白对照,观察增重率、死亡率、节省防治费等。结果:1、1组和2组5～60天,球虫病及大肠杆菌病的治愈率均为100%;3组和4组第5天治愈率均为0,20～60天,治愈率为70.0～100.0%。2、1组和2组比3组和4组及对照组增重率分别提高19.2%、21.5%、47.9%和33.9%、38.0%、39.9%;成活率分别提高10、8、20个百分点;注射组比口服组节省防治费1.4元。注射组单位增重的饲料消耗较口服组及对照组分别下降24.1%、26.5%、54.0%和24.1%、26.5%、54.0%。3、推广应用该方法防治90.5万头仔猪,获得经济效益3649万元(增重效益、挽回死亡仔猪损失、减少饲料费和节省防治费)。结论:球虫(菌)清缓释剂能安全、高效、经济、方便地控制仔猪球虫病及大肠杆菌病发生,保护仔猪安全度过球虫病高危期。

关键词：球虫清缓释剂球菌清缓释剂防治仔猪球虫病大肠杆菌病效果

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腺病毒介导的GFP在鸭胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉

腺病毒介导的GFP在鸭胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：孟宇航汤承杨发龙邓书岳华西南民族大学生命科学与技术学院

原代细胞具备二倍体的遗传性、来源方便,可作为RNA干涉(RNAi)效果的体外评价系统,可方便地研究病毒与宿主相互作用机制及其基因功能,也可作为筛选有效的siRNA分子用于病毒感染防治的平台。本研究将不同感染复数(MOI)的绿荧光蛋白重组腺... 详细信息

原代细胞具备二倍体的遗传性、来源方便,可作为RNA干涉(RNAi)效果的体外评价系统,可方便地研究病毒与宿主相互作用机制及其基因功能,也可作为筛选有效的siRNA分子用于病毒感染防治的平台。本研究将不同感染复数(MOI)的绿荧光蛋白重组腺病毒(Adv-GFP)感染鸭胚成纤维细胞(DEF),用流式细胞仪分别测定感染后24、36、48和60h GFP表达效率及对细胞的影响;此外,用脂质体转染试剂将化学合成的靶向GFP基因的小干扰RNA(GFP-siRNA)转染DEF,6h后再感染200MOI的Adv-GFP。结果显示:10～200MOIAdv-GFP均能够感染DEF并表达GFP,且对DEF的形态及活力无明显影响,GFP的表达率为5.4±0.29～31.2±3.11%,500MOIAdv-GFP则对DEF有显著的致细胞病变作用;GFP-siRNA能显著干涉Adv-GFP介导的GFP基因在DEF中的表达,相对抑制率为98.56%。证明DEF细胞与其它真核生物一样存在RNA干涉机制,Adv-GFP在一定的MOI范围内对DEF是安全的,且转染效率较高,是理想的外源基因表达载体;本研究为RNA干涉技术研究DEF易感病毒和鸭的基因组功能以及病毒感染防治奠定了基础。

关键词：鸭胚成纤维细胞 RNA干涉腺病毒载体绿荧光蛋白感染复数

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新型痘苗病毒穿梭载体的构建及评价

新型痘苗病毒穿梭载体的构建及评价

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：杜寿文李昌王宇航刘存霞任大勇李沂秦艳青张轩源金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所

痘苗病毒具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等特点,而且相对毒力较弱、比较安全,广泛用于生物医药研究与开发。目的:获得一种新型痘苗病毒穿梭载体,并对其重组及表达功能进行验证,为新型基因工程活病毒载... 详细信息

痘苗病毒具有广阔的克隆空间、广泛的宿主和细胞范围、可形成稳定的重组体等特点,而且相对毒力较弱、比较安全,广泛用于生物医药研究与开发。目的:获得一种新型痘苗病毒穿梭载体,并对其重组及表达功能进行验证,为新型基因工程活病毒载体疫苗的研制及生物技术药物研发奠定坚实基础。方法:本研究本着提升临床应用安全性、外源基因高效表达及多价疫苗研制的理念,设计、构建了一个痘苗病毒穿梭载体(pSTKE),以痘苗病毒胸苷激酶基因(TK)作为筛选标记,包含三个独立的外源基因表达盒,启动子为痘苗病毒早晚期强力复合启动子(PE/L),能够实现外源基因的全程表达。然后以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、红色荧光蛋白(RFP)和蓝色荧光蛋白(BFP)为报告基因,以中国天坛株痘苗病毒(VTT)为原始毒株,对每个表达盒的表达功能进行验证,并应用PCR、实时荧光定量PCR方法和Western blot对重组病毒的表达量和遗传稳性进行了检测。结果:设计构建的痘苗病毒穿梭载体的三个表达盒均具有高效的重组和表达能力,同时筛选获得两株重组痘苗病毒,重组病毒在20代内遗传稳定性良好,且TK基因20代内无回复突变,外源基因得到高效、稳定及持续表达。结论:获得一种高重组率、高效表达、遗传稳定性良好的痘苗病毒穿梭pSTKE,利用该载体构建的重组病毒可同时表达至少3种外源基因,且相互之间没有影响,可有效解决以往重组痘苗病毒安全性低、目的基因表达效率不高、目的基因表达周期不连贯和插入外源基因片段少等问题。目前,本研究室正利用该载体进行HIV,基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)、辛德比斯病毒(Sindbis virus,SINV)、乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)及猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus,PRRSV)等重组痘苗病毒疫苗的研究。

关键词：穿梭载体外源基因痘苗病毒

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表达猪脑心肌炎病毒P1和P12A3C基因重组腺病毒的构建及其在小鼠诱导的免疫应答

表达猪脑心肌炎病毒P1和P12A3C基因重组腺病毒的构建及其在小鼠诱...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：陈振海杨汉春郭鑫盖新娜贾红陈艳红查振林中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室北京100094

为研制脑心肌炎病毒新型活载体疫苗,将病毒核表壳前体多肽P1与P12A2C串联基因分别插入穿梭质粒pDC316中,构建得到重组穿梭质粒pDC316-P1和pDC316-12A3C.将其分别与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染293细胞,成功包装出重组腺病毒Ad-P1和Ad... 详细信息

为研制脑心肌炎病毒新型活载体疫苗,将病毒核表壳前体多肽P1与P12A2C串联基因分别插入穿梭质粒pDC316中,构建得到重组穿梭质粒pDC316-P1和pDC316-12A3C.将其分别与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染293细胞,成功包装出重组腺病毒Ad-P1和Ad-P12A3C.免疫过氧化物酶单层试验确证重组腺病毒可表达目的蛋白。分一次和两次肌肉注射免疫小鼠,然后通过间接ELISA试验和中和试验评价其诱导的特异性体液免疫水平. 结果显示,Ad-P1诱导的VP1特异总抗体IgG水平显著高于Ad-P12A3C,但不能检测到明显的中和抗体(＜1∶8)。Ad-P12A3C能诱导产生良好的中和抗体(1∶32-128),用108TCID50剂量EMCV BJC3株攻毒,Ad-P12A3C免疫组能获得100％的保护,而Ad-P1免疫组仅能获得部分保护。以上结果表明Ad-P12A3C可作为良好的EMCV腺病毒活载体疫苗。

关键词：腺病毒免疫应答猪脑心肌炎病毒基因重组活载体疫苗

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抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及检测狂犬病毒G抗体红细胞凝集试验方法的建立

抗人红细胞单链抗体与狂犬病毒G蛋白双功能融合蛋白的构建及检测...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者：周松峰廖文军白安斌覃绍敏袁书智林俊袁洁赵武闭炳芬吴健敏广西兽医研究所北京博莱得利生物技术有限责任公司广东省农业科学院兽医研究所

为建立一种简便、快速、直观检测狂犬病毒抗体的红细胞凝集试验方法,本研究采用重叠延伸(SOE)PCR法将抗人红细胞H抗原单链抗体基因(2E8ScFv)和狂犬病毒G基因主要抗原表位区(KG基因)拼接成融合基因2E8KG,进而构建原核表达质粒pET-Trx-2E... 详细信息

为建立一种简便、快速、直观检测狂犬病毒抗体的红细胞凝集试验方法,本研究采用重叠延伸(SOE)PCR法将抗人红细胞H抗原单链抗体基因(2E8ScFv)和狂犬病毒G基因主要抗原表位区(KG基因)拼接成融合基因2E8KG,进而构建原核表达质粒pET-Trx-2E8KG。通过原核表达、纯化、复性获得既能够与人不同血型红细胞结合,又能够与狂犬病毒(RV)高免血清反应的双功能融合蛋白。以此双功能融合蛋白为检测抗原,以人"O"型红细胞作为指示细胞,建立了快速检测狂犬病毒G抗体的方法。通过方阵滴定试验筛选出检测抗原最佳稀释度为l:16,对应的工作浓度为106.26μg/mL,血清最佳稀释度为1:16,作用时间25min。利用该方法检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)阳性血清均无凝集,与RV标准阳性血清反应出现强凝集,表明该方法特异性强。用不同批次制备的检测抗原重复检测狂犬病毒阳、阴性血清,检测结果完全一致,具有很好的重复性。将红细胞凝集试验与荧光抗体病毒中和试验(FAVNT)作平行比对,通过对临床1225份犬血清的检测,结果发现血凝价大于或等于1:16(相当于FAVNT试验中和效价0.5IU/ml)为免疫抗体合格;红细胞凝集试验检测结果与FAVNT方法一致性分析的Kappa值为0.78>0.75,检测结果的符合率为88.82%。本研究利用双功能融合蛋白建立的检测犬狂犬病抗体红细胞凝集试验诊断试剂盒,操作简单、结果准确、灵敏度高且特异性强,可以用于犬狂犬病抗体的检测,大面积开展疫苗免疫效果评估,满足了基层快速、简便、可现场使用的要求。

关键词：狂犬病毒 G基因抗人红细胞单链抗体双功能融合蛋白红细胞凝集试验

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猪肺炎支原体部分疫苗候选抗原蛋白的原核表达与纯化

猪肺炎支原体部分疫苗候选抗原蛋白的原核表达与纯化

引用

中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：周瑶琴刘芮覃立旬丁红雷西南大学动物科技学院动物传染病学实验室

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原休引起的一种重要的猪的呼吸道疾病,我国每年由此病造成的直接经济损失超过100亿元。现有的疫苗免疫保护效果不完全,且不能清除病原。因此,研发新型更加有效的疫苗是防制猪支原体肺炎的重要研究方向。本研究... 详细信息

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原休引起的一种重要的猪的呼吸道疾病,我国每年由此病造成的直接经济损失超过100亿元。现有的疫苗免疫保护效果不完全,且不能清除病原。因此,研发新型更加有效的疫苗是防制猪支原体肺炎的重要研究方向。本研究目的是表达并纯化猪肺炎支原体候选抗原蛋白,为后续的抗原筛选提供研究工具。

关键词：猪肺炎支原体猪支原体肺炎原核表达与纯化候选抗原

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鹅源副粘病毒与F48E9株受体糖链连接类型及结合特异性研究

鹅源副粘病毒与F48E9株受体糖链连接类型及结合特异性研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：宋战昀丁壮冯新刘伟刘影波吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要病原与疫病研究室

细胞表面的神经节苷脂可被新城疫和鹅副粘病毒作为受体入侵易感细胞,但不同动物的神经节苷脂种类分布是不同的,且这种差异的生物学意义还是未知的,同时,不同物种神经节苷脂种类的相对丰度的不同是否会对病毒的复制造成潜在影响还不确定... 详细信息

细胞表面的神经节苷脂可被新城疫和鹅副粘病毒作为受体入侵易感细胞,但不同动物的神经节苷脂种类分布是不同的,且这种差异的生物学意义还是未知的,同时,不同物种神经节苷脂种类的相对丰度的不同是否会对病毒的复制造成潜在影响还不确定。因此,我们使用糖链检测试剂盒对易感细胞Vero进行细胞免疫组化染色鉴定,发现Vero细胞与SNA和MAA凝集素呈阳性反应,而与GNA和PNA的反应呈阴性,表明Vero细胞表面具有唾液酸2-6连接的半乳糖和唾液酸2-3连接的半乳糖。通过对Vero细胞神经节苷脂的提取及纯化,成分分析表明GD1a是主要的神经节苷脂组份;同时还存在GM1、GM2和GM3。为进一步确定神经节苷脂在病毒的感染中的作用和意义,我们用神经节苷脂标准品进行了新城疫病毒的感染中和试验,考察了不同神经节苷脂对两株病毒感染中和效果上的差异,结果表明两种病毒与不同神经节苷脂的结合特异性上存在差异。

关键词：鹅副粘病毒 Vero细胞神经节苷脂受体病毒入侵

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鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达

鹅细小病毒主要免疫原性蛋白VP3基因遗传变异及其原核表达

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：毕玉海丁壮徐明李志杰高跃吉林大学预防兽医学国家重点学科动物重要病原与疫病研究室

根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长16... 详细信息

根据鹅细小病毒(GPV)B株全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,采用PCR技术对GPVGD-01株的VP3基因进行扩增,将目的基因克隆到pGEM-T后测序,分析了GPV GD-01株VP3基因的遗传变异情况,并进行原核表达。结果表明,GPV GD-01株VP3基因全长1605bp,编码534个氨基酸(DQ665790),与已发表的GPV、番鸭细小病毒(MDPV)毒株进行比较分析,结果显示GPV GD-01株与其他GPV、MDPV核苷酸、氨基酸同源性分别平均为96.15%、80.1%,97.78%、89.13%,说明GPV VP3基因具有较高的遗传稳定性。结合亲水性、表面极性、抗原位点分析比较GPV、MDPV VP3基因,为研究GPV和MDPV感染谱差异的分子机制提供了一定的理论基础。原核表达研究显示,VP3蛋白的最高表达量占整个菌体蛋白含量的29.9%,经表达条件优化可产生大量可溶性VP3表达蛋白。SDS-PAGE与Western-blot分析,显示表达的VP3蛋白分子质量在60000左右,并能与鼠抗GPV阳性血清反应,证明具有一定的反应原性,为进一步研制基因工程疫苗及诊断制品奠定了基础。

关键词：鹅细小病毒 VP3基因遗传变异原核表达

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