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- 4 篇 生物工程
- 3 篇 化学工程与技术
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1 篇 教育学
- 1 篇 教育学

主题

21 篇 序列分析
20 篇 elisa
19 篇 prrsv
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14 篇 禽流感病毒
13 篇 原核表达
13 篇 单克隆抗体
13 篇 rna
12 篇 疫苗
12 篇 大肠杆菌
11 篇 猪流感病毒
11 篇 禽流感
11 篇 克隆
11 篇 口蹄疫病毒
11 篇 鉴定
10 篇 口蹄疫
10 篇 新城疫病毒
10 篇 分离鉴定
10 篇 rt-pcr

机构

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44 篇 四川农业大学
42 篇 军事医学科学院军...
30 篇 河南农业大学
24 篇 华中农业大学
22 篇 中国农业科学院哈...
20 篇 南京农业大学
19 篇 吉林农业大学
18 篇 动物疫病与人类健...
16 篇 河南省动物疫病预...
13 篇 四川大学
10 篇 黑龙江八一农垦大...
10 篇 辽宁省辽阳市宏伟...
9 篇 华南农业大学
9 篇 河北农业大学
8 篇 宁夏动物疾病预防...
8 篇 新疆畜牧科学院兽...
8 篇 上海市畜牧兽医站
8 篇 辽宁益康生物制品...
8 篇 云南农业大学

作者

39 篇 金宁一
39 篇 丁壮
23 篇 王川庆
20 篇 程安春
20 篇 陈陆
18 篇 汪铭书
18 篇 陈焕春
16 篇 杨霞
16 篇 鲁会军
15 篇 常洪涛
15 篇 刘红英
15 篇 金梅林
14 篇 曹三杰
14 篇 徐明
14 篇 文心田
14 篇 王红宁
14 篇 夏咸柱
14 篇 黄小波
13 篇 杨松涛
13 篇 李昌

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629 篇 中文
3 篇 英文

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稳定分泌抗PRV及抗PRRSV单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

稳定分泌抗PRV及抗PRRSV单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：任向阳张昶刘秋燕王江辉常洪涛陈陆王川庆河南农业大学

从河南省某些发病猪场分别分离到一株狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了鉴定。利用自行分离的PRV和PRRSV作为混合抗原,免疫小鼠后用一次融合、分别筛选的方法,获得了能分别稳定分泌抗2种抗原的单抗杂交瘤细胞株... 详细信息

从河南省某些发病猪场分别分离到一株狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了鉴定。利用自行分离的PRV和PRRSV作为混合抗原,免疫小鼠后用一次融合、分别筛选的方法,获得了能分别稳定分泌抗2种抗原的单抗杂交瘤细胞株。其中2株抗PRV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,3株抗PRRSV的单克隆抗体杂交瘤细胞株。其免疫球蛋白均为IgG2。分泌的抗PRV单克隆抗体与AIV、NDV、PPV、PRRSV、LPS、IBDV无交叉反应;分泌的抗PRRSV单克隆抗体与AIV、NDV、PRV、PPV、IBDV无交叉反应;表明所选杂交瘤细胞株特异性较高。抗PRV的单抗上清和腹水效价均值分别达到1:3200、1:102400以上;抗PRRSV的单克隆抗体杂交瘤细胞株的培养上清和腹水效价分别达到1:3200、1:51200以上。这两种杂交瘤细胞分泌的抗体均有良好的热稳定性。腹水经辛酸硫酸铵纯化后,蛋白含量分别为105.89mg/mL、112.49mg/mL。此两种单克隆抗体的获得为猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征的研究及快速诊断方法的建立提供了工具。与用单一纯化抗原免疫小鼠的传统方法相比,本研究建立的混合免疫、分别筛选方法,仅一次免疫、一次融合就可选出分别分泌两种抗不同抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,是一种建立杂交瘤细胞株的高效方法,不但节约实验材料、降低了成本,而且节省了时间和人力,大大提高了建立杂交瘤细胞株的工作效率。原来需要两个或更多人才能完成的工作,现在一个人就可以完成。这对杂交瘤技术的学术研究和实际应用均具有重要意义。利用自行制备的抗PRRSV单克隆抗体建立了单抗介导双夹心间接ELISA对PRRS抗原检测的实验方法,可以用来检测病料组织及细胞培养物中的PRRSV.但该方法不能区分强毒株和疫苗毒。尽管如此,该方法对于PRRSV非免疫发病猪群、疫苗毒或强毒培养物等的检测仍具有重要参考价值。

关键词： PRV PRRSV 混合免疫一次融合单独筛选杂交瘤细胞株单克隆抗体双夹心ELISA

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PCV2的分离鉴定及其ORF2基因的克隆、测序与表达

PCV2的分离鉴定及其ORF2基因的克隆、测序与表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：王江辉陈陆刘红英杨霞任向阳张昶刘秋燕王川庆河南农业大学

对河南省10个地市的64个规模化猪场进行了猪2型圆环病毒临床发病情况调查,用ELISA对1595份血清进行了抗体检测,并用鉴别PCR对166份临诊病料进行了PCV2DNA的检测。结果显示,64个猪场有49个猪场表现为断奶后多系统衰竭综合征(PMWS),9个猪... 详细信息

对河南省10个地市的64个规模化猪场进行了猪2型圆环病毒临床发病情况调查,用ELISA对1595份血清进行了抗体检测,并用鉴别PCR对166份临诊病料进行了PCV2DNA的检测。结果显示,64个猪场有49个猪场表现为断奶后多系统衰竭综合征(PMWS),9个猪场表现为皮炎与肾病综合征(PDNS),6个猪场表现为猪呼吸道疾病综合征(PRDC);2005年抗体阳性率为24.1%(157/651),2006年为63.1%(595/944);2005年PCR检测阳性率为78%(62/81),2006年为96%(81/85)。利用鉴别PCV1和PCV2的复合PCR对PK-15细胞及阳性病料进行检测,利用3份单一PCV2阳性病料接种无PCV的PK-15细胞进行培养,盲传8代后,成功分离到3株PCV2流行毒株,分别命名为JZ、ZMD和KF株。利用PCR技术从分离的PCV2KF株中扩增出ORF2基因(702bp),并进行克隆、测序分析。遗传进化分析表明PCV-2的ORF2较保守,不同地域分离株的ORF2核苷酸同源性为92.5%-99.0%,氨基酸同源性为89.4%-94.7%;ZMD株与美洲株核苷酸同源性高达97.0%,与欧洲株仅为91.6%;KF、JZ株与欧洲株核苷酸同源性高达97.9%以上,与美洲株仅为92.0%;中国分离株之间ORF2变异较大,其亲缘关系较复杂,ZMD株与BF株核苷酸同源性最高,但***株与BF株氨基酸同源性较高。尽管ORF2基因型较稳定,但是中国不同的地域株之间有变异,这种变异可能对PCV的诊断和研究有重要意义。对KF、JZ、ZMD株ORF2的抗原表位进行了分析。将KF株ORF2基因593bp的片段克隆到融合表达载体pET-32a中进行IPTG诱导表达,所得产物经Western-blotting可被阳性血清所识别。可利用该重组蛋白作为抗原,制备单克隆抗体或建立间接ELISA方法,为PCV2的临床诊断提供技术保障。

关键词：猪2型圆环病毒河南株分离鉴定 ORF2 序列分析基因表达

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部分鸡场鸭源卡氏杆菌感染的临床和血清流行病学调查

部分鸡场鸭源卡氏杆菌感染的临床和血清流行病学调查

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：王川庆陈陆杨霞刘红英河南农业大学

早在1950年Hansen就发现了鸭源卡氏杆菌(Gallibacterium anatis),但由于其具有溶血性,故1960年该菌被划分为溶血性巴氏菌。1977年被认为是家禽体内正常菌系的一部分。1991年Mirle等报道了该菌与鸡输卵管疾病的关系,后来发现该菌具有鸭... 详细信息

早在1950年Hansen就发现了鸭源卡氏杆菌(Gallibacterium anatis),但由于其具有溶血性,故1960年该菌被划分为溶血性巴氏菌。1977年被认为是家禽体内正常菌系的一部分。1991年Mirle等报道了该菌与鸡输卵管疾病的关系,后来发现该菌具有鸭巴氏杆菌、溶血性巴氏杆菌和输卵管炎放线杆菌的特性,而且在欧美与该菌相关的输卵管炎病例报道也越来越多。2003年该菌被划分为巴氏杆菌科新的菌属,即鸭源卡氏杆菌,它结合了以前的放线杆菌和巴氏杆菌的特性。该菌的易感禽类包括鸡、火鸡、鸭、鹅、鹦鹉、鹌鹑和珍珠鸡,也可从牛和猪分离到该细菌。该菌经呼吸道传播,水平传播是主要方式。该菌以侵害上呼吸道和生殖道为主,输卵管炎和腹膜炎导致产蛋量下降是最重要的症状之一。该菌常与禽肺病毒、传支病毒和鸡毒支原体混合侵害呼吸道和生殖道。由于诊断方法的局限,人们不了解该菌对禽群的危害,进而缺乏对该细菌的现场研究。作者自2001年以来便不断发现有临床疑似病例,但由于我国目前尚无关于该菌的报道,因此作者对河南部分鸡场进行了临床和血清流行病学调查。经现场调查、症状观察、病理剖检和血清流行病学调查,证明我国确实存在与该菌相关的疾病。下表是对临床症状明显鸡场进行的血清学检测结果。河南部分鸡场鸭源卡氏杆菌血清学检测结果鸡场编号临床表现阳性数阳性比例1(种鸡场)有典型病例17/2470.8%2(种鸡场)有典型病例20/2290.9%3(种鸡场)有典型病例41/4787.2%4(种鸡场)有典型病例18/4242.9%5(种鸡场)有典型病例13/4528.9%6(肉种鸡场)有典型病例5/3315.2%7(商品蛋鸡场)有典型病例8/3026.7%8(种鸡场)有典型病例17/2470.8%9(蛋种鸡场)有典型病例11/2544%10(种鸡场)有典型病例17/5232.6%11(蛋种鸡场)无典型病例1/313.2%

关键词：鸭源卡氏杆菌产蛋鸡输卵管炎临床流行病学调查血清学检测

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赤羽病研究进展

赤羽病研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：范晴花群义段纲江海天孙洪正云南农业大学动物科技学院深圳出入境检验检疫局云南大学

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabane virus,AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲一积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病。上世纪30年代,该病在澳大利亚羊群中首次暴发,但到1961... 详细信息

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabane virus,AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲一积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病。上世纪30年代,该病在澳大利亚羊群中首次暴发,但到1961年才在日本群马县赤羽村的畜舍内采集的金色库蚊和三带喙库蚊中首次分离到病毒。此后澳大利亚、肯尼亚、以色列等国家也相继分离到病毒,阿卡班病毒广泛分布于热带和温带的广大地区。我国许多省也流行本病,该病的暴发给畜牧业带来巨大损失。阿卡班病毒属于布尼病毒科(Bunyaviridae)布尼病毒属辛布(simbu)病毒血清群的一个亚群,为单股负链RNA病毒。毒粒子呈球形,外有囊膜和纤突,分子量300～400×106。基因组由大(L)、中(M)、小(S)3个RNA片断构成。S RNA编码核衣壳蛋白(N)和非结构蛋白(NSs),S RNA核苷酸序列和N蛋白氨基酸序列高度保守,具有群特异性。M RNA编码两种囊膜糖蛋白(G1和G2),具有型特异性,分别诱导产生中和抗体和血凝抑制抗体。此外M RNA还编码一种或多种非结构蛋白(NSm)。L RNA编码聚合酶,能够催化病毒RNA转录生成mRNA。AKV可多种细胞培均易增殖,并引起细胞病变。本病主要通过蚊和库蠓吸血传播,多感染孕期的牛和羊,在蚊蠓滋生猖獗的季节和地区流行。感染动物一般不表现临床症状,AKV的细胞受体在中枢神经系统妊娠母畜感染AKV后随血流增殖,随后引起胎儿关节弯曲、积水性无脑、脑穿通、脑过小、脑水肿、脑脊髓炎。在迄今分离到的阿卡班病毒株中,只有一种血清型存在。此病爆发范围广,应及时发现并处理。目前根据其抗原性主要的检测方法有:琼脂凝胶扩散沉淀试验(ADIG),血凝抑制试验(HI),微量血清中和试验(SN),间接荧光抗体法(IFNT)和多种酶联免疫吸附方法(ELISA)。根据其核蛋白基因S RNA的高度保守性可对其进行PCR检测,主要有RT-PCR,巢式PCR,多重反转录荧光PCR。本病现目前没有特异性治疗方法,有研究表明可利用小干扰RNA可阻断病毒的复制来治疗此病。目前主要使用疫苗有活苗和灭活苗两种。加强进出口检疫防止病原传入,改善环境卫生彻底消灭吸血昆虫及其孽生地,制定计划定期进行疫苗接种,是预防本病的三项有效措施。

关键词：阿卡班病毒布尼病毒属核衣壳蛋白非结构蛋白胎儿畸形中和试验 RNA

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Characterization of an attenuated TE3L and TE4L deficient vaccinia virus Tian Tan strain in vitro and in vivo

Characterization of an attenuated TE3L and TE4L deficient va...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次人兽共患病学术研讨会暨第六届第十四次教学专业委员会

作者： Yuhang Wang Xiao Li Ningyi Jin Genetic Engineering Laboratory of PLA Academy of Military Medical Sciences of PLA Changchun bioxun biotech co.ltd

Vaccinia virus(VV) is a double-stranded DNA virus that replicates and multipli es in the cytoplasm of infected cells using both virally encoded proteins and resourc es of the host *** causes relatively mild symptoms in humans infected natural ***,it has been reported that VV results in several serious side effects,inc luding encephalitis,eczema after vaccination,generalized and progressive poxvirus in fections,as well as some less severe *** complications were recently

关键词： Characterization of an attenuated TE3L and TE4L deficient vaccinia virus Tian Tan strain in vitro and in vivo

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不同剂量鸭IFN-α真核表达质粒对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭细胞和体液免疫调节作用初探

不同剂量鸭IFN-α真核表达质粒对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭细胞和体液免...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：程志萍程安春汪铭书陈斌刘闯段坤周雪陈孝跃四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川省兽医防疫总站

为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-SDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的免疫调节作用,本文将pcDNA-SDIFN-α以每只50、100和200μg三个剂量用肌肉注射法分别免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,所有鸭15d后接种鸭... 详细信息

为探索鸭α干扰素(IFN-α)真核表达质粒(pcDNA-SDIFN-α)对鸭瘟弱毒疫苗免疫鸭的免疫调节作用,本文将pcDNA-SDIFN-α以每只50、100和200μg三个剂量用肌肉注射法分别免疫28日龄鸭,以PBS和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,所有鸭15d后接种鸭瘟(DP)弱毒疫苗,接种后第3、7、14、21、28、35、49、63、84、105d采血用淋巴细胞增殖试验(MTT法)测定鸭外周血T淋巴细胞转化;第7、14、21、28、35、49d采血用流式细胞仪(FACS)测定CD3+T淋巴细胞数量的动态变化;第7、14、21、28、35、49、63、84、105、126、154、182d采血用间接ELISA法检测血清抗体水平。结果表明:不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭T淋巴细胞对ConA的反应能力于3～49d均显著(P≤0.05)或极显著(P≤0.01)高于弱毒和空载体对照组;鸭外周血CD3+T淋巴细胞数量于7～28d均极显著(P≤0.01)或显著(P≤0.05)高于弱毒和空载体对照组。第7d时,不同剂量pcDNA-SDIFN-α免疫组鸭血清抗体水平就极速升高,在28d时达到高峰;200μg免疫组于14～84d极显著(P≤0.01)或显著(P≤0.05)高于弱毒和空载体对照组,其余组间无显著差异(P≥0.05)。在诱导细胞免疫和体液免疫方面,弱毒和空载体对照组间无显著差异(P≥0.05)。研究表明,pcDNA-SDIFN-α提前15d免疫能显著增强DP弱毒疫苗诱导的鸭细胞免疫和体液免疫力,是一种良好的增强DP弱毒疫苗细胞免疫和体液免疫的分子佐剂,用肌肉注射pcDNA-SDIFN-α以每只200μg的效果最佳。

关键词：鸭IFN-α真核表达质粒鸭瘟弱毒疫苗细胞免疫体液免疫分子佐剂

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禽博尔纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析

禽博尔纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析

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第三届中国兽医临床大会

作者：田纯见王宏罗琼林志雄赵吟罗长保鱼海琼刘志玲陈茹唐羿周小明常彦磊吴晓薇朱道中广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心广州迪澳生物科技有限公司

本研究利用哺乳动物细胞从腺胃扩张症（PDD）患病鹦鹉体内分离一种新的博尔纳病毒（BDV）。将鹦鹉"琉璃363"和"色彩"腺胃病料接种猪睾丸（ST）细胞单层出现圆缩、脱落,RT-PCR检测禽博尔纳病毒（ABV）基质蛋白（M）... 详细信息

本研究利用哺乳动物细胞从腺胃扩张症（PDD）患病鹦鹉体内分离一种新的博尔纳病毒（BDV）。将鹦鹉"琉璃363"和"色彩"腺胃病料接种猪睾丸（ST）细胞单层出现圆缩、脱落,RT-PCR检测禽博尔纳病毒（ABV）基质蛋白（M）基因出现预计大小351bp产物条带,产物克隆序列进化树分析显示为ABV5基因型。利用DNAStar和PrimerExplorer V5.0（网络版）软件设计获得ID1,6,19,30和37共5组M基因LAMP引物,进行RT-LAMP反应后三组引物呈现阳性显色反应,并具有特异电泳条带。以钙黄绿素为荧光指示剂,实时RT-LAMP分别在36min（ID30）、38min（ID37）和49min（ID19）出现扩增反应曲线,60min内扩增达到峰值;浊度测定时三者出现扩增曲线的时间分别为56min、58min和65min。临床及有关样品检测RT-LAMP与RT-PCR结果一致,腺胃呈ABV阳性,大肠、小肠、十二指肠、心、肝、脾、肺、肾、肌胃、腺胃、腺胃内容物、胰腺、素囊、脑、肌肉等病料中未检出;病毒ST细胞培养物RT-LAMP检测10～10为阳性,RT-PCR检测10以后为阴性。新城疫、禽流感、法氏囊病、白血病J亚群、脑脊髓炎等有关病毒未见阳性反应。研究结果对鹦鹉及其他家禽致死性PDD防制提供新的技术手段,为BDV公共卫生研究提供有益的参考。

关键词：禽博尔纳病毒腺胃扩张症环介导逆转录恒温扩增快速检测进化树分析

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水泡性口炎研究进展

水泡性口炎研究进展

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：孙洪正徐自忠花群义高洪范晴江海天南京农业大学动物科技学院云南出入境检验检疫局深圳出入境检验检疫局云南大学生命科学院

水泡性口炎(Vesicular Stomatitis,VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)引起马、牛、猪等多种动物的一种病毒性疾病。水泡性口炎又名鼻疮(sore nose)、口疮(sore mouth)、伪口疮(pseudoaptutusis)、"烂舌症&qu... 详细信息

水泡性口炎(Vesicular Stomatitis,VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)引起马、牛、猪等多种动物的一种病毒性疾病。水泡性口炎又名鼻疮(sore nose)、口疮(sore mouth)、伪口疮(pseudoaptutusis)、"烂舌症"、"牛及马的口腔溃疡"等。水泡性口炎病毒属于弹状病毒科水泡病毒属,水泡性口炎病毒主要呈嗜上皮性,症状与口蹄疫相似,但比口蹄疫缓和得多。VS的特点是短期发烧,水泡发生的部位因流行爆发的情况不同而不同,大量流涎是家畜感染最重要的症状,其特征为口腔黏膜、乳头皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂[1],《国际动物卫生法典》规定VS的潜伏期为21天。各种动物均可在足上发生病灶,特别是冠状带上,马的主要病变部位在舌背部、唇内、唇上和鼻上,牛的潜伏期一般为3～7天,病牛轻度发热,在舌、牙床、唇和颊粘膜上突然出现水泡,水泡迅速破溃而发展为浅在性糜烂。病牛大量流涎,缺乏食欲。猪则在鼻镜和唇部出现水疱,足部病变可能导致跛行。人可因接触病畜而偶然发生感染,但常不显症状或仅轻微发烧或寒战。人感染的潜伏期为30小时～8天,有的患者表现头疼、恶心、呕吐等。约有1/4的病人在口部、舌或鼻部出现疱疹样水疱病变,持续2～7天后完全恢复。一般认为VSV是通过上皮和粘膜侵入机体的。病毒侵入上皮层,在皮内产生原发病变,同时在较深层的皮肤中,尤其是棘细胞层,病毒的复制更活跃。从病毒的复制到引起细胞溶解的过程会有渗出液蓄集,小水泡汇成大水泡。这一阶段通常在实验感染2一3天内发生。当病毒扩散到整个生发层后,常破坏柱状细胞层和基底膜,但并不明显地破坏这些细胞的再生能力。在真皮和皮下组织中有出血、水肿和自细胞浸润,但病毒在这些区域通常并不造成原发性损伤。如果出现继发感染,其损伤扩散到深层组织造成化脓和坏死。在无并发症的情况下,上皮细胞迅速再生,通常1一2周康复而不留疤痕。VSV感染牛和猪时,临诊症状与口蹄疫(FMD)、猪水泡病(SVD)、猪水泡疹(VES)不易区别,而且该病使猪和乳牛的生产能力下降而造成严重的经济损失,并对国际贸易产生严重影响。因此,对VSV诊断、防治的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义。本文从分子生物学特征、流行病学以及诊断防治三个方面对水泡性口炎的研究进行综述。

关键词：水泡性口炎分子生物学流行病学

来源：评论

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95个猪场大肠杆菌耐药性和对氨基糖苷类耐药基因的调查

95个猪场大肠杆菌耐药性和对氨基糖苷类耐药基因的调查

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：汤景元王红宁冮婷婷张鹏举曾博杨鑫刘立四川农业大学动物科技学院

本研究采用CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)推荐的K-B(Kirby-Bauer)法,对2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种广谱抗生素耐药性进行检测,结果表明:耐药率较高的是四环素(... 详细信息

本研究采用CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)推荐的K-B(Kirby-Bauer)法,对2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种广谱抗生素耐药性进行检测,结果表明:耐药率较高的是四环素(99.9%),氨苄青霉素(99.5%),萘定酸(98.7%),强力霉素(98.5%),磺胺甲基异噁唑(95.7%),复方新诺明(91.5%),恩诺沙星(89.4%),阿莫西林╱克拉维酸(89.2%),链霉素(86.8%),头孢噻呋钠(78.7%),环丙沙星(78.2%);其次是庆大霉素(64.4%),氟苯尼考(54.2%),新霉素(42.5%);壮观霉素(20.1%),多粘菌素B(11.8%),阿米卡星(10.9%)相对敏感。480株大肠杆菌有14种耐药普型,其中13、14、15、16、17重耐药较多,26株出现18重耐药,14株出现19重耐药,表明大肠杆菌以多重耐药菌株为主。采用WHONET5.4软件对大肠杆菌耐药性分析,发现每个猪场都能检测到对链霉素,四环素,强力霉素,萘定酸,恩诺杀星,氨苄青霉素,磺胺甲基异噁唑,复方新诺明,阿莫西林╱克拉维酸耐药的大肠杆菌;其次是对氯霉素,头孢噻呋钠和环丙杀星。壮观霉素,阿米卡星,头孢噻肟,多粘菌素B耐药的猪场相对较少,分别是56,29,26,24。采用PCR方法对氨基糖苷类相关耐药基因检测,耐药基因检出率分别是aadA1(65.89%),aaC2(52.35%),aaC4(12.91%)和aphA3(10.95%)。耐药基因型检出率较高的是aadA1/aaC2(29.61%),aaC2(18.04%);较低的是aadA1/aphA3(2.11%),aaC2/aaC4(0.98%),aadA1/aaC4/aphA3(0.35%)和aaC4(0.14%)。使用excel软件统计相关耐药基因的猪场分布表明,耐药基因aadA1/aaC2(43),aadA1/aaC2/aaC4(20),aadA1/aaC2/aaC4/aphA3(13)aadA1/aaC2/aphA3(11)在猪场分布较普遍;aadA1(4)和aaC2(1)较少。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌药物耐药表型与耐药基因符合率分别是阿米卡星(68.39%)壮观霉素(32.49%),链霉素(18.36%),庆大霉素(12.45%),新霉素(10.56%)。结果表明猪大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,本研究为选择合理药物,控制耐药性提供科学依据。

关键词：大肠杆菌耐药耐药基因 PCR

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分泌抗NDV和H9N2亚型AIV单抗杂交瘤细胞株的建立

分泌抗NDV和H9N2亚型AIV单抗杂交瘤细胞株的建立

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

作者：张昶刘秋燕任向阳王江辉陈陆常洪涛王川庆河南农业大学

用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)、LaSota株新城疫病毒(NDV)加入特殊免疫增强剂作为混合免疫原,免疫小鼠后采用一次融合、分别筛选的方法,分别获得2株稳定分泌抗AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞株和4株稳定分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。同... 详细信息

用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)、LaSota株新城疫病毒(NDV)加入特殊免疫增强剂作为混合免疫原,免疫小鼠后采用一次融合、分别筛选的方法,分别获得2株稳定分泌抗AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞株和4株稳定分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。同时用纯化的H9N2亚型AIV和LaSota株NDV作为单一免疫原,各自分别免疫小鼠,采用传统杂交瘤细胞技术,最后从单一抗原免疫组分别获得3株稳定分泌抗AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞株和2株稳定分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。各株杂交瘤细胞培养上清及小鼠腹水单抗ELISA效价最高分别可达1:1024和1:102400以上,单克隆抗体亚型均为IgG2类分子。连续传代25次和三次冻存复苏后,各杂交瘤细胞抗体分泌能力略有下降,但仍能稳定分泌抗体。单克隆抗体的稳定性均较高,抗酸、碱、热的能力较强。AIV特异性单克隆抗体腹水对H9N2亚型AIV具有较高的HI效价,但在鸡胚中不表现中和活性。应用AIV特异性单克隆抗体做免疫荧光检测,结果表明具有较高特异性。利用小鼠腹水单克隆抗体建立了检测AIV的抗原捕获单抗介导夹心间接ELISA(AC-ELISA)方法,用于检测AIV抗原具有良好的特异性和稳定性。本试验应用混合免疫、一次融合、分别筛选的新方法,获得的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体,与传统方法制备的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体相比,效价相似,特异且稳定。与用单一纯化抗原免疫小鼠的传统方法相比,本研究建立的混合免疫、分别筛选方法,仅一次免疫、一次融合就可筛选出分别稳定分泌针对两种甚至更多种不同抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,不仅节约了实验材料、降低了成本,而且节省了时间和人力,大大提高了建立杂交瘤细胞株的工作效率,是一种建立杂交瘤细胞株的高效方法,对杂交瘤技术的学术研究和实际应用均具有重要意义。

关键词： H9N2亚型AIV 新城疫病毒混合免疫一次融合单独筛选单克隆抗体杂交瘤细胞双夹心间接ELISA

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