引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒（duck hepatits A virus,DHAV-1）引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3...
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引言由血清1型鸭甲型肝炎病毒（duck hepatits A virus,DHAV-1）引起的鸭肝炎自上世纪五十年代在美国被发现以后,迅速在世界养鸭地区爆发和蔓延,成为危害我国养鸭业最严重的疫病。但近十年来由于新出现的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3）引起的鸭肝炎又成为制约我国养鸭生产新的严峻问题。本研究建立的同时检测DHAV-1和DHAV-3二重RT-PCR方法,为临床诊断和检测DHAV-1和DHAV-3感染提供了快速适用的技术手段。材料与方法根据DHAV的基因文库,设计2对特异性引物,建立血清1型和血清3型的双重RT-PCR检测方法,运用此双重RT-PCR方法对2013年8月014年6月,采集于华东部分地区（山东、江苏和安徽）鸭场疑似鸭肝炎的11份肝脏病料进行检测。并同时对上述病料采用抗DHAV-1、DHAV-3单因子血清对分离病毒进行鸭胚中和试验进行病毒鉴定结果通过引物浓度,模板浓度,以及退火温度等试验条件优化,建立了血清1型和血清3型的双重PCR检测方法。运用该方法对11份疑似鸭肝炎病料进行检测,试验结果表明,构建的DHAV二重RT-PCR检测方法与病毒分离鉴定结果具有高度一致性。讨论近年来随着DHAV-3的出现,使DHAV-1和DHAV-3在部分地区的共流行,而且它们的流行病学、临床症状、病理变化极其相似,这些都给国内鸭甲型肝炎的预防和诊断带来了困难,因此建立一种能够快速鉴别诊断DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR的检测方法具有重要意义,本研究建立的DHAV-1和DHAV-3的二重RT-PCR方法,具有良好的特异性和较高的敏感度,可以直接用于临床样品的检测和流行病学调查,为临床上鸭肝炎的鉴别诊断和病原检测提供了快速适用的手段。
引言/目的新城疫病毒强毒株感染和弱毒疫苗株接种的主要途径是呼吸道感染,肺泡巨噬细胞是肺脏与外界的第一道防线,从而新城疫病毒与肺泡巨噬细胞之间的相互作用成为病毒感染的关键点。前期研究发现肺泡巨噬细胞的极化分型在急性肺炎进程中发挥重要作用,因此,研究不同毒力新城疫感染肺泡巨噬细胞极化分型的差异及机制,将为阐明不同独立新城疫病毒的感染机制和提高弱毒疫苗免疫效果提供理论支持。材料和方法以MOI=0.1剂量的新城疫强鹅源毒株NA-1和传统弱毒疫苗株LaSota分别感染鸡HD11巨噬细胞,并设培养基对照组。分别于2、8、24、48 hours post infection(hpi)后分别提取细胞总RNA;最后采用实时荧光定量PCR方法检测各个时间点巨噬细胞极化的标志性基因水平。结果与讨论感染8h后,强毒组中iNOS等M1相关标志明显高于弱毒组和对照组:感染24h后强毒组中这些M1相关标志的表达水平逐渐降低,但弱毒组则出现缓慢上升的趋势。而感染24h后,无论是强毒组还是弱毒组和对照组,Ym1等M2相关标记的表达水平均呈现升高的趋势,但强毒组的表达水平远高于弱毒组和对照组。结论导致强毒NDV高致死率的一部分原因可能是由强毒NDV引起肺泡巨噬细胞呈现明显且持续时间长的M1极化特点而产生的强烈的炎性细胞因子风暴。而弱毒组在感染24h后才出现较为明显的M1极化特点,促炎性因子的水平缓慢升高,可控的炎性因子水平对对抗病毒的感染发挥了积极的作用。
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