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8 篇 同源性
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7 篇 中国畜牧兽医学会...
7 篇 河南省动物疫病预...
7 篇 广西大学

作者

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11 篇 余祖华
11 篇 程相朝
11 篇 邵国青
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10 篇 赵雪丽
10 篇 吴志明
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10 篇 闫若潜
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9 篇 谢彩华
9 篇 李一权
9 篇 郁川
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355 篇 中文
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8种猪病病原体GeXP检测方法的建立

8种猪病病原体GeXP检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张民秀谢芝勋邓显文谢志勤谢丽基黄莉黄娇玲广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室

引言猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome disease,PRRS),猪瘟(classical swine fever,CSF),猪圆环病毒病(porcine circovirus disease,PCVD),猪流感(swine influenza,SI),猪细小病毒病(porcine parvovirus disease,PPVD),猪伪狂犬病(pseudorabies virus disease,PR)和猪日本乙型脑炎病毒病(Japanese encephalitis,JE)是给养猪业造成巨大经济损失的8种病原体。其中,PRRS,CSF,PCVD,PPVD,PR和JE可导致母猪繁殖障碍,而PRRS,PCVD和SI能引起呼吸道系统疾病。由于这些疾病的临床表现非常相似,临床诊断容易引起混淆,因此建立一种能同时鉴别这些猪呼吸道与繁殖障碍传染病病原体的高通量快速检测方法对这些传染病的有效控制具有重要意义。材料与方法根据这8种病原体的基因保守序列,设计并合成了9对特异性引物,在每对特异性引物的5'端均加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。运用GeXP单重PCR方法和GeXP多重PCR方法,以单一病毒cDNA/DNA模板和阳性cDNA/DNA混合模板验证引物的可行性和GeXP多重检测体系的特异性和准确性;并对该方法进行了单一病原体灵敏度和同时检测8种病原体的灵敏度分析。运用建立好的GeXP多重检测体系对23份临床样品进行检测,并与常规单重PCR进行比较,对该GeXP多重检测体系的临床应用进行评价。结果与讨论基于GeXP系统的单重PCR检测体系和GeXP多重PCR检测体系均能扩增出特异性片段,验证了引物的可行性、GeXP多重检测体系的特异性和准确性;GeXP多重检测体系的单一病原模板灵敏度分析结果显示,多重检测体系对单一病原体检测的下限均为10～1拷贝/μL;GeXP多重检测体系在8种病原体同时检测的灵敏度分析结果显示,多重检测体系可在10～3拷贝/μL水平可同时检测到8种病原体;比较GeXP多重PCR检测方法和常规PCR方法对临床样品的检测结果,两种检测方法的检测结果相符。本研究成功建立了基于GeXP系统的多重PCR检测体系,可以同时检测8种猪病病原体,该方法具有高通量、特异性强和灵敏度高的特点,为猪传染性疾病的分子诊断提供了新型的检测方法。

关键词：临床样品灵敏度分析多重检测特异性引物病原体检测方法

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西南地区禽传染性支气管炎病毒分离株S1基因系统进化分析

西南地区禽传染性支气管炎病毒分离株S1基因系统进化分析

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：杨鑫王红宁张毅曾诚周英顺蒋魏四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室“985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台生物资源与生态环境教育部重点实验室

1前言禽传染性支气管炎(Avain infectious bronchitis,IB)是危害养禽业的重大传染病之一,它是由冠状病毒科冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒(Avain infectious bronchitis Virus,IBV)引起的一种急性高度接触性传染病,以呼吸道症状、产... 详细信息

1前言禽传染性支气管炎(Avain infectious bronchitis,IB)是危害养禽业的重大传染病之一,它是由冠状病毒科冠状病毒属的禽传染性支气管炎病毒(Avain infectious bronchitis Virus,IBV)引起的一种急性高度接触性传染病,以呼吸道症状、产蛋鸡产蛋下降、蛋品质下降、肾脏病变及胃肠道病变为主要特征。IBV血清型极其复杂,目前世界各国已发现30多种IBV血清型,由于血清型多、同血清型之间缺乏有效的交叉保护、新的变异株不断出现等原因导致免疫失败,鸡传染性支气管炎不断爆发。研究表明,S1蛋白在IBV致病过程、诱发特异性抗体及组织嗜性方面起核心作用,最适合作为分子流行

关键词：禽传染性支气管炎病毒分离株系统进化分析

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改进的两种猪前腔静脉采血法

改进的两种猪前腔静脉采血法

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：雍长福吴月玲滕进礼李瑞宁夏中卫市沙坡头区动物疾病预防控制中心宁夏中卫市迎水桥镇畜牧兽医技术服务站宁夏中卫市动物卫生监督所

前言猪病的血清学诊断和猪瘟等重大动物疫病强制免疫后的免疫抗体水平监测都有赖于通过采集血样进行血清学检验。在长期的采血工作中,我们通过临床实践和不断探索,对传统的猪仰卧保定前腔静脉采血法进行了改进,建立了更为便捷、高效、... 详细信息

前言猪病的血清学诊断和猪瘟等重大动物疫病强制免疫后的免疫抗体水平监测都有赖于通过采集血样进行血清学检验。在长期的采血工作中,我们通过临床实践和不断探索,对传统的猪仰卧保定前腔静脉采血法进行了改进,建立了更为便捷、高效、省事的两种前腔静脉保定采血方法,现介绍于下。正提保定采血法(1)适用范围;适用于体重在15Kg以下的乳猪和断奶仔猪。(2)方法:由助手徒手抓住仔猪两耳,两腿夹住仔猪的腰部以阻止身体的摆动,让其腹部朝外。按常规方法对仔猪胸前窝采血部位进行剪毛、消毒后,另一助手将猪的左前肢抓住,采血者的左手抓住仔猪的右前肢向仔猪纵轴外侧方向拉直,这样仔猪胸前窝的凹陷即可清晰显露出来。采血者的右手持一次性灭菌采血器朝右侧胸前窝凹陷处垂直进针1～2cm,这时血液就呈直线状射入采血器内。若不出血,可调整进针深度和角度,直到采出血液为止。采血完毕后拔出针头,消毒按压采血部位后,解除猪的保定。站立保定采血法(1)适用范围:适用于体重在15Kg以上的断奶猪、保育猪、中等体重的猪、大猪和种猪。(2)方法:由助手用猪鼻捻子或保定绳将猪上颌部向前上方吊起,让其两前肢着地,使其下颌部与两前肢的夹角为135°左右,这样就自然显露出两侧胸前窝的凹陷。按常规方法对猪胸前窝采血部位进行剪毛、消毒后,采血者的右手持一次性灭菌采血器(体重在150Kg以上的大猪需使用人医9号以上的长针头)朝右侧胸前窝凹陷处垂直进针2～5cm左右(进针深度依猪体重大小而定),这时血液就呈直线状射入采血器内。若不出血,可调整进针深度和角度,直到采出血液为止。采血完毕后拔出针头,消毒按压采血部位后,解除猪的保定。体会以上两种采血方法可完全取代传统的仰卧保定采血法,整个采血过程仅需1--2名助手保定,因而可大大减少保定人员数量,降低因采用仰卧保定法前腔静脉采血所付出的劳动强度,提高工作效率;这两种采血方法耗时少且容易被初学者学习和掌握,使得猪的前腔静脉采血工作变得更为简单和容易,适于在各级动物疾病预防控制机构和进出境动物检疫部门的血样采集工作中大力推广应用。

关键词：前腔静脉静脉采血法

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炭疽芽孢杆菌PCR鉴定方法及其模拟样品的检测

炭疽芽孢杆菌PCR鉴定方法及其模拟样品的检测

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：梁冰祝令伟纪雪周伟孙洋刘军郭学军冯书章吉林农业大学动物科技学院军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

引言炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的人兽共患传染病,炭疽茅孢杆菌是重要的烈性病原菌,主要经消化道感染。在自然环境中,炭疽芽孢杆菌主要以芽孢的形式长期存在,在局部地区形成自然疫源地。建立快速检测技术对于炭疽诊断和环境监测都具有重... 详细信息

引言炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的人兽共患传染病,炭疽茅孢杆菌是重要的烈性病原菌,主要经消化道感染。在自然环境中,炭疽芽孢杆菌主要以芽孢的形式长期存在,在局部地区形成自然疫源地。建立快速检测技术对于炭疽诊断和环境监测都具有重要应用价值。材料与方法根据炭疽茅孢杆菌3种特异性毒力基因的序列,其中包括位于质粒pXO1上的保护性抗原基因(pag)、质粒pXO2上的荚膜基因(cap)和染色体中的S-层蛋白基因(sap),设计3对引物建立多重PCR鉴定方法。在无菌采集的绵羊血中,加入不同浓度的炭疽疫苗菌株的培养液,制备模拟血液样品,通过血液基因组DNA提取试剂盒直接提取DNA作为PCR检测的模板,进行多重PCR检测。在长春市郊采集土壤,称取3g/份土壤加入不同稀释梯度的炭疽疫苗菌株制备的芽孢,混匀,制备模拟土壤样品;经增菌培养后,使用土壤基因组DNA提取试剂盒提取DNA作为PCR检测的模板,进行PCR检测。另外,还设计了炭疽茅孢外壁结构蛋白基因Bc明的鉴定引物。结果与讨论使用已建立的多重PCR方法检测所有的炭疽芽孢杆菌菌株均为阳性,检测其它非炭疽的需氧芽孢杆菌菌株均为阴性。该方法检测模拟血液样品的灵敏度是最低细菌含量2×10～6CFU/mL;血液样品增菌培养后再提取细菌基因组DNA的检测灵敏度是2×10～2CFU/mL;模拟土壤样品的检测灵敏度为3×10～4茅孢/g土壤。根据BclA引物的PCR扩增片段长度以及测序结果,可以区别炭疽Ⅱ号疫苗菌株和临床分离菌株。自然环境中广泛存在的蜡样茅孢杆菌、苏云金茅孢杆菌和蕈状茅孢杆菌等,与炭疽芽孢杆菌同属蜡样芽孢杆菌群,是一类遗传进化关系非常近的细菌。炭疽芽孢杆菌区别于同群内其它细菌最主要特征是携带pXO1和pXO2两个毒力质粒。本研究就是基于两个毒力质粒上的特异性基因建立了炭疽茅孢杆菌的多重PCR鉴定方法。结论 BclA是炭疽茅孢外壁主要结构蛋白的编码基因,该蛋白的最大特点是内含若干三氨基酸重复序列,在不同的菌株中长度不同。本研究中,在基因保守区设计引物,实验证明,根据PCR扩增片段长度和测序比对的结果,能够有效辨别炭疽临床分离株和Ⅱ号炭疽疫苗株。本研究建立了一种特异性和敏感性都很好的炭疽多重PCR检测方法。

关键词：炭疽芽孢杆菌鉴定方法 PCR 毒力质粒

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一株新型蝙蝠腺病毒基因分析

一株新型蝙蝠腺病毒基因分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李兴宇何彪徐琳涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病防控重点实验室

引言腺病毒是一种重要的人兽共患病毒,能造成消化道、呼吸道严重疾病。国际病毒学分类委员会(ICTV)将腺病毒分为Atadenovirus、Aviadenovirus、Ichtadenovirus、Mastadenovirus和Siadenovirus五个属,其中Mastadenovirus有25个种,包括两个蝙蝠腺病毒种。蝙蝠是重要的病毒储存库,目前已至少发现了13种病毒,其中61种是人兽共患病毒。为了进一步了解我国蝙蝠病毒的多样性,本实验对来自广东省4个市的蝙蝠进行病毒宏基因组学分析,结果发现了一株新型的腺病毒。材料与方法 2005-2006年间,本课题组从广东省罗定市、阳春市、云浮市和韶关市等地采集了8种蝙蝠181只。对蝙蝠肠道和肺脏进行收集,依据实验室已建立的病毒宏基因组学分析技术进行研究,设计特异性检测引物对样品进行筛查,并进行全基因组序列的扩增。结果根据宏基因组学结果,其中179条序列注释到腺病毒基因,利用特异性引物从广东省韶关市的26只中蹄蝠中,筛查出了10只蝙蝠携带腺病毒,阳性率为38.4%。根据兼并引物获得6kb的蝙蝠腺病毒基因序列,其中包含了100K、DBP、Protease、Hexon五个蛋白基因,该序列已经提交到GenBank(KT282355)。系统进化分析发现本次分离到的蝙蝠腺病毒与同属已知的腺病毒种均存在较远的亲缘关系;遗传距离分析,与A型蝙蝠腺病毒Bat adenovirus TJM具有最高的相似性,能达到76.9%,与已知蝙蝠腺病毒相似性低的能达到69%。依据ICTV中腺病毒的分类原则,可以归为腺病毒科(Adenoviridae)中Mastadenovirus属一个新种。讨论腺病毒具有非常广泛的感染谱,如蛇、鸟、几乎所有的哺乳动物等。由于其存在的广泛性,加之大多数腺病毒都不致病,所以腺病毒在公共卫生中不被人们重视。然而近年来,陆续有群体性腺病毒病暴发的报道,尤其是在大学和部队中,腺病毒已经成为威胁健康一类重要的病原体,所以研究腺病毒的自然宿主和多样性愈发受到人们的关注。蝙蝠作为多种病毒的自然宿主,在保存和传播病毒中具有重要的作用;数据显示,蝙蝠可能也是腺病毒的自然宿主,几乎所发现的蝙蝠腺病毒都是新型的,这说明蝙蝠携带的腺病毒具有非常丰富的多样性,因而探知腺病毒在蝙蝠体内的增殖和传播动态将对防控人类腺病毒病具有重要的借鉴作用。

关键词：病毒宏基因组学人兽共患相似性病毒病病毒基因

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我国动物狂犬病分子流行病学分析

我国动物狂犬病分子流行病学分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：冯烨许炜迪苏南李文婧于明洋涂忠忠涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

引言我国作为狂犬病的重灾区,每年狂犬病发病死亡人数居于世界第二位。近年来我国在狂犬病防控方面采取了多项措施,发病人数呈逐年下降趋势,但是每年新发生狂犬病的县市不断增加。本研究通过对近年来我国动物狂犬病流行毒株N基因系统进... 详细信息

引言我国作为狂犬病的重灾区,每年狂犬病发病死亡人数居于世界第二位。近年来我国在狂犬病防控方面采取了多项措施,发病人数呈逐年下降趋势,但是每年新发生狂犬病的县市不断增加。本研究通过对近年来我国动物狂犬病流行毒株N基因系统进化分析,了解我国毒株流行现状与分布特征。方法使用PCR方法对2004～2015年本实验室获得的53株狂犬病病毒株进行全长N基因序列扩增,使用DNAStar 7.2对上述毒株和近年来我国流行毒株33株N基因序列进行同源性分析,使用MEGA 6.1绘制N基因系统进化树。结果和讨论本研究获得的狂犬病病毒株均为狂犬病病毒(RABV),宿主种类包括犬、牛、羊、骆驼、貉、野生狐狸等,地理来源覆盖了我国28个省市自治区。系统进化分析将我国及周边国家RABV街毒株划分为4个进化群,即亚洲1群、亚洲2群、北极相关群和世界群。亚洲1群RABV分布最广,主要分布在我国中部和南部的23个省市,包括北京、天津、河北、山东、山西、陕西、甘肃、河南、江苏、上海、安徽、湖北、江西、浙江、重庆、湖南、贵州、四川、宁夏、云南、广西、广东和福建等,该群毒株的主要传播来源是患病犬。亚洲2群RABV在我国南部的11个省份传播流行,包括河南、浙江、福建、江西、湖南、广东、广西、贵州、重庆、云南等,该群毒株的主要传播来源是犬和鼬獾。值得一提的是近年来台湾地区新发的鼬獾狂犬病也是由该群毒株引起的。我国的北极相关群毒株最早在内蒙古的貉体内分离获得,2012年在我国的西藏和青海等省份也发现该群病毒的传播流行。在我国,世界群RABV主要分布在吉林、北京、江苏、河南、湖南、贵州和福建等省,该群毒株的主要传播来源是患病犬。在世界群毒株中,草原型RABV是近几年新出现的进化分支,目前已经发现内蒙古和新疆等地传播流行。该型毒株表现出与内地其他进化分支不同的特点,例如该群毒株的主要传播宿主是狐狸等野生动物,感染动物主要为牛、羊、骆驼等家畜。结论基于全长N基因的系统进化分析,将我国RABV街毒株分为4个进化群(亚洲1群、亚洲2群、北极相关群和世界群),我国毒株分布有明显地源性特点,不同进化群毒株在地理分布上有一定重叠。

关键词：系统进化分析内蒙古动物狂犬病分子流行病学

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副鸡禽杆菌血凝素蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA诊断方法的初步建立

副鸡禽杆菌血凝素蛋白单克隆抗体的制备及夹心ELISA诊断方法的初...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李淑芳徐玉智张培君龚玉梅王宏俊北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室沈阳农业大学生物科学与技术学院

副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌,该细菌培养条件苛刻、分离及生化鉴定较困难,发病鸡临床症状不典型且病程缓慢,这都加大了临床诊断和实验室检测的难度。本实验的目的在于研制出该菌的种特异性单抗,并在此基础上建立起特异性较强... 详细信息

副鸡禽杆菌是鸡传染性鼻炎(IC)的病原菌,该细菌培养条件苛刻、分离及生化鉴定较困难,发病鸡临床症状不典型且病程缓慢,这都加大了临床诊断和实验室检测的难度。本实验的目的在于研制出该菌的种特异性单抗,并在此基础上建立起特异性较强、敏感性较好的检测方法。本实验以副鸡禽杆菌C型标准菌株Modesto菌株的血凝素蛋白HA为抗原,四次免疫8周龄的BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。通过间接ELISA和Western进行筛选,将获得的阳性细胞进行亚克隆,筛选稳定分泌单克隆抗体的细胞株。经5次亚克隆后共获得11株针对副鸡禽杆菌血凝素蛋白HA的特异性单抗,分别命名为3D3、1D6、5C9、4C3、4G1、6G2、5D2、1E8、3F5、4F5、4G2,以上单抗腹水的间接ELISA效价在105～3×106之间,直接平板凝集在23～25。免疫球蛋白亚类试剂盒鉴定结果表明:3D3、1D6、4C3、4G1、5D2、4F5、4G2属于IgG1亚型,5C9、6G2、1E8属于IgG2b亚型,而3F5属于IgG2a亚型。特异性实验结果表明:11株单抗只与副鸡禽杆菌反应,而不与巴氏杆菌、禽嗜血杆菌、放线杆菌发生交叉反应,显示出比较好的种特异性,本研究在研制出副鸡禽杆菌HA蛋白的特异性单克隆抗体的基础上建立了能检测副鸡禽杆菌的夹心ELISA方法,并应用此方法对几种临床中常见病原菌和已获得的副鸡禽杆菌进行了检测,结果证实,本方法具有较好的特异性和敏感性,而且操作简便、快速,是一种使用于鸡传染性鼻炎的诊断、流行病学调查、检疫和监测的有效方法。这些都为有效控制该病的暴发提供了必要的生物材料和方法。

关键词：副鸡禽杆菌特异性 ELISA 鸡传染性鼻炎单克隆抗体

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PRRSV HB-AG的ORF5与NSP2基因遗传变异分析

PRRSV HB-AG的ORF5与NSP2基因遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：左奕袁万哲孙继国河北农业大学动物医学院河北省兽医生物技术工程技术研究中心

引言由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已成为危害全球养猪业的重要经济性传染病之一。自2006年以来,高致病性PRRSV的流行和疫情爆发,给我国养猪业造成了巨大经济损失。且国内不断有PRRSV的变异分离株的报... 详细信息

引言由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已成为危害全球养猪业的重要经济性传染病之一。自2006年以来,高致病性PRRSV的流行和疫情爆发,给我国养猪业造成了巨大经济损失。且国内不断有PRRSV的变异分离株的报道,表明变异毒株适应能力在不断增强,在我国境内流行也逐渐复杂化、扩大化。因此,及时掌握当地PRRSV流行变异情况,对于当地PRRSV的防控有着重要意义。而对ORF5和NSP2基因的遗传变异分析可以一定程度上反应整个病毒基因组的变异情况。本研究以我国分离到的一株高致病性PRRSV为材料,深入研究其ORF5和NSP2基因的遗传变异情况,旨在为今后PRRS的防控提供理论依据。材料与方法用于分析的毒株—PRRSV HB-AG于2014年分离自河北安国地区发生PRRS猪场的病猪脏器样本。根据GenBank已收录的PRRSV VR2333、HB-1a、CH-1a和JXA1等毒株核苷酸序列,通过DNAstar软件分析比较,运用Primer Permier 5软件设计引物,进行基因PCR鉴定以及ORF5、NSP2基因的扩增和序列测定分析。结果与结论本研究通过对分离的HB-AG毒株NSP2和ORF5基因的核苷酸序列进行遗传进化分析,结果表明PRRSV HB-AG株Nsp2编码区存在30个不连续氨基酸的缺失,且其ORF5第137位氨基酸为丝氨酸(S),第13、151位氨基酸为精氨酸(R),因此,本研究分离的毒株为具有强毒特性的高致病性野毒株。其Nsp2编码区和ORF5编码的氨基酸序列存在多处变异,表明该分离株与国内其他地区流行毒株并不一致,而且在本地区产生了新的变异。HB-AG的N-糖基化位点分别位于氨基酸序列的第30、34、44和51位,且其第33位突变为D,与疫苗株JXA1-R一致;此外,其第58、61、104和114位都存在碱基突变,而这些碱基的突变与致病性的关系,目前尚未有报道。HB-AG株属于最新分离,能在一定程度上反应当地最近的流行情况。PRRSVHB-AG与疫苗株JXA1-R同源性高达98%,且其33位的与疫苗株JXA1-R一致,所以该毒株可能是与疫苗毒株发生重组的新毒株。

关键词： PRRSV HB-AG 变异分析基因遗传

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甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情流行病学分析

甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情流行病学分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：许炜迪刘世基冯烨李文婧于明洋涂忠忠张富林涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室甘肃省庆阳市合水县兽医局

目的通过甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情,了解该省份狂犬病流行的本底,分析狂犬病病毒流行现状及与周边地区的演化关系,指导当地狂犬病的防控工作。方法采用FAT实验和荧光定量RT-PCR方法对甘肃省送检的犬脑组织样品进行检测。使用... 详细信息

目的通过甘肃省首例实验室确诊的犬狂犬病疫情,了解该省份狂犬病流行的本底,分析狂犬病病毒流行现状及与周边地区的演化关系,指导当地狂犬病的防控工作。方法采用FAT实验和荧光定量RT-PCR方法对甘肃省送检的犬脑组织样品进行检测。使用PCR方法扩增该毒株全长N和G基因。使用DNAStar 5.0对该毒株和我国流行毒株进行同源性分析,使用MEGA 6.06绘制G基因系统进化树。结果经检测,该样品为狂犬病病毒（RABV）阳性,毒株命名为GSHSD14,将N和G基因序列上传Genbank,登录号分别为KT221140、KT221103。将该毒株G基因序列与我国流行毒株比较,该毒株与2011年分离自陕西的犬源毒株ShaanxiRa007同源性最高,为99.8%;氨基酸同源性为99.4%。系统进化分析结果表明,我国流行毒株分为亚洲1群、亚洲2群、北极相关群和世界群。GSHSD14属于亚洲1群,该群毒株在我国分布范围最广,主要分布在我国中部和南部各省市。山西、山西、湖北、重庆、四川和宁夏等甘肃邻近省份分离的毒株均属于该进化群,该进化群的主要传播来源是患病犬。讨论甘肃省地处我国西北,周边省份狂犬病流行情况较为复杂,例如在陕西、青海和四川等省,犬是人和动物狂犬病的主要传播来源,主要流行的毒株属于亚洲1群。甘肃西部的青海省的流行毒株属于北极相关群;位于甘肃西北的新疆,狂犬病的主要传播来源是狐狸、狼等野生动物,该群毒株属于世界群草原型;甘肃北部的内蒙古,流行的RABV毒株特征更为复杂,目前已发现貉引起的北极相关群RABV和野生狐狸引起的世界群草原型RABV在当地传播流行。据报道,甘肃省人狂犬病疫情偶有暴发,但是上述疫情均是由临床症状判断的,均没有进行实验室方法确诊。本研究首次证实了亚洲1型RABV已在甘肃省传播流行,提示甘肃省狂犬病是犬狂犬病流行为主的疫区传播的结果,而非临近省份野生动物狂犬病溢出所致。为了有效的控制甘肃省的狂犬病疫情,建议在全省范围内,特别是在农村地区,开展大规模犬只免疫,提高当地犬狂犬病免疫覆盖率,此外还应加强犬只管理,做好与周边省份的狂犬病联防联控机制,防止不同进化群毒株在当地混合流行。

关键词：狂犬病病毒基因序列甘肃省流行病学分析

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宁夏骆驼狂犬病的暴发处理报告

宁夏骆驼狂犬病的暴发处理报告

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：周海宁王进香张和平杨佳冰宁夏动物疾病预防控制中心

引言 2015年4月,宁夏平罗县国营前进农场11队发生骆驼陆续死亡病例,为了分析骆驼死亡原因,宁夏动物疾病预防控制中心通过流行病学调查和实验室检测,确诊为此次疫情为狂犬病疫情,该疫情属宁夏首次报告骆驼狂犬病。材料与方法流行病学调查... 详细信息

引言 2015年4月,宁夏平罗县国营前进农场11队发生骆驼陆续死亡病例,为了分析骆驼死亡原因,宁夏动物疾病预防控制中心通过流行病学调查和实验室检测,确诊为此次疫情为狂犬病疫情,该疫情属宁夏首次报告骆驼狂犬病。材料与方法流行病学调查:畜主反映四月初连续阴雨,导致部分饲喂骆驼的饲草霉变,怀疑骆驼食用霉变饲料导致死亡,有骆驼死亡病例后随即更换饲草。畜主没有发现自家骆驼被犬咬伤病史,饲养的2条犬也没有发病。但在走访农尸调查中,有人证实,2015年2月20日前,该队先后有3条狗死亡,死前有呕吐、狂叫等症状。临床特征:发病骆驼2峰,其发病初期无明显症状,发病后期撵人、追赶其他骆驼;将其强行拴住,还啃咬木桩。最后倒地不起,口流涎1-2d死亡。病骆驼死亡后剖检内脏无眼观病理变化,只发现瘤胃积食,膀胱尿液充盈。实验室检测:采集死亡骆驼心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等组织脏器进行细菌学检测;采集病死驼脑组织送往军事医学科学院军事兽医研究所动物狂犬病诊断中心进行狂犬病检测。结果与处置细菌学检测结果为阴性;根据流行病学调查、病驼临床症状,怀疑病驼患狂犬病,初步推断,由病犬夜间咬伤骆驼引发;动物狂犬病诊断中心采用直接免疫荧光法和巢式RT-PCR对病驼脑组织进行检测,结果均为狂犬病阳性,确诊了此次狂犬病疫情。随后县政府发布狂犬病紧急通告,划定疫点,对疫点内患病骆驼和犬进行了扑杀,并对骆驼、犬等排泄物、垫料、污水等进行无害化处理;在全县范围内加大犬类免疫注射工作;对疫点周边相邻的农户饲养动物进行拉网式疫情排查,在全县范围内开展牛、羊、猪、犬疫情排查监测;对人间曾经发生过狂犬病疫情乡镇重点排查;指导养殖场建立消毒制度;加大宠物诊所和狗市监管力度,停止经营和出售犬只活动,制定全县流浪犬整治工作方案,对县城主要路段、居民小区、广场、车站等重点场所流浪犬进行集中捕捉;对骆驼畜主和饲养人员进行医学观察,对密切接触的人员注射狂犬病疫苗;在全县范围内加强狂犬病防治知识宣传,使狂犬病防控知识家喻户晓,特别是被犬咬伤后必须注射狂犬病疫苗,同时做好群众的安抚教育工作,消除群众恐慌情绪,树立群防群控的意识。

关键词：狂犬病疫苗动物狂犬病流浪犬流行病学调查细菌学检测

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