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17 篇 河南农业大学
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7 篇 中国畜牧兽医学会...
7 篇 河南省动物疫病预...
7 篇 广西大学

作者

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13 篇 丁壮
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11 篇 熊祺琰
11 篇 冯志新
11 篇 余祖华
11 篇 程相朝
11 篇 邵国青
10 篇 何雷
10 篇 赵雪丽
10 篇 吴志明
10 篇 刘茂军
10 篇 闫若潜
9 篇 王淑娟
9 篇 张春杰
9 篇 谢彩华
9 篇 李一权
9 篇 郁川
8 篇 刘光清

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355 篇 中文
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Poly(I:C)对PRRSV诱导的抗病毒免疫反应的影响

Poly(I:C)对PRRSV诱导的抗病毒免疫反应的影响

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王冬梅崔春晓冯亚琼张莹莹郭嘉杜东颖夏平安河南农业大学牧医工程学院

引言聚肌胞（polyinosinic-polycytidylic acid,polyI:C）是由聚肌苷酸和聚胞苷酸通过碱基互补配对形成的双链RNA,是一种高效干扰素诱导剂,1957年Isaacs和Lindenmann在用鸡胚研究流感病毒干扰现象时发现了干扰素（Interferon,IFN）,其... 详细信息

引言聚肌胞（polyinosinic-polycytidylic acid,polyI:C）是由聚肌苷酸和聚胞苷酸通过碱基互补配对形成的双链RNA,是一种高效干扰素诱导剂,1957年Isaacs和Lindenmann在用鸡胚研究流感病毒干扰现象时发现了干扰素（Interferon,IFN）,其后人们迅速地对干扰素的性质、诱生原理以及与其相关的细胞因子等进行了广泛的研究。二十世纪六七十年代,许多学者就开始对干扰素的有效诱导剂展开了大量的研究。其中polyI:C是由polyI链中的次黄嘌呤残基与polyC链中的胞嘧啶残基配对形成的双螺旋结构,其诱导干扰素效果最为显著。而且,由于polyI:C有非常类似病毒的dsRNA结构,使许多研究者对polyI:C产生了浓厚的兴趣。有报道称聚肌胞苷酸可以通过激活IFIT3来抑制PRRSV在Marc-145细胞上的复制。但是对抗病毒免疫反应的影响还未见报道。材料与方法（1）毒株与实验动物:PRRSV Hn-3/06株（TCID50为）为本实验室分离并保存;PRRSV抗原、抗体均为阴性的20日龄健康大白仔猪购自郑州市郊区散养殖户。（2）主要试剂:Trizol裂解液、Reverse Transcriptase M-MLV、dNTP、Oligo（dt）、RRI、SYBR Premix Ex Taq等购自TaKaRa公司;Poly（I:C）购自Invivogen公司;RPMI 1640培养液购自索来宝有限公司;胎牛血清购自杭州四季青生物工程有限公司。（2）方法:用200个TCID的PRRSV感染猪肺巨噬细胞（porcine alveolar macrophage,PAM）,吸附1h后用100ng/mL的聚肌苷胞(poly（I:C）)处理细胞,分别培养12、24、36、48 h后收集细胞及上清,同时设PRRSV感染对照组、poly（I:C）刺激对照组和健康细胞对照组,用实验室已经建立的Real-time qPCR方法对poly（I:C）刺激PRRSV感染组和PRRSV感染对照组中PRRSV复制水平及各组PAM细胞中IFN-α、TNF-αmRNA转录水平变化进行定量分析。结果与讨论PRRSV在感染PAM细胞后12-24b期间可促进PAM细胞IFN-αmRNA的转录,36-48h期间抑制PAM细胞IFN-αmRNA的转录;TNF-αmRNA转录水平在12h、48h后略微升高,在24、36h后均略微下降。Poly（I:C）处理PAM细胞后IFN-αTNF-αmRNA转录水平均上调。Poly（I:C）+PRRSV组IFN-αmRNA的转录水平与PRRSV组相比在12-36h均显著升高,在48h后则显著下调。Poly（I:C）+PRRSV组TNF-αmRNA转录水平与PRRSV组相比,12-36h后均升高,在12h升高较显著,48h后则显著下调。结论 PRRSV感染PAM细胞经Poly（I:C）刺激后IFN-α、TNF-αmRNA转录水平在12-36h后显著升高,从而抑制了PRRSV在PAM细胞内的复制。

关键词： PRRSV 抗病毒免疫反应 I:C

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新疆富蕴县骆驼狂犬病疫情分析

新疆富蕴县骆驼狂犬病疫情分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李文婧王文盛卓君冯烨许炜迪于明洋马伟林汉亮恰布旦胡尔曼别克涂长春军事医学科学院军事兽医研究所新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆阿勒泰地区富蕴县畜牧兽医站

引言 2015年5月,新疆阿勒泰地区富蕴县发生了一起骆驼的狂犬病疫情,由当地兽医局采集2头骆驼的脑组织送狂犬病参考实验室确诊。方法运用直接免疫荧光法(FAT)对送检的2份骆驼脑组织样品进行确诊,采用PCR方法扩增阳性毒株的全长N基因序列... 详细信息

引言 2015年5月,新疆阿勒泰地区富蕴县发生了一起骆驼的狂犬病疫情,由当地兽医局采集2头骆驼的脑组织送狂犬病参考实验室确诊。方法运用直接免疫荧光法(FAT)对送检的2份骆驼脑组织样品进行确诊,采用PCR方法扩增阳性毒株的全长N基因序列,使用DNAStar7.2对上述毒株和新疆周边地区的狂犬病流行毒株进行比对分析,使用MEGA6.1绘制N基因系统进化树。结果经FAT法检测,2份骆驼脑组织样品均为狂犬病病毒阳性。经过全长N基因序列比对发现,2株毒株的同源性达到100%,均命名为XJFYCA15。该毒株N基因序列与分离自内蒙古阿拉善盟和锡林浩特的牛、羊、骆驼和狐狸毒株NMC01、NMSH01、NMALSC01、NMFOX01同源性相对较高,为99.7～99.8%;与分离自新疆伊犁地区的毒株XJTCSS01和塔城地区的毒株XJTCS01相比,同源性为99.5～99.7%,且处于不同的进化分支。系统进化分析结果表明,XJFYCA15属于世界群草原型狂犬病病毒。讨论新疆地处我国西北边境,近年来牲畜狂犬病疫情偶有发生,大多为狐狸、狼等野生动物咬伤所致。目前在新疆发现的狂犬病流行毒株均为草原型狂犬病病毒,此次新疆富蕴县的毒株与内蒙古阿拉善盟的草原型狂犬病病毒毒株同源性最高,且处于同一进化分支,这打破了以往对新疆和内蒙古草原型RABV各自具有独立传播的认知。内蒙古阿拉善盟、锡林浩特市与新疆阿勒泰地区均位于阿勒泰山脉,新疆伊犁和塔城位于天山山脉,而阿勒泰和天山等不同山脉的野生动物狂犬病处于不同的进化分支,形成了各自相对独立的传播圈;两个山脉上狐狸、狼等野生动物活动频繁,且活动范围较大,严重威胁生活在上述地区牧民的人身和财产安全,导致近年来新疆地区牲畜狂犬病频发。因此建议上述地区的兽医部门与林业部门做好沟通,在野生动物疫源疫病监测站做好野生犬科动物监视工作,一旦发现死亡的狐狸、狼等野生动物,立即报告并采样送参考实验室检测确诊。在当地宣传防治知识,教育牧民做好自身的防护,防止人狂犬病的发生。一旦被犬、野生动物或有神经症状的家畜咬伤,应立即到卫生部门接受狂犬病暴露后的免疫救治措施。同时教育和鼓励广大牧民一旦发现动物疫情应及时报告兽医防疫部门。

关键词：狂犬病病毒基因序列同源性内蒙古阿拉善盟新疆阿勒泰地区富蕴县疫情分析

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我国牛呼吸道病细菌性病原的研究进展

我国牛呼吸道病细菌性病原的研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：姜志刚常继涛王芳于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病创新团队

牛呼吸道疾病(The bovine respiratory disease,BRD)是一种由多种病原体感染、环境应激以及牛体自身因素相互作用所引起的重要的经济性疾病,对养牛产业危害严重。细菌性病原的感染是引起牛体发生纤维素性化脓性肺炎(或胸膜肺炎)的直接因... 详细信息

牛呼吸道疾病(The bovine respiratory disease,BRD)是一种由多种病原体感染、环境应激以及牛体自身因素相互作用所引起的重要的经济性疾病,对养牛产业危害严重。细菌性病原的感染是引起牛体发生纤维素性化脓性肺炎(或胸膜肺炎)的直接因素,也是BRD导致牛死亡的主要原因。作者从病原学、病理学、流行病学以及防控措施等多个方面对引起BRD的细菌性病原体,多杀性巴氏杆菌、溶血性曼式杆菌、睡眠嗜组织杆菌以及牛支原体的相关研究进展进行综述,以期为该病的防控提供参考。在细菌性病原中,多杀性巴氏杆菌可引起牛纤维素性化脓性肺炎,我国从2006年开始,在牛群中出现该病,强烈应激条件下发病率最高可达100%、死亡率可达40%;到2008年,本研究团队对完成对多杀性巴氏杆菌的分离鉴定;随后几年间,该病已经覆盖了包括西藏牦牛在内的我国所有养牛省区,对我国养牛产业造成了沉重的打击。在北美地区,溶血性曼氏杆菌被认为是最重要的牛呼吸道病原菌,引起牛发生急性的纤维素性胸膜肺炎;然而,该菌在我国只有少数散发的案例报道,要全面了解该菌在我国的流行情况,还需做更加广泛的流行病学调查。睡眠嗜组织杆菌引起的病理变化也与溶血性曼式杆菌较难区分,主要表现为纤维素性胸膜肺炎;本研究组曾经在病牛肺脏组织中检测到该病菌,证明其在我国牛群中的存在;鉴于该菌在北美特别是澳洲的危害,我国也应予以重视。化脓性隐秘在BRD发生过程中,主要引起牛慢性化脓性胸膜肺炎;我国针对该菌分离鉴定已有许多案例,本研究组也从肺脏组织化脓灶中获得多个分离株,但对其致病性尚缺乏深入的研究。牛支原体可引起牛干酪样坏死性肺炎,但牛支原体是否是BRD的原发病原菌却一直存在争议,因为在无病理损伤的肺脏组织中其分离率也可达到45%;我国近年来对于牛支原体的分离报道较多,并认为是2008年以来我国流行的犊牛肺炎的病因,已经展开针对该病原的诊断与疫苗的研究。国外的研究表明,与抗生素治疗相比,疫苗免疫是防控BRD细菌性肺炎更加安全有效的手段。目前,哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队与中牧实业股份有限公司正在联合研发牛多杀性巴氏杆菌A型、B型二价灭活疫苗,随着对牛呼吸道其他病原菌的深入研究,牛呼吸道细菌多联疫苗的研究和应用是我国牛群中BRD防控的必然趋势。

关键词：细菌性病原牛呼吸道病多杀性巴氏杆菌牛支原体

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检测通用型和H5亚型禽流感病毒TaqMan-MGB探针复合实时荧光PCR方法的建立

检测通用型和H5亚型禽流感病毒TaqMan-MGB探针复合实时荧光PCR方...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：马震原吴志明闫若潜赵雪丽谢彩华王东方王淑娟曹伟伟河南省动物疫病预防控制中心

引言禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒（Influenza Virus Type A）引起的禽类的一种急性、烈性传染病。目前以H5、H7、H9亚型禽流感病毒的致病性最强,危害最大。其中,由H5N1亚型禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）引... 详细信息

引言禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒（Influenza Virus Type A）引起的禽类的一种急性、烈性传染病。目前以H5、H7、H9亚型禽流感病毒的致病性最强,危害最大。其中,由H5N1亚型禽流感病毒（Avian Influenza virus,AIV）引起的高致病性禽流感（Highly pathogenic avian influenza,HPAI）被国际兽疫局定为A类传染病,对人类健康和公共卫生安全造成了严重危害。目前检测AIV方法病毒分离、血清学检测以及RT-PCR方法等由于耗时较长、操作复杂、无法区分感染与免抗体等缺陷已无法满足快速诊断需要;因此建立灵敏、特异、快速、高通量的荧光定量PCR方法已势在必行。本研究采用TaqMan-MGB探针建立AIV通用（AIV-T）和H5亚型（AIV-H5）复合实时荧光PCR（FQ-PCR）检测方法,该方法能够检测区分1个碱基差异,可对AIV作出快速准确诊断并判定出是否为H5亚型HPAIV,对AIV的早期快速诊断和采取有效防控措施有重要的意义。材料与方法根据GenBank中公布的禽流感病毒M基因的高度保守序列,设计了1对通用型引物和1条TaqMan MGB荧光探针;根据H5禽流感病毒HA基因的型特异性序列,设计了1对H5亚型特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针;以流感病毒Uni-12引物作为共用反转录引物。用构建好的阳性重组质粒作为标准品绘制标准曲线,通过对反应条件优化,用敏感性试验、特异性试验、稳定性及重复性试验、应用试验对本方法进行验证。结果与讨论本研究对引物与探针浓度进行优化,以提高反应扩增效率与敏感度。以终浓度1.0×10～5拷贝/μL重组质粒作为检测模板,应用荧光PCR仪采用矩阵法筛选不同浓度的引物和探针组合,筛选针对AIV-T/AIV-H5基因复合FQ-PCR最佳引物浓度、探针浓度和最佳反应条件。该方法在1.0×10～1.0×10～7copies/μL检测范围之间具有良好线性关系,最小检出量达到10copies/μL;具有较好的重复性、稳定性;与灭活的AIV H7亚型及H9亚型抗原、新城疫病毒、传染性喉气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病毒核酸无交叉反应,具有较好的特异性。由国内具有AIV病毒分离培养研究资质的实验室用本研究建立的方法对其保存的36份疑似禽流感病毒样本进行检测,与商品化禽流感病毒通用型、H5亚型2种荧光PCR检测试剂盒同时检测结果相比,本方法显示出操作简便、耗时短、高通量、敏感稳定的特点,从而说明该方法可用于临床样品中微量禽流感病毒病毒定型检测。

关键词：禽流感病毒 AIV PCR TaqMan-MGB 实时荧光

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小反刍兽疫病毒GZL14株的全基因组序列测定与分析

小反刍兽疫病毒GZL14株的全基因组序列测定与分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：朱利塞郭昌明邢泽黎盖小春鲁海冰王明月涂长春王新平吉林大学动物医学学院中国人民解放军军事兽医研究所

前言小反刍兽疫(peste des petits ruminants PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属中的小反刍兽疫病毒引起的一种急性、亚急性高度接触性传染病,也是国际动物卫生组织(OIE)规定的通报行疫病和我国法定的一类疫病。该病首次在1942年报道于西非... 详细信息

前言小反刍兽疫(peste des petits ruminants PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属中的小反刍兽疫病毒引起的一种急性、亚急性高度接触性传染病,也是国际动物卫生组织(OIE)规定的通报行疫病和我国法定的一类疫病。该病首次在1942年报道于西非的象牙海岸。本病在国内于2007年首次暴发于西藏自治区阿里地区,之后于2013年冬至2014年春在全国各地爆发流行。2014年春,本实验室从吉林省某地羊群爆发的临床上以腹泻、发热、流涎、口腔黏膜严重溃疡、呼吸困难为主要特征的疫病中分离检出小反刍兽疫病毒,并对分离的pPRV毒株的基因组序列进行了测定与分析。材料与方法用无菌的绵拭子采集发病羊的鼻腔分泌物,并用无菌的磷酸盐缓冲溶液处理,离心后取上清液,其中一部分用于电镜负染观察,一部分用于RNA的提取,并采取RT-PCR的方法对其进行鉴定,同时根据GeneBank上提交的PRRV序列设计引物,扩增全长基因组序列。结果与讨论电镜负染观察病料中存在大量的大小为130-150nm的副黏病毒粒子。应用PPRV特异性的引物,扩增出与预期目的片段大小相似的基因片段,经过序列测定与对比分析,发现扩增出片段为PPRV的特异性序列,证明该病毒粒子为PPRV,并将该毒株命名为GZL14。扩增出的N基因序列与国外PPPV分离株INDIA-1994和PRADESH-95的核苷酸同源性最高,为99.3%,而与国内分离株China/Tib/07的同源性为99%;F基因序列与国外分离株Izatnagar-94和Morocco-2008毒株的同源性最高,为98.1%,而与国内分离株Clina/Tib/07的同源性为97.2%。为了进一步验证该毒株其他基因的变异情况,我们对GZL14毒株的全基因组序列进行扩增,结果显示该毒株基因组全长为16058bp,其中5'UTR包含107个核苷酸,3'UTR包含109个核苷酸,且存在个别碱基的突变和插入。与其他PPRV毒株不同,GZL14毒株的M和F基因之间的非编码区,存在一段连续重复的序列,共103个碱基,该重复序列是否对PPRV的生物学特性及其致病性产生影响,还有待进一步研究。结论分离鉴定一株引起吉林省小反刍兽疫爆发的PPRV毒株GZL14。基因组序列测定与分析发现GZL14毒株的M和F基因之间的非编码区存在一段连续重复的序列,这与其他报道的PPRV毒株不同,该结果将为病毒的致病机理及本病的诊断和防治提供理论依据。

关键词：小反刍兽疫病毒基因组序列 GZL14 全基因组序列测定与分析

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出血性大肠杆菌O157:H7免疫磁性分离方法的建立

出血性大肠杆菌O157:H7免疫磁性分离方法的建立

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：梁冰纪雪孙洋祝令伟刘军周伟郭学军冯书章吉林农业大学动物科技学院军事医学科学院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

引言磁性纳米粒子是近几年发展起来一种新型材料,与免疫学相结合,广泛应用于病理、药理、分子遗传学和微生物等领域。尤其在免疫检测方面,逐渐受到重视。出血性大肠杆菌(EHEC)主要存在O157、O26和O111等几种血清型,其中主要以O157:H7为... 详细信息

引言磁性纳米粒子是近几年发展起来一种新型材料,与免疫学相结合,广泛应用于病理、药理、分子遗传学和微生物等领域。尤其在免疫检测方面,逐渐受到重视。出血性大肠杆菌(EHEC)主要存在O157、O26和O111等几种血清型,其中主要以O157:H7为典型菌株,是一种动物源性传染病,牛和少数反刍动物为贮存宿主,对人有很强的致病力。本研究主要是建立一种灵敏性较高、特异性较好的分离O157:H7的免疫磁珠检测技术。材料与方法首先制备O157:H7单克隆抗体,并应用ELISA方法检测单克隆抗体效价。通过国内五种磁珠与国外两种磁珠的比较,优化磁珠与单克隆抗体的偶联条件,包括偶联时间、偶联温度和耦合缓冲液PH值等,选取最适磁珠和最佳偶联条件。磁珠与纯化后的单克隆抗体偶联制成O157免疫磁珠,通过测定偶联前后抗体蛋白浓度,计算磁珠蛋白偶联量。通过免疫磁珠捕获不同浓度的大肠杆菌O157:H7,利用涂板后计数,计算免疫磁珠的灵敏性;培养多种肠道常见菌株,与大肠杆菌O157:H7菌液等体积混匀,再进行免疫磁珠对混合菌液中目的菌的富集,然后将磁珠涂板于O157选择培养基,检测免疫磁珠的特异性。结果与讨论通过五种磁珠的比较,选取国内倍思乐羧基磁珠(直径0.5～1μm)。偶联条件为在振荡器上磁珠悬浮液37℃孵育2h,耦合液PH为7.4。通过免疫小鼠获得腹水,制备大肠杆菌O157:H7单克隆抗体效价达1:1.024×10～4;制备单抗免疫磁珠对大肠杆菌O157:H7的特异性好,捕获效率因细菌浓度的不同,捕菌效率也不同。在1.4×10～4CFU/mL细菌含量,磁珠的吸附率为53%;在1.4×10～2CFU/mL细菌含量,磁珠的吸附率为83%。大肠杆菌O157:H7细菌含量在1.4×10～4CFU/mL时,特异性集菌率为90%;在1.4×10～3 CFU/mL时,特异性集菌率为43%,而在140 CnU/mL时,特异性集菌率仅为7%。结论大肠杆菌O157:H7在人类感染疾病中的地位越来越突出,很多实验室对其检测方法都已进行深入研究。本研究通过制备单抗免疫磁珠对大肠杆菌O157:H7进行富集,具有较高的特异性和灵敏性,建立免疫磁珠富集鉴定大肠杆菌O157:H7的方法具有可行性。

关键词：出血性大肠杆菌灵敏性单克隆抗体免疫磁珠 O157:H7 特异性 CFU 免疫磁性分离

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PB1-T296R突变增强甲型H1N1流感病毒聚合酶活性及对BALB/c小鼠的致病性

PB1-T296R突变增强甲型H1N1流感病毒聚合酶活性及对BALB/c小鼠的...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：于志君程凯慧孙伟洋张醒海王铁成李元果王化磊张乾义欣悦李雪张坤黄靖杨松涛秦川钱军陈化兰胡桂学高玉伟夏咸柱北京协和医学院中国医学科学院医学实验动物研究所军事医学科学院军事兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所吉林农业大学

引言/目的:2009年4月,新型猪源H1N1亚型流感病毒(即甲型H1N1流感病毒)出现在墨西哥等地,随后在全球迅速传播,引发本世纪第一次流感大流行。作为一种人畜共患的流感病毒,其有可能通过基因突变来增强对哺乳动物的致病性,对公共卫生安全构... 详细信息

引言/目的:2009年4月,新型猪源H1N1亚型流感病毒(即甲型H1N1流感病毒)出现在墨西哥等地,随后在全球迅速传播,引发本世纪第一次流感大流行。作为一种人畜共患的流感病毒,其有可能通过基因突变来增强对哺乳动物的致病性,对公共卫生安全构成潜在危害。小鼠作为一种哺乳动物模型,被广泛应用于流感病毒致病机理的研究。本研究以BALB/c小鼠作为哺乳动物模型,研究新型猪源H1N1亚型流感病毒感染哺乳动物的致病机理。材料与方法:将一株甲型H1N1流感病毒A/Changchun/01/2009(H1N1)鼻内接种BALB/c小鼠,两天后取鼠肺,制成肺匀浆后鼻内接种下一只BALB/c小鼠,如此连续传代18次,获得致病性增强的甲型H1N1流感病毒鼠适应株;采用小鼠半数致死量(MLD50)、体重变化率、生存率、组织嗜性、体内/体外复制动力学等指标评价鼠适应株的生物学特性;全基因组测序分析鼠适应株病毒蛋白上出现的氨基酸残基突变;反向遗传技术拯救重组病毒并验证突变位点对病毒生物学特性的影响;通过微基因组实验初步探讨鼠适应株致病性增强的分子机制。结果与讨论:鼠适应株的体外和体内复制能力均显著增强,且能够在脑内复制;鼠适应株共计发生6处氨基酸残基突变,分别是PB1-T296R、PA-I94V、HA-N159D、HA-D225G、HA-R226Q和NP-D375N。通过反向遗传技术,发现PB1-T296R突变能显著增强甲型H1N1流感病毒的体外和体内复制能力、扩大病毒的组织嗜性、增强病毒的聚合酶活性及对BALB/c小鼠的致病性。结论:本研究发现一个新的流感病毒毒力分子标记PB1-T296R,为今后研究流感病毒感染哺乳动物的致病机理奠定基础。

关键词：组织嗜性流感病毒 BALB/c PB1-T296R 酶活性

来源：评论

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猪鼻支原体不同分离菌株对仔猪致病性试验

猪鼻支原体不同分离菌株对仔猪致病性试验

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：危艳武陈冬杰黄立平王一平刘丹孙建慧冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、关节炎、肺炎的重要病原,在机体免疫力降低的情况下该病的发生率就显著上升,在临床实践中,Mhr还经常与其他病原微生物混合感染,造成猪群极为严重的临床病理和解剖病理,... 详细信息

引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、关节炎、肺炎的重要病原,在机体免疫力降低的情况下该病的发生率就显著上升,在临床实践中,Mhr还经常与其他病原微生物混合感染,造成猪群极为严重的临床病理和解剖病理,导致保育阶段仔猪死亡率显著升高,也可通过污染的饲料或饮水经消化道侵入机体,随血液到达相应的靶器官而致病。至今为止,尚无有效的药物防控该病。方法选用25日龄Mhr抗体和抗原均为阴性试验猪,由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心培育和提供,取Mhr-DL菌株和Mhr-SP菌株第5代培养物(2.1×1010CCU/mL)1mL,经气管和腹腔同时感染试验猪10头,同设未感染对照组5头。人工感染试验猪隔离饲养,逐日进行临床观察和体温测定。按表1制定标准评分,试验猪于感染后第28 d迫杀,采取心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结和小肠等组织做病理学观察和病毒分布测定。结果 Mhr-DL菌株感染组临床症状表现为精神沉郁、食欲不振、体温高达41.8℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏的多发性浆膜炎、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾肉样病变。Mhr-SP菌株感染组仅表现为一过性的体温升高,剖检病理仅表现为肺脏的虾肉样变。免疫组化法检测发现,Mhr感染后肺脏、扁桃体、肾脏、肝脏的检出率为最高。Mhr感染组的组织病理均存在间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生。抗体检测发现,感染后第5d这两个菌株抗体均阳转。细胞因子检测发现,感染组尤以TNF-α变化最为显著。-临床猪群中Mhr感染比较普遍,常与其他病原混合感染,显著提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床Mhr的综合防制提供科学依据。结论综上所述,Mhr通过气管和腹腔同时感染能够引起试验猪显著的临床病理和解剖病理,为Mhr人工感染模型的建立提供了良好的思路。另外,由于其引起试验猪的临床症状与猪副嗜血杆菌感染引起的临床症状极为相似。在临床诊断中Mhr引起的解剖病理极易与猪副嗜血杆菌引起的解剖病理相混淆,这也充分证明,我国Mhr流行菌株对猪群的危害虽未引起重视,但其对我国猪群的危害却是不可低估,并且随着我国猪群的集约化、规模化饲养,多病原混合感染日趋严重,Mhr在混合感染中对猪群危害有待于进一步澄清,加以科学评估,为今后开展Mhr防控技术和科学研究奠定理论基础。

关键词：猪鼻支原体猪副嗜血杆菌混合感染分离菌株

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GP5△84-119稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

GP5△84-119稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王晓红宋林林李亮亮袁传奇姜博周恩民穆杨西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西省科学观测实验站

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）,俗称蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）引起的接触性传染病,以妊娠母猪流产、死产、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍和各年龄阶段猪的呼吸道症状、哺乳仔猪的高死亡率、免疫抑制和持续性感染等为主要特征。由于PRRSV的嗜巨噬细胞性、抗体依赖性增强作用（ADE）和持续性感染等特征,目前对该病的致病机制和免疫机理都不完全清楚,对PRRS也无确实有效的防制措施。ORF5编码的GP5是一种糖基化囊膜蛋白,是PRRSV最主要的结构蛋白,在病毒的组装、入侵和诱导机体产生免疫应答方面发挥着重要作用。GP5分子质量约25ku,具有高度变异性,美洲型毒株和欧洲型毒株的GP5分别由200和201个氨基酸残基组成。成熟的GP5由氨基端信号肽（1-31aa）、胞外区、三次跨膜的疏水区和位于胞质中的亲水性羧基端组成。三次跨膜的疏水区在病毒囊膜上形成两个胞外区,美洲型毒株位于第一胞外区的氨基端的44和51位（在LV是46和53位）的糖基化位点在不同毒株间高度保守。在LV毒株,46位天冬酰胺（Asn）的糖基化对病毒的组装和感染性是绝对必须的,但Asn 53的糖基化似乎并不重要。有关第二胞外区与病毒复制的关系,目前还未见相关报道。本研究利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84-119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPB-GP5),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,获得了稳定表达GP5的Marc-145细胞系。经RT-PCR、Western blot和激光共聚焦显微镜分析,GP5在Marc-145细胞中获得稳定表达,并将此细胞命名为Marc-145-GP5;利用cck-8试剂盒对该细胞的增殖测定证实,Gp5的表达不影响细胞的增殖。用PRRSV SD16株感染Marc-145-GP5细胞,通过病毒基因拷贝数和病毒滴度检测发现,GP5表达可以抑制PRRSV复制;进一步采用Real-time PCR和ELISA检测病毒感染前后细胞IFN-α、β、γ的表达情况,发现GP5表达通过上调IFN特别是IFN-β的表达抑制病毒复制。表明GP5第二胞外区对PRRSV的复制可以发挥调控作用。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5△84-119 稳定表达复制干扰素

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中山病病毒广西分离株的分离鉴定及基因组序列分析

中山病病毒广西分离株的分离鉴定及基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王芳吴健敏林俊曹颖颖覃绍敏于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队广西兽医研究所

繁殖障碍性疾病是影响牛羊养殖业发展的重要传染病,其病因复杂众多,虫媒病毒是一类重要的病原。虫媒病毒经由媒介昆虫传播,可以感染多种动物和人类,对畜牧业生产和人类健康构成严重的威胁,同时导致动物的出口贸易受到限制。引起牛羊繁... 详细信息

繁殖障碍性疾病是影响牛羊养殖业发展的重要传染病,其病因复杂众多,虫媒病毒是一类重要的病原。虫媒病毒经由媒介昆虫传播,可以感染多种动物和人类,对畜牧业生产和人类健康构成严重的威胁,同时导致动物的出口贸易受到限制。引起牛羊繁殖障碍的虫媒病毒病主要有阿卡斑病、中山病和茨城病。中山病(Chuzan disease)又称牛异常分娩病,是由中山病病毒(Chuzan virus,CHUV)引起的牛异常分娩病毒性传染病。CHUV是呼肠孤病毒科环状病毒属Palyam病毒群的成员。成年牛呈隐性感染,不表现任何临诊症状。妊娠母牛受到感染后,产出积水性无脑和脑发育不良的犊牛。主要临床表现为流产、早产、死产或畸形产。异常分娩的犊牛少数病例出现头顶部稍微突起,但体形和关节不见异常,多数表现为哺乳能力丧失(人工帮助也能吸孔)、失明和神经症状。该病是OIE于20世纪90年代规定的B类传染病,主要分布在日本、韩国和澳大利亚。在我国,这是中山病病毒的分离鉴定的首次报告。根据虫媒分布特点,虫媒病毒病的流行具有一定的周期性和地方流行性。因此,为了解我国虫媒病毒病流行情况,我们在广西马山县设立监控点,筛选血清学阴性的5只羊和10头牛建立哨兵动物群,每周采集全血、抗凝血并收集虫媒。对抗凝血样品进行病毒分离,目前已经分离获得蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、流行性出血热病毒(epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)和CHUV。其中CHUV病毒是我国首次获得分离,将其命名为GX871。对GX871株进行全基因组序列测定,结果显示,基因组全长18915bp,分10个节段:S1(3930bp)、S2(3055bp)、S3(2774bp)、S4(1967bp)、S5(1764bp)、S6(1610bp)、S7(1151bp)、S8(1059bp)和S10(728bp),分别编码VP1、VP2、VP3、VP4、NS1、VP5、VP7、NS2、VP6和NS3/NS3a蛋白。对结构蛋白VP2、VP3、VP5和VP7的进化分析显示,与日本CHUV参考毒株K-47的核苷酸同源性分别为98.1%、97.2%、96.0%、96.6%,氨基酸同源性分别为99.0%、99.9%、99.6%、100%,与已发表的日本毒株在均同一分支。与其他毒株的序列比对发现,S1基因节段有碱基缺失和插入,导致5个氨基酸移码,S5基因节段的非编码区也出现碱基缺失和插入。以上结果表明,CHUV广西分离株GX871可能来源于日本,但编码结构蛋白S1的基因和编码非结构蛋白S5的基因存在独特的变异,说明该病毒在我国已发生长时间的演化。该毒株的致病性及其毒力,有待进一步的研究。

关键词：中山病基因组序列分析分离鉴定分离株

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