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文献类型

358 篇 会议
2 篇 期刊文献

馆藏范围

360 篇 电子文献
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354 篇 农学
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主题

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机构

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20 篇 中国农业科学院上...
19 篇 江苏省农业科学院...
19 篇 军事医学科学院军...
18 篇 河南科技大学
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13 篇 吉林农业大学
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8 篇 军事医学科学院军...
8 篇 四川农业大学
8 篇 扬州大学
8 篇 山东农业大学
7 篇 中国畜牧兽医学会...
7 篇 河南省动物疫病预...
7 篇 广西大学

作者

17 篇 金宁一
14 篇 涂长春
13 篇 丁壮
12 篇 周恩民
11 篇 熊祺琰
11 篇 冯志新
11 篇 余祖华
11 篇 程相朝
11 篇 邵国青
10 篇 何雷
10 篇 赵雪丽
10 篇 吴志明
10 篇 刘茂军
10 篇 闫若潜
9 篇 王淑娟
9 篇 张春杰
9 篇 谢彩华
9 篇 李一权
9 篇 郁川
8 篇 刘光清

语言

355 篇 中文
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传染性支气管炎病毒CK/CH/JS/06Ⅱ株全基因组序列测定分析

传染性支气管炎病毒CK/CH/JS/06Ⅱ株全基因组序列测定分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：马莲代珊余丽萍季文彬韦洪晨张林张小荣吴艳涛扬州大学兽医学院

引言传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种急性、高度接触性传染性疾病,目前该病已成为养禽业中危害最大的病毒性传染病之一。由于IBV基因组较易发生变异... 详细信息

引言传染性支气管炎（infectious bronchitis,IB）是由传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种急性、高度接触性传染性疾病,目前该病已成为养禽业中危害最大的病毒性传染病之一。由于IBV基因组较易发生变异和重组,产生多种基因型和血清型,且不同血清型间只有部分交叉或完全没有交叉保护作用,导致疫苗免疫失败,为养禽业带来巨大的经济损失。因此对IBV基因组进行序列测定和分析,有助于从分子水平研究IBV基因组功能、变异机制及流行情况,以对IB进行更好地防控。本研究对从江苏省分离的一株IBV进行了全基因组序列测定和分析,旨在揭示其遗传演化规律,为进一步评估IBV潜在危害提供理论基础。材料与方法本研究毒株于2010年在江苏省分离,命名为CK/CH/JS/06Ⅱ,简称06Ⅱ。根据GenBank已公布的IBV毒株LX4（登录号:AY338732）的全基因组序列,运用Primer Premier5.0软件设计22对引物。用RT-PCR方法对06Ⅱ进行分段扩增、克隆和序列测定。同时用5'-Full RACE Kit with TAP及3'-Full RACE core Set with PrimeScript RTase试剂盒对5'末端和3'末端进行扩增。用DNAStar软件包对测序结果进行分析比对、拼接,获得全基因组序列。同时进行ORF的确定以及氨基酸序列的预测,并对各基因序列进行比对分析。结果与讨论结果显示06Ⅱ基因组全长27692kb,其中A+T含量为61.85%,基因组结构为5'UTR-1a-1b-S-3a-3b-3c/E-M-ORFX-5a-5b-N-UTR-3',具有典型的IBV病毒基因编码特征,纤突蛋白裂解位点HRRRR,为国内毒株特有的裂解位点。同源性分析比对结果表明,06Ⅱ株与参考毒株全基因组的核苷酸同源性在86.3%-96.4%之间,其中与SDIB821/2012株同源性最高,为96.4%,而与TW2575/98株以及疫苗株H120、4/91同源性均低至86.3%。06Ⅱ株基因组各序列与SDIB821/2012高度同源,其中5'UTR、1ab、3a、3b、E、M、N、3'UTR同源性在96.9%-100%之间。而5a基因与BJ株同源性最高,为87.9%,5b基因与4/91同源性最高,为99.6%。S1基因遗传进化分析发现,06Ⅱ株和国内外参考毒株形成7个进化分支,其与LX4株同源性高达96.5%。全基因组及各个基因序列的系统进化树分析显示,在所有系统进化树中06Ⅱ株与SDIB821/2012、LX4株亲缘关系最近,同属QX型,为国内近年来主要流行毒株。RDP重组分析结果显示,06Ⅱ株是SDIB821/2012和4/91的重组毒株。其中5'UTR、1ab、3a、3b、E、M、N、3'UTR基因源于SDIB821/2012,5b源于4/91。这一结果显示,该毒株是一变异毒株。本研究对CK/CH/JS/06Ⅱ分离株进行全基因组测序及分析,鉴定出该毒株与LX4型毒株,尤其是SDIB821/2012分离株具有较近的亲缘关系,表明了CK/CH/JS/06Ⅱ分离株的来源,丰富了IBV基因数据库,并为对该毒株进行分子方面的研究提供基础。

关键词：传染性支气管炎病毒 IBV 全基因组序列 CK/CH/JS/06 测定分析

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猪支原体肺炎气溶胶活疫苗的发生、检测与免疫

猪支原体肺炎气溶胶活疫苗的发生、检测与免疫

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：冯志新白昀牛青青王丽马庆红韦艳娜熊祺琰刘茂军邵国青江苏省农业科学院兽医研究所

目的创制一种气溶胶形态的猪支原体肺炎新型活疫苗及雾化免疫新方法,为实现猪支原体肺炎以及其它猪呼吸道疫病的自动、高效免疫防控提供新方法与借鉴。材料与方法以猪支原体肺炎活疫苗（168株）为研究模型,根据水力式、吹气式、离心式... 详细信息

目的创制一种气溶胶形态的猪支原体肺炎新型活疫苗及雾化免疫新方法,为实现猪支原体肺炎以及其它猪呼吸道疫病的自动、高效免疫防控提供新方法与借鉴。材料与方法以猪支原体肺炎活疫苗（168株）为研究模型,根据水力式、吹气式、离心式、超声波法等不同雾化方法与原理,设计气溶胶疫苗发生设施。对疫苗株进行荧光标记后,采用激光粒度仪与激光共聚焦显微镜对产生的气溶胶疫苗分别进行空气动力学粒径检测及形态学观察。通过比选5种不同系列,共12种疫苗稀释液配方对猪肺炎支原体168株的耐雾化能力,选择最佳雾化疫苗稀释液,保证气溶胶疫苗的有效活性。将制备成功的猪支原体肺炎气溶胶活疫苗通过雾化方式免疫7-15日龄试验猪,采用定量PCR方法动态监测免疫猪肺泡灌洗液（BALF）中疫苗株的存留时间与剂量;用ELISA方法和流式细胞仪分别检测免疫猪呼吸道局部特异性sIgA抗体分泌规律与外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+细胞数量与比值。结果与讨论根据吹气式雾化方法与原理,设计成功气液两相分离式气溶胶疫苗发生装置。产生的气溶胶疫苗平均空气动力学粒径为4.8μm,激光共聚集显微镜对疫苗气溶胶观察,选取20个视野进行统计分析,所产生的气溶胶颗粒中平均有61.32%的颗粒包含疫苗株,每个气溶胶颗粒中平均含1.68±0.87个菌体。为了保持气溶胶疫苗的活性,设计了A（去离子水溶液）、B（生理盐水溶液）、C（磷酸盐缓冲液）、D（Tris缓冲液）4种不同系列的稀释液,共12种（A1、A2、A3、A4、B1、B2、B3、B4、B5、C、D1、D2）配方,经猪肺炎支原体168株在各稀释液中的耐雾化能力测试,选择B3配方为吹气式雾化疫苗的最佳稀释液,雾化疫苗损失<0.5个滴度。将制备的气溶胶疫苗通过雾化方式免疫猪肺炎支原体阴性的健康仔猪,免疫后的第1周内BALF中疫苗株数量急剧增加,但第2周即出现较快的下降,从免疫后第14天开始至试验监测期结束（免疫后56天）,BALF中疫苗株数量稳定维持在10～30～4个拷贝/mg总蛋白。免疫后第28天,免疫猪鼻腔中特异性sIgA抗体开始转阳,并持续至监测期结束。与未免疫对照组试验猪相比,免疫猪外周血淋巴细胞中CD4+细胞比例以及CD4/CD8比值显著增加。结论利用吹气式雾化原理,成功设计了气溶胶疫苗的发生设施,并制备出具备高活力,可进入猪下呼吸道的猪支原体肺炎气溶胶活疫苗。通过雾化免疫,疫苗株可在猪下呼吸道持续定植,并显著激活机体免疫功能,在呼吸道局部产生长期稳定的特异性黏膜抗体。

关键词：猪支原体肺炎呼吸道猪肺炎支原体稀释液气溶胶颗粒

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我国牛羊疫病防控的难点、研究现状和对策

我国牛羊疫病防控的难点、研究现状和对策

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：于力常继涛王芳姜志刚周国辉王海伟杨德成中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队

本文阐述当前我国牛羊传染病防控的难点、研究的现状、存在的问题、以及应采取的对策,内容包括重大疫病、新发疫情、人畜共患病、梭菌类疾病、呼吸/消化/繁殖系统疾病。1)口蹄疫病毒的毒力明显增强,加之O型变异株的出现,如果畜群的免疫... 详细信息

本文阐述当前我国牛羊传染病防控的难点、研究的现状、存在的问题、以及应采取的对策,内容包括重大疫病、新发疫情、人畜共患病、梭菌类疾病、呼吸/消化/繁殖系统疾病。1)口蹄疫病毒的毒力明显增强,加之O型变异株的出现,如果畜群的免疫力不坚强或者无免疫力,会导致幼畜发生轻度或高度死亡,这就对疫苗的免疫效力及其免疫覆盖率提出了更高的要求;2013年以来,A型口蹄疫在猪群中流行,不但给A型非免疫的猪群带来严重的危害,非典型感染的A型病毒潜伏在猪群中也成为牛群的持久威胁。2)新发疫情是危害我国牛羊养殖业发展的大敌,需要实时应对、即时研究、及时献策,才能化解危机:荚膜A型巴氏杆菌引起的牛纤维素性化脓性肺炎,是2008年以来对我国养牛业尤其是肉牛业危害最大的传染病,尽快将疫苗推向市场是当务之急;牛leachii支原体病主要通过污染的精液传播,用污染精液繁育的所有新生犊牛发生死亡或被淘汰,一旦发生损失巨大,有效的预防办法是检测精液控制传染源;小反刍兽疫是对养羊业危害最大的疾病,2013年传入我国大部分地区,因及时引进并使用高效的减毒活疫苗得到有效控制,未来的清除计划要求建立该减毒疫苗株与野毒株的鉴别诊断方法;2014年以来,我国许多省和周边国家发生羊痘疫情,是山羊痘减毒活疫苗的效力出现了问题还是流行毒株发生了变化,有待证实。3)牛羊来源人畜共患病的主要难题是牛羊布病和牛结核,关系到人畜健康和食品安全:近年来我国人畜的布病和结核感染呈现明显的上升趋势,已引起广泛的关注,我国和世界上控制和消灭这两种疾病的有效经验是检疫和淘汰;由于我国一些地区牛羊群的布病感染率高,采用检疫淘汰方法难以奏效,因此国家制定政策允许使用布病疫苗;存在的问题是,我国现有疫苗株均残存毒力,而且与野毒株感染的鉴别诊断也缺乏有效性,从免疫预防考虑引进更加安全有效的布病疫苗株是当前的迫切问题;实施检疫淘汰策略的关键是补贴额到位和严格执法,检疫方法的提升可缩短清群计划的时间。4)梭菌类疾病,包括牛羊肠毒血症、羔羊痢疾、羊快疫、羊猝狙、羊黑疫,是由梭状芽孢杆菌属的细菌引起的以毒血症为特征的一类传染病,发病急死亡率高、对牛羊危害严重,当前问题是疫苗的效力和质量需要改进。5)呼吸系统疾病,指牛羊呼吸道病综合征(RDC),牛RDC由BRSV、IBRV、BPIV3和几种继发性细菌感染引起,羊RDC的病原尚不明确。6)消化系统疾病,主要指G6/G10轮状病毒引起的犊牛和羔羊腹泻,已完成G6/G10基因重配二价减毒疫苗的研究,急需产业化并投放市场;犊牛腹泻的另两类主要病原是产毒素性大肠杆菌和冠状病毒,前者用抗生素可有效控制,后者对环境因素高度敏感、不常发生。7)繁殖系统疾病,指引起牛羊流产的传染病,近年来呈明显上升的趋势;除布病外,其他可能的病因包括IBRV、BVDV、几种虫媒病毒(阿卡斑病毒、中山病病毒和茨城病病毒),这些病原在我国流行广泛,与牛羊流产的因果关系尚待确定。8)未来的威胁:国外发生的疯牛病、痒病、蓝舌病8型和施马伦贝格病,一旦传入将对我国牛羊产业造成严重的损失,需严加防范并做好储备性研究。

关键词：传染病野毒株鉴别诊断疫病防控疫苗株人畜共患病现状和对策

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鸽新城疫病毒分离鉴定及实验感染鸽的排毒监测

鸽新城疫病毒分离鉴定及实验感染鸽的排毒监测

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张清水李占鸿马富梅李冰心杨秀环苏敬良中国农业大学动物医学院北京动物疫病控制中心

前言鸽新城疫是由1型禽副粘病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病。该病发病急、传播快、死亡率高,给养鸽业造成了极大的危害。本实验室从北京地区发病的商品肉鸽中分离到1株新城疫病毒并对其全基因组序列进行分析,实验感染雏鸽表现... 详细信息

前言鸽新城疫是由1型禽副粘病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病。该病发病急、传播快、死亡率高,给养鸽业造成了极大的危害。本实验室从北京地区发病的商品肉鸽中分离到1株新城疫病毒并对其全基因组序列进行分析,实验感染雏鸽表现出极高的致病性,并通过口咽和泄殖腔持续排毒,引发同居感染。材料和方法病毒分离采集发病鸽肝脏和脑组织,研磨制成20%悬液并用220nm孔径滤膜过滤除菌,接种3枚9日龄SPF鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液进行血凝和血凝抑制实验,鉴定为新城疫病毒后,参照已发表的序列合成引物。利用RT-PCR扩增病毒基因组并进行序列测定和比对分析。雏鸽感染及排毒监测通过滴鼻途径感染鸽子,同时放入未攻毒鸽子作为对照,分别于感染后第2天、4天、6天、8天和10天用灭菌棉拭子采集鸽子咽拭子和泄殖腔拭子,拭子处理后取上清感染鸡胚成纤维细胞(CEF),72h后取CEF细胞上清液进行红细胞凝集实验,通过凝集实验结果确定拭子中病毒有无,同时观察鸽子的发病及死亡情况。采集发病鸽血液,利用血凝抑制试验检测鸽血清中的抗体水平。结果与讨论分离的鸽源新城疫病毒BJ2014株全基因组长度15192nt,属Ⅵ基因型,F蛋白裂解位点符合强毒特征。本实验感染鸽子30只(实验组),未感染同居鸽(对照组)6只。鸽子攻毒2天后即可检测到鸽子排毒,其中实验组咽拭子检出率为57%,泄殖腔拭子的检出率为13%。4天后实验组咽拭子的病毒检出率为100%,泄殖腔拭子的病毒检出率为40%。6天后实验组咽拭子病毒检出率依然为100%,泄殖腔拭子检出率为76%,8天后实验组咽拭子病毒检出率为100%,泄殖腔拭子检出率为88%。对照组于6天时在咽拭子和泄殖腔拭子中检测到病毒。攻毒实验组在攻毒后的第3、4天有几只出现轻微症状,第5天绝大部分攻毒组鸽子出现头颈震颤、翅下垂等神经症状。攻毒后第7天有6只出现死亡,攻毒后第11天,实验组鸽子死亡率达90%。对照组鸽子7、8天时出现神经症状,至11天死亡3只,死亡率为50%,观察至13天,剩余鸽子均未死亡。发病鸽采集血清中的抗体血凝抑制效价较低。通过咽拭子和泄殖腔拭子中病毒的测定可以发现鸽感染新城疫病毒后,第2天就开始排毒,前期病毒排出主要通过口腔、呼吸道途径,消化道途径排毒量较少。感染后期病毒通过消化道途径排出量增加。强毒感染后,第三天即可导致鸽子发病,攻毒11天后的致死率达90%。结论鸽新城疫病毒BJ2014分离株为基因Ⅵ型,实验感染雏鸽48h即开始排毒,开始主要通过口咽排毒,后期口咽和和消化道均排毒。该毒株对雏鸽具有高度的致死性和接触传染性。

关键词：咽拭子检出率鸽新城疫病毒分离鉴定新城疫病毒实验感染

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吉林省某猪场爆发猪葡萄球菌引起的化脓性肺炎

吉林省某猪场爆发猪葡萄球菌引起的化脓性肺炎

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王明月郭昌明鲁海冰邢泽黎朱利塞盖小春王芳王新平吉林大学动物医学学院

前言猪葡萄球菌(***)与金黄色葡萄球菌(***)同属葡萄球菌科葡萄球菌属中的成员。它们是一类最为常见和重要的条件性致病微生物,也是引起人类和动物共患传染病的病原体。据报道,猪葡萄球菌可以引起猪渗出性皮炎,马与鸡关节炎、牛乳腺炎... 详细信息

前言猪葡萄球菌(***)与金黄色葡萄球菌(***)同属葡萄球菌科葡萄球菌属中的成员。它们是一类最为常见和重要的条件性致病微生物,也是引起人类和动物共患传染病的病原体。据报道,猪葡萄球菌可以引起猪渗出性皮炎,马与鸡关节炎、牛乳腺炎。此外与猪群接触的人类可以出现菌血症、败血症和多器官功能衰竭。2015年3月份,吉林省某猪场爆发了一种临床上以呼吸困难、发绀、腹泻为主要特征的疫病,剖检病理变化主要表现化脓性肺炎和纤维素性胸膜肺炎和腹膜炎,发病猪一般10-15天死亡。我们从送检病猪体内的实质器官和血液中分离出一种革兰氏阳性葡萄球菌,经过培养及生化实验等初步鉴定后,进行16SrRNA和L36基因片段的扩增和测序。测序结果发现,扩增出的基因片段的序列与猪葡萄球菌核苷酸序列的同源性达96%-100%,表明所分离的菌株为猪葡萄球菌,并将其命名为JLHN15。材料和方法无菌采取病猪的心包积液、血液、肝脏、脾脏和肺脏,接种含有5%血清和5%血液的琼脂平板,进行分离培养。然后对分离培养出的细菌进行革兰氏染色镜检和生化特性、药敏试验、凝固酶试验和动物接种试验,确定细菌的生化特性和致病性。同时应用PCR扩增细菌基因组序列,测定和分析确定细菌的种类。结果与讨论病料直接涂片及染色,镜下可见菌体呈蓝紫色,大小均匀,不规则排列呈葡萄串样或成双排列;无菌采取病料接种固体培养基出现圆形、不透明、湿润、表面光滑、边缘整齐的菌落。血液琼脂平板培养无溶血现象;凝固酶试验发现试管内容物完全凝固,试管倒置或倾斜时不流动,结果为阳性。生化特性鉴定发现,分离菌株对还原硝酸盐、精氨酸、麦芽糖、蔗糖为阳性;对鸟氨酸、葡萄糖、尿素、ONPG、木糖、赖氨酸、硫化氢为阴性。药敏实验发现,JLHN15对先锋霉素、氟哌酸、美福仙、头孢肤肟、复方新诺明为高度敏感;罗红霉素、苯唑青霉素、新霉素、万古霉素等中度敏感;卡那霉素、多粘霉素B等不敏感。小鼠接种试验发现JLHN15对小鼠具有明显的致病性,接种小鼠于48小时内均发生死亡。剖检可见肺脏有充血水肿,心包积液。肝脏和脾脏有出血点和大量纤维素沉着。PCR扩增、序列测定和分析发现扩增片段核苷酸序列与猪葡萄球菌的同源性最高,可达96%-100%,表明分离的细菌菌株为猪葡萄球菌。金黄色葡萄球菌引起动物的化脓性肺炎和败血症的报道非常多见,而由猪葡萄球菌引起化脓性肺炎和败血症的报道非常罕见,本研究为首次报道。结论病料涂片、镜检,分离培养,生化鉴定、PCR等结果表明引起爆发化脓性肺炎和败血症的病原体为猪葡萄球菌;JLHN15对先锋霉素、丙氟哌酸、氟哌酸、头孢肤肟等非常敏感;对青霉素、罗红霉素、四环素、氯霉素等中度敏感;而对多粘霉素B及卡那霉素具有耐药;小鼠感染实验和凝固酶试验结果表明JLHN15为病原性猪葡萄球菌,临床上应与金黄色葡萄球菌引起的类似疾病进行鉴别诊断。

关键词：猪葡萄球菌核苷酸序列同源性化脓性肺炎吉林省

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重组高产欧亚禽源H1N1亚型猪流感疫苗株的构建与保护效力评价

重组高产欧亚禽源H1N1亚型猪流感疫苗株的构建与保护效力评价

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：阮宝阳王林宫晓倩汪秀会刘晓敏汪琪张鹏李泽君童光志于海中国农业科学院上海兽医研究所山东农业大学动物科技学院

引言猪流感（Swine influenza,SI）是引起猪急性,高度传染性的一类呼吸系统性疾病,不仅给养猪业带来巨大损失,而且危害人类健康。从我国商品猪体内分离得到H1N1亚型SIV主要是古典猪源H1N1亚型和欧亚禽源H1N1亚型SIV。本研究利用反向遗... 详细信息

引言猪流感（Swine influenza,SI）是引起猪急性,高度传染性的一类呼吸系统性疾病,不仅给养猪业带来巨大损失,而且危害人类健康。从我国商品猪体内分离得到H1N1亚型SIV主要是古典猪源H1N1亚型和欧亚禽源H1N1亚型SIV。本研究利用反向遗传操作技术,以高产且传代致弱A/Puerto/8/34（H1N1）(简称PR8)的6个内部基因片段（PB2、PB1、PA、NP、M和NS）为骨架,结合近年来国内流行的欧亚禽源H1N1毒株表面抗原基因HA和NA,构建重组欧亚禽源H1N1亚型猪流感疫苗株,为防控猪流感提供有效技术支持和产品储备。材料与方法以欧亚禽源H1N1亚型SIV分离株A/swine/Shanghai/1/2014（H1N1）(简称SHl)为材料,提取病毒RNA,反转录合成cDNA,通过RT-PCR扩增HA和NA基因,电泳鉴定,回收产物。将HA和NA基因和PBD载体经酶切、连接,转化和涂板,挑单克隆菌落在LB培养基增殖,菌液PCR鉴定筛选出阳性克隆并送去测序验证。将测序正确的共8质粒转染293T细胞,经过48h后,收集上清并接种MDCK细胞,细胞出现明显病变后收集病毒液并进行HA检测。将两种病毒按照相同剂量接种MDCK细胞,在不同时间点收集细胞上清,检测病毒HA效价;在MDCK细胞上进行病毒蚀斑检测,龙胆紫染色,观察蚀斑形态大小。甲醛灭活,佐剂乳化;肌注免疫小鼠1免和2免,首免后每隔7d收集血清;2免14天后以10～5TCID的剂量感染小鼠。RDE处理血清,进行HI实验;在MDCK细胞上进行中和实验:攻毒后14内每天称重小鼠。结果与讨论通过测序验证和HA检测验证,表明重组病毒拯救成功。以0.001MOI病毒量接种MDCK细胞60h后,SH/PR8血凝效价最大达到2～9,相比较SH1为2～7具有更高的病毒滴度:重组病毒SH/PR8在MDCK细胞上形成的病毒蚀斑形态更大。小鼠在二免后第2周,血凝抑制（HI）抗体和中和抗体效价达到最高,分别为2～9和10～3以上。攻毒后免疫组小鼠体重围绕正常体重上下波动,没有出现死亡现象,而没有免疫组攻毒后小鼠体重持续下降,6天后出现100%死亡。总之,病毒在MDCK细胞上的生长曲线和蚀斑实验表明,SH/PR8在MDCK细胞上相对于SH1具有更高的复制能力。制备的灭活疫苗免疫小鼠,通过检测HI和中和抗体效价,结果表明免疫组可以诱导机体产生高水平的抗体。攻毒后,小鼠的体重变化和死亡率结果显示,免疫组可以提供很好的免疫保护。结论重组病毒SH/PR8相比较原始毒株SH1具有更高的病毒复制能力;乳化免疫小鼠能够获得较高的抗体效价,攻毒后,免疫组能提供好的保护效。

关键词：小鼠体重中和抗体效价效力评价疫苗株猪流感

来源：评论

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果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株感染细胞嗜性分析

果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株感染细胞嗜性分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李志杰田进仇铮刘春国刘大飞刘培欣张晓战胡晓亮曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自然疫源性人兽共患病团队

哺乳动物呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus,MRV）隶属于呼肠孤病毒科（Reoviridea）正呼肠孤病毒属,该病毒宿主范围非常广泛,包括人、鼠、猫、犬、猪、牛、果子狸及蝙蝠等多种动物,甚至也在河水、贮存水及污水等中被发现。实际上,... 详细信息

哺乳动物呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus,MRV）隶属于呼肠孤病毒科（Reoviridea）正呼肠孤病毒属,该病毒宿主范围非常广泛,包括人、鼠、猫、犬、猪、牛、果子狸及蝙蝠等多种动物,甚至也在河水、贮存水及污水等中被发现。实际上,几乎可以从所有哺乳动物的体内检测到呼肠孤病毒的抗体。虽然该病毒与疾病的确切关系尚未最后确定,但是MRV可引起鼠和灵长类呼吸系统、消化系统和神经系统疾病,还可引起人的呼吸道和肠道疾病。对SARS病原的相关研究发现SARS的发生可能与呼肠孤病毒的同时感染有关。由于MRV明显缺乏种间屏障,所以存在由动物传播给人类的潜在可能性。呼肠病毒的复制是在细胞质中进行的,病毒以双链RNA为模板通过保留性复制产生大量的正链RNA,这些正链RNA既可作为以后的mRNA,又可作为病毒基因组中负链RNA合成的模板。呼肠孤病毒的复制过程包括:吸附、穿入、脱壳、转录、翻译、装配和释放。脱壳过程决定着病毒是否能够感染宿主细胞,因此在呼肠病毒的生命周期中,这一步骤对于病毒的增殖具有重要的作用。本研究以果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株为研究对象,测定病毒滴度,按照0.1 MOI剂量接种细胞（Vero-E6、Vero、CRFK、MDBK、F81、INH3T3、DF1、PK15、RK13）,于感染不同时间段（12h、24h、36h、48h、60h、72h）观察细胞病变情况及收集感染细胞样品。提取感染细胞样品的RNA,采用已建立的荧光定量PCR方法检测病毒在不同细胞系、不同时间段病毒复制能力,从而分析病毒细胞嗜性。结果证明:细胞增殖的病毒滴度测定,结果显示病毒的TCID为100μl 10稀释的病毒液;采用感染72h细胞进行超薄切片电镜观察,感染细胞的胞浆内可以看到病毒粒子呈结晶状排列;显微镜观察和定量PCR检测均显示果子狸源呼肠孤病毒MPC/04株对不同来源细胞感染力存在不同程度的差异,对哺乳动物源细胞普遍具有感染力,但也存在增殖能力差异,对鸡源细胞系（DF1）几乎无感染力。哺乳动物呼肠孤病毒具有广泛的致病性,细胞和组织感染机制也十分复杂。呼肠病毒能够使细胞停止于生长周期的G1期和G2/M期,不同类型的呼肠病毒诱导细胞生长周期停止的能力不同。呼肠病毒的致病机制可能与其能诱导细胞凋亡有关,在体外呼肠病毒能够诱导多种细胞系的凋亡,并能导致小鼠模型出现脑炎和心肌炎。体外培养细胞感染呼肠病毒以及体内感染呼肠病毒后,凋亡细胞在诱导细胞病变效应和诱导组织损伤方面均发挥着重要的作用。呼肠病毒在不同的组织和细胞中诱导凋亡的途径是不同的。在体内,病毒感染的部位及组织损伤与凋亡的出现明显相关,这说明凋亡在触发宿主发病的过程中具有重要的作用。病毒感染中使用不同的受体决定着呼肠孤病毒的不同细胞嗜性,不同的细胞嗜性又决定着它的感染、传播及致病进程。了解呼肠孤病毒的细胞嗜性,对预防呼肠孤病毒由动物感染人、分析感染宿主范围及为今后治疗、诊断、疫苗的研究都具有重要的意义。

关键词：呼肠孤病毒哺乳动物细胞嗜性 MPC/04 果子狸

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Toll样受体7激动剂T7在PRRSV感染PAMs中的抗病毒作用

Toll样受体7激动剂T7在PRRSV感染PAMs中的抗病毒作用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：杜永坤杜涛峰刁昱文靳广毅周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站大连医科大学高等医学研究院

目的Toll样受体（TLRs）在宿主抵抗病原入侵的天然免疫应答中扮演着重要的角色。其中处于胞内体的TLRs,如TLR3,TLR7/8和TLR9的激活可以通过促进抗病毒因子的产生（如干扰素）而参与机体的抗病毒应答。TLRs激动剂能够激活TLRs信号通路起... 详细信息

目的Toll样受体（TLRs）在宿主抵抗病原入侵的天然免疫应答中扮演着重要的角色。其中处于胞内体的TLRs,如TLR3,TLR7/8和TLR9的激活可以通过促进抗病毒因子的产生（如干扰素）而参与机体的抗病毒应答。TLRs激动剂能够激活TLRs信号通路起始机体的天然免疫应答作为机体抗病毒的第一道重要防线。猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是引起猪繁殖与呼吸障碍综合症（PRRS）的病原体,它是一种单股正链RNA病毒,能引起严重的母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸障碍。PRRSV感染猪体能够引起微弱的免疫应答,但这不足以机体清除病毒,同时PRRSV诱导机体产生大量的IL-10等免疫抑制因子,负调控机体的天然免疫应答与适应性免疫应答,从而得以在猪体内持续性感染。目前针对PRRS的防控措施都不能给猪体提供百分之百的持续性保护作用。猪肺泡巨噬细胞（PAM）是PRRSV在机体内的主要靶细胞,常被体外分离用于病毒的增殖和感染机制的研究。研究报道,TLR7的激动剂imiquimod等可以激活NF-κB,诱导IL-1β、IL-12等多种细胞因子的产生。PAM上表达有具有生物学功能的TLR7。我们的前期研究发现,TLR7的激动剂T7能够显著诱导小鼠PBMC产生IFN-γ和IL-12。本研究的目的就是评价T7在PRRSV感染PAMs中的抗病毒作用。材料方法从4周龄的健康仔猪肺脏中分离PAMs体外培养。用不同浓度的T7（0,1,10,100μg/mL）孵育PAMs后,接种0.01MOI高致病性PRRSV毒株SD16,分别于12h、24h和36h收集细胞上清及细胞,用于IFA、Westem Blot、qPCR及TCID测定。结果与讨论蛋白水平（N蛋白）和基因水平（ORF7基因）的检测结果表明T7刺激PAMs后接种病毒,能够显著抑制SD16在PAMs中的复制,并且这种抑制作用呈现浓度梯度依赖性。细胞上清中子代病毒的TCID测定结果与前边结果一致,T7呈现浓度梯度性抑制子代病毒的产生。进一步研究发现,细胞中磷酸化的NF-κB p65水平随着T7浓度的升高而升高,证明T7激活了细胞中的NF-κB信号通路。另外,通过qPCR检测发现,T7刺激PAMs后能够显著诱导IFN-γ和IL-12的mRNA的水平,同时IFIT1和ISG15的mRNA水平也显著升高,并且这些基因mRNA水平的升高以及对SD16的抑制作用能够被NF-κB的抑制剂BAY 11-7082以及TLR7的抑制剂Chlorquine所反转,说明NF-κB在T7抑制SD16的感染过程中发挥关键作用。结论 TLR7激动剂T7能够以浓度梯度依赖的方式抑制PRRSV感染PAMs,这种抑制作用可能是通过激活NF-κB诱导IFN-γ和IL-12,进而诱导抗病毒因子IFIT1和ISG15等而实现的。进一步的抗病毒机制以及猪体动物实验的体内抗病毒作用需要进一步的研究。

关键词： PRRSV 激动剂抗病毒作用样受体

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白在鸡体内最佳使用剂量研究

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白在鸡体内最佳使用剂量研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王东方闫若潜吴志明刘梅芬赵雪丽谢彩华王淑娟马震原李勤楠河南省动物疫病预防与控制中心河南科技大学动物科技学院

引言α干扰素（Interferon-α,IFN-α）具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性,可增强机体细胞免疫应答水平。白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可以提高机体的细胞和体液免疫应答水平,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。将I... 详细信息

引言α干扰素（Interferon-α,IFN-α）具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性,可增强机体细胞免疫应答水平。白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可以提高机体的细胞和体液免疫应答水平,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。将IFN-β和IL-2联合应用可发挥协同抗病毒和免疫增强作用。课题前期研究证明表达成功的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2重组融合蛋白（rChIFN-a-Linker-ChIL-2）在体外具有显著的协同生物学活性。本研究在前期研究的基础上开展重组融合蛋白在鸡体内抗传染性法氏囊病毒（IBDV）的最佳使用剂量研究。通过检测攻毒前后外周血带毒时间、外周血中细胞因子的表达水平及外周血中淋巴细胞亚群等指标的差异以揭示重组融合蛋白在鸡体内抗病毒和免疫增强作用的机理,并筛选重组融合蛋白在鸡体内发挥最佳抗病毒活性的最适剂量。材料与方法重组融合蛋白、重组鸡α干扰素蛋白（rChIFN-α）、IBDV由河南省动物疫病预防控制中心研究和保存;30日龄SPF鸡由乾元浩郑州生物药厂提供;流式细胞仪（FACS CaIibur）为美国BD公司产品。将IBDV LX强毒株人工感染37日龄SPF鸡,同时分别选取在CEF细胞上抗VSV活性单位为200IU、1000IU、3000IU、5000IU的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白采用注射方式进行鸡体内活性比较实验;并观察试验鸡临床症状,检测攻毒前、后（dpc）不同时间鸡体的排毒率、IBDV在不同组织器官的动态分布、外周血带毒时间、外周血中ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α、ChIFN-γ细胞因子的表达水平,鸡PBLC和脾脏淋巴细胞的增殖活性及外周血中淋巴细胞亚群等指标。结果与讨论结果表明,不同剂量的重组融合蛋白在鸡体的抗病毒活性存在差异。注射后不同时间,3000IU重组融合蛋白试验组IBD典型症状持续时间、病死率、排毒率、各组织器官带毒率、外周血持续带毒率（28h、20%、22.2%、16.7%、23.5%）等指标均显著低于其他剂量的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白对照组;ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChiFN-α、ChIFN-γ五种细胞因子的表达水平均显著高于其他组;12 dpc时,不同实验组鸡的外周血T淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖活性达到峰值,且3000IU重组融合蛋白实验组鸡的OD490值（0.2654、0.3406）均显著高于其他实验组鸡（p<0.05）;12 dpc5 dpc期间,不同剂量的攻毒实验组鸡的CD4+/CD8+比值均显著低于相同剂量的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白对照组,其中3000IU的重组融合蛋白攻毒组鸡的CD4+/CD8+比值显著高于其他剂量的攻毒实验组鸡和所有rChIFN-β蛋白对照攻毒实验组。以上各项检测指标表明,重组融合蛋白体内、外抗病毒和免疫增强活性均高于rChIFN-α蛋白对照,且3000IU的重组融合蛋白在鸡体内具有最佳的抗病毒和免疫增强活性。重组融合蛋白在鸡体内以提高外周血中CD3+CD4+细胞的含量,降低CD3+CD8+细胞的含量,使CD4+/CD8+比值大幅升高来增强机体细胞免疫能力。

关键词：鸡α干扰素 IFN 不同剂量重组融合蛋白使用剂量白细胞介素

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兔出血症病毒基因组克隆与病毒抗原性相关遗传变异分析

兔出血症病毒基因组克隆与病毒抗原性相关遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：肖跃强刘吉山魏凤杨慧沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司

引言兔病毒性出血症病毒(RHDV)基因组ORF1、ORF2分别编码257kD多聚蛋白、次要结构蛋白VP10,多聚蛋白裂解为p16、p23/p26、p37、p29、p13/p14、p15与p58等非结构蛋白与病毒主要结构蛋白-VP60。VP60变异性是病毒基因型分类的依据。目前该... 详细信息

引言兔病毒性出血症病毒(RHDV)基因组ORF1、ORF2分别编码257kD多聚蛋白、次要结构蛋白VP10,多聚蛋白裂解为p16、p23/p26、p37、p29、p13/p14、p15与p58等非结构蛋白与病毒主要结构蛋白-VP60。VP60变异性是病毒基因型分类的依据。目前该病毒被分为"原始"毒株与变异毒株。国外学者等认为变异株构成一种新亚型PHDVa,1985年在我国流行毒株NJ株就属于RHDVa亚型。本研究对先前分离的SQ-1变异群毒株进行了时空遗传演变分析。材料与方法根据已发表序列设计引物并克隆RHDV SQ-1株病毒基因组序列,测序后应用DNAstar软件对所测得序列与GenBank已发表29株病毒株基因组非结构与结构蛋白序列进行比较,分析其遗传变异特性。结果与讨论(1)非结构蛋白分析:非结构蛋白p16、p23/p26、p37、p29、p13/p14、p15与p58与其它株病毒核苷酸序列同源性分别在85.5%-96.5%、86.9%-96.6%、86.3%-96.0%、86.1%-95.8%、85.4%-94.4%、86.7%-97.4%与85.7%-96.6%之间,除p13/p14(VPg)外,其余蛋白均与NJ2009株同源性最高,与CB194-Pt同源性最低。p13/p14与NJ2009株、Triptis、WHNRN毒株的同源性最高,与Bahrain同源性最低。(2)结构蛋白序列分析:VP60蛋白测序结果表明,SQ-1与国内流行毒株核苷酸序列同源性最高为97.4%(NJ/China/1985),氨基酸序列最高99.5%(YL/2006株、whn-03株);与国外俄罗斯Manihino-09核苷酸序列同源性最高,为98.0%,高于我国已经公布所有毒株,与95-05、Erfurt、Iowa2000氨基酸序列同源性最高,均为99.3%。而且分离时间差异较大,Manihino-09系2009年报道,whn-03与YL/2006分是2005年、2006年国内流行毒株,而SQ-1株系2011年分离。表明,SQ-1进化来源可能相对复杂,与地域分布、流行时间没有明显的相关性。根据分离时间排列比较,对国内外41株RHDVa群病毒进行了遗传变异趋势分析,发现随着时间推移,出现了304、305、414、425与432氨基酸位点逐渐演变,而且变异的频次越来越高,同时,也出现13、237、299、309、324、346、348与351等7个氨基酸位点仅在近期流行毒株开始出现变异,预示着RHDVa病毒未来可能发生的遗传进化趋势。将RHDVa病毒株与原始群19株病毒VP60蛋白氨基酸位点遗传演变进行了分析,两个群体存存在12个氨基酸位点的完全变异;原始群病毒在RHDVa毒株存在7、207、219、365与480氨基酸残基交互变异位点,可见这些位点一直是两群体毒株不断发生进化与回复变异。讨论本研究克隆了病毒株SQ-1基因组,将非结构蛋白、结构蛋白基因与已公布毒株基因组序列进行了序列比对分析,发现基于非结构蛋白基因的基因型分类高度一致.而且与VP60蛋白序列基因型分类的结果相似,进而说明毒株序列在遗传进化过程中突变具有方向一致性,因此,笔者认为以非结构蛋白为目的基因,也可作为判定毒株分类的一个重要依据。

关键词：结构蛋白兔出血症病毒变异分析基因组克隆抗原性

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