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作者

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11 篇 邵国青
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10 篇 赵雪丽
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10 篇 闫若潜
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9 篇 李一权
9 篇 郁川
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排序：

脂筏在猪瘟病毒感染中的作用

脂筏在猪瘟病毒感染中的作用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：曹永国涂长春军事医学科学院军事兽医研究所吉林大学动物医学学院

引言/目的脂筏是细胞膜上富含鞘脂和胆固醇的微区结构,广泛分布于细胞的膜系统。研究表明,很多病毒可以利用细胞膜表面的脂筏结构介导其侵入宿主细胞,一些病毒可以借助脂筏结构完成病毒颗粒的组装和出芽。本论文旨在探讨CSFV的复制与宿... 详细信息

引言/目的脂筏是细胞膜上富含鞘脂和胆固醇的微区结构,广泛分布于细胞的膜系统。研究表明,很多病毒可以利用细胞膜表面的脂筏结构介导其侵入宿主细胞,一些病毒可以借助脂筏结构完成病毒颗粒的组装和出芽。本论文旨在探讨CSFV的复制与宿主细胞脂筏的结构完整性的关系,研究CSFV与宿主细胞脂筏的相互作用。深入研究脂筏在CSFV感染中的作用,将有助于对病毒与宿主细胞的相互作用的理解,从而可能发现新的、有效的对抗CSFV的方法。材料与方法选择不同浓度的MβCD,分别作用于PK15细胞,EC细胞和ST细胞,看其对CSFV复制的影响;采用碘克沙醇密度梯度提取和纯化细胞的脂筏,并通过western blot的方法,对其进行验证;进一步通过比较蛋白质组学的方法,对比分析了无CSFV感染组与CSFV感染组所提取的脂筏成分的差异;采用生物信息学的方法对其进行了分析,并进一步通过qPCR和western blot的方法对其结果进行了验证。结果与讨论1,选择无细胞毒性浓度的MβCD,作用宿主细胞以去除细胞膜上的胆固醇,可以破坏脂筏的完整性,且不同浓度的MβCD对CSFV复制的抑制作用具有明显的剂量依赖性,且与mock组相比,差异显著(P<0.05);2,通过比较蛋白质组学的方法,筛选了大量的差异蛋白,并对其中的一些蛋白进行了进一步的验证。结果显示,CSFV的复制效率与宿主细胞的脂筏的结构和功能息息相关。

关键词：猪瘟病毒感染宿主细胞

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Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域的克隆表达及抗体的制备与纯化

Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域的克隆表达及抗体的制备与纯化

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：杜东颖崔春晓冯亚琼王冬梅郭嘉张莹莹夏平安河南农业大学牧医工程学院

目的为了验证Marc145细胞SHP-1、SHP-2的存在,克隆出Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。材料与方法应用RT-PCR技术从Marc145细胞中克隆出SHP-1、SHP-2结构域基因的cDNA序列... 详细信息

目的为了验证Marc145细胞SHP-1、SHP-2的存在,克隆出Marc145细胞SHP-1、SHP-2结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。材料与方法应用RT-PCR技术从Marc145细胞中克隆出SHP-1、SHP-2结构域基因的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-SHP-1、pET-SHP-2,转化大肠杆菌BL21,在IPTG的诱导下成功表达分子质量大小约为37.5KD、40.1KD的融合蛋白,将纯化过的融合蛋白分别免疫小鼠,制备鼠源血清,采用间接ELISA和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1:12800;Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-SHP-1、pET-SHP-2多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清得到纯度较高的鼠抗SHP-1、SHP-2抗体IgG。结果与讨论本试验验证Marc145细胞中有SHP-1、SHP-2基因的存在,并成功构建了原核表达载体,且通过Western blotting检测和SDS-PAGE电泳分析表明以本试验方法所制备的抗体具有较好的免疫原性和一定的生物学活性,且达到纯度的要求,为后续探究SHP-1、SHP-2在免疫受体介导的信号转导以及磷酸酶调节作用的研究奠定了基础。

关键词： SHP-2 重组蛋白结构域 Marc145

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猪源大肠杆菌K88感染鼠模型建立及评价

猪源大肠杆菌K88感染鼠模型建立及评价

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：齐宇王开伊淑帅潘娜苏双邵洪泽程荣华胡桂学吉林农业大学吉林省畜牧兽医科学研究院

引言仔猪大肠杆菌性腹泻是一种发病率和死亡率极高的传染病,给养猪行业带来巨大的经济损失。该病主要由产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia ***）引起。在ETEC众多血清型中,K88流行最为广泛。该病的治疗主要依赖抗生素,但... 详细信息

引言仔猪大肠杆菌性腹泻是一种发病率和死亡率极高的传染病,给养猪行业带来巨大的经济损失。该病主要由产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia ***）引起。在ETEC众多血清型中,K88流行最为广泛。该病的治疗主要依赖抗生素,但长期滥用抗生素造成病原菌耐药性的增强。抗生素疗效日渐遭受质疑,使得寻求新的治疗方法尤为重要。微生态制剂无副作用、无残留、不产生抗性,是理想的抗生素替代品,有着广泛的应用前景。为探讨微生态制剂治疗肠炎的作用机理,建立ETEC K88感染的动物肠炎模型成为了实验的前提。方法本实验分别给小鼠灌服10×10～7 cfu/mL、1.0×10～8 cfu/mL和1.0×10～9 cfu/mL浓度菌液,连续灌服3 d。观察其临床症状,记录体重变化,检测外周血中IL-1α、TNF-α以及髓过氧化物酶（MPO）的含量,并制备和观察十二指肠病理组织切片。结果灌菌后小鼠食欲下降,体重降低,外周血中IL-1α、TNF-α及MPO含量增加,十二指肠病理组织切片显示炎症发生。灌菌结束后第5 d,小鼠粪便稀软,体重降到最低,所检测的细胞因子含量达到最高,与对照组相比差异显著（P<0.05）;十二指肠肠黏膜层与肌层间隙增宽、杯状细胞增多、固有层与黏膜层炎性细胞浸润,炎症变化最为严重。此外,接种不同浓度菌液的小鼠炎性因子数量变化差异不显著（P>0.05）。结论本实验采用灌服的浓度为1.0×10～7 cfu/mL.0×10～9cfu/mLK88菌液均可成功建立肠炎模型,浓度对模型建立影响不显著。小鼠肠炎最为严重的时间为灌服ETECK88结束后后第5 d。

关键词：产肠毒素大肠杆菌细胞因子肠道组织学评分肠炎模型

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空泡形成毒素影响禽致病性大肠杆菌的生物学特性及致病性

空泡形成毒素影响禽致病性大肠杆菌的生物学特性及致病性

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：赵益超王少辉刘新杨登辉韩先干田明星丁铲刘宗平于圣青中国农业科学院上海兽医研究所扬州大学兽医学院

引言禽致病性大肠杆菌(APEC)属于肠道外致病性大肠杆菌,由其引起的鸡、火鸡及其他禽类的急、慢性传染病统称为禽大肠杆菌病,其临床症状主要包括大肠杆菌性败血症、大肠杆菌性肉芽肿等,该病同时可以造成多种器官病变,包括气囊炎、滑膜炎... 详细信息

引言禽致病性大肠杆菌(APEC)属于肠道外致病性大肠杆菌,由其引起的鸡、火鸡及其他禽类的急、慢性传染病统称为禽大肠杆菌病,其临床症状主要包括大肠杆菌性败血症、大肠杆菌性肉芽肿等,该病同时可以造成多种器官病变,包括气囊炎、滑膜炎、心包炎、全眼炎等。空泡形成毒素(Vacuolating autotransporter toxin,Vat)属于T5SS,有关报道显示该蛋白酶具有细胞毒性作用。构建禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)菌株APEC-O1空泡形成毒素Vat基因缺失株,研究该基因对APEC-O1生物学特性及致病性的影响。材料和方法菌株APEC-O1由本实验室2010年分离自安徽巢湖某养鸡场病鸡。利用Red同源重组方法构建APEC-O1的Vat缺失株;分析野生株与缺失株的生长特性、黏附与入侵DF1细胞的差异;并对该缺失株的致病性、体内感染能力、被膜形成能力、凝集沉淀等特性进行分析研究。结果与讨论Vat基因缺失不影响APEC-O1的生长特性,但生物被膜形成能力显著下降。Vat基因缺失株对细胞的黏附侵袭能力略低于野生株,而凝集沉淀则与野生株无差别;LD50测定结果表明,缺失株相比野生株致病力下降2.7倍,并且缺失株在雏鸭体内存活能力下降显著。本研究结果表明,Vat缺失影响APEC-O1运动能力、凝集沉淀能力、生物被膜形成能力及致病力,为全面了解Vat的致病作用提供参考。

关键词：禽致病性大肠杆菌野生株缺失株生物学特性空泡形成

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牛病毒性腹泻病毒感染诱导的MDBK细胞自噬有益于病毒复制

牛病毒性腹泻病毒感染诱导的MDBK细胞自噬有益于病毒复制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：周玉龙丛彦龙穆昱尹仁福丁壮吉林大学动物医学院预防兽医学系

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)能够感染牛、鹿等多种反刍兽,引起的临床症状复杂多样,给畜牧业造成巨大经济损失。BVDV可分为两个生物型:致细胞病变型(cytopathic,CP)和非致细胞病变型(noncytopathic,NCP),由其引... 详细信息

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)能够感染牛、鹿等多种反刍兽,引起的临床症状复杂多样,给畜牧业造成巨大经济损失。BVDV可分为两个生物型:致细胞病变型(cytopathic,CP)和非致细胞病变型(noncytopathic,NCP),由其引起疾病的机理比较复杂。自噬是进化上古老的通路,在机体多种基本的生理过程中起重要作用,包括免疫、存活、分化和维持机体内稳态等。自噬调节常被用于治疗和预防重要的病毒性疾病。然而,目前对于自噬与BVDV之间的相互作用仍然是不清楚的,因此,我们评价了自噬对病毒复制和宿主细胞存活的影响。通过透射电镜、激光共聚焦技术、RNA干扰技术、免疫印迹和细胞增殖试验等进行上述研究,结果实验组中自噬体双层或者单层膜结构增加,GFP-LC3绿色荧光点的增加,以及LC3B-Ⅰ到LC3B-Ⅱ的转化率增加这些结果均表明,CP型和NCP型BVDV感染均诱导了MDBK细胞的稳态自噬。通过溶酶体和自噬体阻断剂氯喹的使用导致LC3B-Ⅱ转化率及GFP-LC3数量变化证实BVDV感染诱导完全自噬。自噬抑制剂3-MA和RNA干扰减少了CP型和NCP型BVDV的复制,并且在CP型BVDV感染后,增加了宿主细胞的存活。雷帕霉素诱导的自噬增加了CP型和NCP型BVDV的复制,并且在CP型BVDV感染后,加速了宿主细胞的死亡。结论:本研究结果证实BVDV感染诱导的自噬促进了病毒的复制,抑制了MDBK细胞的体外存活。本结果也有助于进一步阐明CP型BVDV引起的黏膜病的机理和NCP型BVDV引起的持续性感染的机制。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 细胞自噬致病机理病毒复制

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转瓶培养与生物反应器微载体培养流感重组腺病毒的比较

转瓶培养与生物反应器微载体培养流感重组腺病毒的比较

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：郭海宁张萍韩继成靖杰曹亮解长占肖朋朋李一权马海彬南福龙崔卓栋鲁会军金宁一吉林农业大学动物科学技术学院军事医学科学院军事兽医研究所吉林大学动物医学学院

分别用3.5L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养HEK-293细胞,接种流感重组腺病毒,比较两种培养方式生产病毒的毒价。材料与方法:向转瓶中接种3.4×10～7个HEK-293细胞,每2d传代细胞并计数,8d后细胞数目达到2.8×10～8个,接种流感... 详细信息

分别用3.5L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养HEK-293细胞,接种流感重组腺病毒,比较两种培养方式生产病毒的毒价。材料与方法:向转瓶中接种3.4×10～7个HEK-293细胞,每2d传代细胞并计数,8d后细胞数目达到2.8×10～8个,接种流感重组腺病毒,2d后收取病毒并测定毒价。使用Cytodex-1型微载体培养HEK-293细胞,每12h取样并计数,3d后细胞数目达到8.16×10～8个,接种病毒,2d后收取病毒病并测定毒价。结果与讨论:转瓶培养3d细胞数目增加1.35倍,反应器培养3d细胞数目增加8.16倍,是转瓶的2.16倍,生物反应器培养HEK-293细胞增长速率高于转瓶培养。转瓶生产收获病毒200ml,滴度为9.28PFU/ml,反应器生产收获病毒1.2L。滴度为10.7PFU/ml,经反应器培养流感重组腺病毒增殖数量是转瓶培养的6.92倍。生物反应器微载体系统培养的流感重组腺病毒数量和滴度明显高于转瓶,初步证明了病毒的规模化的可行性,为大规模的疫苗生产提供了参考。在微载体培养系统中,细胞贴壁面积增加,培养条件可操纵性强,因此细胞生长速率及病毒滴度较转瓶培养明显增加,降低了培养成本缩短了培养周期。

关键词：重组腺病毒细胞数目生物反应器微载体培养

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基于BAC系统的表达红色荧光蛋白的HP-PRRSV感染性克隆的构建

基于BAC系统的表达红色荧光蛋白的HP-PRRSV感染性克隆的构建

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄柏成孔宁李琼毅张昂克王承宝周恩民西北农林科技大学动物医学院兽医免疫研究所农业部兽用药物与兽医生物技术陕西科学观测实验站

外源基因在重组病毒中的表达常表现出不稳定性,因此,一个可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆对于研究病毒生物学特性而言将是一个有效工具。在不同的病毒拯救系统中,细菌人工染色体(bacterial artificial chromosomes... 详细信息

外源基因在重组病毒中的表达常表现出不稳定性,因此,一个可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆对于研究病毒生物学特性而言将是一个有效工具。在不同的病毒拯救系统中,细菌人工染色体(bacterial artificial chromosomes,BAC)系统较其他拯救系统具有大片段可容性和复制的高保真性,且易于操作。为构建可稳定表达外源荧光蛋白标签的高致病性PRRSV感染性克隆,红色荧光蛋白(DsRed)插入至PRRSV基因组N基因和3'UTR之间,作为独立转录单元由PRRSV转录调控序列TRS2来启动转录,重组病毒在Marc-145细胞上得到拯救。在Marc-145细胞上的研究表明,拯救的病毒(rSD16/TRS2/DsRed)与亲本毒株(SD16)在生长动力学曲线和病毒滴度等生物学特性上较为一致,且红色荧光蛋白的表达在至少10代内保持着高效率的荧光密度和荧光强度,流式细胞术检测结果表明随着病毒培养时间的延长,荧光阳性细胞比率也随之增加。这一重组红色荧光高致病性PRRSV可作为研究病毒机理和生物学特征的有力工具,同时也可为其他外源标签的表达提供一个骨架式载体系统。

关键词：高致病性PRRSV DsRed 细菌人工染色体转录调控序列

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欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗构建及免疫原性研究

欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗构建及免疫原性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：曹亮孙文超解长占鲁会军陈兴韩继成郭海宁肖朋朋张萍马海彬南福龙崔卓栋金宁一钱爱东吉林农业大学动物科学技术学院军事医学科学院军事兽医研究所广西大学动物科学技术学院

目的构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据。材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭质粒构建重组腺病毒穿梭质粒pacad-EU-ORF3、pacad-EU-ORF5、pac... 详细信息

目的构建欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗并对其免疫原性进行分析,为预防欧洲型PRRSV的感染提供依据。材料与方法 PCR扩增欧洲型蓝耳病ORF3、ORF5目的基因,将其连接到腺病毒穿梭质粒构建重组腺病毒穿梭质粒pacad-EU-ORF3、pacad-EU-ORF5、pacad-EU-ORF3-ORF5,将重组腺病毒穿梭质粒与骨架质粒共同转染至HEK 293细胞,构建重组腺病毒rAd-EU-ORF3、rAd-EU-ORF5、rAd-EU-ORF3-ORF5,并对构建的病毒用western blot方法进行验证。将构建的病毒免疫Balb/c小鼠,并通过特异性抗体水平及淋巴细胞增殖试验对重组腺病毒疫苗的免疫原性进行初步分析。结果与讨论western blot结果显示重组病毒可稳定表达目的蛋白;特异性抗体检测结果显示血清中GP3蛋白抗体的OD值在35d时达到最高为0.32,是PBS组的2-3倍(P<0.05),而GP5蛋白抗体的OD值为0.28,为PBS组的2倍(P<0.05);小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示重组腺病毒rAd-EU-ORF3-ORF5刺激指数为PBS组1.5倍(P<0.05),表明重组腺病毒疫苗无论是体液免疫还是细胞免疫,均能提高机体的免疫应答水平。结论成功包装出重组腺病毒rAd-EU-ORF3,rAd-EU-ORF5,rAd-EU-ORF3-ORF5,动物实验显示其具有良好的免疫原性。

关键词：欧洲型重组腺病毒疫苗 ORF PRRSV 免疫原性

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驯鹿产气荚膜梭菌的分离鉴定

驯鹿产气荚膜梭菌的分离鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：韩一啸周伟贾敏祝令伟纪雪孙洋刘军王海军郭学军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林农业大学动物科技学院

2015年4月,某动物园一头雄性驯鹿突然死亡(4岁),其身体状况良好,无慢性疾病,于2014年9月引进。该驯鹿白天在园区内散养,夜晚补饲青草、花生壳、苔藓、玉米面等。2015年4月22日晚未按时回圈,23日早上7点在散养区发现尸体。尸体腹胀、肛... 详细信息

2015年4月,某动物园一头雄性驯鹿突然死亡(4岁),其身体状况良好,无慢性疾病,于2014年9月引进。该驯鹿白天在园区内散养,夜晚补饲青草、花生壳、苔藓、玉米面等。2015年4月22日晚未按时回圈,23日早上7点在散养区发现尸体。尸体腹胀、肛门四周污秽、鼻孔有血性粘液。剖检尸体,可见皮下出血、大肠段鼓气致肠壁薄并多处破裂,脾脏肿大、心包积血、肺充血。无菌采集肝、脾、肾和血,低温保存送回实验室进行细菌学检测,各样本触片后革兰氏染色镜检,可见革兰氏阳性菌,菌体两端钝圆、呈粗杆状、单个、成双或者成短链状存在。个别菌体有芽孢,芽孢不大于菌体宽度,为单极芽孢,不能着色。依据《食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验--GB4789.13-2012》,将血、肾、肝和脾分别划线接种于TSC琼脂培养基上,37℃厌氧培养18h,划线区域有大量表面光滑、圆形突起的黑色菌落生长,初步判定分离菌株为产气荚膜梭菌。经PCR扩增产气荚膜梭菌α毒素、β毒素、ε毒素、ι毒素目的基因,获得α毒素目的基因,结果表明该分离菌株为A型产气美膜梭菌。据相关研究报道,动物感染产气荚膜梭菌后,大多突然死亡而来不及治疗,与本次疫情相符,但该分离菌株不致死小鼠,其毒力特性需进一步研究。该菌株对头孢替坦、吡利霉素、氨曲南等药物敏感,可作为预防和治疗的参考。

关键词：产气荚膜梭菌分离鉴定

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流感病毒受体结合特性研究进展

流感病毒受体结合特性研究进展

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：邓颖琦陈瑞玲钟颖丛彦龙吉林大学动物医学学院

近年来,流感病毒(influenza virus)由于其不可预测的流行性及严重的危害性,一直受到人们的高度重视。流感病毒表面血凝素(bemagglutinin,HA)与宿主细胞表面受体的特异性结合是流感病毒感染与复制进而传播的生物学基础。流感病毒表面HA... 详细信息

近年来,流感病毒(influenza virus)由于其不可预测的流行性及严重的危害性,一直受到人们的高度重视。流感病毒表面血凝素(bemagglutinin,HA)与宿主细胞表面受体的特异性结合是流感病毒感染与复制进而传播的生物学基础。流感病毒表面HA的变化与宿主细胞表面受体的不同是导致病毒受体结合特性差异的重要因素。其中,导致HA差异的主要原因包括基因突变,基因重配,糖基化位点变化;导致宿主细胞表面受体差异的因素包括受体种类,构象以及分布位置的变化。禽流感病毒对α-2,3型受体以及人流感病毒对α-2,6型受体的特异性结合,使流感病毒跨种传播受到阻碍,但不同的流感病毒在猪这个"混合器"体内发生基因重配后,能够使某些禽流感病毒获得适应性的感染人的能力。而对于其自身的基因突变,尤其是受体结合域内的关键位点的突变,可直接导致其受体结合特性的改变,突变的同时也可能伴随着糖基化位点的改变以及抗原表位变化,这些特性的改变都会对病毒感染宿主及宿主的免疫应答产生不同程度的影响。因此,准确并及时把握这些信息将会使人们对流感病毒病原学特性、跨种传播机制、流行病学特征等方面有更加深入的认识,有助于人们对流感病毒进行防控、监测,对疫苗、抗流感药物的研制以及公共卫生学都具有重要意义。本课题组多年来从事流感病毒的研究,运用反向遗传学构建病毒拯救平台,对HA受体结合域内关键位点进行突变,为研究其受体结合特性及机制奠定基础。论文就流感病毒血凝素的基因特点、宿主细胞受体类型及其结合特性进行综述。

关键词：血凝素受体结合特性

来源：评论

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