利用噬菌体表面展示技术,筛选bursin相应的结合蛋白。以纯化的TRX-BS融合蛋白为靶蛋白,对鸡B细胞噬菌体T7cDNA文库进行生物筛选,噬菌体经过3轮筛选后出现明显生物富集,随机挑选第三轮筛选的10个噬斑裂解液做PCR扩增,将其PCR产物序列测定后进行同源搜索。初步确定了2个与bursin结合的蛋白,为3-羟基异丁基-辅酶A水解酶(3-hydroxyisobutyryl-Coenzyme Ahydrolase)和含EGF腓素样细胞外基质蛋白1(similar to EGF-containing fibulin-like extracellular matrix protein 1,EFEMP1)。本研究应用T7cDNA噬菌体表面展示技术和生物信息学方法筛选的bursin的结合蛋白,可为进一步研究bursin的生物学功能提供了新的思路。
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Genbank收录的TGEV-Miller毒株S蛋白基因序列,设计合成一对引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEVS基因,将纯化后的PCR产物与pGEM-TEasy载体连接并...
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为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Genbank收录的TGEV-Miller毒株S蛋白基因序列,设计合成一对引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEVS基因,将纯化后的PCR产物与pGEM-TEasy载体连接并转化宿主细胞DH5α,得到阳性重组质粒pGEM-TS。以重组质粒为标准模板,建立SYBR GreenI荧光定量RT-PCR标准曲线,并进行灵敏度和特异性试验。结果显示建立的猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法具有灵敏度高、检测快速、定量准确、特异性和重复性好等优点,可用于临床猪传染性胃肠炎病毒感染检测。
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