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2 篇 医学
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主题

28 篇 猪圆环病毒2型
22 篇 猪瘟病毒
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18 篇 基因克隆
18 篇 原核表达
18 篇 prrsv
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17 篇 猪
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机构

68 篇 河南农业大学
33 篇 军事医学科学院军...
24 篇 河南省动物疫病预...
21 篇 吉林大学
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15 篇 中国农业科学院哈...
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9 篇 吉林农业大学
8 篇 湖北省农业科学院...
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8 篇 青岛农业大学

作者

34 篇 崔保安
26 篇 金宁一
24 篇 王川庆
22 篇 杨霞
20 篇 陈红英
18 篇 陈陆
16 篇 吴志明
16 篇 闫若潜
16 篇 王臣
15 篇 刘长明
15 篇 程相朝
14 篇 赵战勤
14 篇 张春杰
14 篇 丁轲
14 篇 王新娟
14 篇 刘春生
14 篇 魏战勇
14 篇 徐耀辉
13 篇 危艳武
13 篇 黄立平

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猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体的分子特征

猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体的分子特征

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：刘玉松刘肖萍张志远范旭赵琳张凤华徐红运段二珍卢晓艳夏平安崔保安河南农业大学牧医工程学院

根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因剪接异构体(FJ608551),测定其序列并进行序列分析,将swFcγRⅡB剪接异构体亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,利用脂质体瞬时转... 详细信息

根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因剪接异构体(FJ608551),测定其序列并进行序列分析,将swFcγRⅡB剪接异构体亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,利用脂质体瞬时转染COS-7细胞,经流式细胞术检测swFcγRⅡB剪接异构体在细胞表面表达;并用红细胞吸附试验检测其与IgG免疫复合物结合的生物学活性。序列分析表明克隆的swFcγRⅡB剪接异构体编码区长度为951bp,编码316个氨基酸,包括45个氨基酸的N-端信号肽序列、179个氨基酸的胞外区序列、23个氨基酸组成的疏水跨膜区序列和69个氨基酸的胞质尾区序列;克隆的swFcγRⅡB剪接异构体(FJ608551)与swFcγRⅡB(DQ026064)的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99.3%和98.3%,其胞内区多出19个氨基酸的插入,类似于人类FcγRⅡb1剪接异构体;流式细胞术检测swFcγRⅡB剪接异构体能在COS-7细胞表面表达,瞬时表达细胞株的红细胞吸附试验,证明了其结合IgG免疫复合物的活性。克隆基因是swFcγRⅡB基因的一种RNA剪接异构体,本试验将为进一步研究swFcγRⅡB剪接异构体功能作用奠定基础。

关键词：猪 IgGIIB类Fc受体剪接异构体抑制性受体基因克隆

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猪轮状病毒GDXS株VP7基因的克隆及序列分析

猪轮状病毒GDXS株VP7基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：田小艳苏润环徐贵娟李春梅邓雨修宋延华广东省温氏集团研究院广东新兴 527400

参考GerBank中发表的PRV OSU毒株VP7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列，设计1对特异引物，以PRV GDXS株反转录CDNA为模板，通过PCR方法扩增出长约1kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：GDXS RV的VP7基因全... 详细信息

参考GerBank中发表的PRV OSU毒株VP7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列，设计1对特异引物，以PRV GDXS株反转录CDNA为模板，通过PCR方法扩增出长约1kb的基因片段，并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明：GDXS RV的VP7基因全长1062bp，含有一个981bp的开放阅读框，编码326个氨基酸。与国内外已知的15个毒株VP7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较，同源性分别为73.5％～76.2％和76.5％～82.6％;核苷酸系统发育进化树结果表明，GDXS分离株跟其他代表毒株的氨基酸同源性都低于89％，应该为一新的毒株，还有待进一步确定其血清型。

关键词：猪轮状病毒 VP7基因基因克隆序列分析

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猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及拯救病毒的体外生物学特性研究

猪圆环病毒2型不同基因型毒株感染性克隆的构建及拯救病毒的体外...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三个基因型,还有PCV2d基因型新报道,这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,根据病毒基因组差异分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三个基因型,还有PCV2d基因型新报道,这些不同基因型PCV2毒株的致病性差异有待阐明。采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株,对拯救的毒株进行体外生物学特性试验。本研究构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆,经转化细胞后拯救4个克隆毒株,经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代,病毒增殖能力稳定,毒价均可达到105.0TCID50/ml;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测,拯救的PCV2a/rCL毒株与该单抗产生特异性反应,另3个克隆毒株(PCV2b/rYJ、rJF和PCV2d/rBDH)与该单抗均无反应,表明它们属于不同基因型代表毒株。这表明我国猪群中PCV2流行毒株存在不同基因型,其病毒抗原特性各异,构建和拯救了4个代表不同基因型PCV2克隆毒株,为进一步研究其致病性差异奠定了基础。

关键词： PCV2 不同基因型感染性克隆病毒拯救生物学特性

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猪α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达

猪α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：梁望旺袁秋云徐涤平周丹娜田永祥伍锐杨克礼刘泽文段正赢邓均华郭锐湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉 430064

利用PCR技术从长白猪全血基因组DNA中扩增出猪α干扰素的成熟肽(mPoIFN-α)基因，并将其亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中，构建分泌型重组表达载体***-α。将Sal I线性化的pPIC9K-mPoIFN-α电转化毕赤酵母菌GS115(... 详细信息

利用PCR技术从长白猪全血基因组DNA中扩增出猪α干扰素的成熟肽(mPoIFN-α)基因，并将其亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中，构建分泌型重组表达载体***-α。将Sal I线性化的pPIC9K-mPoIFN-α电转化毕赤酵母菌GS115(组氨酸缺陷型)，使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后，得到的阳性菌株再以G418抗性梯度法筛选多拷贝重组子。该多拷贝菌株经1％甲醇诱导表达，表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测，结果表明猪α干扰素在毕赤酵母中成功获得分泌表达，并具有免疫活性，表达产物约为19KD。本研究为进一步研究猪α干扰素功能奠定了基础。

关键词：猪α干扰素毕赤酵母分泌表达

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猪圆环病毒2型ORF2基因真核表达载体的构建

猪圆环病毒2型ORF2基因真核表达载体的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：王子馨陈红英崔保安刘金朋王淑娟朱前磊王亚丹河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002

根据猪圆环病毒2型ORF2基因基因序列设计并合成1对特异性引物，以含猪圆环病毒2型ORF2基因的重组质粒pGEM-ORF2为模板进行PCR扩增，回收的PCR产物和载体质粒pIRES分别用Xho I和Mlu I做双酶切，然后将酶切、回收的ORF2基因片段连接到同... 详细信息

根据猪圆环病毒2型ORF2基因基因序列设计并合成1对特异性引物，以含猪圆环病毒2型ORF2基因的重组质粒pGEM-ORF2为模板进行PCR扩增，回收的PCR产物和载体质粒pIRES分别用Xho I和Mlu I做双酶切，然后将酶切、回收的ORF2基因片段连接到同样处理的pIRES上，转化入大肠杆菌DH5α。所获重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定，证实含有目的片段，且连接、构建正确，表明PCV2 ORF2已连接到pIRES真核表达载体中，为猪圆环病毒2型ORF2基因的生物学功能研究奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因真核表达载体

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PCV2 ORF2与猪IL-2真核双表达质粒的构建

PCV2 ORF2与猪IL-2真核双表达质粒的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：朱前磊崔保安陈红英刘金朋王淑娟王子馨王亚丹河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002

根据GenBank发表的猪白细胞介素-2(pIL-2)、PCV2 ORF2基因核苷酸序列分别设计并合成2对引物，PCR扩增pIL-2、PCV2 ORF2基因。将回收纯化的ORF2经Xho I和Mlu I酶切、回收，克隆到同样处理的pIRES载体的外源基因插入位点MCS A上，构建重... 详细信息

根据GenBank发表的猪白细胞介素-2(pIL-2)、PCV2 ORF2基因核苷酸序列分别设计并合成2对引物，PCR扩增pIL-2、PCV2 ORF2基因。将回收纯化的ORF2经Xho I和Mlu I酶切、回收，克隆到同样处理的pIRES载体的外源基因插入位点MCS A上，构建重组质粒pIKES-ORF2。经SalI和Not I酶切、回收的pIL-2基因插入到同样处理的重组质粒pIRES-ORF2的MCS B位点上，构建pIRES-ORF2/IL2，转化入大肠杆菌DH5α。重组质粒经PCR、酶切及测序证实，含有目的片段，且连接、构建正确，表明ORF2、pIL-2已连接到pIRES真核表达载体中的指定位置，为PCV2核酸疫苗的研制、开发奠定基础。

关键词： pig IL-2 ORF2 真核表达载体

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猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究

猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：闫若潜马文涛吴志明李桂喜张志凌张健盛敏刘梅芬河南省动物疫病预防控制中心商丘市动物疫病预防控制中心

为了研究高效猪基因工程免疫增强剂,探讨IL-2/IL-6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克隆入... 详细信息

为了研究高效猪基因工程免疫增强剂,探讨IL-2/IL-6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克隆入pQE-30原核表达载体中进行融合表达;通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-PoIL-6)进行纯化。分别采用MTS法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖活性;分别采用PoIL-2和PoIL-6ELISA试验方法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白与抗PoIL-2和PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性。结果表明:成功构建了PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒(rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6)。表达的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分子量大小约28ku,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别具有与单一重组PoIL-2、PoIL-6蛋白(rPoIL-2、rPoIL-6)对照相近的生物学活性,可显著促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖,并可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应。本研究初步证明了rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在体外具有单rPoIL-2和rPoIL-6蛋白的双重生物学活性,为下一步进行rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。

关键词：猪白介素2 猪白介素6 嵌合基因融合表达活性

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O型口蹄疫病毒猪源分离株VP1基因特征分析

O型口蹄疫病毒猪源分离株VP1基因特征分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：杨鑫王红宁用英顺高荣曾博徐昌文丁梦蝶四川大学生命科学学院动物疫病与食品安全四川省重点实验室四川成都望江路29号 610064

通过对从猪分离鉴定的4株O型口蹄疫病毒VP1基因序列测定，采用DNAstar和Genbank中O型口蹄疫毒株VP1基因进行序列比较分析，结果表明，分离的4株O型口蹄疫病毒相互之间同源率均在97.2％以上，VP1蛋白氨基酸在198位存在特征性的变异(E→A... 详细信息

通过对从猪分离鉴定的4株O型口蹄疫病毒VP1基因序列测定，采用DNAstar和Genbank中O型口蹄疫毒株VP1基因进行序列比较分析，结果表明，分离的4株O型口蹄疫病毒相互之间同源率均在97.2％以上，VP1蛋白氨基酸在198位存在特征性的变异(E→A)。运用MAGE4.0软件构建O型口蹄疫病毒进化树，结果显示，分离的4株病毒属于O型口蹄疫东南亚亚型CHA亚群。应用DNAstar软件Jameson-Wlolf方法进行VP1结构蛋白的抗原性指数分析，结果以O/NC/CHA/2010株为代表的CHA亚群抗原指数与东南亚亚型差别较小，而与古典中国、泛亚两种亚型的差别较大，提示今后应对口蹄疫疫苗毒株的选择应有针对性。

关键词：口蹄疫病毒 O型东南亚亚型 VP1

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松鼠葡萄球菌脱皮毒素C活性功能域的分析

松鼠葡萄球菌脱皮毒素C活性功能域的分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：李海花郑世军中国农业大学动物医学院北京 100193

松鼠葡萄球菌(***)是引起猪渗出性皮炎(Exudativeepidennitis，EE)和人外伤感染的重要病原。脱皮毒素是该病原主要的致病因子之一。前期研究发现，松鼠葡萄球菌产生的脱皮毒素C(ExhC)能够使哺乳动物细胞发生坏死。为了进一步探讨ExhC诱... 详细信息

松鼠葡萄球菌(***)是引起猪渗出性皮炎(Exudativeepidennitis，EE)和人外伤感染的重要病原。脱皮毒素是该病原主要的致病因子之一。前期研究发现，松鼠葡萄球菌产生的脱皮毒素C(ExhC)能够使哺乳动物细胞发生坏死。为了进一步探讨ExhC诱导细胞死亡的活性区域，本研究以全长ExhC的氨基酸序列为基础，从ExhC羧基端开始对ExhC蛋白进行随机性截短，共获得4个ExhC截短体(T1-ExhC、T2-ExhC、T3-ExhC和T4-ExhC)，并在大肠杆菌中对这4个ExhC截短体进行了表达和纯化。我们以BHK细胞为模型研究不同截短的ExhC对细胞生长的影响。结果表明，ExhC具有强大的诱导细胞坏死的作用，然而如果ExhC缺失第79～128位氨基酸，就失去了诱导细胞死亡的活性。从而，证实Exhc第79～128位氨基酸是该蛋白的活性功能区，在诱导细胞死亡中具有极其重要的作用。

关键词：松鼠葡萄球菌哺乳动物细胞坏死脱皮毒素C ExhC诱导

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埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白的原核表达及纯化

埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白的原核表达及纯化

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：王皓婷邱亚峰沈阳史子学邵东华王雪敏马志永中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室上海 200241 河北工程大学农学院河北邯郸 056001 中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室上海 200241 河北工程大学农学院河北邯郸 056001

目的: 通过原核表达获得埃博拉病毒特迪瓦型的核蛋白，并将蛋白纯化。方法: 将合成的埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白基因亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中，构建重组表达质粒pET--28(a)-C-NP，并将重组质粒用热休克方法转化BL21(DE3)感受... 详细信息

目的: 通过原核表达获得埃博拉病毒特迪瓦型的核蛋白，并将蛋白纯化。方法: 将合成的埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白基因亚克隆入原核表达质粒pET-28(a)中，构建重组表达质粒pET--28(a)-C-NP，并将重组质粒用热休克方法转化BL21(DE3)感受态细菌，以IPTG诱导蛋白表达，以SDS-PAGE分析表达形式及表达量，并用利用His-Band Ni+柱进行亲和层析纯化。结果: 所构建的重组表达质粒pET-28(a)-C—NP序列正确。以1.0mmol/LIPTG 37℃诱导6h，破菌沉淀中有目的蛋白表达。结论: 成功表达并纯化了埃博拉病毒科特迪瓦型核蛋白，为后续研究奠定了基础。

关键词：埃博拉病毒 NP蛋白原核表达蛋白纯化

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