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349 篇 会议
1 篇 期刊文献

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349 篇 农学
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- 2 篇 生物工程
- 1 篇 食品科学与工程（可...
2 篇 医学
- 1 篇 药学(可授医学、理...
- 1 篇 医学技术（可授医学...

主题

24 篇 猪圆环病毒2型
19 篇 猪瘟病毒
17 篇 副猪嗜血杆菌
16 篇 prrsv
15 篇 克隆
14 篇 原核表达
13 篇 猪
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11 篇 猪病
10 篇 猪瘟
10 篇 elisa
10 篇 分离鉴定
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9 篇 猪繁殖与呼吸综合...
9 篇 多重pcr
8 篇 混合感染
8 篇 基因克隆
8 篇 转录时相
8 篇 细胞因子

机构

46 篇 河南农业大学
33 篇 军事医学科学院军...
24 篇 河南省动物疫病预...
21 篇 吉林大学
17 篇 河南科技大学
15 篇 中国农业科学院上...
15 篇 中国农业科学院哈...
12 篇 南京农业大学
12 篇 华南农业大学
10 篇 河北农业大学
10 篇 中国畜牧兽医学会...
10 篇 河南省动物性食品...
9 篇 四川农业大学
9 篇 吉林农业大学
8 篇 南京天邦生物科技...
8 篇 青岛农业大学
8 篇 中国农业大学
7 篇 华中农业大学
6 篇 郑州牧业高等专科...
6 篇 山东省动物疫病预...

作者

26 篇 金宁一
24 篇 崔保安
16 篇 吴志明
16 篇 闫若潜
16 篇 王臣
15 篇 陈红英
15 篇 刘长明
15 篇 程相朝
14 篇 赵战勤
14 篇 张春杰
14 篇 丁轲
13 篇 危艳武
13 篇 王川庆
13 篇 魏战勇
13 篇 黄立平
12 篇 李霄
12 篇 杨霞
12 篇 冯志新
12 篇 张健
12 篇 袁世山

语言

346 篇 中文
4 篇 英文

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多重PCR方法检测动物源大肠杆菌O157:H7抗原基因及hylA毒力基因的初步研究

多重PCR方法检测动物源大肠杆菌O157:H7抗原基因及hylA毒力基因的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：胡慧段志刚崔保安张龙现耿新爱陈丽颖张红英王亚宾河南农业大学牧医工程学院

【目的】建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157:H7及其毒力基因hylA的多重PCR方法。【方法】以编码大肠杆菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计三对特异性引物,建立并优化了检测大肠杆... 详细信息

【目的】建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157:H7及其毒力基因hylA的多重PCR方法。【方法】以编码大肠杆菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计三对特异性引物,建立并优化了检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法,并进行了特异性和灵敏性试验,且用单重PCR和多重PCR进行初步临床验证。【结果】成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠杆菌O157:H7的O抗原、H抗原和毒力基因hylA的方法,其特异性和灵敏性均较高,细菌纯培养物的检测灵敏度为2×102cfu/mL。【结果】本研究初步建立了检测动物源大肠杆菌O157︰H7的多重PCR方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157︰H7的分子流行病学调查。

关键词：大肠杆菌O157:H7 多重PCR rfb基因 flic基因 hylA基因

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副猪嗜血杆菌对猪气管上皮细胞黏附作用的研究

副猪嗜血杆菌对猪气管上皮细胞黏附作用的研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：王津津张彦明汤智慧唐青海仝刚西北农林科技大学动物医学院

为了探讨副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)与原代培养的猪气管上皮细胞的黏附作用,应用气管支气管结扎灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞,胶原覆盖的盖玻片上培养,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮细胞,然后用对数生长期的... 详细信息

为了探讨副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)与原代培养的猪气管上皮细胞的黏附作用,应用气管支气管结扎灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞,胶原覆盖的盖玻片上培养,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮细胞,然后用对数生长期的Hps以不同浓度感染上皮细胞和猪脐静脉血管内皮细胞,分别作用1h、2h、3h、4h后,通过革兰氏染色法观察Hps对细胞的黏附情况。结果表明,Hps可黏附在上皮细胞和内皮细胞表面;Hps对气管上皮细胞有毒性作用,致细胞变性坏死和凋亡;Hps对细胞的黏附力和菌液浓度和作用时间有关系,浓度为1.0×108cfu/mLHps感染4h后,黏附效果最好。高倍显微镜下可见大量Hps黏附于猪气管上皮细胞,只有个别Hps黏附于猪血管内皮细胞表面。说明Hps对猪气管上皮细胞的黏附能力远强于猪血管内皮细胞,可以利用猪气管上皮细胞建立副猪嗜血杆菌的黏附细胞模型。

关键词：副猪嗜血杆菌猪气管黏膜上皮细胞黏附作用

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实时定量PCR对猪细小病毒自然感染猪体内病毒分布情况的探讨

实时定量PCR对猪细小病毒自然感染猪体内病毒分布情况的探讨

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：李金磊魏战勇韩志涛耿静微陈红英崔保安河南省动物性食品安全重点实验室河南农业大学牧医工程学院

【目的】探讨猪自然感染猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)后病毒在体内的分布情况,分析病毒对猪器官组织的嗜性,揭示猪细小病毒致病机制。【方法】利用已建立的猪细小病毒SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,定量检测自然感染仔猪、母... 详细信息

【目的】探讨猪自然感染猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)后病毒在体内的分布情况,分析病毒对猪器官组织的嗜性,揭示猪细小病毒致病机制。【方法】利用已建立的猪细小病毒SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测方法,定量检测自然感染仔猪、母猪和同时混合感染有猪圆环病毒的仔猪器官组织中PPVDNA的相对含量,分析猪细小病毒的组织嗜性及其与圆环病毒混合感染时的相互作用机制。【结果】在多种器官组织中均可检测到PPV,在感染仔猪的肾脏、脾脏、髂下淋巴结中病毒含量较高(为1.39×105～1.81×106μL-1),在感染母猪的肾脏、脾脏、肺脏、子宫内膜中病毒含量为4.56×105～5.82×106μL-1,混合感染PPV和猪圆环病毒2型(PCV2)仔猪肺脏中的PPVDNA的相对含量增加显著,从2.69×104μL-1增加到5.04×105μL-1。【结论】PPV对猪肾脏、脾脏、淋巴结、妊娠母猪子宫的嗜性最强,对肝脏的嗜性较弱。PCV2的混合感染可促进PPV在肺脏的复制增殖,增强了PPV对感染器官组织的亲嗜能力。

关键词：猪细小病毒猪圆环病毒2型实时定量PCR 体内分布规律

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关节型鸡白痢沙门菌的分离、鉴定及脉冲场凝胶电泳分型研究

关节型鸡白痢沙门菌的分离、鉴定及脉冲场凝胶电泳分型研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：徐成刚徐小芹辛朝安廖明华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室

本研究从广东A公司下属3个肉鸡分公司、广西B公司4个分公司9个肉鸡群发生跗关节、翅关节肿胀的病鸡肿胀部位,B公司孵化场19日龄死胚跗关节处、B公司种鸡场种蛋蛋壳表面,进行病原分离、鉴定,采用K-B法对所分离的菌株进行药敏试验,并应用P... 详细信息

本研究从广东A公司下属3个肉鸡分公司、广西B公司4个分公司9个肉鸡群发生跗关节、翅关节肿胀的病鸡肿胀部位,B公司孵化场19日龄死胚跗关节处、B公司种鸡场种蛋蛋壳表面,进行病原分离、鉴定,采用K-B法对所分离的菌株进行药敏试验,并应用PFGE方法对所分离菌株进行相关性研究。结果显示:从广东A公司下属3个肉鸡分公司发病肉鸡,广西B公司4个分公司9个发病肉鸡群、B公司孵化场死胚跗关节处、B公司种鸡场种蛋蛋壳表面共分离到14株鸡白痢沙门菌;所分离菌株对氨苄西林、奈啶酸、青霉素G、利福平高度耐药,耐药率为100%,对四环素、红霉素耐药率分别高达79%、93%耐药率;从A种鸡场下属3个分场的送检的病鸡所分离到的菌株具有相同的PFGE图谱,从B公司所属4个分公司发病肉鸡群及B公司种鸡场种蛋表面、B公司孵化场19日龄死胚跗关节处所分离菌株具有相同的PFGE图谱,不同公司传染源可能为本公司种鸡。结论:鸡白痢沙门菌能引起雏鸡跗关节、翅关节肿胀;关节型鸡白痢沙门菌为蛋传性病原菌,禽苗在运送到肉鸡饲养场前已经感染或携带病原菌;鸡胚在孵化过程中有可能已感染致病菌。

关键词：关节型沙门菌 PFGE 耐药蛋传性疾病

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4株猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与序列分析

4株猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：王亚丹崔保安陈红英王淑娟刘金朋朱前磊王子馨河南农业大学牧医工程学院

将从郑州、南阳、武陟、临颍等地采集疑似PCV2感染的病料研磨、过滤除菌后,接种无PCV1和PCV2污染的PK-15细胞,盲传6代后,分离出4株PCV2(NY、LY、ZZ、WZ)。根据已发表的猪圆环病毒2型基因序列设计1对PCR引物,用PCR朗读显示对应的拉丁字... 详细信息

将从郑州、南阳、武陟、临颍等地采集疑似PCV2感染的病料研磨、过滤除菌后,接种无PCV1和PCV2污染的PK-15细胞,盲传6代后,分离出4株PCV2(NY、LY、ZZ、WZ)。根据已发表的猪圆环病毒2型基因序列设计1对PCR引物,用PCR朗读显示对应的拉丁字符的拼音字典-查看字典详细内容方法从4株PCV2河南分离株中扩增出相应的全基因组DNA片段。将扩增产物连接到pGEM-TEasy上并转化到大肠杆菌DH5α中,得到阳性克隆。应用序列分析软件DNAstar,对所测PCV-2序列与GenBank中的国内外PCV2毒株进行同源性比较,并绘制系统进化发生树。结果表明,4个PCV2河南株全基因组皆为1767bp,4个毒株间全基因序列核苷酸同源性在95.7%-99.7%之间。NYPCV2分离株同周口分离株存在较近的亲缘关系,WZPCV2分离株同ZZPCV2分离株存在较近的亲缘关系,NY与LY的亲缘关系也比较近。

关键词：猪圆环病毒2型全基因序列克隆序列分析

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猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：王淑娟崔保安陈红英刘金朋王亚丹朱前磊王子馨河南农业大学牧医工程学院

【目的】为研究猪IL-2生物学功能及其应用前景。【方法】本实验采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2)基因,RT-PCR产物进行T-A克隆、测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切... 详细信息

【目的】为研究猪IL-2生物学功能及其应用前景。【方法】本实验采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2)基因,RT-PCR产物进行T-A克隆、测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2。NotⅠ酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2。【结果】测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因为482bp,包含1个完整读码框(465bp),与GenBank中其它5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9%。重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。【结论】本研究成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础。

关键词：猪白细胞介素-2 克隆重组禽痘病毒载体构建

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新型猪细小病毒(PPV4)TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

新型猪细小病毒(PPV4)TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：黄律龙进学翟少伦刘长龙张荣袁世山中国农业科学院上海兽医研究所传染病防治研究室新疆农业大学动物医学院

根据GenBank中登录的新型猪细小病毒(PPV4)全基因组序列,针对结构蛋白VP2基因序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了用于检测PPV4的Ta... 详细信息

根据GenBank中登录的新型猪细小病毒(PPV4)全基因组序列,针对结构蛋白VP2基因序列设计合成特异性引物及TaqMan探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了用于检测PPV4的TaqMan荧光定量PCR。结果显示,该方法在6.73×107copies/μL～6.73×102copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;最低检测限为6.73×101copies/μL;用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细环病毒和猪源牛病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法对301份临床病料感染情况进行检测,结果首次在我国猪群中检测到PPV4,阳性率为3.32%,而普通PCR检出率仅为2.66%,且两种方法的符合率为100%。结果表明,建立的检测方法为PPV4的检疫、分子流行病学调查以及敏感细胞的筛选等提供了新的快速检测技术。

关键词：猪细小病毒4型 TaqMan荧光PCR 检测

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我国大陆地区PRRSV的遗传衍变分析

我国大陆地区PRRSV的遗传衍变分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：安同庆田志军冷超良彭金美周艳君李冉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院上海兽医研究所

自1996年我国大陆地区首次分离到PRRSV以来,该病毒相继在全国各主要养猪省份分离到,并造成了巨大的经济损失。PRRSV在不断地变异,为进一步认识我国PRRSV的分子流行病学,本研究就我国大陆地区1996年以来的PRRSV进行了遗传衍变特征分析。... 详细信息

自1996年我国大陆地区首次分离到PRRSV以来,该病毒相继在全国各主要养猪省份分离到,并造成了巨大的经济损失。PRRSV在不断地变异,为进一步认识我国PRRSV的分子流行病学,本研究就我国大陆地区1996年以来的PRRSV进行了遗传衍变特征分析。结果表明,我国1996年～2006年的毒株主要分为两大亚群,其中一群与北美洲型疫苗株ResPRRSp/Repro MLV高度同源;另一亚群与我国1996年的CH-1a株相近,且具有逃避机体体液免疫、毒力较强的潜质,这些毒株主要集中在我国的东南沿海地区。2006年我国HP-PRRSV的起源是CH-1a样PRRSV,而且其变异是逐步的,在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹。对2006发生HP-PRRS以来至2010年初的PRRSV流行病学分析,结果显示早期的HP-PRRSV具有一定的地域性,目前我国流行的毒株中HP-PRRSV占绝对优势,且遗传相对比较稳定。

关键词： PRRSV 我国大陆流行病学分析欧洲型高致病性猪蓝耳病大陆地区

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河南省规模化猪场猪繁殖呼吸障碍综合症病毒的分离及其特性鉴定

河南省规模化猪场猪繁殖呼吸障碍综合症病毒的分离及其特性鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：张玉杨郭成留许保疆朱文豪河南省农业科学院畜牧兽医研究所

无菌采取我省规模化猪场发病猪群的肺脏、脾脏、淋巴结等新鲜组织,适当处理后,4℃条件5000r/min离心30min,收集上清过滤后-20℃冻存备用。取上述上清液分别接种长满单层的MARC-145细胞、PK-15细胞,结果接种病料的MARC-145细胞盲传后第... 详细信息

无菌采取我省规模化猪场发病猪群的肺脏、脾脏、淋巴结等新鲜组织,适当处理后,4℃条件5000r/min离心30min,收集上清过滤后-20℃冻存备用。取上述上清液分别接种长满单层的MARC-145细胞、PK-15细胞,结果接种病料的MARC-145细胞盲传后第二代开始出现细胞聚集、成堆、脱落,最后形成空洞,而对照组细胞、接种的PK-15细胞均无病变,盲传4代后,也同样无病变出现。然后选取传至4代的HnPRRS6病毒株分别进行:TCID50、中和试验、理化特性(氯仿敏感实验,热敏感实验,酸碱敏感实验)的测定及PCR检测。实验结果:将病毒在MARC-145上传2代后,按Reed-Muench法测得其TCID50为10-5.29/0.1ml。利用美洲型PRRSV标准阳性血清与HnPRRS6株病毒进行中和试验,同时以阴性血清作对照。结果所分离的病毒能被美洲型PRRSV阳性血清中和,中和效价为1:80,HnPRRS6株病毒对4.8%氯仿高度敏感,所分离的HnPRRS6病毒株对热敏感,56℃50分钟完全灭活。所分离的HnPRRS6株病毒不耐酸碱。参照GenBank上PRRSV ATCC VR-2332株ORF6基因序列,设计一对扩增ORF6基因(505bp)的引物,结果扩增出510bp大小的片段。进一步证实了所分离的病毒株为美洲型猪繁殖呼吸障碍综合症病毒。

关键词：规模化猪场猪繁殖呼吸障碍综合症病毒 HnPRRS6病毒株特性鉴定中和价 TCID50

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抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：安春霞闫若潜吴志明黄磊王强刘光辉张盼盼张龙现宁长申河南省动物疫病预防控制中心河南农业大学牧医工程学院

目的筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性。方法将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选,... 详细信息

目的筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidium suis)单克隆抗体(McAb),并探讨其生物学活性。方法将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠,取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选,有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验、间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性。结果获得3株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞株,命名为1E1C5、1E11A5、2B7A1,分别属于IgM、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1:3200、1:1600和1:3200,小鼠腹水效价分别为1:1.6×105、1:1.6×105和1:0.8×105;ELISA叠加试验表明3株单抗可识别两个不同抗原位点,1E1C5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示3株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应,但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(***)有微弱的交叉反应。结论获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs,为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础。

关键词：猪隐孢子虫单克隆抗体制备和鉴定 ELISA 免疫荧光

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