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403 篇 会议
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2 篇 医学
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- 1 篇 医学技术（可授医学...

主题

28 篇 猪圆环病毒2型
22 篇 猪瘟病毒
19 篇 副猪嗜血杆菌
18 篇 基因克隆
18 篇 原核表达
18 篇 prrsv
17 篇 克隆
17 篇 猪
15 篇 猪瘟
14 篇 序列分析
12 篇 单克隆抗体
11 篇 猪病
11 篇 elisa
11 篇 多重pcr
10 篇 混合感染
10 篇 分离鉴定
10 篇 猪链球菌
9 篇 口蹄疫
9 篇 pcr
9 篇 猪繁殖与呼吸综合...

机构

68 篇 河南农业大学
33 篇 军事医学科学院军...
24 篇 河南省动物疫病预...
21 篇 吉林大学
17 篇 河南科技大学
15 篇 中国农业科学院上...
15 篇 中国农业科学院哈...
14 篇 南京农业大学
13 篇 华南农业大学
11 篇 郑州牧业高等专科...
10 篇 河北农业大学
10 篇 中国畜牧兽医学会...
10 篇 河南省动物性食品...
10 篇 山东省滨州畜牧兽...
9 篇 四川农业大学
9 篇 山东绿都生物科技...
9 篇 吉林农业大学
8 篇 湖北省农业科学院...
8 篇 南京天邦生物科技...
8 篇 青岛农业大学

作者

34 篇 崔保安
26 篇 金宁一
24 篇 王川庆
22 篇 杨霞
20 篇 陈红英
18 篇 陈陆
16 篇 吴志明
16 篇 闫若潜
16 篇 王臣
15 篇 刘长明
15 篇 程相朝
14 篇 赵战勤
14 篇 张春杰
14 篇 丁轲
14 篇 王新娟
14 篇 刘春生
14 篇 魏战勇
14 篇 徐耀辉
13 篇 危艳武
13 篇 黄立平

语言

400 篇 中文
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传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

传染性法氏囊病病毒AH1株vp2基因在昆虫细胞中的表达与应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：欧阳伟王永山周宇张海彬唐雨德江苏省农业科学院兽医研究所/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院南京军区军事医学研究所

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-... 详细信息

将近期引起IBD免疫预防失败的传染性法氏囊病病毒(IBDV)vp2基因,定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建重组供体质粒pFastBacHTA-VP2,转化Escherichia coli DH10Bac感受态,筛选重组杆状病毒表达质粒pBac-VP2。用pBac-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒vBac-VP2。对重组杆状病毒vBac-VP2感染的Sf9细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)检测,具有特异性荧光;用IBDV抗体夹心ELISA检测,呈阳性反应,抗原效价达到1.6×103;用Western blotting分析,在53kDa处出现一条特异蛋白条带;电镜观察,重组Vp2蛋白能够自组装成病毒样颗粒,在感染细胞中发现了"包涵体样"结构。用HisTrap HP亲和层析柱纯化的重组Vp2蛋白作为包被抗原,建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。用重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞裂解物,免疫2周龄SPF鸡,一次免疫14d后,ELISA检测抗体效价为8×102,中和抗体效价为1106,攻毒实验的存活率为30%;二次免疫14d后,ELISA抗体效价为3.2×103,中和抗体效价为2536,存活率为100%。在实验观察7d内,重组Vp2蛋白免疫保护鸡未显任何临床症状和病理变化,法氏囊/体重比高于对照组(P<0.05)。本实验制备的病毒样颗粒重组Vp2蛋白在研制新型IBD基因工程疫苗和检测试剂方面显示出了应用前景。

关键词：传染性法氏囊病病毒 Vp2基因病毒样颗粒包涵体样结构间接ELISA 免疫实验

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猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达

猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：刘春生王川庆徐耀辉杨霞陈陆王新娟张金来顾帅杨猛刘春明河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002 郑州牧业高等专科学校河南郑州 450002

目的: 克隆表达猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶。方法: 设计1时引物，采用PCR方法以猪链球菌2型河南分离株PDSWG-1的基因组DNA为模板扩增出gdh全基因序列。用限制性核酸内切酶BamH ***进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达... 详细信息

目的: 克隆表达猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶。方法: 设计1时引物，采用PCR方法以猪链球菌2型河南分离株PDSWG-1的基因组DNA为模板扩增出gdh全基因序列。用限制性核酸内切酶BamH ***进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-gdh，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达。结果: 经1mmol/L IPTG诱导后SDS-PAGE分析表明，重组菌株表达出了约68.8KDa的融合蛋白条带，与预期一致。Westem blotting分析表明，该融合蛋白具有特异的生物学活性。结论: 这为以后建立快速简便特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原，同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试刺盒奠定了基础。

关键词：猪链球菌血清2型谷氨酸脱氢酶基因基因克隆原核表达

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TGEV和PEDV多重RT-PCR检测方法的建立及其细胞分离培养研究

TGEV和PEDV多重RT-PCR检测方法的建立及其细胞分离培养研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：李霞张春红赵亚华张建峰广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州 510640 华南农业大学生命科学学院，广东广州 510642 广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州 510640 华南农业大学生命科学学院，广东广州 510642

根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的ORF2(s基因)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株的ORF6(N基因)核酸序列，经DNA sis 2.0比较分析，分别筛选出TGEVS基因和PEDVN基因相对保守区，利用PrimerPremier=5.0软件设计两对引物。多重RT-PCR得到与... 详细信息

根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的ORF2(s基因)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株的ORF6(N基因)核酸序列，经DNA sis 2.0比较分析，分别筛选出TGEVS基因和PEDVN基因相对保守区，利用PrimerPremier=5.0软件设计两对引物。多重RT-PCR得到与预期大小相一致的约858bp和511bp的产物，特异性试验表明，多重RT-PCR不与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪瘟病毒和猪轮状病毒反应，特异性良好;敏感性试验表明多重RT-PCR能检测10 TVID50/mL疫苗毒。将猪传染性胃肠炎、轮状病毒二联活疫苗和疑似腹泻猪粪便分别在ST细胞和Vero-E6细胞上进行增殖，经RT-PCR和金标试纸条检测，分别盲传5代、10后成功分离出TGEV和PEDV病毒。

关键词： TGEV PEDV 多重RT-PCR

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表达T+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

表达T+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会

作者：赵战勤王臣丁轲张春杰李银聚刘一尘吴庭才程相朝河南科技大学动物科技学院动物病原微生物学实验室

粘膜免疫与多价疫苗是未来免疫预防传染病的重要方向,以细菌为载体的重组活疫苗是其最有发展前景的研究领域之一。本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组... 详细信息

粘膜免疫与多价疫苗是未来免疫预防传染病的重要方向,以细菌为载体的重组活疫苗是其最有发展前景的研究领域之一。本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。生化鉴定结果表明,重组菌株C501(pYA-PmtC)与载体菌株C501(pYA3493)不能利用乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、半乳糖醇和尿素作为唯一碳源,但能利用一些其他糖类作为唯一碳源,这些生化指标与亲本菌株C500相同。同时发现重组菌株C501(pYA-PmtC)的血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5kDa的外源保护性抗原rPmtC。通过生物学软件Bio-RadQuantityOne对SDS-PAGE结果进行分析,发现重组蛋白rPmtC的总表达量约占菌体总蛋白的3.3%。其中,在菌体中的表达量约占总表达量的69.6%,分泌到上清液中的表达量(分泌性表达)占31.4%。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106CFU,毒力稍低于C500(LD50为4.4×106CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别。本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。

关键词：猪霍乱沙门氏菌C500株产毒巴氏杆菌 Asd+平衡致死系统重组疫苗

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猪瘟疫苗免疫反应低下猪CD3+CD4+和CD4+CD25+淋巴细胞亚群分析

猪瘟疫苗免疫反应低下猪CD3+CD4+和CD4+CD25+淋巴细胞亚群分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：王惟付明山郑海英李芳萍涂长春吉林大学畜牧兽医学院吉林长春 130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春 130062 通辽市畜牧兽医站内蒙古通辽 028042 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春 130062

分析猪瘟疫苗免疫反应低下猪CD3+CD4+和CD4+CD25+淋巴细胞亚群分布。将接种过猪瘟疫苗的种母猪经ELISA和血清中和试验检测筛选出38头猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪。从中挑选15头作为研究对象，以15头抗体阳性猪作为对照。用流式细胞术对30... 详细信息

分析猪瘟疫苗免疫反应低下猪CD3+CD4+和CD4+CD25+淋巴细胞亚群分布。将接种过猪瘟疫苗的种母猪经ELISA和血清中和试验检测筛选出38头猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性猪。从中挑选15头作为研究对象，以15头抗体阳性猪作为对照。用流式细胞术对30头猪外周血淋巴细胞(PBL)中CD3+CD4+和CD4+CD25+淋巴细胞亚群进行检测。15头CSFV抗体阴性猪PBL中CD3+CD4+细胞所占比例(24.09％±1.29％)明显低于15头CSFV抗体阳性猪(37.49％±1.60％);15头CSFV抗体阴性猪PBL中CD4+CD25+细胞所占比例(2.34％±0.20％)明显高于15头CSFV抗体阳性猪(1.64％±0.13％)。PBL中CD3+CD4+淋巴细胞亚群的减少及CD4+CD25+淋巴细胞亚群的增加可能是导致猪瘟疫苗免疫反应低下的重要原因。

关键词：猪瘟病毒外周血淋巴细胞 CD3+CD4+亚群 CD4+CD25+亚群

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猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达系统的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：高磊李国江丁壮张立春吉林农业大学动物科技学院预防兽医学系吉林长春 130062 吉林农业科技学院吉林吉林 132101 吉林大学畜牧兽医学院动物医学系吉林长春 130062

目的: 利用pEGFP-N1载体构建了含有PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达载体pEGFP-IL18-GP5。方法:采用RT-PCR方法扩增了JL/07/SW毒株GP5基因和猪IL-18基因。将该基因与真核表达载体pEGFP—N1连接，克隆获得重组质... 详细信息

目的: 利用pEGFP-N1载体构建了含有PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达载体pEGFP-IL18-GP5。方法:采用RT-PCR方法扩增了JL/07/SW毒株GP5基因和猪IL-18基因。将该基因与真核表达载体pEGFP—N1连接，克隆获得重组质粒pEGFP-IL18-GP5。将获得重组质粒转染MACR-145细胞，检测目的蛋白的表达情况。结果:RT-PCR分别扩增出GP5基因和IL-18基因，大小与预期一致;通过荧光显微镜观察、SDS—PAGE和Western blot试验证明GP5基因和IL-18基因在MACR-145细胞中成功表达。结论:成功构建含有PRRSV JL/07/SW毒株GP5基因及猪IL-18基因融合蛋白真核表达载体pEGFP-IL18-GP5，为研究基于以EGFP为报告基因的IL18-GP5为耙蛋白的核酸疫苗以及细胞因子对PRRS核酸疫苗免疫效果的影响奠定了实验基础。

关键词：猪繁殖呼吸障碍综合征 GP5基因 IL-18基因真核表达

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动物源大肠杆菌O157：H7多重PCR检测方法的初步研究

动物源大肠杆菌O157：H7多重PCR检测方法的初步研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：陈雅君段志刚魏战勇王亚宾崔保安张龙现陈丽颖胡慧河南农业大学牧医工程学院郑州河南 450002

目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化... 详细信息

目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件，成功地建立了可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，同时还初步应用到临床样品的检测中。结果: 本试验所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fkiC基因(247 bp)的特异性片段，特异性结果显示其它非大肠杆菌O157：H7的扩增结果均为阴性，表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102 cfu/mL。结论: 初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法，为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查。

关键词：大肠杆菌O157∶H7 多重PCR rfbE基因 fliC基因

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新型猪细小病毒(PPV4)TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

新型猪细小病毒(PPV4)TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：黄律龙进学翟少伦刘长龙张荣袭世山中国农业科学院上海兽医研究所传染病防治研究室上海 200241 中国农业科学院上海兽医研究所传染病防治研究室上海 200241 新疆农业大学动物医学院乌鲁木齐 830052

根据GenBank中登录的新型猪细小病毒(PPV4)全基因组序列，针对结构蛋白VP2基因序列设计合成特异性引物及TaqMan探针，以VP2克隆质粒为标准品，通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整，建立了用于检测PPV4... 详细信息

根据GenBank中登录的新型猪细小病毒(PPV4)全基因组序列，针对结构蛋白VP2基因序列设计合成特异性引物及TaqMan探针，以VP2克隆质粒为标准品，通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整，建立了用于检测PPV4的TaqMan荧光定量PCR。结果显示，该方法在6.73×107copies/μL-6.73×102copies/μL范围内线性关系良好，相关系数为0.998;最低检测限为6.73x101copies/μL;用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细环病毒和猪源牛病毒性腹泻病毒均为阴性;批内及批间变异系数均低于2％。用建立的荧光定量PCR方法对301份临床病料感染情况进行检测，结果首次在我国猪群中检测到PPV4，阳性率为3.32％，而普通PCR检出率仅为2.66％，且两种方法的符合率为100％。结果表明，建立的检测方法为PPV4的检疫，分子流行病学调查以及敏感细胞的筛选等提供了新的快速检测技术.

关键词：猪细小病毒4型 TaqMan荧光PCR 敏感细胞

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流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

流行性乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：赵付荣周东辉华荣虹王斌陈娜莎阿合买提·买买提步志高华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部兽医公共卫生重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephaIitis virus，JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒AA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原，免疫6周龄BALB/c小鼠... 详细信息

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephaIitis virus，JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白。本研究利用原核表达的乙型脑炎病毒AA14-14-2株结构蛋白E蛋白作为免疫原，免疫6周龄BALB/c小鼠，采用淋巴细胞杂交瘤技术进行融合，经有限稀释法获得1株特异性针对JEVE蛋白的杂交瘤细胞，命名为5D4，经测定5D4单抗亚类属于IgG2a，轻链为K链。经Westem blot证实所得杂交瘤细胞分泌的抗体可特异地与JEVE蛋白结合。结果表明，所制备的抗JEVE蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性，为JEV准确快速的病原诊断和JEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。

关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体

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副猪嗜血杆菌对猪气管上皮细胞黏附作用的研究

副猪嗜血杆菌对猪气管上皮细胞黏附作用的研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：王津津张彦明汤智慧唐青海仝刚西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌 712100

为了探讨副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)与原代培养的猪气管上皮细胞的黏附作用，应用气管支气管结扎灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞，胶原覆盖的盖玻片上培养，使上皮细胞分化戍假复层黏膜纤毛上皮细胞，然后用对数生... 详细信息

为了探讨副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)与原代培养的猪气管上皮细胞的黏附作用，应用气管支气管结扎灌注酶冷消化法分离气管黏膜上皮细胞，胶原覆盖的盖玻片上培养，使上皮细胞分化戍假复层黏膜纤毛上皮细胞，然后用对数生长期的Hps以不同浓度感染上皮细胞和猪脐静脉血管内皮细胞，分别作用1h、2h、3h、4h后，通过革兰氏染色法观察Hps对细胞的黏附情况。结果表明，Hps可黏附在上皮细胞和内皮细胞表面;Hps对气管上皮细胞有毒性作用，致细胞变性坏死和凋亡;Hps对细胞的黏附力和菌液浓度和作用时间有关系，浓度为1.0×108cfu/mL Hps感染4h后，黏附效果最好。高倍显微镜下可见大量Hps黏附于猪气管上皮细胞，只有个别Hps黏附于猪血管内皮细胞表面。说明Hps对猪气管上皮细胞的黏附能力远强于猪血管内皮细胞，可以利用猪气管上皮细胞建立副猪嗜血杆菌的黏附细胞模型。

关键词：副猪嗜血杆菌猪气管黏膜上皮细胞黏附作用

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