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14 篇 张春杰
14 篇 丁轲
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14 篇 刘春生
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13 篇 危艳武
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2005～2010年猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株的遗传变异分析

2005～2010年猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株的遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：范培虎危艳武鄣龙军黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室哈尔滨 150001

2006年我国南方猪高热病爆发以来，高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在全国各地广泛流行，为了揭示该病的发生规律，根据GenBank登录的PRRSV基因序列设计引物，采用RT-PCR法对2005～2010年间送检的282份病料进行了PRRSV核酸检测... 详细信息

2006年我国南方猪高热病爆发以来，高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在全国各地广泛流行，为了揭示该病的发生规律，根据GenBank登录的PRRSV基因序列设计引物，采用RT-PCR法对2005～2010年间送检的282份病料进行了PRRSV核酸检测，阳性检出率为18.8％(53/282);对9份阳性样品进行了ORF5～7基因片段扩增和测序，这9个毒株ORF5序列相似性为95.0％～99.2％，氨基酸序列相似性为92.0％～99.0％;与GenBank下载的PRRSV CH-la、VR2332、HB-2、LV株等ORF5序列相似性依次为93.4％～95.5％、87.6％～89.4％、91.2％～92.7％、63.0％～64.0％;氨基酸序列的相似性依次为91.0％～94.0％、85.6％～88.6％、89.6％～92.0％，54.7％～58.2.与国内已发表的27株PRRSV ORF5序列进行遗传进化树分析，2005～2010年流行毒株同属于一个基因亚群;对GP5蛋白潜在糖基化位点与数目分析，5个糖基化位点有3株，4个糖基化位点有5株，3个糖基化位点有1株;糖基化位点分布在第30～55位点氨基酸之间，以第44、55位点比较保守，其它3个位点变异幅度较大。表明我国流行的PRRSV毒株变异幅度较大，GP5糖基化位点不同可能与毒力存在一定联系。

关键词：猪繁殖呼吸综合征病毒 GP5基因遗传变异

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猪链球菌种及1、2、7型多重PCR检测方法的建立及应用

猪链球菌种及1、2、7型多重PCR检测方法的建立及应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：刘春生王川庆徐耀辉陈陆杨霞王新娟高冬生王永生程海卫刘春明河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002 郑州牧业高等专科学校河南郑州 450002

目的: 建立快速检测致病性猪链球菌种及1、2、7型的多重PCR方法，并进行初步的临床应用。方法:根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)，2(1/2)、7型型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列，分别设计了4对引物，预计扩增的目的基因片段... 详细信息

目的: 建立快速检测致病性猪链球菌种及1、2、7型的多重PCR方法，并进行初步的临床应用。方法:根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)，2(1/2)、7型型特异的cps1I、cps2H、cps7H基因序列，分别设计了4对引物，预计扩增的目的基因片段分别为689bp、441bp、542bp和232bp。通过对单个基因PCR和多重PCR扩增条件.反应体系进行优化，建立了快速检测猪链球菌种及其1(14)、2(1/2)、7型的四重PCR方法。利用保存的猪链球菌不同血清型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株进行特异性生和敏感性试验。并用所建立的四重PCR方法对河南省不同地市的39份猪扁桃体样品进行检测，并选取部分样品通过PCR产物序列测定进行了验证。结果: 所建立的四重PCR方法特异、敏感，对猪链球菌2型的最低检出水平为2.52CFU。临床检测及测序结果显示该多重PCR准3确性很好。结论: 建立的四重PCR方法可用于猪链球菌主要致病血清型的快速检测。

关键词：猪链球菌种及血清多重PCR

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抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

抗猪隐孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：安春霞闫若潜吴志明黄磊王强刘光辉张盼盼张龙现宁长申河南省动物疫病预防控制中心郑州河南 450008 河南农业大学牧医工程学院郑州河南 450002 河南省动物疫病预防控制中心郑州河南 450008 河南农业大学牧医工程学院郑州河南 450002

目的: 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidumsuis)单克隆抗体(McAb)，并探讨其生物学活性。方法:将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠，取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛... 详细信息

目的: 筛选特异性强、亲和力高的抗猪隐孢子虫(Cryptosporidumsuis)单克隆抗体(McAb)，并探讨其生物学活性。方法:将纯化的猪隐孢子虫卵囊冻融和超声波处理后免疫BALB/c小鼠，取阳性免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;经间接ELISA法筛选，有限稀释法进行克隆;用间接ELISA叠加试验.间接免疫荧光试验鉴定McAbs的免疫反应活性。结果:获得3株能稳定分泌抗猪隐孢子虫McAbs的杂交瘤细胞林，命名为1E1C5、1E11A5，287A1，分别属于IgM、IgG3和IgG2a类;其细胞培养上清效价分别为1：3200、1：1600和1：3200，小鼠腹水效价分别为1：1.6×105、1：1.6×105和1：0.8×105;ELISA叠加试验表明3株单抗可识别两个不同抗原位点，lElC5有较高的亲和力;免疫荧光试验结果显示3株单抗均能与猪隐孢子虫卵囊壁反应，但与艾美耳球虫、人隐孢子虫(***)有微弱的交叉反应。结论:获得了3株可识别猪隐孢子虫卵囊壁的McAbs，为进一步开展猪隐孢子虫快速诊断研究奠定了基础。

关键词：猪隐孢子虫单克隆抗体免疫荧光

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迁移性树突状细胞与淋巴结内树突状细胞在抗***免疫应答中的作用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：董炳梅何媛娜付景丽 Nico Van Rooijen 王家鑫河北农业大学动物科技学院免疫学实验室保定 071000

目的：研究迁移性树突状细胞与淋巴结内树突状细胞在抗猪布鲁氏菌免疫应答中的作用。方法：48只BALB/c小鼠随机分为3组：Ⅰ组为正常对照组，阴道滴注PBS。Ⅰ组为巨噬细胞(MΦ)清除组，每只小鼠阴道滴入清除剂，Ⅲ组为未清除MΦ组，每只... 详细信息

目的：研究迁移性树突状细胞与淋巴结内树突状细胞在抗猪布鲁氏菌免疫应答中的作用。方法：48只BALB/c小鼠随机分为3组：Ⅰ组为正常对照组，阴道滴注PBS。Ⅰ组为巨噬细胞(MΦ)清除组，每只小鼠阴道滴入清除剂，Ⅲ组为未清除MΦ组，每只小鼠阴道滴注同体积的liposome-PBS。48 h后Ⅱ组、Ⅲ组均阴道接种猪布鲁氏菌，对照组阴道滴注PBS。各组小鼠分别在12 h，24 h，48 h和72h采集血液和髂内淋巴结，采用免疫组织化学染色法观察淋巴结内树突状细胞(DC)的分布，用ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的含量。结果：未清除MΦ组小鼠接种布鲁氏菌后髂内淋巴结内有大量DC迁移，至12 h血清IFN-γ水平显著增高，与对照组相比差异显著(p<0.05)，48 h达到高峰，显著高于对照组(p<0.01)。清除MΦ组小鼠接种布鲁氏菌后，髂内淋巴结内没有明显的DC迁移，各时间点血清IFN-γ水平明显高于PBS对照组(p<0.05)，但明显低于未清除MΦ组(p<0.05)。各组IL-4水平的差异无统计学意义(p>0.05)。结论：迁移性DC和淋巴结内DC在启动抗布鲁氏菌细胞免疫应答中均发挥重要作用，并具有协同作用的特点。

关键词：猪布鲁氏菌巨噬细胞树突状细胞淋巴结免疫应答

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我国大陆地区PRRSV的遗传衍变分析

我国大陆地区PRRSV的遗传衍变分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：安同庆田志军冷超良彭金美周艳君李冉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海 200241 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海 200241

自1996年我国大陆地区首次分离到PRRSV以来，该病毒相继在全国各主要养猪省份分离到，并造成了巨大的经济损失。PRRSV在不断地变异，为进一步认识我国PRRSV的分子流行病学，本研究就我国大陆地区1996年以来的PRRSV进行了遗传衍变特征分... 详细信息

自1996年我国大陆地区首次分离到PRRSV以来，该病毒相继在全国各主要养猪省份分离到，并造成了巨大的经济损失。PRRSV在不断地变异，为进一步认识我国PRRSV的分子流行病学，本研究就我国大陆地区1996年以来的PRRSV进行了遗传衍变特征分析。结果表明，我国1996年～2006年的毒株主要分为两大亚群，其中一群与北美洲型疫苗株ResPRRSp/Rerpro MLV高度同源;另一亚群与我国1996年的CH—la株相近，且具有逃避机体体液免疫、毒力较强的潜质，这些毒株主要集中在我国的东南沿海地区。2006年我国HP-PRRSV的起源是CH-la样PRRSC，而且其变异是逐步的，在中间过渡的毒株中能够发现逐步演变的轨迹。对2006发生HP—PRRS以来至2010年初的PRRSC流行病学分析，结果显示早期的HP-PRRSV具有一定的地域性，目前我国流行的毒株中HP—PRRSV占绝对优势，且遗传相对比较稳定。

关键词：大陆地区 PRRSV 遗传衍变

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同一猪场副猪嗜血杆菌感染的多样性研究

同一猪场副猪嗜血杆菌感染的多样性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：陈小飞岳华郭定乾匡学谦杨发龙汤承西南民族大学生命科学与技术学院成都四川 610041 动物医学四川省高校重点实验室成都四川 610041 通威股份有限公司成都四川 610041 西南民族大学生命科学与技术学院成都四川 610041 动物医学四川省高校重点实验室成都四川 610041

2007年12月，某大型规模化猪场300余头30～70日龄仔猪爆发疑似副猪嗜血杆菌病。经鉴定，最终从21头猪的多部位分离到41株副猪嗜血杆菌。血清型鉴定结果显示，血清5型18株(43.9％)，血清14型12株(29.3％)、血清4型1株，未定型10株(24.4％... 详细信息

2007年12月，某大型规模化猪场300余头30～70日龄仔猪爆发疑似副猪嗜血杆菌病。经鉴定，最终从21头猪的多部位分离到41株副猪嗜血杆菌。血清型鉴定结果显示，血清5型18株(43.9％)，血清14型12株(29.3％)、血清4型1株，未定型10株(24.4％)。同一头猪身上也存在2种血清型同时感染。对21株临床分离株的ompA全基因和16S rRNA片段进行了序列分析。发现ompA基因完整的编码框序列中存在三种不同长度的碱基序列：1098bp，1104bp，1107bp，核苷酸的同源性为94.7％-100％。在邻近法进化树中，所有血清5型和未定型菌株聚为一支，所有血清14型聚为另外一支。相同血清型的临床分离株存在不同的ompA型，甚至采自同一头病猪的不同分离株也存在ompA型的差异。16S rRNA基因片段扩增长度为1475bp-1480bp，核苷酸的同源性为96.5％-100％。在16S rRNA序列邻近法进化树中，分为两大支，证明在临床分离株中也存在遗传距离的差异.

关键词：副猪嗜血杆菌分离鉴定血清型基因多样性猪

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河南省发病猪群不同血清型猪链球菌感染情况调查

河南省发病猪群不同血清型猪链球菌感染情况调查

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：刘春生王川庆徐耀辉陈陆杨霞刘春明王新娟李志娟王艳王珊河南农业大学牧医工程学院郑州 450002 并列第一作者郑州牧业高等专科学校郑州 450002

目的: 对河南省发病猪群猪链球菌的感染流行情况及血清型分布进行调查。方法: 根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)、2(1/2)、7、9型型特异的cps1I、cps2H、cps7H、cps9G基因序列，分别设计了5对特异性引物，对河南省14个地市33个... 详细信息

目的: 对河南省发病猪群猪链球菌的感染流行情况及血清型分布进行调查。方法: 根据猪链球菌种特异的gdh基因序列及1(14)、2(1/2)、7、9型型特异的cps1I、cps2H、cps7H、cps9G基因序列，分别设计了5对特异性引物，对河南省14个地市33个猪场送检的83份发病猪扁桃体样品进行PCR检测，欲扩增目的基因片段分别为689bp、441bp、542bp、232bp和330bp。并对部分PCR产物序列测定进行验证。结果: 共检测出猪链球菌阳性77份，检出率为92.8％,其中2型15份，占18.1％，7型4份，占4.8％，9型26份，占31.3％，没有检测出血清1型。结论: 河南省发病猪猪链球菌的感染率(携带率)很高;河南省流行的猪链球菌主要为血清9型，其次是2型，7型较少;河南省可能很少存在猪链球菌血清1型;部分病猪可以同时感染两种血清型的猪链球菌。猪链球菌致病血清型常与HCV，PCV2等混合感染。

关键词：河南省猪链球菌 PCR 检测

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猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株NSP2和ORF5的变异分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株NSP2和ORF5的变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：卢晓艳李伟娟张志远刘肖萍段二珍夏平安崔保安河南农业大学牧医工程学院河南郑州 450002

利用RT-PCR方法对2006年到2009年期间，从河南省不同地区疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪场中，成功分离出9株PRRSV河南病毒株。根据GenBank上已发表的PRRSVCH-1a和VR2332株设计扩增NSP2和ORF5全长的4对引物，对9株河南分离株进行扩增... 详细信息

利用RT-PCR方法对2006年到2009年期间，从河南省不同地区疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪场中，成功分离出9株PRRSV河南病毒株。根据GenBank上已发表的PRRSVCH-1a和VR2332株设计扩增NSP2和ORF5全长的4对引物，对9株河南分离株进行扩增和测序。结果显示，9株河南分离株的NsP2全长为2850bp-2937bp，编码氨基酸为950—979个。对9株分离株NSP2和ORF5进行核苷酸序列测定分析和绘制进化树，结果都表明9株河南分离株都属于美洲型毒株，9个毒株之间的NSP2和ORF5的氨基酸同源性分别为76.3％-99.2％和87.9％-99.8％，与VR2332，CH-1a，BJ-4比对，其中有6株的NSP2氨基酸发生30个氨基酸的缺失，这与09年河南省流行株HN0701缺失完全一致，而HeN-2株与河南流行株HN0702的NSP2全长和缺失也相同。将HeN-3株与VR2332，BJ-4进行比对.并对HeN-3株NSP2和ORF5的进化树，以及ORF5糖基化位点和毒力分析都表明，HeN-3株很可能是由疫苗株演变而来。

关键词： NSP2 ORF5 基因克隆变异分析

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猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究

猪白细胞介素2/6嵌合基因的融合表达及活性研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：闫若潜马文涛吴志明李桂喜张志凌张健盛敏刘梅芬河南省动物疫病预防控制中心河南郑州 450008 商丘市动物疫病预防控制中心河南商丘 476000

为了研究高效猪基因工程免疫增强剂，探讨IL-2，IL-6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果，本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克... 详细信息

为了研究高效猪基因工程免疫增强剂，探讨IL-2，IL-6融合蛋白用作疫苗佐剂的免疫增强效果，本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将猪白介素2(PoIL-2)、6(PoIL-6)基因构建成PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因并克隆入pQE-30原核表达载体中进行融合表达;通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIL-2-linker-PoIL-6)进行纯化。分别采用MTS法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖活，胜;分别采用PoIL-2和PoIL-6 ELISA试验方法检测rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白与抗PoIL-2和PoIL-6单抗发生特异性免疫反应的活性。结果表明：成功构建了PoIL-2-liner-PoIL-6嵌合基因及其重组原核表达质粒(rpQE-30/PoIL-2-linker-PoIL-6)。表达的rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分子量大小约28 ku，蛋白经纯化后纯度在96％以上。rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白分别具有与单一重组PoIL-2，PoIL-6蛋白(rPoIL-2、rPoIL-6)对照相近的生物学活性，可显著促进猪外周血淋巴细胞和猪脾脏细胞的增殖，并可与抗PoIL-2、PoIL-6单抗发生特异性免疫反应。本研究初步证明了rPoIL-2-linker-PiIL-6蛋白在体外具有单rPoIL-2和rPoIL-6蛋白的双重生物学活性，为下一步进行rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白在动物体内活性研究奠定了基础。

关键词：猪白介素2 猪白介素6 嵌合基因融合表达

来源：评论

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PCV2与PPV共感染对猪肺泡巨噬细胞吞噬功能及其表达干扰素水平的影响

PCV2与PPV共感染对猪肺泡巨噬细胞吞噬功能及其表达干扰素水平的...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

作者：刘祥义宋勤叶陈立功李艳琴左玉柱焦健迭王秀萍河北农业大学动物科技学院河北保定 071001

将48头5w健康仔猪随机分为4组，即PCV2感染组、PPV感染组、PCV2/PPV共感染组和对照组，每组12头。PCV2和PPV单独感染组分别通过口鼻途径接种PCV2或PPV，PCV2/PPV共感染组通过相同途径同时接种PCV2和PPV，对照组接种细胞营养液。感染后3... 详细信息

将48头5w健康仔猪随机分为4组，即PCV2感染组、PPV感染组、PCV2/PPV共感染组和对照组，每组12头。PCV2和PPV单独感染组分别通过口鼻途径接种PCV2或PPV，PCV2/PPV共感染组通过相同途径同时接种PCV2和PPV，对照组接种细胞营养液。感染后3、7、14和35d(dpi)每组随机剖杀3头，收获猪肺泡巨噬细胞(PAM)，检测PAM的存活率、吞噬活性及其表达α1型干扰素(IFN-α1)、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平。PCV2感染组和PCV2/PPV共感染组PAM的存活率于3、7，14 dpi均低于对照组，35 dpi时基本接近对照组，但PCV2，PPV共感染组与PCV2感染组之间差异不显著(P>0.05)，实验期间PPv感染组队M的存活率持续低下;3个感染组PAM的吞噬能力显著低于对照组(P<0.01)，其中共感染组的吞噬能力低于两个单独感染组;共感染组PAM中IFN-α1和IFN-γ mRNA的水平持续显著低于两个单独感染组和对照组的水平(P<0.01)。上述结果表明，PCV2与PPV共感粢导致PAM的吞噬功能和IFN-α1和IFN- γ mRNA表达水平持续严重下降，为PMWS病程的进一步发展创造了前提条件。

关键词： PCV2 PPV 共感染猪肺泡巨噬细胞吞噬功能干扰素猪

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