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- 2 篇 教育学
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主题

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38 篇 基因克隆
35 篇 大肠杆菌
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机构

63 篇 中国农业大学
59 篇 华南农业大学
54 篇 广西兽医研究所
48 篇 吉林大学
47 篇 军事医学科学院军...
40 篇 广西大学
40 篇 四川农业大学
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36 篇 山东农业大学
34 篇 华中农业大学
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28 篇 河南省动物疫病预...
25 篇 河南科技大学
22 篇 云南农业大学
19 篇 湖南农业大学
18 篇 青岛农业大学
18 篇 山东省滨州畜牧兽...
16 篇 黑龙江八一农垦大...
15 篇 南京天邦生物科技...

作者

44 篇 金宁一
34 篇 李斌
34 篇 梁家幸
34 篇 赵武
32 篇 蒋玉雯
32 篇 黄安国
32 篇 姚瑞英
32 篇 梁保忠
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29 篇 鲁会军
28 篇 丁壮
25 篇 潘康成
24 篇 黄伟坚
22 篇 吴志明
22 篇 王红宁
22 篇 闫若潜
22 篇 罗满林
21 篇 程相朝
20 篇 杨霞
20 篇 母连志

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株分离鉴定及遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘长明危艳武张朝霞袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR.该毒株接种细胞后能够产生细胞病变（CPE）,随传代次数增加毒价显著提升,第45... 详细信息

床"高热综合征"病例分离到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株,经细胞传代和蚀斑克隆,培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-HBR.该毒株接种细胞后能够产生细胞病变（CPE）,随传代次数增加毒价显著提升,第45～60代毒价测定达10TCID/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测病毒抗原分布在细胞浆中;电镜观察到的病毒粒子呈圆形,直径约50～55nm。分离株Nsp2基因序列中第483和535～563位氨基酸存在缺失,属PRRSV变异株。用该毒株第5代培养物滴鼻接种试验猪(1×10 TCID),临床表现为持续高热（≥40.5℃,9d～12d）、食欲下降、精神萎靡、消瘦、眼睑水肿、体表淋巴结肿大等,发病率为100%（10/10）,死亡率为30%（3/10）。研究表明,PRRSV-HBR分离株对靶动物具有高致病力,培育的细胞适应毒株体外繁殖能力稳定,并产生了标志性基因突变,为该病毒致病机理、遗传变异规律、疫苗免疫等研究奠定了基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性遗传变异分析

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抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

抗H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备与鉴定

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：孔维乔传玲陈艳杨焕良展小过辛晓光陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒（SIV）作为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、... 详细信息

采用纯化的H3N2亚型猪流感病毒（SIV）作为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,用间接ELISA方法筛选分泌抗H3N2亚型SIV的阳性细胞株,经克隆获得7株亲和力较高的杂交瘤细胞株,分别命名为1C9、2C5、2F10、3D3、4E8、5C7、5D12,用其制备的腹水ELISA效价分别为1:10～5、1:10～6、1:10～4、1:10～5、1:10～6、1:10～5、1:10～6;其中1C9、2C5、2F10、3D3单抗亚类为IgG,而4E8、5C7、5D12则是IgG,所有的单抗轻链均为κ型.Western-blot结果显示,这7株单抗都能识别HA蛋白,均能分泌针对血凝素的抗体。将本实验室构建的pCAGGS-H3HA质粒转染到293T细胞后,分别用7株单抗进行间接免疫荧光试验,能观察到特异性绿色荧光,证实该7株单抗具有良好的特异性。该亚型单克隆抗体的制备,为SIV鉴别诊断方法的建立奠定了基础.

关键词：猪流感病毒血凝素单克隆抗体

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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重TaqMan实时荧光定量RT...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：袁秀芳刘邓徐丽华王一成浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起仔猪腹泻和死亡的主要病因之一,本实验根据TaqMan探针荧光定量分析原理,设计两对引物和两条探针,分别以FAM和JOE标记探针。以T7体外转录试剂盒得到的RNA为标准品,通过对反应条... 详细信息

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起仔猪腹泻和死亡的主要病因之一,本实验根据TaqMan探针荧光定量分析原理,设计两对引物和两条探针,分别以FAM和JOE标记探针。以T7体外转录试剂盒得到的RNA为标准品,通过对反应条件的优化,建立了一步法TaqMan双重实时荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)检测PEDV和TGEV的方法。该方法具有良好的敏感性、重复性和特异性,能够检测到2×10～0拷贝/ul的病毒RNA,重复性试验中Ct值变异系数CV%均不超过2%,对猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒进行FQ-RT-PCR,均检测不到荧光信号。应用本方法对浙江省176份病料进行检测时,其中PEDV阳性率97.7%,TGEV阳性率6.3%,混合感染率6.3%,表明浙江省猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎均有发生,但以猪流行性腹泻为主。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪流行性腹泻病毒双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR

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日本乙型脑炎病毒SA14-14-2单克隆抗体的研制

日本乙型脑炎病毒SA14-14-2单克隆抗体的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：余慧曹三杰黄小波文心田四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室四川雅安 625014

利用BHK-21细胞常规增殖乙脑病毒，设未接种JEV病毒的BHK-21细胞为对照抗原，同时经浓缩及超速离心后，将所得样品作为免疫抗原常规途径免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，最终选取试剂盒检测OD450值最高者经有... 详细信息

利用BHK-21细胞常规增殖乙脑病毒，设未接种JEV病毒的BHK-21细胞为对照抗原，同时经浓缩及超速离心后，将所得样品作为免疫抗原常规途径免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，最终选取试剂盒检测OD450值最高者经有限稀释法进行4次亚克隆。结果显示：常规免疫组的融合率约34％，阳性率近1％，共获得3株能稳定分泌抗JEV病毒的杂交瘤细胞系，分别命名为JEV.1、JEV.2、JEV.3。经亚型鉴定试剂盒检测JEV1、JEV.2、JEV.3抗体亚类均为：IgG1，轻链为κ型;间接ELISA方法检测到3株杂交瘤细胞均具有良好的传代及热稳定性，细胞培养上清效价均为103，免疫小鼠所制备的腹水效价为105，血清中的抗体效价为104：相加试验证实此3株细胞系针对的抗原决定簇存在一定差异;特异性试验及间接免疫荧光试验证实三株单抗均具有良好的特异性;各株单抗的相对亲和力分别为：JEV.1 5mol/L、JEV.24mol/L、JEV.35mol/L。

关键词：乙型脑炎病毒减毒活疫苗单克隆抗体亚型鉴定间接ELISA检测热稳定性

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猪白细胞介素4、6融合基因和CpG基序对猪蓝耳病疫苗免疫的强化效应

猪白细胞介素4、6融合基因和CpG基序对猪蓝耳病疫苗免疫的强化效应

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：陈建林杨肖王泽洲章欢程驰李栋王红宁李江凌高荣四川大学生命科学学院动物疾病防控与食品安全重点实验室四川省动物疾病预防控制中心四川省畜牧科学研究院

为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、... 详细信息

为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、6和8周采取实验猪静脉血,用Sandwich ELISA检测血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量,同时检测外周血液免疫细胞数量的变化.结果发现实验猪接种CNP-(VRIL-46+VR1C)后1-8周内,其血清中IL-2、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量较对照组均显著增多(P<0.05),淋巴细胞和单核细胞数量也明显升高(P<0.05).这些表明接种CNP-(VRIL-46+VR1C)的实验猪的特异体液和细胞免疫水平均显著多于对照组,提示PIL-46基因和CpG基序组合能显著增强猪的特异体液和细胞免疫机能,明显提高其免疫防御力,具有研制为高效安全的分子免疫增强剂的应用前景.

关键词：猪猪白细胞介素4、6融合基因 CpG基序蓝耳病免疫

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类高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒特殊变异株的分离鉴定与序列分析

类高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒特殊变异株的分离鉴定与序列分...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：何世成唐小明汪洪冰郭成玲吴发兴谈志祥黄建龙张燕霞刘道新邱立新鲁杏华范仲鑫湖南省动物疫病预防控制中心长沙410007 湖南省动物卫生监督所长沙410007 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032

在2008年送检病猪病料中分离获得一株致细胞病变产生的代次、时间以及细胞病变形态均与典型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒培养特性不同的PRRS病毒(LD812株),进一步对该株病毒的Nsp2和ORF5基因进行测序,结果发现,该株病毒与标准高致病... 详细信息

在2008年送检病猪病料中分离获得一株致细胞病变产生的代次、时间以及细胞病变形态均与典型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒培养特性不同的PRRS病毒(LD812株),进一步对该株病毒的Nsp2和ORF5基因进行测序,结果发现,该株病毒与标准高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株(相较与VR2332株,Nsp2基因上第477和538-566位氨基酸缺失,缺失形式为1+29个氨基酸)的Nsp2基因同源性为98.3％,但分离株Nsp2基因上第475-520和538-566位氨基酸缺失,缺失形式为46+29个氨基酸,比JXA1株在1号缺失位多缺失45个氨基酸;LD812 ORFS序列相较与JXA1株未出现明显变异。结合该病例的临床和该毒株培养及分子特性,初步认为该株病毒为一弱毒毒株;对该毒株的深入研究可能有助于进一步认识JXA1株高致病性的内在机制。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征高致病性病毒变异株分离鉴定序列分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白末端序列在病毒复制过程中的作用分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白末端序列在病毒复制过程中的作...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：谭菲菲韦祖樟孙志庄金山袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室上海 200232

核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein)是猪繁殖与呼吸综合征病毒((Porcine Reproductive andRespiratory ***))的最主要的结构蛋白,在病毒粒子的包装中起着重要作用,但是对于病毒感染性所必需的N蛋白的最小结构域还不确定。本研究在本实验... 详细信息

核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein)是猪繁殖与呼吸综合征病毒((Porcine Reproductive andRespiratory ***))的最主要的结构蛋白,在病毒粒子的包装中起着重要作用,但是对于病毒感染性所必需的N蛋白的最小结构域还不确定。本研究在本实验室所拥有的感染性克隆的基础上,构建了N蛋白末端系列缺失的突变体,通过转染Marc-145细胞,观察细胞病变,检测基因组的复制、亚基因组的转录,表明N蛋白C端可以承受4个氨基酸的缺失而不影响病毒的感染性。值得说明的是N蛋白C端所有缺失突变体转染细胞后拯救出的病毒都发生了额外的突变,包括点突变和缺失。其中C端缺失3个氨基酸的突变体拯救病毒经空斑纯化后出现了5种形式的病毒,包括两种额外缺失和三种额外的点突变。C端缺失4个氨基酸的突变体拯救病毒也发生了额外的点突变。C端缺失5个氨基酸的突变体转染细胞后没有拯救出活的病毒,但可以检测到亚基因组的转录,说明可能影响了病毒粒子的包装。这些拯救病毒都可以在细胞上至少稳定传5代,从而为缺失疫苗的研究奠定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白病毒复制点突变体 Marc-145细胞

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猪源2型链球菌福建株CPS2J基因PCR检测及序列分析

猪源2型链球菌福建株CPS2J基因PCR检测及序列分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：俞伏松郭长明车勇良林天龙陈少莺福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

设计并合成一对扩增2型猪链球菌CPS基因的特异性引物，以猪2型链球菌福建株DNA为模板，筛选最佳反应条件，建立检测CPS2J基因的PCR方法，并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下：应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准... 详细信息

设计并合成一对扩增2型猪链球菌CPS基因的特异性引物，以猪2型链球菌福建株DNA为模板，筛选最佳反应条件，建立检测CPS2J基因的PCR方法，并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下：应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准阳性株进行扩增，均获得与预期大小一致的675bp特异性目的片段，而对8株非2型猪链球菌的扩增结果均呈阴性;敏感性测定最低可检出100cfu细菌量或50pg细菌DNA;SS2PFJ06CPS2J基因部分核苷酸及其推导的氨基酸序列与猪链球菌2型不同菌株的同源性分别达98.7％.100％和97.8％～100％。上述结果表明建立并优化的猪2型链球菌CPS2J基因的PCR检测方法敏感性好、特异性高，能用于2型猪链球菌的分子流行病学调查和快速检测;序列分析表明猪2型链球菌福建株与国内外8株标准株之间同源性高、亲缘关系密切。

关键词：猪链球菌2型福建株 CPS2J基因 PCR检测序列分析

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Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘标高继明辛英豪刘少宁王波姜世金山东农业大学动物医学院泰安 271018

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)，命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PC... 详细信息

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)，命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PCR检测对病毒进行鉴定，并在此基础上对该病毒的ELD50和LD50进行了测定。结果表明所分离病毒无血凝性，人工感染12日龄鸭胚和7日龄雏鸭后表现出典型的鸭肝炎病毒致病特征，能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和，RT-PCR检测及序列测定为传统的DHV-Ⅰ，其第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2ml，对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2ml。根据已发表序列设计合成9对引物，以SG株DHV-Ⅰ基因组为模板经RT-PCR扩增出9段连续的、相互部分重叠的DNA片段并分别连入T载体进行克隆测序。用DNAstar螯件对测序结果进行拼接，获得了该病毒的全基因组核苷酸序列。比较分析发现，SG株DHV-Ⅰ与其他传统DHV-Ⅰ毒株在同一进化分支上，而与DHV-Ⅰ变异株的进化分支距离较远，确证SG株为一株DHV-Ⅰ传统强毒。

关键词：鸭病毒性肝炎 DHV-Ⅰ病毒 SG株分离鉴定基因组序列

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类高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒特殊变异株的分离鉴定与序列分析

类高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒特殊变异株的分离鉴定与序列分...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：何世成吴发兴谈志祥黄建龙张燕霞刘道新邱立新鲁杏华范仲鑫唐小明汪洪冰郭成玲湖南省动物疫病预防控制中心中国动物卫生与流行病学中心湖南省动物卫生监督所

在2008年送检病猪病料中分离获得一株致细胞病变产生的代次、时间以及细胞病变形态均与典型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒培养特性不同的PRRS病毒(LD812株),进一步对该株病毒的Nsp2和ORF5基因进行测序,结果发现,该株病毒与标准高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株(相较与VR2332株,Nsp2基因上第477和538～566位氨基酸缺失,缺失形式为1+29个氨基酸)的Nsp2基因同源性为98.3%,但分离株Nsp2基因上第475～520和538～566位氨基酸缺失,缺失形式为46+29个氨基酸,比JXA1株在1号缺失位多缺失45个氨基酸;LD812ORF5序列相较与JXA1株未出现明显变异。结合该病例的临床和该毒株培养及分子特性,初步认为该株病毒为一弱毒毒株;对该毒株的深入研究可能有助于进一步认识JXA1株高致病性的内在机制.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性变异株

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