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- 2 篇 教育学
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主题

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21 篇 prrsv
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17 篇 克隆
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机构

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59 篇 华南农业大学
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36 篇 山东农业大学
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18 篇 青岛农业大学
18 篇 山东省滨州畜牧兽...
16 篇 黑龙江八一农垦大...
15 篇 南京天邦生物科技...

作者

44 篇 金宁一
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34 篇 梁家幸
34 篇 赵武
32 篇 蒋玉雯
32 篇 黄安国
32 篇 姚瑞英
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29 篇 鲁会军
28 篇 丁壮
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24 篇 黄伟坚
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22 篇 王红宁
22 篇 闫若潜
22 篇 罗满林
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20 篇 母连志

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猪基因工程复合重组抗病毒制剂对高致病性猪蓝耳病病毒体内抑制作用研究

猪基因工程复合重组抗病毒制剂对高致病性猪蓝耳病病毒体内抑制作...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘光辉闫若潜吴志明李桂喜张健张志凌河南省动物疫病预防控制中心商丘市动物疫病预防控制中心

选取35头猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原和血清学检测均阴性猪平均分为7组进行rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白在猪体内抗高致病性猪蓝耳病病毒(猪繁殖与呼吸综合征病毒,HP-PRRSV)试验,并设rPoIFN-α蛋白和rPoIL-2蛋白等量混合物、单rPo... 详细信息

选取35头猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原和血清学检测均阴性猪平均分为7组进行rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白在猪体内抗高致病性猪蓝耳病病毒(猪繁殖与呼吸综合征病毒,HP-PRRSV)试验,并设rPoIFN-α蛋白和rPoIL-2蛋白等量混合物、单rPoIFN-α蛋白及单rPoIL-2蛋白作对照。分别从体温变化、出现HP-PRRSV典型症状维持时间、死亡率、月增重率、病毒血症维持时间等几个方面评估其抗PRRSV在猪体内活性情况。结果表明:rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白、rPoIFN-α蛋白和rPoIL-2蛋白等量混合物、rPoIFN-α蛋白均可有效抑制PRRSV在猪体内的增殖和持续性感染,明显降低发病猪体温、减少高温维持时间、减缓发病症状、降低死亡率;rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白对PRRSV的抑制作用优于单一rPoIFN-α蛋白,稍优于、rPoIFN-α蛋白和rPoIL-2蛋白等量混合物,大大优于rPoIL-2蛋白制剂.本研究结果表明:rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白在猪体内具有rPoIFN-α蛋白和rPoIL-2蛋白的双重抗病毒活性,发病早期应用rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白对PRRSV的抑制效果明显优于后期。

关键词：猪 rPoIFN-α-linker-PoIL2蛋白抗病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒

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猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法的建立及应用

猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘梅芬吴志明闫若潜盛敏赵明军拜廷阳河南省动物疫病预防控制中心周口市动物疫病预防控制中心

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了... 详细信息

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床34例疑似猪链球菌感染猪临床样品进行了应用检测,并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100个CFU,特异性和重复性好;利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球菌感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验,其中有11份样品为gdh阳性,11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,可用于猪链球菌种和SS9型猪链球菌的快速诊断。

关键词：猪链球菌种 9血清型二重PCR 检测建立应用

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PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性研究

PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：曹瑞兵顾金燕张羽陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京 210095

猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来发现的一种重要的动物病原,适量的猪干扰素能促进其在细胞中的增殖。为了揭示PCV2 Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件(vISRE)的生物学功能,本研究应用感染性克隆技术构建了2株vISRE点突变的重组PCV2... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来发现的一种重要的动物病原,适量的猪干扰素能促进其在细胞中的增殖。为了揭示PCV2 Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件(vISRE)的生物学功能,本研究应用感染性克隆技术构建了2株vISRE点突变的重组PCV2,对突变病毒在PK15细胞上的增殖特性、遗传稳定性及对干扰素刺激的反应特性进行了分析。结果显示,PCV2 Rep基因启动子区ISRE点突变后PCV2仍可在PK15细胞中正常复制,但病毒滴度比亲本毒株下降。PCV2 1740G-C在PK15细胞上3至10代之间遗传稳定,PCV2 1741A-T 在PK细胞上第3代病毒保持突变基因的特征,但传至第7代时1743和1744位的AC突变为TT,并一直保持到第10代。100U/mL的POIFN-α处理感染病毒的PK15细胞后,亲本毒株和2个突变毒株的阳性感染细胞数量均有增加,但亲本毒株病毒粒子数的增加显著高于2个突变毒株。根据结果推测PCV2 Rep基因启动子区vISRE的突变影响其启动子活性,并可能在干扰素促进病毒增殖中发挥调控作用。

关键词：猪圆环病毒2型 Rep基因启动子干扰素刺激反应元件基因突变 vISRE突变株生物学特性

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抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测

抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：覃绍敏白安斌吴健敏廖文军袁书智华俊关忠谊广西兽医研究所惠朋动物药业有限责任公司

为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究以重组质粒PMD-2E8ScFv和PETmE2为模板,应用PCR方法分别扩增出目的基因2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟E2蛋白主要抗原编码区基因).采用重叠延伸(SOE)PCR的方法... 详细信息

为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究以重组质粒PMD-2E8ScFv和PETmE2为模板,应用PCR方法分别扩增出目的基因2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟E2蛋白主要抗原编码区基因).采用重叠延伸(SOE)PCR的方法将2E8ScFv和mE2拼接成融合基因2E8mE2,经测序正确后,将2E8mE2亚克隆入PET-DsbA原核表达载体,经PCR和酶切鉴定,表明重组表达质粒PET-DsbA-2E8mE2构建成功.将该重组表达质粒转化入宿主菌BL21(DE3)PlysS中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE电泳、免疫印迹和BandScan软件分析.结果表明:2E8mE2融合基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物大部分以不溶的包涵体形式存在,分子量约为65KDa,与预期的大小一致;融合蛋白的表达量约占菌体总量的30%左右.Western-blotting与红细胞凝集试验证实:2E8mE2融合蛋白既能够与人红细胞结合,又能够与CSFV抗体反应,具有双功能特性。

关键词：猪瘟单链抗体双功能蛋白原核表达红细胞凝集试验

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猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张志凌闫若潜吴志明谢彩华王东方王英华贾松涛河南省动物疫病预防控制中心河南郑州 450008

以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV2间接ELISA诊断方法;对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方... 详细信息

以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV2间接ELISA诊断方法;对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用实验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验。结果：优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815μg/mL,抗原最佳包被时间为37℃ 2h：血清最适稀释度1:40,酶标抗体最适稀释度为1:500,最佳封闭液为1％的BSA;阴阳性临界值判定标准OD450≥0.33,判为阳性,OD450<0.33,则判为阴性。特异性试验结果表明只有PCV2阳性血清反应后的OD450>0.33,包括抗PCV1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的OD450<0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性。经对临床疑似PCV2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69％。组装试剂盒在4℃至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗PCV2血清抗体的ELISA检测方法。

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白间接ELISA法抗体检测组装试剂盒

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B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株HA基因重组3型腺病毒的构建

B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株HA基因重组3型腺病毒的构建

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：鲁俊鹏田新贵罗满林李海涛周志超周荣华南农业大学兽医学院广东广州 510642 广州市儿童医院中心实验室广东广州 510663 广州市儿童医院中心实验室广东广州 510663 华南农业大学兽医学院广东广州 510642

目的：构建包含有B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株血凝素(HA)基因的重组3型腺病毒。方法：用PCR方法扩增得到HA基因，酶切后克隆至3型腺病毒穿梭质粒pSK-CMV，构建重组穿梭质粒pSK-CMV-HA，然后在大肠杆菌BJ5183内进行经Not Ⅰ和E... 详细信息

目的：构建包含有B型流感病毒B/Guangzhou/01/2007株血凝素(HA)基因的重组3型腺病毒。方法：用PCR方法扩增得到HA基因，酶切后克隆至3型腺病毒穿梭质粒pSK-CMV，构建重组穿梭质粒pSK-CMV-HA，然后在大肠杆菌BJ5183内进行经Not Ⅰ和EcoR Ⅴ线性化的pSK-CMV-HA和经Rsr Ⅱ线性化的骨架质粒pBRAdV3△E3的同源重组， AsiS Ⅰ酶切线性化重组腺病毒质粒pBRAdV3△E3-HA后脂质体法转染HEp-2细胞，进行病毒包装和增殖后得到重组腺病毒rAdV3△E3-HA，并且通过病变观察、扫描电镜、RT-PCR、免疫细胞化学方法对基因组的包装和HA基因的表达进行检测。结果：将HA基因克隆入pSK-CMV获得重组穿梭质粒pSK-CMV-HA，线性化的pSK-CMV-HA与pBRAdV3△E3同源重组后获得pBRAdV3△E3-HA，线性化的pBRAdV3△E3-HA转染HEp-2细胞观察到细胞病变和HA基因的表达。结论：成功构建了带有HA基因的重组腺病毒rAdV3△E3-HA，为B型流感病毒-3型腺病毒二联活苗的研究提供了依据。

关键词： B型流感病毒 HA基因重组腺病毒细胞病变蛋白表达

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猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张志凌闫若潜吴志明谢彩华王东方王英华贾松涛河南省动物疫病预防控制中心

以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV2间接ELISA诊断方法;对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用实验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验。结果:优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815μg/mL,抗原最佳包被时间为37℃2h;血清最适稀释度1:40,酶标抗体最适稀释度为1:500,最佳封闭液为1%的BSA;阴阳性临界值判定标准OD450≥0.33,判为阳性,OD450<0.33,则判为阴性。特异性试验结果表明只有PCV2阳性血清反应后的OD450>0.33,包括抗PCV1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的OD450<0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性。经对临床疑似PCV2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69%.组装试剂盒在4℃至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗PCV2血清抗体的ELISA检测方法.

关键词：猪圆环病毒2型 Cap蛋白间接ELISA 检测应用试剂盒

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新城疫地方强毒株的分离鉴定及毒力测定

新城疫地方强毒株的分离鉴定及毒力测定

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张庆霞张瑜金鑫蒋岩孙浩张秀文郑杰北京信得威特科技有限公司

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病,是危害养禽业的最重要的疫病之一.本实验室在辽宁地区疑似发生新城疫的免疫鸡群中采集病料,进行研磨冻融处理后,接种9... 详细信息

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病,是危害养禽业的最重要的疫病之一.本实验室在辽宁地区疑似发生新城疫的免疫鸡群中采集病料,进行研磨冻融处理后,接种9-10日龄SPF鸡胚,鸡胚在接种后40-48小时内全部死亡,死亡胚体水肿,全胚弥漫性出血,尤其胚体头部、颈部和脚爪出血严重,形成紫红色出血斑,收集第一代尿囊液HA效价为1:2～8;此尿囊液血凝性能被新城疫阳性血清所抑制,而不能被禽流感和鸡减蛋综合症阳性血清抑制;对4周龄SPF鸡进行攻毒试验,试验鸡攻毒后72小时全部死亡,表现出典型的新城疫临床症状和剖检变化.通过血凝试验、血凝抑制试验、中和试验及动物回归试验,确定分离株为新城疫病毒.然后对分离株的毒力进行了测定,病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT)为57.2h;1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.89;6周龄鸡静脉内接种致病指数(IVPI)为2.83.通过以上试验结果表明:从免疫鸡群中分离到的新城疫病毒为新城疫强毒株,暂命名为BX/LN/08株.

关键词：新城疫分离鉴定毒力测定

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猪传染性胃肠炎病毒S、N基因核酸疫苗的构建与免疫原性研究

猪传染性胃肠炎病毒S、N基因核酸疫苗的构建与免疫原性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：杨恒曹三杰黄小波文心田四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室四川雅安 625014

本研究采用RT-PCR扩增TGEV SC-H株S基因5’端主要抗原位点片段和N基因，并将其插入真核表达载体pVAx1，构建单独与嵌合表达S、N基因的pVAX-S、pVAX-N、pVAX-S-N三种重组质粒。通过脂质体将重组质粒转染COS-7细胞，利用间接免疫荧光检测... 详细信息

本研究采用RT-PCR扩增TGEV SC-H株S基因5’端主要抗原位点片段和N基因，并将其插入真核表达载体pVAx1，构建单独与嵌合表达S、N基因的pVAX-S、pVAX-N、pVAX-S-N三种重组质粒。通过脂质体将重组质粒转染COS-7细胞，利用间接免疫荧光检测目的基因的表达情况。将6周龄NIH小鼠随机分为5组，分别于腿部肌肉注射重组质粒pVAX、pVAX-S、pVAX-S-N、pVA-S+pVAX-N与pVAX-S+pVAX，共免疫三次，间隔2周。通过间接ELISA以及流式细胞仪分别检测免疫小鼠血清中特异性TGEV IgG抗体和外周血T淋巴细胞亚群数量。结果显示，重组质粒构建正确且在COS-7细胞中得以表达。pVAX-S+pVAX-N质粒混合免疫组小鼠后与pVAX-S+pVAX质粒混合对照组相比，可有效促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加，而pVAX-S-N免疫组小鼠与pVAX-S组比较，未能起到提高血清中特异性抗体水平的和外周血T淋巴细胞亚群数量作用。以上结果表明S、N基因的联合应用可有效加强TGEV核酸疫苗的免疫效力，但这种增强作用与S、N基因联合应用的方式直接相关。

关键词：猪传染性胃肠炎 TGEV病毒 S基因 N基因核酸疫苗免疫原性

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新城疫地方强毒株的分离鉴定及毒力测定

新城疫地方强毒株的分离鉴定及毒力测定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张庆霞张瑜金鑫蒋岩孙浩张秀文郑杰北京信得威特科技有限公司北京 101302

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病，是危害养禽业的最重要的疫病之一。本实验室在辽宁地区疑似发生新城疫的免疫鸡群中采集病料，进行研磨冻融处理后，... 详细信息

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的禽类一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病，是危害养禽业的最重要的疫病之一。本实验室在辽宁地区疑似发生新城疫的免疫鸡群中采集病料，进行研磨冻融处理后，接种9-10日龄SPF鸡胚，鸡胚在接种后40-48小时内全部死亡，死亡胚体水肿，全胚弥漫性出血，尤其胚体头部、颈部和脚爪出血严重，形成紫红色出血斑，收集第一代尿囊液HA效价为1：28;此尿囊液血凝性能被新城疫阳性血清所抑制，而不能被禽流感和鸡减蛋综合症阳性血清抑制;对4周龄SPF鸡进行攻毒试验，试验鸡攻毒后72小时全部死亡，表现出典型的新城疫临床症状和剖检变化。通过血凝试验、血凝抑制试验、中和试验及动物回归试验，确定分离株为新城疫病毒。然后对分离株的毒力进行了测定，病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT)为57.2 h;1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.89;6周龄鸡静脉内接种致病指数(IVPI)为2.83。通过以上试验结果表明：从免疫鸡群中分离到的新城疫病毒为新城疫强毒株，暂命名为BX/LN/08株。

关键词：新城疫病毒地方强毒株毒力测定分离鉴定

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