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检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军温士刚武嘉男吴洪丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法,用于检测该病毒感染猪血清中和抗体。该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待... 详细信息

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法,用于检测该病毒感染猪血清中和抗体。该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待检猪血清抗体及辣根过氧化物酶标记的单抗进行反应,通过测定酶标单抗显示阻断ELISA检测结果。该方法与常规免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)对353份试验猪血清样品进行了平行试验,两种方法检测符合率为96.0％;该方法的敏感性为97.9％,特异性为92.4％,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。用阻断ELISA和血清中和试验检测PCV2血清中和抗体结果表明,两种方法呈显著正相关性(r=0.9970),其敏感性优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品检测结果显示,疫苗接种2 w开始能够检测到病毒中和抗体,4w后血清抗体阳转率达100％;此外,对来自东北3省不同地区送检的703份血清样品进行检测,抗体阳性检出率为73.4％,表明我国养猪场中PCV2感染率较高,该病毒危害严重。本研究建立的阻断ELISA具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV2流行病学调查及血清抗体检测提供了一种有效技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型血清中和抗体检测单克隆抗体阻断ELISA法

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负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞对CD8+T淋巴细胞的旁位活化效应

负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞对CD8+T淋巴细胞的旁位活化效应

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李杰石玮边海霞王若张丽张雷孟明王家鑫河北农业大学动物科技学院动物免疫学实验室

目的:探讨在体外条件下负载灭活口蹄疫病毒(FMDV)树突状细胞活化CD8+T细胞的机制.方法:用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白介素-4(rmIL-4)将小鼠外周血单核细胞诱导分化成树突状细胞(MoDCs),以信号阻断法从淋巴结T细胞制... 详细信息

目的:探讨在体外条件下负载灭活口蹄疫病毒(FMDV)树突状细胞活化CD8+T细胞的机制.方法:用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白介素-4(rmIL-4)将小鼠外周血单核细胞诱导分化成树突状细胞(MoDCs),以信号阻断法从淋巴结T细胞制备CD8+T细胞,利用负载FMDV的MoDCs与CD8+T细胞共培养,以FMDV+MoDCs+淋巴结T细胞作为对照,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量.用蛋白酶体抑制剂和溶酶体抑制剂处理MoDCs,2h后再负载灭活FMDV,并与CD8+T细胞共培养,用FMDV+MoDCs+CD8+T细胞和FMDV+MoDCs作对照,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量.结果:在共培养9h,CD8+T细胞的IFN-γ释放量约为淋巴结T细胞IFN-γ释放量的1/6,随后,淋巴结T细胞和CD8+T细胞均产生少量IFN-γ.在FMDV+MoDCs+CD8+T细胞对照组,在共培养至9h-24h,CD8+T细胞释放IFN-γ的量逐渐增多.灭活FMDV负载被lactacystin和氯喹处理的MoDCs(iMoDCs)与CD8+T细胞共培养后9h-12h,CD8+T细胞产生IFN-γ显著减少,共培养至24h,IFN-γ释放显著增多,在36h,CD8+T细胞产生的IFN-γ水平升至最高,与对照组相比有显著的统计学意义。结论:负载灭活FMDV的MoDCs可以活化淋巴结T细胞,并以活化CD4+T细胞为主.而且,负载灭活FMDV的MoDCs既可以交叉提呈途径活化CD8+T细胞,还可通过非MHC-Ⅰ和非MHC-Ⅱ类分子依赖途径激活CD8+T细胞。该发现为研制口蹄疫新型治疗性疫苗开辟了一条新途径。

关键词：树突状细胞口蹄疫病毒抗原提呈旁位活化

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口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂DNA疫苗构建及其免疫原性研究

口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂DNA疫苗构建及其免疫原性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：马鸣潇金宁一李昌尹革芬鲁会军李宵中国人民解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室长春 130062 云南农业大学动物科技学院 650201

本研究以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMDV... 详细信息

本研究以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,在此基础上,以SEA为基因佐剂,通过分子设计构建了SEA与OAAT融合表达基因。将构建好的表达盒OAAT与SEA融合表达基因克隆至真核表达载体PVAX1 PCMV启动子下游,构建成口蹄疫三价基因佐剂DNA疫苗pEA。经Western blot和IFA检测,目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。小鼠免疫实验表明。pA和pEA免疫组的血清抗体均能分别与。型、A型和AsiaⅠ抗原反应,与对照组相比差异已显著,且pEA免疫组和灭活疫苗免疫组抗体水平均显著高于pA免疫组;同时pA和pEA免疫小鼠细胞因子IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10较对照组显著提高,且pEA免疫组的IL-2,IFN-γ和IL-4水平明显高于pA免疫组。用O/NY00和AsiaⅠ/YNNBS/58株F MD V进行豚鼠攻毒免疫保护试验,结果表明O型和AsiaⅠ型FMDV二联灭活疫苗免疫组均获得完全保护,pA免疫组均获得2/4保护,pEA免疫组均获得3/4保护,而pVAX1和PBS免疫组完全没有保护,实验结果表明,SEA与OAAT融合表达蛋白具有较好免疫原性,且SEA可以作为DNA疫苗的有效基因佐荆。

关键词：口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂 DNA疫苗免疫原性

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用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0％。用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7-10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到106拷贝/μL。试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7-11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性。对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在。实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量分析 RT-PCR法体内分布

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共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的攻毒保护效果研究

共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李军星李玉峰王先炜王兴龙姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,分别构建了以5×甘氨酸为连接肽的重组腺病毒rAd-HS35和以口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白为连接肽的重组腺病毒rAd-HSA35.通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot可以检测到HSP/GP3/GP5蛋白的表达,证明重组腺病毒可以正确表达目的蛋白.以串联表达GP3/GP5(rAd-GP35)的重组腺病毒和野生型重组腺病毒(wtAd)为对照.研究该重组腺病毒在猪体内诱导免疫应答情况及对同源毒株攻毒的保护效果,结果表明,免疫rAd-GP35,rAd-HS35及rAd-HSA35的猪产生了PRRSV特异性的体液免疫应答,且rAd-HSA35诱导的中和抗体滴度明显高于rAd-GP35免疫组.同时,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪血清中的IFN-γ及IL-4的含量也明显升高.攻毒后,与wtAd和rAd-GP35免疫组相比,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪的临床症状较轻,病毒血症较低,肺部病理变化也较轻.此外,rAd-HSA35诱导的保护效力明显高于rAd-HS35.上述结果表明HSP70与GP3-GP5共表达可以增强PRRSV抗原的诱导的免疫应答并对同源毒株攻毒提供一定的免疫保护.重组腺病毒rAd-HSA35为防治高致病性PRRSV提供了可能。

关键词：高致病性PRRSV 免疫应答 HSP70 重组腺病毒

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鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势

鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张立杰马力杨飞鸽陈卫红北京市兽医生物药品厂

鸡马立克氏病(MD)是一种常见以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病.自1907年发现以来,病毒毒力不断增强。在70年代初期,马立克非致病性火鸡疱疹病毒制备的弱毒活疫苗HVT投入使用,成为世界上第一个也是唯一一个利用疫苗预防肿瘤... 详细信息

鸡马立克氏病(MD)是一种常见以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病.自1907年发现以来,病毒毒力不断增强。在70年代初期,马立克非致病性火鸡疱疹病毒制备的弱毒活疫苗HVT投入使用,成为世界上第一个也是唯一一个利用疫苗预防肿瘤产生的产品。该疫苗的使用,在一定时期内有效的控制MD的蔓延.根据不同血清型毒株的分离鉴定,更多的单苗、联苗、基因工程苗得到了深入研究和应用.但是随着是世界养禽业由散养型步入集约化饲养,各国不同程度出现管理不善、早期感染,疫苗使用方法不当等原因,造成马立克病毒毒力逐年进化,出现了更多的免疫失败事件,与之相适应的疫苗及免疫策略受到了严峻的挑战.本文分析了马立克病毒毒株进化的情况,以及引起病毒毒力进化的原因,对马立克疫苗研制的进展进行了分类概述。提出应从免疫方法、免疫佐剂、遗传抵抗等方面入手,缓解病毒毒力增强的态势,进而减少MD的发生和传播,降低该病给养禽业带来的经济损失。马立克氏病(marek's disease,MD)是由疱疹病毒科、细胞结合性马立克氏病病毒(marek's piseasevirm,MDV)引起的一种高度接触传染性、淋巴组织增生性肿瘤疾病.以患鸡内脏、外周神经、性腺、皮肤及眼出现淋巴样细胞浸润和形成肿瘤为特征.该病是第一个能用疫苗预防的肿瘤性疾病,因此受到了医学界、兽医学界、病毒学界的广泛关注.到目前为止,还没有有效的方法来治疗MD患鸡,仍通过疫苗预防控制该病的发生.近50年来,随着养鸡业的迅速发展,MDV的毒力不断增强,对常规疫苗的抵抗力增加,甚至宿主范围都有所扩大.在大约每十几年发生一次毒力跃迁,与常规疫苗的发展几乎同步.疫苗的研发和使用在病毒毒力进化过程中是否起到推波助澜的作用?如何采取措施缓解病毒毒力的增强?本文对毒力进化以及疫苗研发进展进行了分析和概述,提出了减缓毒力增强的途径.

关键词： MDV 疫苗使用鸡马立克氏病病毒毒力疫苗研究

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S2菌苗对奶牛布氏杆菌病防制效果及安全性试验

S2菌苗对奶牛布氏杆菌病防制效果及安全性试验

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：凤英刘晓松牧仁内蒙古农牧业科学院动物医学研究所内蒙古呼和浩特 010030 内蒙古鄂尔多斯市鄂托克前旗农牧业局内蒙古鄂托克前旗 016200

2004年内蒙古呼和浩特市地区新建的3个奶牛场，于2005年发生严重流产，作者从流产胎儿中分离到牛型布氏杆菌;7～8月份对3个奶牛场全面进行布病血清学检疫，阳性率分别为36.4％、46.8％、66.2％。根据疫病情况和以往防制布病经验，在疫... 详细信息

2004年内蒙古呼和浩特市地区新建的3个奶牛场，于2005年发生严重流产，作者从流产胎儿中分离到牛型布氏杆菌;7～8月份对3个奶牛场全面进行布病血清学检疫，阳性率分别为36.4％、46.8％、66.2％。根据疫病情况和以往防制布病经验，在疫区和爆发点采取免疫为主的综合性防制措施。免疫组Ⅰ场，阳性牛隔离饲养，流产牛隔离治疗，阳性牛和阴性牛连续3年S2菌苗口服免疫，一次免疫即起到基本控制流产作用;免疫组Ⅱ场，阳性牛和阴性牛没有隔离淘汰，与阴性性同群饲养，每年进行S2菌苗口服免疫，连续三年免疫后该场布病得到稳定控制：未免疫对照组，未进行免疫，采取以检疫为主，阳性牛隔离淘汰，环境消毒等措施，第四次检疫布病阳性率6.7％，流产率4.2％。从S2菌苗对阴性反应奶牛免疫血清抗体消长规律看出，阴性泌乳牛和阴性育成牛免疫后20-30天的血清效价达到1：400，血清抗体在8个月后基本消失。对免疫组Ⅱ场同群饲养的62头泌乳牛免疫前后乳清SAT检测布病抗体，分别为45.2％和21％，但隔离饲养的阴性泌乳牛免疫后乳清SAT检测全部为阴性，因此乳清SAT检测法可作泌乳牛自然感染与免疫的鉴别诊断方法手段之一。布病阴性牛S2菌苗口服免疫后，不同时期采集牛奶进行细菌学检菌，培养于布氏杆菌选择性培养基上，均无分离到病原菌，因此，阴性反应牛S2菌苗口服免疫后乳品是安全的。

关键词：奶牛布鲁氏菌病 S2菌苗血清抗体免疫效果安全性

来源：评论

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13种消毒剂对规模化蛋鸡场环境微生物MIC、MBC测定

13种消毒剂对规模化蛋鸡场环境微生物MIC、MBC测定

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：康润敏王红宁高荣周英顺庞平四川大学“动物疫病与食品安全四川省重点实验室”四川大学生命科学学院四川农业大学四川大学生命科学学院

为评价13种消毒剂(白疫杀、百毒杀、过氧化氢、PVP碘、万仑菌清、新洁尔灭.复合酚、新大卫1、碘伏、84、百毒杀S、百毒强杀、菌毒灭)对规模化鸡舍环境微生物(大肠杆菌8099,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372以及... 详细信息

为评价13种消毒剂(白疫杀、百毒杀、过氧化氢、PVP碘、万仑菌清、新洁尔灭.复合酚、新大卫1、碘伏、84、百毒杀S、百毒强杀、菌毒灭)对规模化鸡舍环境微生物(大肠杆菌8099,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372以及环境微生物中的11株大肠杆菌,7株金黄色葡萄球菌与3株枯草芽孢杆)的消毒作用,采用肉汤稀释法进行了药物最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度测定(MBC).结果表明:13种消毒剂药物大肠杆菌的MIC最低的依次为是过氧化氢23.4mR/L,PVP碘39-78.1 mg/L以及碘伏39.0-156.3 mg/L;对大肠杆菌MBC最低的依次为过氧化氢46.8 mg/L,PVP碘39-156.3mg/L和碘伏78.1-156.3 mg/L;对金黄色葡萄球菌的MIC最低依次为PVP碘39-78.1 mg/L,过氧化氢46.8 mg/L以及新洁尔灭和新大卫62.5mg/L;对金黄色葡萄球菌的MBC最低的依次为PVP碘39-78.1mg/L,过氧化氢46.8 mg/L,新大卫62.5 mg/L;对芽孢杆菌的MIC最低依次为新洁尔灭62.5mg/L,新大卫62.5mg/L,PVP碘78.1-156.3 mg/L;对芽孢杆菌的MBC最低依次为新洁尔灭62.5 mg/L,过氧化氢93.6 mg/L,新大卫125mg/L。结论:对于规模化鸡场对大肠杆菌抑菌效果最好的的过氧化氢,对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的是PVP碘,对于枯草芽孢杆菌抑菌效果最好的是新洁尔灭。

关键词：消毒剂最低抑菌浓度最小杀菌浓度

来源：评论

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不同H9N2亚型禽流感病毒株致病力的比较试验

不同H9N2亚型禽流感病毒株致病力的比较试验

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王泽霖柴丽娜杨大光陈陆河南农业大学禽病研究所

本研究参照NDV评介毒力的方法对1998～2005年间收集的25株H9N2亚型禽流感病毒（主要是河南地区）的致病性进行了比较分析。结果显示:25株H9N2亚型不同毒株间致病性有较大差异,其EID值在10/0.2mL～10/0.2mL之间,ELD值在10/0.2mL～10/0.2m... 详细信息

本研究参照NDV评介毒力的方法对1998～2005年间收集的25株H9N2亚型禽流感病毒（主要是河南地区）的致病性进行了比较分析。结果显示:25株H9N2亚型不同毒株间致病性有较大差异,其EID值在10/0.2mL～10/0.2mL之间,ELD值在10/0.2mL～10/0.2mL之间;MDT/MLD值在66.5h～103.2h之间。从中选出致病力有差异的8个毒株进行了1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）、6周龄鸡静脉接种指数（IVPI）以及8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,结果证明大部分毒株ICPI和IVPI基本上为0,排毒散毒的高峰期在攻毒后第5天到第6天.在25毒株中A/CK/HN/02（H9N2）(18#)和A/CK/HN/A3/98（H9N2）(3#)表现出了比较高的致病性,不仅其EID值最高(分别为10/0.2mL和10/0.2mL)、ELD值最高(分别为10/0.2mL和10/0.2mL),而且鸡胚平均死亡时间也最短（分别为66.5h和69h）。且还出现了1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）(分别为0.238和0.437)和6周鸡静脉内接种指数（IVPI）(分别为和0.34和0.51).在8周龄SPF鸡人工感染排毒试验中3#和18#毒株的排毒量最大,排毒时间也明显长于其它毒株（从第2～9天）.根据以上的试验结果,25株H9N2亚型禽流感病毒致病性强弱大致可以分为3类:致病性偏强、致病性中等、致病性较弱,表明我国H9N2亚型不同毒株致病性有明显差异,呈多态性.

关键词：尿囊液禽流感病毒平均死亡时间比较试验

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免疫鸡群传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其S1基因全序列分析

免疫鸡群传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其S1基因全序列分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：徐雪王宏魁杨霞孙彦婷刘慧敏郑鹿平刘春生王川庆河南农业大学禽病研究所郑州河南 450002

从河南省某免疫蛋鸡群发病鸡分离到一株传染性支气管炎病毒，将其命名为HN/HL株。根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核苷酸全序列，设计两对引物，一对引物用于鉴定感染IBV的阳性尿囊液;另一对引物用于扩增阳性尿囊液中IBV的S1全... 详细信息

从河南省某免疫蛋鸡群发病鸡分离到一株传染性支气管炎病毒，将其命名为HN/HL株。根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核苷酸全序列，设计两对引物，一对引物用于鉴定感染IBV的阳性尿囊液;另一对引物用于扩增阳性尿囊液中IBV的S1全基因序列，并对其进行克隆测序。结果同GenBank上发表的S1基因序列相比较，分析表明此次分离的HN/HL株与国内不同地区(黑龙江，吉林等)流行的肾病变型IBV各株之间有较高的同源性(94％以上)，其中与JS分离株(FJ345378)同源性最高，为98.9％;而与其他呼吸型IBV分离株及国际标准疫苗株的同源性较低(约75％左右)。对IBV S1基因推导的氨基酸序列进行分析，发现HN/HL株S1基因编码的氨基酸与其他IBV毒株的氨基酸同源性在72.2％～98.7％之间，其中与JS分离株(FJ345378)同源性为98.9％，与山东呼吸型分离株(AF208240)同源性为76.2％。对S1基因的氨基酸序列进一步分析发现，HN/HL株、SD株(FJ345384)等毒株主要为肾型IBV，S蛋白切割识别位点序列主要为H—R—R—R—R;疫苗株H120和H52等毒株为呼吸型IBV，S蛋白切割识别位点序列均为R—R—F—R—R;而US株肾型IBV S蛋白切割识别位点序列为R—R—S—R—R。基因进化树分析表明HN/HL株同国内大多数肾型分离株在同一个分支上。

关键词：鸡传染性支气管炎 IBV病毒分离鉴定 S1基因序列分析

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