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排序：

Development of a reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification assay for the detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

Development of a reverse transcriptase loop-mediated isother...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者： Jida Li1,Yanbo Yin1*,Mingke Yu2,Shouzhen Xu1,Jianlin Wang1,Yi Zhang1,Xu Jiangtao1,Xingcai Liu1, Yanyan Guo3,Limin Han3 1.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China 2.Fresno Laboratory of the California Animal Health and Food Safety Laboratory System,School of Veterinary Medicine,University of California at Davis,Fresno,CA 93725 3.Qingdao OLand-Better Bioengineering CO.LTD,Qingdao 266101,China

In order to rapidly test the Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRSSV),a reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification(RT-LAMP) assay was developed using primers designed for the ORF7 gene of the *** RT-LAMP product was verified by restriction enzyme digestion and the specificity and sensitivity of the test were *** results showed that the RT-LAMP assay was 100 times more sensitive than the conventional RT-PCR *** used for clinical diagnosis,the coincideration rate was 100%with that of virus *** RT-LAMP assay does not require complicate instruments,is easy to perform,can be used by localized,less-equipped veterinary stations for onsie rapid diagnosis of PRRS.

关键词： Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS) PRRS Virus(PRRSV) Reverse transcriptase Loop-mediated isothermal amplification

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株及其致弱过程中不同代次病毒的遗传变异分析

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株及其致弱过程中不同代次病...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：周艳君田志军于海李国新郝晓芳闫丽萍姜一峰陈瑾张善瑞彭金美安同庆童光志中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

高致病性猪蓝耳病是目前危害我国养猪业的主要传染病,本研究以高致病性PRRSV亲本毒HuN4株及其传代致弱的毒株为研究对象,将高致病性PRRSV亲本毒HuN4株在Marc145细胞上进行连续100次以上传代致弱,并对PRRSV强毒HuN4株及其不同传代致弱的... 详细信息

高致病性猪蓝耳病是目前危害我国养猪业的主要传染病,本研究以高致病性PRRSV亲本毒HuN4株及其传代致弱的毒株为研究对象,将高致病性PRRSV亲本毒HuN4株在Marc145细胞上进行连续100次以上传代致弱,并对PRRSV强毒HuN4株及其不同传代致弱的毒株进行核苷酸及氨基酸遗传变异分析,结果发现亲本毒在连续传代过程中,在非结构蛋白编码区和结构蛋白编码区均有氨基酸的突变,但是发生突变的氨基酸比较分散,其中突变最多的主要集中在ORF1a和ORF1b复制酶基因区域,其中ORF1a基因中发生突变的氨基酸主要在NSP2蛋白,占ORF1a基因突变氨基酸的61.5%,ORF1b基因发生突变的氨基酸主要在NSP9、NSP11和NSP12蛋白.在结构蛋白区域氨基酸突变较少,其中氨基酸稳定遗传的是ORF7编码的核衣壳蛋白,即使传至100代以上,也未发生氨基酸的突变或缺失、插入等现象.亲本毒HuN4株在传至F84代时突变率达到了最高,发生突变的氨基酸达到了35个,从F85代以后基本氨基酸遗传性能趋于稳定,当传至F100代以后,氨基酸遗传性能基本稳定,从F100代到F112代仅发生2个氨基酸的突变,其氨基酸突变率仅为0.03%。分析结果显示高致病性PRRSV亲本毒HuN4株在传代致弱过程中,F84代以前中间代次的各个毒株氨基酸仍然可以继续发生突变,具有遗传性能的不稳定性,F84代以后其氨基酸突变率降低,基本趋于平衡,而经过传代致弱F100代以后的毒株其生物学遗传性能更加趋于稳定,适合于作为候选的弱毒疫苗株.

关键词：亲本毒HuN4株不同代次毒株遗传变异

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HuN4株高代次病毒特异性抗原表位的鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HuN4株高代次病毒特异性抗原表位...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：姜一峰安同庆周艳君田志军肖燕韦天超王瑜彭金美于海李国新闫丽萍张善瑞童光志中国农业科学院上海兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

2006年以来由猪繁殖和呼吸综合征病毒变异株（highly pathogenic porcine reproductive and respiratorysyndrome virus,HP-PRRSV）引起的高致病性蓝耳病（HP-PRRS）对我国养猪业造成了巨大的损失.HP-PRRSV相比经典的PRRSV Nsp2区序列缺失了30个氨基酸,成为HP-PRRSV的分子特征之一.近年来,对Nsp2区功能的研究成为了研究PRRSV致病机理的热点。在PRRSV感染过程中针对Nsp2的抗体出现较早,且能够在长时间内保持较高的抗体滴度,时PRRS的防控具有重要的诊断意义。本实验通过对HP-PRRSV HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对4处氨基酸突变,每个突变点分别设计了相互重叠的3条短肽,人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western-Blot分析.结果表明表达的融合蛋白F65-11(KGEPVSDQPAK)能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4株低代次毒株的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变（S754）处存在一个免疫优势抗原表位.将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸(SDQPAK)C端缩短到第3个氨基酸(KGEPVSDQ)时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为VSDQ.选取GenBank中提交的部分高致病性蓝耳病病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65-11变异位点C→S为HuN4株系列传代毒株所特有。本研究结果证实抗原表位F65-11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原。

关键词： PRRSV HuN4株 Nsp2蛋白抗原表位

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猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：冯志新刘茂军王海燕甘源吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏省生物兽药筛选服务中心

目的P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其它支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的耙蛋白或靶基因.P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子,与病原的感染与致病机制相关,其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇.制备针对该两种... 详细信息

目的P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其它支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的耙蛋白或靶基因.P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子,与病原的感染与致病机制相关,其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇.制备针对该两种蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源.方法本研究用猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠,分别利用大肠杆菌表达的P46蛋白和P97R1蛋白作为筛选抗原制备P46与P97R1的单克隆抗体.结果本研究成功制备了两株针时P46的特异性单克隆抗体IA4和3C11以及三株针对P97R1的特异性单克隆抗体2A10,6C4和6C5.两株P46单抗最高ELISA效价可达1:64000,且均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46KD大小的蛋白发生特异性反应.但配对试验表明,该两株P46单抗是针时同一表位的单抗.三株P97R1单抗中,2A10与6C5两株滴度较高,ELISA效价达1:32000.配对试验表明该三株单抗分别针对P97R1蛋白的不同表位.Western-blot结果表明,三株P97R1单抗均能与原核表达的P97R1蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中80-120KD之间的两蛋白发生特异性反应.本研究制备的五株杂交瘤细胞株经三个月冻存或连续传代三个月均能保持较高的滴度.结论本研究分别成功制备了两株针对猪肺炎支原体P46蛋白以及三株针对P97R1蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体.

关键词：猪肺炎支原体 P46蛋白 P97R1蛋白单克隆抗体

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鸡基因工程免疫增强剂对不同种类疫苗免疫增强作用研究

鸡基因工程免疫增强剂对不同种类疫苗免疫增强作用研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：闫若潜谢彩华吴志明李桂喜张志凌张健刘梅芬河南省动物疫病预防控制中心商丘市动物疫病预防控制中心

为科学评价以重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)为主要成分的鸡基因工程免疫增强剂在商品鸡体内对不同种类疫苗的免疫增强作用,本研究分别进行了采用不同方式接种鸡基因工程免疫增强剂对不同种类的鸡新城疫病毒(NDV)疫苗和新支流(NDV-IBV-H9... 详细信息

为科学评价以重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)为主要成分的鸡基因工程免疫增强剂在商品鸡体内对不同种类疫苗的免疫增强作用,本研究分别进行了采用不同方式接种鸡基因工程免疫增强剂对不同种类的鸡新城疫病毒(NDV)疫苗和新支流(NDV-IBV-H9)三联油乳剂灭活疫苗的免疫增强试验、NDVⅣ系与免疫增强剂混合乳化制备的灭活疫苗的免疫试验以及免疫增强剂对传染性法氏囊病毒(IBDV)油乳剂灭活疫苗的免疫增强田间试验.结果表明:采用滴鼻点眼、饮水、肌肉注射、增强剂与疫苗先混和后再进行滴鼻点眼或肌肉注射等不同方式接种免疫增强剂对不同种类的NDV疫苗和NDV-IBV-H9三联油乳剂灭活疫苗均具有显著免疫增强作用;相对而言,免疫增强剂对灭活疫苗的免疫增强效果优于活疫苗,对NDV单联油乳剂灭活疫苗的免疫增强效果优于NDV-IBV-H9三联油乳剂灭活疫苗;免疫增强剂与NDVⅣ系、Ⅰ系活疫苗混合后进行共同接种的方式具有较其他使用方式更好的免疫增强效果。将鸡基因工程免疫增强剂直接加入NDV抗原中预混并制备成油乳剂灭活疫苗后可以显著提高NDV疫苗的免疫抗体水平,其增强效果优于将油乳剂灭活疫苗和免疫增强剂分别使用.田间试验表明:鸡基因工程免疫增强剂对IBDV油乳剂灭活疫苗首免和二免均具有显著免疫增强作用;二免时再次使用免疫增强剂对IBDV疫苗的免疫增强作用优于初次免疫,3家养殖户饲养的鸡二免8天后使用免疫增强剂鸡的IBDV抗体S/P平均值分别比不使用免疫增强剂组鸡增加了0.9、1.1和0.9。本研究为下一步鸡基因工程免疫增强剂的产业化生产及在生产实际中的大量推广应用研究奠定了基础.

关键词：鸡基因工程免疫增强剂,鸡白细胞介素-6 疫苗免疫增强作用

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应用重组自杀性质粒载体构建鸡白痢沙门氏菌C79-13crp基因的位点专一性突变

应用重组自杀性质粒载体构建鸡白痢沙门氏菌C79-13crp基因的位点...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：郁川程相朝赵战勤王学强张旭冯运巩河南科技大学动物科技学院

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的各种年龄鸡只的一种多发性传染病,雏鸡发病多呈急性爆发,发病率和死亡率都很高,是严重危害养鸡业的传染病之一。目前,国内常采用药物控制和淘汰的方法减轻其危害,多次反复用药不仅使成本上升,而且带来了... 详细信息

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的各种年龄鸡只的一种多发性传染病,雏鸡发病多呈急性爆发,发病率和死亡率都很高,是严重危害养鸡业的传染病之一。目前,国内常采用药物控制和淘汰的方法减轻其危害,多次反复用药不仅使成本上升,而且带来了耐药性和药物残留等一系列问题。因此,为寻求更好的防治措施,人们长期以来一直致力于对鸡白痢沙门氏菌的感染与致病分子机制的研究。沙门氏菌crp基因编码腺苷酸环化酶受体蛋白,其突变株能在普通培养基上生长,消除了细菌在哺乳动物中摄取cAMP的唯一途径,使其丧失了代谢碳水化合物、氨基酸和小肽能力从而降低其毒力。为此,本研究根据本室已构建好的带有鸡白痢沙门氏菌crp突变基因的重组自杀性质粒pREcrp,利用自杀性质粒PRE112（oriT oriV△asd Cmr SacB）及其宿主菌X7213（Thi21 thr21 leuB6 fhuA21 lacY1glnV44△asdA4 rexA1 RP4 22Tc::Mu[λpir]Kmr）的特性,通过基因同源交换以突变crp基因置换其野生型拷贝,造成c79-13 crp基因位点专一性突变,构建了鸡白痢沙门氏菌C79-13 crp基因突变株。经PCR扩增鉴定和测序表明,鸡白痢沙门氏菌C79-13染色体上野生型crp基因已被突变型取代。突变株生物学特性明显改变,不能利用果糖,棉籽糖,木糖,甘露醇等碳源,血清型不发生改变,crp缺失基因遗传稳定,生长周期明显减慢,证明鸡白痢沙门氏菌作为特异性宿主沙门氏菌其同样具有毒力基因crp基因编码腺苷酸环化酶受体蛋白的功能。本试验在不改变菌体其它遗传性状的基础上研究基因功能的方法,为染色体基因研究提供了有效手段。同时,对其毒力基因突变株毒力及其免疫学进一步研究,可进一步评价将其开发为安全的鸡白痢沙门氏菌弱毒苗及其适于粘膜免疫的疫苗活载体奠定了一定基础。

关键词：鸡白痢沙门氏菌C79-13 自杀性质粒 crp

来源：评论

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株M蛋白T细胞表位的初步鉴定

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株M蛋白T细胞表位的初步鉴定

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王亚欣周艳君李国新张善瑞姜一峰许傲天于海王礞礞闫丽萍陈宗艳童光志中国农业科学院上海兽医研究所

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染病,细胞免疫在PRRSV的抗感染免疫中发挥重要的作用,而由PRRSV的ORF6编码的M蛋白不仅可以诱导产生中和抗体,还可诱发强的特异性细胞免疫应答.鉴于此,本研究以... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染病,细胞免疫在PRRSV的抗感染免疫中发挥重要的作用,而由PRRSV的ORF6编码的M蛋白不仅可以诱导产生中和抗体,还可诱发强的特异性细胞免疫应答.鉴于此,本研究以HP-PRRSV HuN4株ORF6基因编码的M蛋白作为研究目标,通过软件分析设计合成了肽段长度为15个氨基酸残基,且每个肽段有11个氨基酸残基相互重叠的一系列短肽.选取5头30日龄PRRSV阴性健康仔猪,用HuN4-F112株弱毒疫苗进行免疫,免疫后28天采血分离猪的外周血淋巴细胞(PBMCs),并将所分离的PBMCs作为效应细胞,把上述合成的一系列重叠短肽作为刺激原,肽池的刺激浓度为100μg/ml,其中每孔效应细胞为1×10～6个.利用猪的商品化IFN-γELISPOT试剂盒对效应细胞进行酶联免疫斑点试验(ELISPOT),预先将所有的短肽分为6个肽池,第一轮筛选实验结果显示第Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ号肽池所引起的每孔IFN-γ反应细胞数较多,平均数分别为52.4个、47.8个,49.13个.第Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ号肽池共有的短肽为M1-M10,继续将这10个肽分为6个肽池,进行第二轮筛选,结果显示第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号肽池所引起的每孔IFN-γ反应细胞数较多,平均数分别为113个、74.13个、50.27个、78.73个,其中阳性肽池的共有短肽为M2、M3、M5、M6,M7将这5个短肽分别进行单肤刺激,试验表明其中M3、M5、M6引起的每孔细胞反应数较高,平均数分别为172.3个、164.7个、428.5个.分析结果显示由M3、M5、M6单独的短肽就能够诱导较高水平的IFN-γ表达,而内源性IFN-γ表达水平的高低可以反映机体的细胞免疫状态,因此我们推测这三个短肽与PRRSV诱导的特异性细胞免疫具有相关性,可能存在能够诱导细胞免疫的特异性T细胞表位.本研究结果的获得为进一步探讨PRRSV所引起的细胞免疫以及T细胞表位的鉴定奠定了基础。

关键词： HP-PRRSV M蛋白 ELIspot技术 T细胞表位

来源：评论

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Influenza A virus induces p53 accumulation in a biphasic pattern

Influenza A virus induces p53 accumulation in a biphasic pat...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者： Yang Shen~1,Xiaodu Wang~1,Lin Guo~1,Yafeng Qiu~1,Xiangdong Li~1,Hai Yu~1,Hua Xiang~2,Guangzhi Tong~1 and Zhiyong Ma~(1*) 1 Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Science Shanghai,200241,PR China 2 Institute of Veterinary Medicine,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Baishigang Street,Guangzhou,510640,PR China

Tumor suppressor p53,the major cellular defense against tumor development,has recently been implicated in host antiviral *** studies have shown that p53 was induced at the apoptotic stage of influenza virus-infected ***,we found that p53 was induced not only at the apoptotic stage but also at the beginning phase of infection, showing a biphasic pattern with a first transient elevation apparent at the beginning phase of infection and a second elevation observable at the middle-late phase of *** up-regulation of p53 was independent of increased p53 transcription, but dependent on virus adsorption and *** increased p53 was active and able to transactivate its downstream target genes,such as interferon regulatory factor 9(IRF9) and *** our knowledge,this is the first report to describe a biphasic pattern of p53 accumulation in influenza virus-infected cells.

关键词： Influenza A virus p53 p53 pathway innate antiviral response

来源：评论

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H9N2亚型河南分离毒株HA基因的扩增及序列分析比较

H9N2亚型河南分离毒株HA基因的扩增及序列分析比较

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王泽霖柴丽娜李和平王新卫河南农业大学禽病研究所

从不同致病力的25株H9N2亚型毒株中选出6株(3#、18#,17#、20#、6#、10#)有代表性的毒株,利用RT-PCR技术扩增其HA基因,并对其序列进行分析比较。结果表明:(1)所扩增的HA基因全长1683bp,编码560个氨基酸.在HA1和HA2的氨基酸裂解位点上有... 详细信息

从不同致病力的25株H9N2亚型毒株中选出6株(3#、18#,17#、20#、6#、10#)有代表性的毒株,利用RT-PCR技术扩增其HA基因,并对其序列进行分析比较。结果表明:(1)所扩增的HA基因全长1683bp,编码560个氨基酸.在HA1和HA2的氨基酸裂解位点上有三种模式:RSSR↓GLF、RLSR↓GLF和VSSR↓GLF三种模式,均无出现高致病性禽流感R-X-R/K-R模式,因此均为典型的低致病性毒株。7个受体结合位点3#、6#、、17#、18#为YWTNVLY,20#为YWTHELY,10#为YWTSELY.潜在糖基化位点除了3#和18#多出一个之外,其余均为8个。(2)6个毒株核苷酸同源性为82.9%～100%,氨基酸同源性为85.6%～99.8%。除了20#之外,其余5个毒株之间核苷酸与氨基酸的同源性都在93%以上。与国内代表株DK/HK/G9/97核苷酸的同源性分别为:96.6%、95.7%、93.3%、95.7%、94.7%、82.5%;氨基酸同派性分别为:96.4%、95.9%、94.9%、95.9%、95.1%、88.0%,表明亲源关系比较近.HA基因系统进化树表明:3#、6#、10#、17#、18#毒株属于欧亚分支,而20#属于北荚分支.(3)个别毒株受体结合位点,潜在糖基化位点、裂解位点也发生了变化。其中3#和18#毒株在145aa-147aa多了一个糖基化位点NGT,20#毒株在141aa-143aa和305aa-307aa两处糖基化位点分别为NVT和NIS,在191aa和198aa处受体结合位点为H和E,裂解位点VSSRGLF,与其它毒株不同。3#和18#所表现出较强的致病性可能与其在HA的头部(HA1)的A抗原位点上多了一个糖基化位点(145aa-147aa),改变了HA基因空间构型有关,空间构型的改变导致2A4、F6、H、B4单抗作用位点的变异或缺失并影响其较近的受体结合位点,从而改变该毒株的抗原性。3#和18#致病力性的增强是否与除HA以外的其它基因的改变有关尚需进一步探讨。该研究结果不仅在分子流行病学上丰富了H9N2基础理论,而且为我国政府制定禽流感扑灭政策有效地防制H9N2流行提供了科学的指导.

关键词：氨基酸糖基化位点序列分析

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感染马立克氏病病毒SPF鸡法氏囊蛋白质组学研究

感染马立克氏病病毒SPF鸡法氏囊蛋白质组学研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：秦爱建卢占军陈欣虹钱锟金文杰邵红霞王友扬州大学兽医学院

马立克氏病病毒(Marek's Disease Virus,MDV)是一种致肿瘤性疱疹病毒,能够引起内脏和皮肤肿瘤,侵染中枢神经系统,导致易感鸡瘫痪或死亡。马立克氏病病毒引起的马立克氏病(Marek's Disease,MD)也是一种目前人类能成功用疫苗进行... 详细信息

马立克氏病病毒(Marek's Disease Virus,MDV)是一种致肿瘤性疱疹病毒,能够引起内脏和皮肤肿瘤,侵染中枢神经系统,导致易感鸡瘫痪或死亡。马立克氏病病毒引起的马立克氏病(Marek's Disease,MD)也是一种目前人类能成功用疫苗进行预防的肿瘤性疾病,具有重要的比较生物学意义.研究马立克氏病病毒感染的鸡在感染不同阶段的蛋白质组学,将为认识淋巴瘤的形成提供更基础、更广泛的资料,并可能为肿瘤的治疗提供新的方法和新的思路.本研究用2-DE技术,对RB1B感染的SPF鸡和对照组鸡的法氏囊在不同感染阶段(4DPI、7DPI、14DPI和21DPI)的组织样品进行了蛋白质组分离,利用PDQuest 8.0.1软件对2-DE图谱进行分析,对其中的部分差异点进行质谱鉴定.结果平均每块胶能检测到800-900个蛋白点,四个阶段共有77个差异蛋白点,利用统计分析方法筛选出差异极显著且变化有规律的蛋白点29个,其中表现为持续上调的有13个,持续下调的有10个,先期上调后期下调的2个,先期下调后期上调的4个.对这些蛋白点进行切胶消化,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrixassociated laserdissociation/ionization time of flightmass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行鉴定分析。共鉴定出24个蛋白,它们是载脂蛋白AI(ApoAI)、白血病相关蛋白18(LAP18)、癌蛋白18(Op18)、Ras相关蛋白Rab11A、两种热休克蛋白27(HSP27)、BUB同系蛋白、含硫氧还蛋白域5(TXNDC5)、伴侣素蛋白(CCT)、β2-微球蛋白(BMG)、热休克蛋白40(HSP40)、磷酸甘露糖变位酶蛋白、慢骨骼肌肌钙蛋白T、蛋白质二硫化物异构酶A3前体、dUTP焦磷酸酶蛋白、D样不均一核核糖核蛋白、醛缩酶C蛋白、胰蛋白、LOC129607类似蛋白、含错配修复酶假定蛋白、含GTPase假定蛋白、两种含GATase1样结构域假定蛋白。另外,还发现了两个数据库中没有的禽源蛋白,这有待于更进一步的研究.通过数据库查询和生物信息学分析,证实这些已知的差异蛋白与新陈代谢相关的占19%,与蛋白质折叠相关的占15%,与细胞增殖和调亡相关的占15%,与信号转导相关的占22%,与免疫相关的占15%,与细胞骨架结构相关蛋白的占7%,其它占7%.在此基础上结合现有的文献报道,对这些差异蛋白质的功能、与病毒感染发病关系以及肿瘤相关方面进行分析讨论.

关键词：法氏囊马立克氏病病毒蛋白质组学质谱鉴定

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