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- 1 篇 公共管理
2 篇 教育学
- 2 篇 教育学
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主题

55 篇 原核表达
54 篇 序列分析
41 篇 分离鉴定
39 篇 猪繁殖与呼吸综合...
38 篇 基因克隆
35 篇 大肠杆菌
28 篇 临床诊断
24 篇 流行病学
22 篇 乳酸菌
21 篇 猪圆环病毒2型
21 篇 prrsv
21 篇 益生菌
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19 篇 新城疫病毒
18 篇 鉴别诊断
18 篇 病毒检测
17 篇 混合感染
17 篇 猪流感病毒
17 篇 克隆
17 篇 副猪嗜血杆菌

机构

63 篇 中国农业大学
59 篇 华南农业大学
54 篇 广西兽医研究所
48 篇 吉林大学
47 篇 军事医学科学院军...
40 篇 广西大学
40 篇 四川农业大学
40 篇 河南农业大学
36 篇 南京农业大学
36 篇 山东农业大学
34 篇 华中农业大学
30 篇 吉林农业大学
28 篇 河南省动物疫病预...
25 篇 河南科技大学
22 篇 云南农业大学
19 篇 湖南农业大学
18 篇 青岛农业大学
18 篇 山东省滨州畜牧兽...
16 篇 黑龙江八一农垦大...
15 篇 南京天邦生物科技...

作者

44 篇 金宁一
34 篇 李斌
34 篇 梁家幸
34 篇 赵武
32 篇 蒋玉雯
32 篇 黄安国
32 篇 姚瑞英
32 篇 梁保忠
29 篇 沈志强
29 篇 鲁会军
28 篇 丁壮
25 篇 潘康成
24 篇 黄伟坚
22 篇 吴志明
22 篇 王红宁
22 篇 闫若潜
22 篇 罗满林
21 篇 程相朝
20 篇 杨霞
20 篇 母连志

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1,247 篇 中文
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鸡MHC Ⅰα-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化

鸡MHC Ⅰα-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：刘光亮童铁钢王群肖一红孟庆文吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 中国农业科学院研究生院北京100081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001

MHC-肽四聚体技术是近年来建立的检测特异性CTL的有效方法.为了构建鸡MHC-肽四聚体,本试验克隆了莱航鸡MHC Ⅰα(B-Fα)全基因,利用软件分析了其信号肽序列,构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-B-F... 详细信息

MHC-肽四聚体技术是近年来建立的检测特异性CTL的有效方法.为了构建鸡MHC-肽四聚体,本试验克隆了莱航鸡MHC Ⅰα(B-Fα)全基因,利用软件分析了其信号肽序列,构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-B-Fα-BSP,在大肠杆菌中得到表达,并优化了表达条件.SDS-PAGE分析表明所得融合目的蛋白约为40kD,Western-blot分析结果显示该重组蛋白成功融合了6×His标签.在此基础上建立了变性状态下纯化包涵体的方法,获得了高纯度的B-Fα-BSP融合蛋白,为在体外构建鸡MHC-肽四聚体,探讨禽类细胞免疫反应机制奠定了基础.

关键词：鸡 MHC 基因克隆生物素化序列基因表达

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高致病性禽流感病毒人工感染小鼠组织病理学研究

高致病性禽流感病毒人工感染小鼠组织病理学研究

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：常爽丁壮杨松涛高玉伟王承宇邹啸环王铁城夏咸柱军事医学科学院军事兽医研究所长春130062 吉林大学畜牧兽医学院长春130062 吉林大学畜牧兽医学院长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所长春130062

本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7.36/0.05ml,经气管接种人工感染小鼠,对感染致死的小鼠和对照组小鼠,无菌采取脏器进行组织病理学观察和免疫组织化学染色... 详细信息

本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7.36/0.05ml,经气管接种人工感染小鼠,对感染致死的小鼠和对照组小鼠,无菌采取脏器进行组织病理学观察和免疫组织化学染色以及透射电镜观察.结果表明:剖检感染的死亡小鼠发现以肺脏的损害最为明显.病理组织学光镜观察,肺泡腔不同程度的缩小,胞腔内有少量蛋白样浆液渗出,肺泡间隔不同程度的增宽,肺内小血管及肺泡间隔的毛细血管扩张、淤血,支气管内充血.免疫组织化学染色发现,在支气管上皮细胞和较多的肺泡上皮细胞和浸润的单核细胞胞浆内可见到该病毒的抗原阳性染色颗粒.电镜超微结构观察,在小鼠肺泡扁平上皮细胞表面和肺泡腔中可见到短杆型和圆型的流感病毒样粒子.

关键词：高致病性禽流感病毒组织病理学免疫组织化学人工感染禽类传染病

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肉鸡HSP70基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

肉鸡HSP70基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：孙培明吴晓东赵永刚刘雨田王志亮鲍恩东南京农业大学动物医学院南京210095 临沂大学农林学院临沂276005 农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心青岛266032 南京农业大学动物医学院南京210095

利用RT-PCR方法扩增了肉鸡HSP70 mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy载体和原核表达载体pET-28a (+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70.以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP7... 详细信息

利用RT-PCR方法扩增了肉鸡HSP70 mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy载体和原核表达载体pET-28a (+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70.以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性.以纯化的重组肉鸡HSP70免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步通过免疫印迹分析筛选出1株高特异性的肉鸡HSP70单克隆抗体,命名为BH70-1.免疫组织化学结果显示,单克隆抗体BH70-1具有很好的组织亲和力,是一种理想的抗体.

关键词：热休克蛋白70 原核表达单克隆抗体肉鸡

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热应激对猪肠道结构及功能的影响

热应激对猪肠道结构及功能的影响

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：胡艳欣佘锐萍张发明肖冲郭延军刘风华中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院北京农学院

目的:观察热应激对猪肠道黏膜结构的损伤作用,以揭示热应激降低猪增重率的机理。方法:12头小型猪随机分成热应激组和常温对照组两组。人工气候室内,热应激组模拟夏季炎热气候,气温从26～39℃24h循环变温,在39℃时维持4h;常温对照组在22... 详细信息

目的:观察热应激对猪肠道黏膜结构的损伤作用,以揭示热应激降低猪增重率的机理。方法:12头小型猪随机分成热应激组和常温对照组两组。人工气候室内,热应激组模拟夏季炎热气候,气温从26～39℃24h循环变温,在39℃时维持4h;常温对照组在22℃下饲养。试验持续10d,分别于热应激前、热应激第5d和热应激结束时称重,计算各组的体重增长率。热应激10d后39℃高温持续期结束时剖杀试验猪,取其十二指肠、空肠及回肠进行固定、石蜡切片、染色,染色和扫描电镜HE．染色切片观察肠黏膜形态交化,并检测肠绒毛长度、宽度、隐窝深度,绒毛长度／隐窝深度:PAS染色切片检测肠黏膜上皮内杯状细胞数量的变化;用Gomori氏改良法染色切片观测肠黏膜碱性磷酸酶活性的变化。结果: 与对照组相比较,热应激组猪的体重增长率显著下降(P<0．05);热应激后猪肠黏膜结构严重损伤;各段肠的绒毛长度、宽度、隐窝深度,绒毛长度／隐窝深度均出现不同程度的降低, 其中回肠绒毛长度减少较为显著(P<0．05),各肠段绒毛宽度的减少均差异显著(P<0．05);肠黏膜上皮内杯状细胞数量增多,其中回肠差异显著(P<0．05);热应激组猪的肠黏膜上皮细胞表面的碱性磷酸酶活性明显降低。结论:热应激可引起猪肠道黏膜结构严重损伤,以致小肠的消化吸收功能严重受阻,这是造成猪热应激掉膘减重的主要机制之一。

关键词：猪热应激小肠结构杯状细胞 AKP

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喹乙醇致线粒体DNA基因损伤的的SSCP检测

喹乙醇致线粒体DNA基因损伤的的SSCP检测

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：王德成高洪范泉水云南农业大学动物科技学院昆明650201 成都军区联勤部军事医学研究所昆明650032

为了研究喹乙醇对线粒体DNA基因的致突变效应,将72只一日龄的健康艾维因商品代肉鸡随机分为2组(36只/组):Ⅰ组(对照组)和Ⅱ组(喹乙醇处理组),两组都饲喂不含喹乙醇的饲料,并按标准鸡场的程序进行免疫和管理.处理组按照14.48mg/kg体重灌... 详细信息

为了研究喹乙醇对线粒体DNA基因的致突变效应,将72只一日龄的健康艾维因商品代肉鸡随机分为2组(36只/组):Ⅰ组(对照组)和Ⅱ组(喹乙醇处理组),两组都饲喂不含喹乙醇的饲料,并按标准鸡场的程序进行免疫和管理.处理组按照14.48mg/kg体重灌服喹乙醇,每周按体重变化改变给药量,同时每次改变给药量前剖杀试验动物.运用改进的碱变性法提取肝脏的mtDNA,设计4对引物扩增mtDNA的tRNALeu(UUR)、tRNAIle、tRNALy8、ATPase8四个基因,运用SSCP(single stranded conformation polymorphism)技术对扩增产物进行突变分析.同时运用分光光度计法对血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量进行测定.结果表明:喹乙醇处理vi组tRNALeu(UUR)有突变发生,序列测定结果表明该突变为4007位的C→A点突变,其它各组的tRNALeu(UUR)基因无任何突变发生.MDA含量测定表明Ⅱ组从第二周开始明显高于Ⅰ组(P＜0.05或P＜0.01),说明机体内有异常水平的FRs产生.该结果提示喹乙醇中毒可以导致mtDNA tRNALeu(UUR)基因突变.

关键词：喹乙醇 mtDNA 基因突变线粒体DNA基因突变效应

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果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究

果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：肖一红孟庆文尹训南关云涛刘永刚李昌文王牟平孔宪刚吴东来中国农业科学院研究生院北京100081 中国农业科学院研究生院北京100081 中国农业科学院研究生院北京100081

目的:果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究.方法:在人源SARS-CoV分离株BJ01(有29个核苷酸的缺失序列)和GD01(无29个核苷酸的缺失序列)实验性感染果子狸的基础上,对其肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾、气管、大脑、胰腺、性腺、胃、心组... 详细信息

目的:果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究.方法:在人源SARS-CoV分离株BJ01(有29个核苷酸的缺失序列)和GD01(无29个核苷酸的缺失序列)实验性感染果子狸的基础上,对其肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾、气管、大脑、胰腺、性腺、胃、心组织进行病理组织学观察,同时用原位杂交技术(in situ hybridization,ISH)方法对SARS-CoV在组织器官中的分布进行检测.结果:攻毒后不同时期,肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾和大脑有不同程度的病理变化,胰腺、性腺、胃、心无病理变化,并在肺、小肠、大脑中检测到了SARS-CoV基因,在肝、脾、肾、气管、胰腺、性腺、胃、心中未检到,与在SARS患者检测结果基本相符.结论:果子狸实验性感染SARS-CoV可导致与人类相似的病理学变化和病原分布,表明果子狸可以作为评价SARS-CoV疫苗及治疗药物的动物模型.

关键词：果子狸病理变化 SARS-CoV 病理组织学动物模型病原分布

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鸡包涵体肝炎过程中血液免疫细胞变化规律的研究

鸡包涵体肝炎过程中血液免疫细胞变化规律的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会

作者：王纯洁敖日格乐斯日古楞贾德刚赵怀平内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古农业大学动物科学与医学学院

为了研究鸡包涵体肝炎(IBH)过程中血液免疫细胞变化规律,FAV-8型禽腺病毒接种2日龄SPF雏鸡,分别在攻毒后1,3,5,7,9,12,15,20,25,30天(dpi),取攻毒组和对照组各10只,心脏采血致死,分离血液白细胞进行CD3、CD4、CD8、Bu-1、 K1、Ia、TCR... 详细信息

为了研究鸡包涵体肝炎(IBH)过程中血液免疫细胞变化规律,FAV-8型禽腺病毒接种2日龄SPF雏鸡,分别在攻毒后1,3,5,7,9,12,15,20,25,30天(dpi),取攻毒组和对照组各10只,心脏采血致死,分离血液白细胞进行CD3、CD4、CD8、Bu-1、 K1、Ia、TCRγδ、CD18阳性免疫细胞的流式细胞仪检测。结果:(1)血液Ia+M(?)在1、9 和20 dpi显著高于对照,3-5和30 dpi显著低于对照;K1在7到9 dpi、15到20 dpi和 30 dDi显著高于对照,1、12和25 dpi显著低于对照;MHC I+M(?)只有在第3天显著高于对照,第1、5-7、15和30天都显著低于对照。血液单核细胞早期凋亡,只在病变高峰期第5 天显著高于对照;而晚期凋亡即坏死,攻毒组均显著高于对照,说明单核细胞与病毒作用后不仅有凋亡,而且坏死更明显。(2)血液Bu-1a+淋巴细胞只有在9到15 dpi显著高于对照, 1到3和7、20 dpi显著低于对照,而5和25dpi无显著变化。(4)CD8+T细胞受损最重, CD3-T和CD4+T细胞虽有损伤,但显著或不显著高于对照的多些。CD3+T淋巴细胞12 dpi极显著高于对照,1、30 dpi极显著和显著低于对照;血液TCRγδ+T细胞仅在7 dpi显著低于对照。以上结果表明,IBH患病鸡反复发病并呈现不完全恢复是因为淋巴细胞和单核细胞的大量损伤和凋亡所致。

关键词：鸡包涵体肝炎淋巴细胞单核细胞流式细胞术凋亡

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应用微卫星标记进行鸡马立克肿瘤分子诊断的研究初报

应用微卫星标记进行鸡马立克肿瘤分子诊断的研究初报

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：夏继飞乔丽平尚月丽姚大伟杨德吉南京农业大学动物医学院南京210095

微卫星标记(microsatellite marker)是真核生物基因组上2～6碱基的串联重复序列,如(CA)n、(CG)n等.微卫星突变率很低,按孟德尔共显性方式遗传.微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是指与正常组织相比,肿瘤中某一微卫星由于... 详细信息

微卫星标记(microsatellite marker)是真核生物基因组上2～6碱基的串联重复序列,如(CA)n、(CG)n等.微卫星突变率很低,按孟德尔共显性方式遗传.微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)是指与正常组织相比,肿瘤中某一微卫星由于重复单位的插入或缺失而造成的微卫星长度的任何改变,出现新的微卫星等位基因现象.MSI还有另一种表现,称杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),即来自父方或母方的等位基因之一,在复制过程中由于种种原因发生缺失.自1993年Thibodeau等在遗传性非息肉性结直肠癌中,首次发现MSI以来,人类胃癌、食管癌、肺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、白血病等肿瘤中均发现存在MSI. 本文根据微卫星侧翼序列设计并合成引物,用PCR扩增、电泳技术,可以分析微卫星发生的变化,即MSI和LOH.本实验拟通过对鸡马立克肿瘤发生后,2号染色体上部分微卫星位点的稳定性进行研究,旨在了解2号染色体是否存在与马立克肿瘤发生相关的宿主基因组改变,为分子诊断提供基础资料.

关键词：微卫星标记鸡马立克肿瘤分子诊断

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利用抑制性差减杂交筛选禽流感病毒感染相关基因

利用抑制性差减杂交筛选禽流感病毒感染相关基因

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：张万坡程国富毕丁仁胡薛英谷长勤华中农业大学动物医学院武汉430070

利用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建了禽流感病毒感染和正常对照鸡肾组织差异表达的双向差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选到包括干扰素刺激基因(ISG12)、淋巴细胞抗原复合体基因(LY6E)、基质Gla... 详细信息

利用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建了禽流感病毒感染和正常对照鸡肾组织差异表达的双向差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选到包括干扰素刺激基因(ISG12)、淋巴细胞抗原复合体基因(LY6E)、基质Gla蛋白基因(MGP)、溶菌酶基因、IFN诱导的跨膜蛋白基因及一个没有任何同源信息的EST等6个表达上调基因;KIAA1259、谷光苷肽转移酶基因(GST)、酒精脱氢酶基因(ADHl)、突触结合蛋白基因(SytVX)、葡萄糖6磷酸酶催化亚基基因(G6PC)、钠/二羧酸转运蛋白基因(SDCT)、MGC4504基因、MGC69686基因和一个没有任何同源信息的EST等9个表达下调基因.通过半定量RT-PCR和Northern杂交对其中8个基因的差异表达进行了验证,并利用Northern杂交对干扰素相关基因ISG12在鸡的不同组织中的表达进行了分析.试验结果初步阐明了高致病性禽流感病毒致病机制和鸡的抗病毒机制.

关键词：禽流感病毒抑制性差减杂交基因差异表达致病机制抗病毒机制

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猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化

猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议

作者：肖一红刘光亮童铁钢王群孟庆文吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨150001 中国农业科学院研究生院北京100081

目的:构建猪β2-微球蛋白(Sβ2m)基因的原核表达载体,使其能在大肠杆菌中得到高效表达并能纯化,为构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.方法:采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中扩增出去信号肽的S2m基因,克隆至pET-28a(+)高效表... 详细信息

目的:构建猪β2-微球蛋白(Sβ2m)基因的原核表达载体,使其能在大肠杆菌中得到高效表达并能纯化,为构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.方法:采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中扩增出去信号肽的S2m基因,克隆至pET-28a(+)高效表达载体后进行化学诱导表达,利用Ni2+NTA鏊合物树脂柱对表达产物进行了纯化,用SDS-PAGE和Western blotting法对表达产物进行鉴定.结果:成功构建了pET-Sβ2m表达载体,表达产物以包涵体的形式存在,分别占全菌和不溶性蛋白的40.4％和91.7％,并在变性条件下对包涵体中的重组Sβ2m进行了纯化,获得了高纯度的Sβ2m,结论:成功表达、纯化了Sβ2m,为进一步利用亲和素在体外构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.

关键词：猪 β2微球蛋白基因大肠埃希氏菌原核表达载体纯化工艺

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