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作者

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小反刍兽疫活疫苗耐热冻干保护剂的研究

小反刍兽疫活疫苗耐热冻干保护剂的研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：王玉红支海兵黄炯李黎新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐 830013 中国兽医药品监察所北京 100081 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐 830013 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐 830000

本文对小反刍兽疫活疫苗传统冻干保护剂与耐热冻干保护剂对疫苗毒价影响进行比较，同时还用进口冷水鱼明胶与国产明胶;酶解酪蛋白与水解乳蛋白的四种耐热保护剂组合对毒价的影响进行探讨比较，结果显示：耐热冻干保护剂保护效果优于传... 详细信息

本文对小反刍兽疫活疫苗传统冻干保护剂与耐热冻干保护剂对疫苗毒价影响进行比较，同时还用进口冷水鱼明胶与国产明胶;酶解酪蛋白与水解乳蛋白的四种耐热保护剂组合对毒价的影响进行探讨比较，结果显示：耐热冻干保护剂保护效果优于传统冻干保护剂;而耐热冻干保护剂四种组合中进口明胶+酶解酪蛋白组的毒价最高，国产明胶+酶解酪胨蛋白与进口明胶+水解乳蛋白次之，三组差异不显著(P>0.05)。从成本考虑，可以用国产明胶代替进口明胶。两批疫苗经耐老化试验(37℃存放5d，10d;常温放置两个月)，其物理性状仍保持良好，放置前后疫苗每头份病毒含量差异在0.2—0.5个滴度。且均≥103。0TCID50/头份，具有良好的热稳定性。四批疫苗的耐老化与疫苗剩余水分之间的关系显示：疫苗的剩余水分偏高，将对耐热冻干保护剂疫苗的热稳定性及耐老化性能产生较大的影响。

关键词：小反刍兽疫活疫苗耐热冻干保护剂病毒含量

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细胞病变法与免疫捕获ELISA法测定小反刍兽疫活疫苗TCID50结果的比较

细胞病变法与免疫捕获ELISA法测定小反刍兽疫活疫苗TCID50结果的...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王玉红支海兵黄炯李黎薛英刘宏贺笋朱刚李延涛王红巧新疆天康畜牧生物技术股份有限公司中国兽医药品监察所新疆畜牧科学院

参照中国兽医药品监察所提出的小反刍兽疫活疫苗制造及检验试行规程(草案),对新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的16批小反刍兽疫弱毒冻干活疫苗进行病毒含量测定,通过观察细胞病变(CPE)及免疫捕获ELISA双重检验,每头份(1ml)病毒含... 详细信息

参照中国兽医药品监察所提出的小反刍兽疫活疫苗制造及检验试行规程(草案),对新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的16批小反刍兽疫弱毒冻干活疫苗进行病毒含量测定,通过观察细胞病变(CPE)及免疫捕获ELISA双重检验,每头份(1ml)病毒含量均高于103TCID50,达到规程要求。在疫苗检验过程中,考虑规程中检验程序比较麻烦,历时较长(在试验比较顺利的情况下,一批苗最终得到结果至少花费8天),并且还受到细胞质量等因素的影响,同时还对每批成品疫苗直接进行捕获ELISA(病毒不接种细胞)测定,对不同时期的病毒细胞液也同时作了大量的测定,以期从中找到一定的相关性,从而达到简化检验步骤,缩短检验时间的目的。结果显示:16个冻干疫苗样品,每个样品重复两次,两组数据的相关性r=0.9213;若再加16个病毒液样品,两组数据的相关性r=0.8751,这可能由于病毒液中有时可能有细胞,导致取样没有成品疫苗均匀的原因。通过两组数据的比较,可以认为直接用捕获ELISA法对成品苗检测是比较可行可靠的。

关键词：细胞病变免疫捕获ELISA 小反刍兽疫弱毒活疫苗 TCID50

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2003～2008年湖南省猪圆环病毒2型分子流行研究

2003～2008年湖南省猪圆环病毒2型分子流行研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘道新邱立新范仲鑫唐小明黄建龙邱伯根鲁杏华张志吴发兴何世成谈志祥郭成玲张燕霞湖南省动物疫病预防控制中心湖南省兽医局中国动物卫生与流行病学中心湖南省动物卫生监督所

从2003年～2008年湖南省疑似PMWS病死猪组织中分离获得7株猪2型圆环病毒(PCV2),分别命名为：HuN-03、HuN-05、HuN-0601,HuN-0602、HuN-0701 HuN-0702、HuN-08。用PCR的方法对这7株病毒进行进行全基因扩增及测序分析,结果显示,7株PCV2分... 详细信息

从2003年～2008年湖南省疑似PMWS病死猪组织中分离获得7株猪2型圆环病毒(PCV2),分别命名为：HuN-03、HuN-05、HuN-0601,HuN-0602、HuN-0701 HuN-0702、HuN-08。用PCR的方法对这7株病毒进行进行全基因扩增及测序分析,结果显示,7株PCV2分离株基因组全长均为1767nt,有典型的PCV2基因组结构;病毒毒株间同源性在94.9-99.3％之间,与Genbank中的13株PCV2基因组同源性在93.6-99.7％之间,与2株PCV1亲缘关系较远,同源性只有75.7-76.5％;在遗传演化关系上,7株分离株分属4个进化方向,HuN-0601可能是外来毒株,HuN-03在一个独立的进化方向内,可能是其它5株病毒的母源性毒株,其它5株病毒可能代表了两个遗传种群,一个是国际流行稳定毒株,一个是国内地域性流行毒株。

关键词：猪2型圆环病毒分子流行病学遗传演化亲缘关系全基因扩增测序分析

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致病性猪源肠球菌16S rDNA-RFLP研究及系统进化分析

致病性猪源肠球菌16S rDNA-RFLP研究及系统进化分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：杨霞陈陆常洪涛王新卫刘红英王川庆河南农业大学牧医工程学院

为探讨分离之河南滑县、武陟等12个地域的猪源肠球菌的亲缘关系,采用对其16S rDNA基因的RFLP分析、序列分析、及系统进化树的构建等方法,对这12株疑似猪源肠球菌进行了研究;结果显示:12株分离株均与肠球菌同源性最高,同源率达98.1%-100%... 详细信息

为探讨分离之河南滑县、武陟等12个地域的猪源肠球菌的亲缘关系,采用对其16S rDNA基因的RFLP分析、序列分析、及系统进化树的构建等方法,对这12株疑似猪源肠球菌进行了研究;结果显示:12株分离株均与肠球菌同源性最高,同源率达98.1%-100%;而与猪链球菌同源率最高才达85.5%,且进化树中,12株菌株均位居与猪链球菌并列的肠球菌主干分支中。HandⅢ,XbaⅠ,ECORⅠ分别对这12株球菌的16S rDNA-RFLP分析发现,它们在该片段上有限制性位点,但没有产生限制性片段长度多态性;而HinfI单酶切结果出现了限制性片段长度多态性,且12株分离株可分为两大rDNA图谱类群,与实际测序分析的酶切位点相一致,且找到鉴定肠球菌的一350bp的分子标记.说明所分离这12株球菌均是肠球菌,且不同地理种群已出现分化.

关键词：致病性肠球菌 RFLP 同源性进化树

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猪传染性胃肠炎和流行性腹泻病毒的分离与鉴定

猪传染性胃肠炎和流行性腹泻病毒的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王川庆陈陆杨霞董加才常洪涛王新卫河南农业大学禽病研究所

在临床综合诊断和PCR确诊的基础上,通过细胞培养技术,作者从7个发病猪场的病料中分离到TGE和PED混合感染的病毒株(HN-TGE-PED)。细胞培养结果表明,在PK-15细胞、Vero细胞上的多次传代和蚀斑克隆不能将二者分离开,两种病毒始终处于混合... 详细信息

在临床综合诊断和PCR确诊的基础上,通过细胞培养技术,作者从7个发病猪场的病料中分离到TGE和PED混合感染的病毒株(HN-TGE-PED)。细胞培养结果表明,在PK-15细胞、Vero细胞上的多次传代和蚀斑克隆不能将二者分离开,两种病毒始终处于混合感染状态。随后分别对混合分离物HN-TGE-PED中的TGEV部分S基因和PEDV M基因进行了克隆、测序、分析,结果表明TGEV S基因同猪胃-流二联弱毒活疫苗株之间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和97.6%,在进化关系中与四川分离株(DQ443743)之间的距离最近;PEDV M基因同猪胃-流二联弱毒活疫苗株之间的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和97.0%,在进化关系中与同猪胃-流二联弱毒活疫苗株之间距离最近。

关键词：同源性氨基酸弱毒活疫苗猪传染性胃肠炎流行性腹泻病毒分离与鉴定

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三株新城疫病毒分离株F基因的克隆与序列分析

三株新城疫病毒分离株F基因的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：袁萍闫丽辉成进汪萍柏庆李延涛新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐 830011 哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨 150001 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐 830011 新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐 830000

本试验利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白基因的全长核苷酸，再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定，获得阳性重组质粒后，进行序列测定并推导出其... 详细信息

本试验利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白基因的全长核苷酸，再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定，获得阳性重组质粒后，进行序列测定并推导出其氨基酸序列，同时进行了分析和比较。序列分析结果表明，所获得的3株分离株F基因完整的开放阅读框长度为1662bp，共编码F蛋白的553个氨基酸;3个毒株之间的核苷酸序列同源性为88.0％～90.6％;与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有85.3％～91.6％。三者F基因的裂解位点均为112R-R-Q-K/R-R-F117，符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征。以1～374bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明：QH3株NDV为基因Ⅷ型;A4株NDV为基因Ⅵ型;HLI株NDV为基因Ⅸ型。

关键词：新城疫病毒 F基因基因克隆序列分析

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不同PRRSV毒株间ORF1a基因密码子偏爱性差异分析

不同PRRSV毒株间ORF1a基因密码子偏爱性差异分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：招丽婵邓雨修王东东苏润环李春梅徐贵娟宋延华广东温氏食品集团有限公司温氏研究院

运用Codon W、ClustalX,Tree View软件及EMBOSS(The European Molecular Biology Open Software Suite)、CIMMiner在线分析软件对选取的29株PRRSV ORF1α基因进行密码子偏爱性聚类分析.CAI、CBI、Fop、Nc、GC3s和GC含量、基因长度等相关性分析显示PRRSV各毒株编码的ORF1α基因密码子偏爱性各有差异,其中Lelystadvirus、LV4.2.1、VR-2332、RespPRRS MLV与国内分离的高致病性PRRSV变异株之间差异较大.密码子使用概率聚类分析表明CC-1、NVSL-97-7895、CH-1a、RespPRRS MLV、LV4.2.1、Lelystad virus与高致病性PRRSV变异株距离较远,而国内分离株相互间的聚类距离则较接近,此结果与基于氨基酸序列比对构建的系统进化树图谱基本一致.由此可见,PRRSV病毒ORF1α基因密码子使用偏爱性的差别与病毒的遗传多样性密切相关.

关键词： PRRSV ORF1a 密码子偏爱性聚类分析生物信息学

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猪细小病毒自然弱毒N株(PPV-N株)VP1基因的扩增与生物信息学分析

猪细小病毒自然弱毒N株(PPV-N株)VP1基因的扩增与生物信息学分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：赵武李斌梁家幸梁保忠白安斌姚瑞英黄安国何颖蒋玉雯广西兽医研究所广西南宁 530001

对猪细小病毒自然弱毒PPV-N株VP1基因扩增及测序,利用生物信息学技术预测VP1蛋白的二级结构与B细胞抗原表位以及分析该蛋白的氨基酸差异位点及密码子偏爱性。结果表明,PPV-N株VP1基因与弱毒参考毒株NADL-2VP1基因同源性最高,亲缘关系最... 详细信息

对猪细小病毒自然弱毒PPV-N株VP1基因扩增及测序,利用生物信息学技术预测VP1蛋白的二级结构与B细胞抗原表位以及分析该蛋白的氨基酸差异位点及密码子偏爱性。结果表明,PPV-N株VP1基因与弱毒参考毒株NADL-2VP1基因同源性最高,亲缘关系最近,为PPV-N株和NADL-2株同属弱毒株提供了分子生物学依据。PPV-N株VP1蛋白的二级结构较为复杂,以β-折叠为主,并有较多的转角和无规则卷曲区域,在序列的20-56,61-80,86-130,136-188区域为B细胞抗原表位的优势区域。PPV强、弱毒株VP1蛋白存在5个氨基酸差异位点(T-365-I,G-528-D,Q-533-H,P-586-S,K-715-R),这些位点处氨基酸残基抗原性与毒力成正相关。PPV-N株VP1蛋白在A、C、E、G、H、I、K、N、Q、R、S、T、V和Y氨基酸于密码子选择上存在一定的偏爱性。

关键词：猪细小病毒 PPV-N株 VP1基因扩增反应生物信息学分析亲缘关系

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兔病毒性出血症病毒次结构蛋白(VP12)的细胞内定位研究

兔病毒性出血症病毒次结构蛋白(VP12)的细胞内定位研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：陈柳刘光清倪征余斌云涛华炯钢李双茂浙江省农业科学院农业部病毒学与生物技术重点实验室

目的)VP12是兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)一种次要结构蛋白。本文旨在构建VP12与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,进而利用它研究VP12在细胞内的定位情况。(方法)首先在大肠杆菌中表达了GST-VP12融合蛋白,然后... 详细信息

目的)VP12是兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)一种次要结构蛋白。本文旨在构建VP12与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,进而利用它研究VP12在细胞内的定位情况。(方法)首先在大肠杆菌中表达了GST-VP12融合蛋白,然后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗VP12的抗血清。再利用该抗体对转染pEGFP-VP12的BHK-21细胞进行检测,以研究VP12蛋白在细胞内的定位情况.(结果)结果表明,pEGFP-VP12转染BHK-21细胞后,不仅VP12蛋白得到了成功表达,而且通过检测偶联的绿色荧光蛋白可判断Vp12在细胞内的定位。检测结果显示,VP12蛋白主要分布于BHK-21细胞的细胞质.(结论)成功构建了VP12与绿色荧光蛋白融合的表达载体,并在真核细胞内实现了表达,通过检测荧光蛋白,发现VP12主要在细胞质内表达并分布,本研究为深入探讨VP12的生物学功能奠定了基础。

关键词：兔出血症病毒 VP12 次级结构蛋白细胞内定位

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猪链球菌1、7、9型多重PCR诊断方法的建立及初步应用

猪链球菌1、7、9型多重PCR诊断方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张健闫若潜吴志明盛敏王英华拜廷阳河南省动物疫病预防控制中心河南郑州 450008 周口市动物疫病预防控制中心河南周口 466000

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)1、7、9型(SS1、SS7、SS9)的快速鉴别诊断和分型方法，本研究根据GenBank已登录的SS1型型特异性的CPSll基因、7型CPS7H基因、9型CPS9H基因设计引物，以标准SS1、SS7、SS9株基因组DNA为模板，建... 详细信息

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)1、7、9型(SS1、SS7、SS9)的快速鉴别诊断和分型方法，本研究根据GenBank已登录的SS1型型特异性的CPSll基因、7型CPS7H基因、9型CPS9H基因设计引物，以标准SS1、SS7、SS9株基因组DNA为模板，建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法，并进行了特异性、敏感性和重复性试验：利用所建立的多重PCR检测方法对11份猪链球菌的临床分离纯化菌株进行了的应用检测。结果表明成功SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法，该方法的检测灵敏度可达100个CFU，特异性和重复性好;利用多重PCR检测方法对11份猪链球菌临床分离纯化菌株检测结果表明：11份样品中有3份样品为SS9阳性、2份样品为SS71、份样品为SS1阳性阳性。本研究为临床上SS1、SS7、SS9的快速鉴别诊断提供了一种新方法。

关键词：猪链球菌菌种鉴定血清学分型临床诊断多重PCR检测

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