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作者

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34 篇 梁家幸
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32 篇 姚瑞英
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29 篇 鲁会军
28 篇 丁壮
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22 篇 王红宁
22 篇 闫若潜
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21 篇 程相朝
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20 篇 母连志

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非特异性转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

非特异性转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘艳田立志张翔林洋单春乔涂岳江国托大连三仪动物药品有限公司生物工程研究所黑龙江省牡丹江农垦分局畜牧水产局

目的研究采用淋巴细胞体外培养方法制备的非特异性转移因子的理化性质及不同浓度非特异性转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响.方法通过福林酚测定法检测制备的非特异性转移因子中多肽的含量,采用核糖含量测定测定法检测其核糖的含量.使... 详细信息

目的研究采用淋巴细胞体外培养方法制备的非特异性转移因子的理化性质及不同浓度非特异性转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响.方法通过福林酚测定法检测制备的非特异性转移因子中多肽的含量,采用核糖含量测定测定法检测其核糖的含量.使用GENMED—MTS细胞繁殖定量检测试剂盒测定不同浓度的非特异性转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响。结果本研究所制得的非特异性转移因子具有和牛、羊、鸡等脾源转移因子相似的理化性质,其多肽含量为0.81mg/mL,核糖含量为17.96μg/mL,同时浓度在0.01～0.43 mg/mL的范围内非特异性转移因子还能较显著刺激犬淋巴细胞的增殖.结论本研究所采用的制备方法不但降低了产品研制的成本,而且避免了大量传染病水平传播的可能.同时通过细胞免疫方面考察了非特异性转移因子生物学功能,以期为探讨转移因子的作用机制及其临床应用提供可供参考的实验依据.

关键词：非特异性转移因子多肽核酸犬淋巴细胞增殖

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山东省禽源大肠杆菌抗喹诺酮类药物的耐药性检测及耐药机制的分析

山东省禽源大肠杆菌抗喹诺酮类药物的耐药性检测及耐药机制的分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李莎莎孙亚妮辛英豪孙慧姜世金山东农业大学动物医学院

本研究对2002年至2009年期间自山东省不同地区分离的214株禽源大肠杆菌进行了"O"抗原血清型鉴定,通过普通药物敏感试验检测分离菌株对6种喹诺酮类药物的耐药情况,采用微量肉汤稀释法对所分离的菌株进行喹诺酮类药物乳酸环丙... 详细信息

本研究对2002年至2009年期间自山东省不同地区分离的214株禽源大肠杆菌进行了"O"抗原血清型鉴定,通过普通药物敏感试验检测分离菌株对6种喹诺酮类药物的耐药情况,采用微量肉汤稀释法对所分离的菌株进行喹诺酮类药物乳酸环丙沙星和乳酸诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的测定,选取不同MIC浓度的大肠杆菌,应用PCR方法扩增喹诺酮耐药决定区(QRDR)的gyrA基因和parC基因并进行克隆测序.实验结果表明分离的菌株所属14种血清型,其中O78、O35、O88和O2为优势血清型.普通的药物敏感试验和最低抑菌浓度(MIC)说明喹诺酮类药物的耐药性已经相当严重,并且随着年份呈现上升趋势.47株不同MIC浓度的禽源大肠杆菌在gyrA亚基在84位和87位发生的氨基酸替代;parC亚基在80位和84位氨基酸替代,而且gyrA和parC突变位点的数量与菌株对喹诺酮类药物的耐药水平呈正相关.

关键词：禽源大肠杆菌血清型喹诺酮类药物耐药性

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IBV N基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡免疫效应的研究

IBV N基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡免疫效应的研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：郭自成王红宁阳泰高荣汪雪李玉玲管中斌四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”四川成都望江路29号 610064

为了研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)Nucleoprotein基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡的免疫效应，本实验将携带禽传染性支气管炎病毒N基因的pvaxl-N重组质粒通过肌肉注射对7日龄雏鸡进行免疫，并在2周后用灭活疫苗进行加强免疫。测... 详细信息

为了研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)Nucleoprotein基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡的免疫效应，本实验将携带禽传染性支气管炎病毒N基因的pvaxl-N重组质粒通过肌肉注射对7日龄雏鸡进行免疫，并在2周后用灭活疫苗进行加强免疫。测定特异性IgG抗体，血清中和抗体，CD4+，CD8+T细胞含量为免疫指标，并进行攻毒实验。结果表明，采用DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫，在加强免疫后4周CD4+、CD8+T细胞含量显著升高(P<0.05)，特异性IgG抗体，血清中和抗体与灭活疫苗组无显著差异(P>0.05)。用剂量为103EID50的IBV M41株病毒攻毒，保护率达86.7％，高于单独免疫灭活疫苗组(80％)和单独免疫DNA疫苗组(66.7％)。可见，采用IBV N基因DNA疫苗首免，灭活疫苗加强免疫具免疫增强效果。

关键词：鸡传染性支气管炎 IBV病毒 N基因 DNA疫苗灭活疫苗免疫效应

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兔出血症病毒次结构蛋白(VP2)的生物学功能研究

兔出血症病毒次结构蛋白(VP2)的生物学功能研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘光清倪征陈柳中国农业科学院上海兽医研究所上海 2000241 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州 310021

兔出血症病毒(RHDV)的基因组仅编码两个结构蛋白，其中一种为衣壳蛋白( VP60)，另一种为次结构蛋白(VP2)。目前，对衣壳蛋白的生物学功能已基本清楚。但是，关于次结构蛋白的生物学功能还不是很清楚。为此，本研究利用反向遗传学技术结... 详细信息

兔出血症病毒(RHDV)的基因组仅编码两个结构蛋白，其中一种为衣壳蛋白( VP60)，另一种为次结构蛋白(VP2)。目前，对衣壳蛋白的生物学功能已基本清楚。但是，关于次结构蛋白的生物学功能还不是很清楚。为此，本研究利用反向遗传学技术结合体外表达技术，系统研究了该蛋白的生物学功能。研究结果表明，RHDV的基因组缺失次结构蛋白(VP2)后，病毒的侵染性有所降低，但是病毒基因组的复制能力和衣壳蛋白的表达水平有所提高，说明VP2不是维持RHDV侵染性所必需的蛋白。体外研究也表明，VP2的缺失并不影响病毒样颗粒的组装，提示该蛋白不是组成病毒衣壳的组成成分。通过对接种VP2的细胞进行DAPI染色和DNA片断分析研究，发现VP2具有诱导宿主细胞凋亡的功能。由此，可以推测VP2可能在RHDV的致病机制过程发挥重要作用。

关键词：兔出血症病毒次结构蛋白反向遗传学体外表达生物学功能致病机制

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猪传染性胃肠炎病毒M蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张小波左玉柱刘媛范京惠李潭清李建辉孙彦新河北农业大学动物科技学院河北保定 071001

本研究根据GenBank发表的TGEV TS株全基因核苷酸序列，设计了1对用以扩增TGEV主要结构蛋白M基因的特异性引物。利用RT-PCR方法扩增TGEV HB06株M基因，并将其克隆到pMD18-T载体中，进行EcoRI和XhoI双酶切鉴定，将获得的M基因片段定向亚... 详细信息

本研究根据GenBank发表的TGEV TS株全基因核苷酸序列，设计了1对用以扩增TGEV主要结构蛋白M基因的特异性引物。利用RT-PCR方法扩增TGEV HB06株M基因，并将其克隆到pMD18-T载体中，进行EcoRI和XhoI双酶切鉴定，将获得的M基因片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中，构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-M，转化Rossetta(DE3)感受态细胞，用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白。结果表明，从TGEV HB06株扩增得到了M基因片段，该基因全长789bp，编码262个氨基酸，与TS株、Purdue-115株、TFI株和H16株的M基因同源性分别为97％、99％，96％和97％。SDS-PAGE电泳结果显示，重组表达质粒获得了约56Kda的目的带，其中M蛋白的分子质量约为30kDa，与预期的结果一致，并且表达产物主要以包涵体的形式存在;Sestern-blot分析表明，表达的M重组蛋白可以被免源抗TGEV阳性血清识别;试验结果证明，TGEV的M基因高度保守，在大肠杆菌表达系统内成功表达了TGEVM蛋白。

关键词：猪传染性胃肠炎 TGEV病毒 M蛋白基因克隆原核表达

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细胞病变法与免疫捕获ELISA法测定小反刍兽疫活疫苗TCID50结果的比较

细胞病变法与免疫捕获ELISA法测定小反刍兽疫活疫苗TCID50结果的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：王玉红王红巧支海兵黄炯李黎薛英刘宏贺笋朱刚李延涛新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐 830000 中国兽医药品监察所北京 100081 新疆天康畜牧生物技术股份有限公司乌鲁木齐 830000 新疆畜牧科学院乌鲁木齐 830000

参照中国兽医药品监察所提出的小反刍兽疫活疫苗制造及检验试行规程(草案)，对新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的16批小反刍兽疫弱毒冻干活疫苗进行病毒含量测定，通过观察细胞病变(CPE)及免疫捕获ELISA双重检验，每头份(1ml)病... 详细信息

参照中国兽医药品监察所提出的小反刍兽疫活疫苗制造及检验试行规程(草案)，对新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产的16批小反刍兽疫弱毒冻干活疫苗进行病毒含量测定，通过观察细胞病变(CPE)及免疫捕获ELISA双重检验，每头份(1ml)病毒含量均高于103TCID50，达到规程要求。在疫苗检验过程中，考虑规程中检验程序比较麻烦，历时较长(在试验比较顺利的情况下，一批苗最终得到结果至少花费8天)，并且还受到细胞质量等因素的影响，同时还对每批成品疫苗直接进行捕获ELISA(病毒不接种细胞)测定，对不同时期的病毒细胞液也同时作了大量的测定，以期从中找到一定的相关性，从而达到简化检验步骤，缩短检验时间的目的。结果显示：16个冻干疫苗样品，每个样品重复两次，两组数据的相关性r=0.9213;若再加16个病毒液样品，两组数据的相关性r=0.8751，这可能由于病毒液中有时可能有细胞，导致取样没有成品疫苗均匀的原因。通过两组数据的比较，可以认为直接用捕获ELISA法对成品苗检测是比较可行可靠的。

关键词：小反刍兽疫弱毒活疫苗细胞病变法免疫捕获ELISA法病毒含量

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新型鸭肝炎病毒GD株基因组序列分析

新型鸭肝炎病毒GD株基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：袁率珍李虹姜畔张兵范小舟范书才中国兽医药品监察所北京 100081 四川大学华西公共卫生学院成都 610041

本研究对1999年从我国广东地区分离到的一株与1型鸭肝炎病毒无抗原交叉性的新型鸭肝炎病毒GD株全基因组序列测定的结果进行了分析。结果表明，基因组全长7786nt，包括652nt的5’UTR，6756nt的ORF，365nt的3’UTR和12nt的poly(A)尾。ORF... 详细信息

本研究对1999年从我国广东地区分离到的一株与1型鸭肝炎病毒无抗原交叉性的新型鸭肝炎病毒GD株全基因组序列测定的结果进行了分析。结果表明，基因组全长7786nt，包括652nt的5’UTR，6756nt的ORF，365nt的3’UTR和12nt的poly(A)尾。ORF编码一个2251aa的聚合蛋白，经3Cpro切割作用分为3个结构蛋白VP0/VP3/VP1和8个非结构蛋白2Al/2A2/2B，2C/3A/3B/3C/3D。GD株基因组核苷酸序列与DHV-1、台湾地区新型DHV、韩国新型DHV和我国广西分离的DHVG株的同源性分别为72.7-73.2％、78.2-78.3％、96.4-96.7％和99.2％。VP1蛋白氨基酸序列的同源性分别为76.9％、80.1-80.5％、92.9-93.3％和98.7％。依据小RNA病毒科肠道病毒属血清型分型标准，GD株与韩国新型DHV和DHVG株属于同一血清型，而与DHV-1和台湾地区新型DHV属于不同的血清型。

关键词：鸭肝炎病毒 GD株基因组序列血清型分型

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IBV N基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡免疫效应的研究

IBV N基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡免疫效应的研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：郭自成王红宁阳泰高荣汪雪李玉玲管中斌四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”

为了研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)Nucleoprotetin基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡的免疫效应,本实验将携带禽传染性支气管炎病毒N基因的pvax1-N重组质粒通过肌肉注射对7日龄雏鸡进行免疫,并在2周后用灭活疫苗进行加强免疫.测定... 详细信息

为了研究禽传染性支气管炎病毒(IBV)Nucleoprotetin基因DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫对鸡的免疫效应,本实验将携带禽传染性支气管炎病毒N基因的pvax1-N重组质粒通过肌肉注射对7日龄雏鸡进行免疫,并在2周后用灭活疫苗进行加强免疫.测定特异性IgG抗体,血清中和抗体,CD4+,CD8+T细胞含量为免疫指标,并进行攻毒实验.结果表明,采用DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫,在加强免疫后4周CD4+、CD8+T细胞含量显著升高(P<0.05),特异性IgG抗体,血清中和抗体与灭活疫苗组无显著差异(P>0.05).用剂量为103EID50的IBV M41株病毒攻毒,保护率达86.7%,高于单独免疫灭活疫苗组(80%)和单独免疫DNA疫苗组(66.7%).可见,采用IBV N基因DNA疫苗首免,灭活疫苗加强免疫具免疫增强效果.

关键词：禽传染性支气管炎病毒 DNA疫苗初免灭活疫苗加强免疫

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猪圆环病毒2型ORF2与猪γ-干扰素基因的重组腺病毒转移载体的构建

猪圆环病毒2型ORF2与猪γ-干扰素基因的重组腺病毒转移载体的构建

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘根梅陈瑞爱韩静芳罗满林华南农业大学广东大华农动物保健品股份有限公司

以重组腺病毒转移载体P-ORF2,P-γ-IFN为模板,应用Primer5.0设计了2对引物,其中一对引物P1,P2用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增,另一对引物P3,P4则用于γ-IFN基因的扩增。再以所扩增的2段基因为模板,P1,P4为引物扩增融合基因ORF2-γ-IF... 详细信息

以重组腺病毒转移载体P-ORF2,P-γ-IFN为模板,应用Primer5.0设计了2对引物,其中一对引物P1,P2用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增,另一对引物P3,P4则用于γ-IFN基因的扩增。再以所扩增的2段基因为模板,P1,P4为引物扩增融合基因ORF2-γ-IFN。将所扩增的串联基因连接PMD-18T-Simple Vector,经PCR方法和限制性内切酶分析鉴定该串联基因已成功转入重组质粒中(命为PMD-ORF2-γ-IFN)。腺病毒转移载体Pshuttle-CMV和PMD-ORF2-γ-IFN经双酶切后再切胶回收并连接后,经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明两基因已成功连接,由此获得了重组腺病毒转移载体Pshuttle-CMV-ORF2-γ-IFN。重组腺病毒转移载体经PmeI酶切线性化后,在BJ5173细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAD-CMV-ORF2-γ-IFN.经PCR方法和PacI酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已得到成功构建。

关键词： ORF2 猪γ-干扰素转移载体重组腺病毒

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猴源细小病毒的分离鉴定

猴源细小病毒的分离鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：杨松涛孙兆增孟轲音王泽夏成柱王淑君冯浩张仁舟曾林夏志平邹啸环王承宇连海军事医学科学院军事兽医研究所长春 130062 军事医学科学院实验动物中心北京 100071

2008年我国某实验动物养殖基地发生猴传染性腹泻并引起死亡，临床症状类似犬猫细小病毒性肠炎.采集发病猴肠内容物，通过细胞培养进行病毒分离。采用血凝试验、PCR检测、免疫组织化学检测、电镜观察、直接免疫荧光检测、理化学鉴定、动... 详细信息

2008年我国某实验动物养殖基地发生猴传染性腹泻并引起死亡，临床症状类似犬猫细小病毒性肠炎.采集发病猴肠内容物，通过细胞培养进行病毒分离。采用血凝试验、PCR检测、免疫组织化学检测、电镜观察、直接免疫荧光检测、理化学鉴定、动物感染实验等方法对分离病毒进行了系统鉴定。结果F81细胞盲传三代后发生细小病毒样细胞病变，此分离病毒对猪红细胞的血凝效价为1：512;用845bp细小病毒通用引物进行PCR检测结果阳性;免疫组化检测肠绒毛上皮细胞呈细小病毒阳性反应;电镜负染和超薄切片观察见典型的细小病毒样粒子：直接免疫荧光检测结果阳性。用该病毒实验感染5只家猫，7日后相继发病死亡。序列分析结果表明， 10个关键氨基酸位点中有8个与FPV相同，有2个与CPV相同。认为该病毒分离株为FPV变异株。该病毒是如何跨种传播给猴并发生致病性突变的尚需进一步研究。

关键词：猴传染性腹泻细小病毒分离鉴定细胞病变

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