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- 2 篇 教育学

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42 篇 河南农业大学
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31 篇 吉林农业大学
28 篇 河南省动物疫病预...
27 篇 河南科技大学
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18 篇 山东省滨州畜牧兽...
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作者

44 篇 金宁一
34 篇 李斌
34 篇 梁家幸
34 篇 赵武
32 篇 蒋玉雯
32 篇 黄安国
32 篇 姚瑞英
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29 篇 沈志强
29 篇 鲁会军
28 篇 丁壮
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24 篇 黄伟坚
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22 篇 王红宁
22 篇 闫若潜
22 篇 罗满林
21 篇 程相朝
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20 篇 母连志

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日本乙型脑炎病毒SA14-14-2单克隆抗体的研制

日本乙型脑炎病毒SA14-14-2单克隆抗体的研制

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：余慧曹三杰黄小波文心田四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室四川雅安 625014

利用BHK-21细胞常规增殖乙脑病毒，设未接种JEV病毒的BHK-21细胞为对照抗原，同时经浓缩及超速离心后，将所得样品作为免疫抗原常规途径免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，最终选取试剂盒检测OD450值最高者经有... 详细信息

利用BHK-21细胞常规增殖乙脑病毒，设未接种JEV病毒的BHK-21细胞为对照抗原，同时经浓缩及超速离心后，将所得样品作为免疫抗原常规途径免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，最终选取试剂盒检测OD450值最高者经有限稀释法进行4次亚克隆。结果显示：常规免疫组的融合率约34％，阳性率近1％，共获得3株能稳定分泌抗JEV病毒的杂交瘤细胞系，分别命名为JEV.1、JEV.2、JEV.3。经亚型鉴定试剂盒检测JEV1、JEV.2、JEV.3抗体亚类均为：IgG1，轻链为κ型;间接ELISA方法检测到3株杂交瘤细胞均具有良好的传代及热稳定性，细胞培养上清效价均为103，免疫小鼠所制备的腹水效价为105，血清中的抗体效价为104：相加试验证实此3株细胞系针对的抗原决定簇存在一定差异;特异性试验及间接免疫荧光试验证实三株单抗均具有良好的特异性;各株单抗的相对亲和力分别为：JEV.1 5mol/L、JEV.24mol/L、JEV.35mol/L。

关键词：乙型脑炎病毒减毒活疫苗单克隆抗体亚型鉴定间接ELISA检测热稳定性

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Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：刘标高继明辛英豪刘少宁王波姜世金山东农业大学动物医学院泰安 271018

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)，命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PC... 详细信息

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)，命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PCR检测对病毒进行鉴定，并在此基础上对该病毒的ELD50和LD50进行了测定。结果表明所分离病毒无血凝性，人工感染12日龄鸭胚和7日龄雏鸭后表现出典型的鸭肝炎病毒致病特征，能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和，RT-PCR检测及序列测定为传统的DHV-Ⅰ，其第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2ml，对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2ml。根据已发表序列设计合成9对引物，以SG株DHV-Ⅰ基因组为模板经RT-PCR扩增出9段连续的、相互部分重叠的DNA片段并分别连入T载体进行克隆测序。用DNAstar螯件对测序结果进行拼接，获得了该病毒的全基因组核苷酸序列。比较分析发现，SG株DHV-Ⅰ与其他传统DHV-Ⅰ毒株在同一进化分支上，而与DHV-Ⅰ变异株的进化分支距离较远，确证SG株为一株DHV-Ⅰ传统强毒。

关键词：鸭病毒性肝炎 DHV-Ⅰ病毒 SG株分离鉴定基因组序列

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猪源2型链球菌福建株CPS2J基因PCR检测及序列分析

猪源2型链球菌福建株CPS2J基因PCR检测及序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：俞伏松郭长明车勇良林天龙陈少莺福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

设计并合成一对扩增2型猪链球菌CPS基因的特异性引物，以猪2型链球菌福建株DNA为模板，筛选最佳反应条件，建立检测CPS2J基因的PCR方法，并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下：应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准... 详细信息

设计并合成一对扩增2型猪链球菌CPS基因的特异性引物，以猪2型链球菌福建株DNA为模板，筛选最佳反应条件，建立检测CPS2J基因的PCR方法，并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下：应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准阳性株进行扩增，均获得与预期大小一致的675bp特异性目的片段，而对8株非2型猪链球菌的扩增结果均呈阴性;敏感性测定最低可检出100cfu细菌量或50pg细菌DNA;SS2PFJ06CPS2J基因部分核苷酸及其推导的氨基酸序列与猪链球菌2型不同菌株的同源性分别达98.7％.100％和97.8％～100％。上述结果表明建立并优化的猪2型链球菌CPS2J基因的PCR检测方法敏感性好、特异性高，能用于2型猪链球菌的分子流行病学调查和快速检测;序列分析表明猪2型链球菌福建株与国内外8株标准株之间同源性高、亲缘关系密切。

关键词：猪链球菌2型福建株 CPS2J基因 PCR检测序列分析

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Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘标高继明辛英豪刘少宁王波姜世金山东农业大学动物医学院

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ),命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PCR... 详细信息

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ),命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PCR检测对病毒进行鉴定,并在此基础上对该病毒的ELD50和LD50进行了测定.结果表明所分离病毒无血凝性,人工感染12日龄鸭胚和7日龄雏鸭后表现出典型的鸭肝炎病毒致病特征,能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和,RT-PCR检测及序列测定为传统的DHV-Ⅰ,其第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2ml,对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2ml.根据已发表序列设计合成9对引物,以SG株DHV-Ⅰ基因组为模板经RT-PCR扩增出9段连续的、相互部分重叠的DNA片段并分别连入T载体进行克隆测序.用DNAstar软件对测序结果进行拼接,获得了该病毒的全基因组核苷酸序列.比较分析发现,SG株DHV-Ⅰ与其他传统DHV-Ⅰ毒株在同一进化分支上,而与DHV-Ⅰ变异株的进化分支距离较远,确证SG株为一株DHV-Ⅰ传统强毒.

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒分离鉴定全基因组核苷酸序列

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一株鹅源副粘病毒分离株全基因组序列的克隆与序列分析

一株鹅源副粘病毒分离株全基因组序列的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：魏雪涛李银刘宇卓张敬峰江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心南京 210014

从发病的鹅分离到一株鹅源副粘病毒(GPMV)，血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-Ⅰ型(PMV-Ⅰ)。运用RT-PCR方法荻取了E01株鹅副粘病毒全基因组序列，并对其进行了比较分析。此株鹅副粘病毒(E01)的全基因组序列由15192个碱基组成，与... 详细信息

从发病的鹅分离到一株鹅源副粘病毒(GPMV)，血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-Ⅰ型(PMV-Ⅰ)。运用RT-PCR方法荻取了E01株鹅副粘病毒全基因组序列，并对其进行了比较分析。此株鹅副粘病毒(E01)的全基因组序列由15192个碱基组成，与鸡NDV一致，基因由6个ORF组成，3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，但是在NP基因和P基因之间的非翻译区多了6个核苷酸ACACTC。测序后拼接的F基因长1672bp，包含完整的开放阅读框(1662bp)，编码553个氨基酸，F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112R-R-Q-K-R-F117，具有强毒株序列特性，同时也与本实验分离该株鹅副粘病毒分离株致病性试验结果相符。根据NDV基因分型标准，鹅副粘病毒E01株归属基因Ⅷ型副粘病毒。F基因与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.9％～97.7％测序后拼接的HN基因长为1716 bp，编码571个氨基酸，与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.0％～98.1％。

关键词：鹅源副粘病毒基因序列遗传变异 F蛋白

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抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测

抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：覃绍敏白安斌吴健敏廖文军袁书智华俊关忠谊广西兽医研究所广西南宁530001 惠朋动物药业有限责任公司广西南宁530001

为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究以重组质粒PMD-2E8ScFv和PETmE2为模板,应用PCR方法分别扩增出目的基因2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟E2蛋白主要抗原编码区基因)。采用重叠延伸(SOE)PCR的方法... 详细信息

为构建既具有凝集性又具有抗原性的双功能融合蛋白,本研究以重组质粒PMD-2E8ScFv和PETmE2为模板,应用PCR方法分别扩增出目的基因2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟E2蛋白主要抗原编码区基因)。采用重叠延伸(SOE)PCR的方法将2E8ScFv和mE2拼接成融合基因2E8mE2,经测序正确后,将2E8mE2亚克隆入PET-DsbA原核表达载体,经PCR和酶切鉴定,表明重组表达质粒PET-DsbA-2E8mE2构建成功。将该重组表达质粒转化入宿主菌BL21(DE3)Plyss中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE电泳、免疫印迹和BandScan软件分析。结果表明：2E8mE2融合基因在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物大部分以不溶的包涵体形式存在,分子量约为65KDa,与预期的大小一致;融合蛋白的表达量约占菌体总量的30％左右。Western blotting与红细胞凝集试验证实：2E8mE2融合蛋白既能够与人红细胞结合,又能够与CSFV抗体反应,具有双功能特性。

关键词：猪瘟单链抗体双功能蛋白原核表达红细胞凝集试验 2E8mE2融合蛋白

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猪传染性胃肠炎病毒M蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张小波左玉柱刘媛范京惠李潭清李建辉孙彦新河北农业大学动物科技学院

本研究根据GenBank发表的TGEV TS株全基因核苷酸序列,设计了1对用以扩增TGEV主要结构蛋白M基因的特异性引物.利用RT-PCR方法扩增TGEV HB06株M基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,进行EcoRI和XhoI双酶切鉴定,将获得的M基因片段定向亚克隆入... 详细信息

本研究根据GenBank发表的TGEV TS株全基因核苷酸序列,设计了1对用以扩增TGEV主要结构蛋白M基因的特异性引物.利用RT-PCR方法扩增TGEV HB06株M基因,并将其克隆到pMD18-T载体中,进行EcoRI和XhoI双酶切鉴定,将获得的M基因片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中,构建了重组原核表达质粒pGEX-6P-M,转化Rossetta(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白.结果表明,从TGEV HB06株扩增得到了M基因片段,该基因全长789 bp,编码262个氨基酸,与TS株、Purdue-115株、TFI株和H16株的M基因同源性分别为97%、99%、96%和97%.SDS-PAGE电泳结果显示,重组表达质粒获得了约56 kDa的目的带,其中M蛋白的分子质量约为30kDa,与预期的结果一致,并且表达产物主要以包涵体的形式存在;Western-blot分析表明,表达的M重组蛋白可以被兔源抗TGEV阳性血清识别;试验结果证明,TGEV的M基因高度保守,在大肠杆菌表达系统内成功表达了TGEV M蛋白.

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 M基因克隆原核表达

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猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：蒋大良余兴龙李润成葛猛颜爱李杰刘春红刘俊琦湖南农业大学动物医学院湖南长沙 410128

采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus HCLV)疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a(+),构建重组原核表达载体pET-NS3。将pET-NS3转化进大肠杆菌Rosetta(DE3)进行优化表达... 详细信息

采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus HCLV)疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a(+),构建重组原核表达载体pET-NS3。将pET-NS3转化进大肠杆菌Rosetta(DE3)进行优化表达,采用SDS-PAGE分析NS3融合蛋白主要以包含体形式表达,分子大小约95 *** Blotting分析表明NS3融合蛋白具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到NS3融合蛋白(90％)。以纯化的NS3融合蛋白为抗原初步建立了检测CSFV NS3抗体的间接ELISA方法,对221份不同猪群和年龄的猪血清样品进行检测。将检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,结果阳性符合率为83.33％,阴性符合率为89.38％,总符合率为86.43％。实验结果表明：重组原核表达载体pET-NS3构建成功,NS3融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功地表达,建立的间接ELISA检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果有较高一致性。

关键词：猪瘟病毒兔化弱毒 NS3基因基因克隆原核表达融合蛋白蛋白纯化免疫印迹间接ELISA 病毒检测

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PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性研究

PCV2 Rep基因启动子区vISRE突变株的生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：曹瑞兵顾金燕张羽陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪圆环病毒2型（PCV2）是近年来发现的一种重要的动物病原,适量的猪干扰素能促进其在细胞中的增殖.为了揭示PCV2 Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件（vISRE）的生物学功能,本研究应用感染性克隆技术构建了2株vISRE点突变的重组PCV2,... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV2）是近年来发现的一种重要的动物病原,适量的猪干扰素能促进其在细胞中的增殖.为了揭示PCV2 Rep基因启动子区类干扰素刺激反应元件（vISRE）的生物学功能,本研究应用感染性克隆技术构建了2株vISRE点突变的重组PCV2,对突变病毒在PK15细胞上的增殖特性、遗传稳定性及对干扰素刺激的反应特性进行了分析.结果显示,PCV2 Rep基因启动子区ISRE点突变后PCV2仍可在PK15细胞中正常复制,但病毒滴度比亲本毒株下降.PCV2 1740在PK15细胞上3至10代之间遗传稳定,PCV2 1741在PK细胞上第3代病毒保持突变基因的特征,但传至第7代时1743和1744位的AC突变为TT,并一直保持到第10代。100U/mL的PoIFN-α处理感染病毒的PK15细胞后,亲本毒株和2个突变毒株的阳性感染细胞数量均有增加,但亲本毒株病毒粒子数的增加显著高于2个突变毒株.根据结果推测PCV2 Rep基因启动子区vISRE的突变影响其启动子活性,并可能在干扰素促进病毒增殖中发挥调控作用。

关键词：猪圆环病毒2型 Rep基因启动子干扰素刺激反应元件基因突变

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猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法的建立及应用

猪链球菌种与9型猪链球菌二重PCR检测方法的建立及应用

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：刘梅芬吴志明闫若潜盛敏赵明军拜廷阳河南省动物疫病预防控制中心周口市动物疫病预防控制中心

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了... 详细信息

为了建立猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种与9型猪链球菌(SS9)的快速诊断方法,本研究根据GenBank已登录的SS种特异性基因gdh和SS9型特异性基因CPS9H设计引物,以标准SS9株基因组DNA为模板,建立了SS种和SS9的二重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床34例疑似猪链球菌感染猪临床样品进行了应用检测,并与常规细菌分离鉴定方法进行了比对。结果表明成功建立SS种和SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100个CFU,特异性和重复性好;利用该方法对34份临床分离自疑似猪链球菌感染样品的细菌培养物进行了应用检测试验,其中有11份样品为gdh阳性,11份gdh阳性样品中有3份样品同时为SS9阳性。本研究成功建立了SS种与SS9型猪链球菌二重PCR检测方法,可用于猪链球菌种和SS9型猪链球菌的快速诊断。

关键词：猪链球菌种 9血清型二重PCR 检测建立应用

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