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- 2 篇 教育学

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21 篇 prrsv
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机构

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67 篇 华南农业大学
57 篇 吉林大学
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48 篇 军事医学科学院军...
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43 篇 华中农业大学
42 篇 河南农业大学
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36 篇 山东农业大学
31 篇 吉林农业大学
28 篇 河南省动物疫病预...
27 篇 河南科技大学
23 篇 云南农业大学
21 篇 湖南农业大学
18 篇 青岛农业大学
18 篇 山东省滨州畜牧兽...
17 篇 东北农业大学

作者

44 篇 金宁一
34 篇 李斌
34 篇 梁家幸
34 篇 赵武
32 篇 蒋玉雯
32 篇 黄安国
32 篇 姚瑞英
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29 篇 鲁会军
28 篇 丁壮
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22 篇 王红宁
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20 篇 母连志

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我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：翟少伦龙进学韦祖樟张建武岳城禤雄标袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/猪传染病防治研究室上海 200241 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐 830052 中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/猪传染病防治研究室上海 200241 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐 830052 广西兽医研究所广西南宁 530001

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战,本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况。我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进... 详细信息

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战,本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况。我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进行检测,对差异PCR方法扩增出来的部分PCV2a和PCV2b目的序列进行克隆、测序及分析。通过对70份临床病料的检测,并配合PCR产物测序的验证,结果发现该方法易操作,特异性高,可重复性好,可以鉴别出PCV2a与PCV2b,其中PCV2a株25份(25/70),PCV2b株23份(23/70),PCV2a与PCV2b共感染株22份(22/70),参照PCV2a或PCV2b的标准毒株,序列比对显示,我国的PCV2型毒株大多发生了很大的变异,包括碱基的变化及同源重组。本研究确定了我国猪场存在PCV2a与PCV2b的共感染情况,共感染率为31.4％,共感染机制及共感染是否会促进病毒的重组,是否会加重猪体的病情还需要进一步的研究。

关键词：猪2型圆环病毒差异PCR法共感染机制同源重组病料检测

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副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析

副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良湖南农业大学动物医学院

根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个24... 详细信息

根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸.与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较。同源性分别为99.9%和99.8%.序列的5′端有一段18个氨基酸的信号肽,该序列C末端最后10个氨基酸残基:Q-F-Q-F-S-I-G-G-S-F,具有典型革兰氏阴性细菌外膜蛋白特征,对于蛋白定位于细菌外膜有重要意义.以pMDTD15质粒为模板,用PCR的方法扩增副猪嗜血杆菌D15基因,并将其克隆到pET-28a（+）中,构建得到pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta（DE3）后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物.结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为94kDa,融合蛋白能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别,具有反应原性.将表达的D15蛋白免疫昆明小鼠和豚鼠后,具有一定的保护效力.

关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性

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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：谢志勤谢芝勋雷剑明刘加波庞耀珊邓显文谢丽基蓝如束广西兽医研究所广西壮族自治区疾病预防控制中心

目的:建立二重实时荧光定量PCR方法,用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测.方法:根据结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针;对反应条件和试剂... 详细信息

目的:建立二重实时荧光定量PCR方法,用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测.方法:根据结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针;对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重实时荧光定量PCR方法,对建立的实时荧光定量PCR方法的敏感性和特异性进行了检测.应用该方法对保存的临床样品进行二重荧光定量PCR检测。结果:所建立的方法特异性好,对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的检测敏感性均达到10个模板拷贝数,比常规PCR敏感性高100倍;抗干扰能力强,对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测出这两种细菌。对50份PPD检测阳性的牛的临床样品进行二重荧光定量PCR检测,结果结核分枝杆菌阳性的临床样品有6份,牛分枝杆菌阳性的临床样品有1份,其它均为阴性.结论:建立了用于检洲结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重荧光定量PCR法,该方法特异、敏感、快速、可定量,对检测鉴别区分结核分枝杆菌和牛分枝杆菌有重要意义。

关键词：结核分枝杆菌牛分枝杆菌二重荧光定量PCR

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TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：范晴花群义周晓黎董俊艾军叶玲玲广西兽医研究所云南出入境检验检疫局

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabanc virus,AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲一积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病.我国许多省也流行本病,该病的大规膜爆发给畜牧业带来巨... 详细信息

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabanc virus,AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲一积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病.我国许多省也流行本病,该病的大规膜爆发给畜牧业带来巨大经济损失。本研究根据GenBank登录的赤羽病核蛋白基因S RNA核苷酸序列设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测赤羽病病毒的实时荧光定量PCR方法。在本研究中,对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法.特异性试验证实,该方法只能检测到赤羽病病毒,与EHD、BTV、VSV等多种常见的动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性.所制作的标准曲线表明,在5.8×10～7～5.8×10～1拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.994),最少可检测到58个拷贝的阳性质粒,敏感度很高.同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为3.19%和4.23%,重复性极好.本方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3个小时。试验结果表明,本研究所建立的赤羽病病毒实时荧光PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合疫情监测、口岸进出口检验检设的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具,其具有良好的应用前景.

关键词：赤羽病病毒实时荧光定量PCR Taqman荧光探针快速检测

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动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：夏兴霞刘洁王永山诸玉梅欧阳伟何孔旺张雪寒江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京农业大学动物医学院

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2... 详细信息

将*** O157:H7（EHEC-O157:H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后,获得七株分泌抗*** O157:H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10～3,腹水效价均为1×10;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～1～2×10～2,腹水效价均为1×10～3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G11三株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,七株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带,而其它四株mAbs则未显示蛋白带。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(mAb) 生物制剂人兽共患病

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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：谢志勤谢芝勋雷剑明刘加波庞耀珊邓显文谢丽基蓝如束广西兽医研究所广西南宁 530001 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028

目的：建立二重实时荧光定量PCR方法，用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测。方法：根据结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特殊基因序列，设计了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针;对反应条... 详细信息

目的：建立二重实时荧光定量PCR方法，用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测。方法：根据结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特殊基因序列，设计了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针;对反应条件和试剂浓度进行优化，建立了能够同时检测鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重实时荧光定量PCR方法，对建立的实时荧光定量PCR方法的敏感性和特异性进行了检测。应用该方法对保存的临床样品进行二重荧光定量PCR检测。结果：所建立的方法特异性好，对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的检测敏感性均达到10个模板拷贝数，比常规PCR敏感性高100倍：抗干扰能力强，对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌不同模板浓度进行组合，仍可有效地同时检测出这两种细菌。对50份PPD检测阳性的牛的临床样品进行二重荧光定量PCR检测，结果结核分枝杆菌阳性的临床样品有6份，牛分枝杆菌阳性的临床样品有1份，其它均为阴性。结论：建立了用于检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重荧光定量PCR法，该方法特异、敏感、快速、可定量，对检测鉴别区分结核分枝杆菌和牛分枝杆菌有重要意义。

关键词：结核分枝杆菌牛分枝杆菌二重荧光定量PCR法鉴别诊断

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TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：范晴花群义周晓黎董俊艾军叶玲玲广西兽医研究所广西南宁518001 云南出入境检验检疫局云南昆明650201

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabane virus，AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲-积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病。我国许多省也流行本病，该病的大规模爆发给畜牧业带来... 详细信息

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabane virus，AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲-积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病。我国许多省也流行本病，该病的大规模爆发给畜牧业带来巨大经济损失。本研究根据GenBank登录的赤羽病核蛋白基因S RNA核苷酸序列设计引物和Traqman荧光探针，建立了用于检测赤羽病病毒的实时荧光定量PCR方法。在本研究中，对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化，评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性，并建立了绝对定量方法。特异性试验证实，该方法只能检测到赤羽病病毒，与EHD、BTV、VSV等多种常见的动物病毒没有交叉反应，具有高度的特异性。所制作的标准曲线表明，在5.8×10(7)～5.8×10(1)拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.994)，最少可检测到58个拷贝的阳性质粒，敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现，变异系数分别为3.19％和4.23％，重复性极好。本方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3个小时。试验结果表明，本研究所建立的赤羽病病毒实时荧光PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点，并且能对病毒进行准确的定量分析，不仅适合疫情监测、口岸进出口检验检疫的需求，而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具，其具有良好的应用前景。

关键词：家畜赤羽病阿卡班病毒实时荧光PCR检测 TaqMan探针核苷酸序列

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用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green Ⅰ嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在1001-106拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R2=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0％。用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7-10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到106拷贝/μL。试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7-11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性。对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在。实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量分析 RT-PCR法体内分布

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猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救

猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李俊于周徐绍建程凯慧王金宝山东省农业科学院畜牧兽医研究所青岛农业大学

感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外... 详细信息

感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒***-PCV2中含有一个线性化PCV2全基因组,长1767bp,载体中PCV2从496nt开始,其起始位点(Ori)含有保守序列的茎环结构未被破坏;ds-PCV2为单个全基因自连产物。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中含有大量的病毒抗原;提取mRNA后经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。所构建的3种重组质粒均可表达并在体外组装出有感染性的PCV2病毒粒子,拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究在国内首次应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性、疫苗免疫及致病机理研究打下了基础。

关键词：猪圆环病毒2型单拷贝双拷贝自身环化感染性克隆体外拯救

来源：评论

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共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的攻毒保护效果研究

共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李军星李玉峰王先炜王兴龙姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,分别构建了以5×甘氨酸为连接肽的重组腺病毒rAd-HS35和以口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白为连接肽的重组腺病毒rAd-HSA35.通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot可以检测到HSP/GP3/GP5蛋白的表达,证明重组腺病毒可以正确表达目的蛋白.以串联表达GP3/GP5(rAd-GP35)的重组腺病毒和野生型重组腺病毒(wtAd)为对照.研究该重组腺病毒在猪体内诱导免疫应答情况及对同源毒株攻毒的保护效果,结果表明,免疫rAd-GP35,rAd-HS35及rAd-HSA35的猪产生了PRRSV特异性的体液免疫应答,且rAd-HSA35诱导的中和抗体滴度明显高于rAd-GP35免疫组.同时,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪血清中的IFN-γ及IL-4的含量也明显升高.攻毒后,与wtAd和rAd-GP35免疫组相比,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪的临床症状较轻,病毒血症较低,肺部病理变化也较轻.此外,rAd-HSA35诱导的保护效力明显高于rAd-HS35.上述结果表明HSP70与GP3-GP5共表达可以增强PRRSV抗原的诱导的免疫应答并对同源毒株攻毒提供一定的免疫保护.重组腺病毒rAd-HSA35为防治高致病性PRRSV提供了可能。

关键词：高致病性PRRSV 免疫应答 HSP70 重组腺病毒

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