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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232 华南农业大学兽医学院广东广州 510642

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body... 详细信息

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置,结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行。通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定,以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响。结果表明： (1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLeaderD对MARC-145细胞无感染性,且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLcaderR能拯救出突变病毒,但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变,由此证明TRS-L 3的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能。 (2)突变TRS123 3'最后两个碱基的pM7Da或突变TRS9 3'最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒,而共同含有TRS9和TRS123 3'最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒,对拯救的突变病毒进行鉴定发现,TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复,而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒,但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零,且vM7S3滴度偏低。由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSV sgmRNA7的转录调控及其3'一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译。 (3)所有突变病毒的亚基因组中leader-body结合位点碱基均来TRS-B,为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征 RT-PCR技术转录调控因子序列分析病毒鉴定

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不同来源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)调查研究

不同来源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)调查研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张云飞王红宁张安云高荣王霆邹立扣曾博四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室” 四川农业大学动物医学院雅安 625014

本试验旨在研究异源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)的耐药表型和质柱介导FQs耐药基因(PMQR)的特征。2006-2008年从四川、河南等地的规模化猪场、医院及野生动物园分离的141异源大肠杆菌,采用K-B纸片法检测其对奈啶酸(... 详细信息

本试验旨在研究异源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)的耐药表型和质柱介导FQs耐药基因(PMQR)的特征。2006-2008年从四川、河南等地的规模化猪场、医院及野生动物园分离的141异源大肠杆菌,采用K-B纸片法检测其对奈啶酸(NA)等六种FQs的耐药表型,并运用PCR方法检测PMQR基因:qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ib-cr、qepA和qnrD.结果表明:试验菌株对各药物的耐药率分别为:萘啶酸(58.93%)、诺氟沙星(56.25%)、氧氟沙星(54.46%)、恩诺沙星(53.57%)、左旋氧氟沙星(51.79%)和环丙沙星(51.77%).其中,猪源及野生动物源菌株以对萘啶酸耐药为主,耐药率分别为72.22%和12.50%;人源菌株以对诺氟沙星耐药为主,耐药率为74.29%。PCR检测结果表明,PMQR基因的检出率由高到低依次为aac(6′)-Ib-cr(49.65%)、qnrD(23.40%)、qnrS(22.70%)、qnrB(21.28%)、qnrA(14.89%)及qepA(8.51%).猪源菌株中aac(6′)-Ib-cr和qnrD检出率高,分别为69.57%和43.47%.aac(6′)-Ib-cr和qnrS在人源菌株中分布较普遍,检出率分别为54.29%和37.14%.qnrA,qnrB和qepA在野生动物源菌株中均有一定检出率,分别为4.17%、8.33%和4.17%。本研究首次对不同来源大肠杆菌中六种PMQR基因进行调查研究,为大肠杆菌耐药性的防控提供参考依据.

关键词：大肠杆菌 FQs PMQR 耐药基因耐药表型

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共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的攻毒保护效果研究

共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：李军星李玉峰王先炜王兴龙姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京 210095

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失。本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失。本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,分别构建了以5×甘氨酸为连接肽的重组腺病毒rAd-HS35和以口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白为连接肽的重组腺病毒rAd-HSA35。通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot可以检测到HSP/GP3,GP5蛋白的表达,证明重组腺病毒可以正确表达目的蛋白。以串联表达GP3/GP5(rAd-GP35)的重组腺病毒和野生型重组腺病毒(wtAd)为对照,研究该重组腺病毒在猪体内诱导免疫应答情况及对同源毒株攻毒的保护效果,结果表明,免疫rAd-GP35,rAd-HS35及rAd-HSA35的猪产生了PRRSV特异性的体液免疫应答,且rAd-HSA35诱导的中和抗体滴度明显高于rAd-GP35免疫组。同时,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪血清中的IFN-γ及IL-4的含量也明显升高。攻毒后,与wtAd和rAd-GP35免疫组相比,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪的临床症状较轻,病毒血症较低,肺部病理变化也较轻。此外,rAd-HSA35诱导的保护效力明显高于rAd-HS35。上述结果表明HSP70与GP3-GP5共表达可以增强PRRSV抗原的诱导的免疫应答并对同源毒株攻毒提供一定的免疫保护。重组腺病毒rAd-HSA35为防治高致病性PRRSV提供了可能。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫应答热休克蛋白70 重组腺病毒攻毒保护

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猪轮状病毒广东分离株VP6基因的克隆及序列分析

猪轮状病毒广东分离株VP6基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：田小艳邓雨修孙华苏润环王东东招丽婵宋延华广东省温氏集团研究院

参考GenBank中发表的猪轮状病毒PRV OSU毒株VP6基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,分别以本实验室分离保存的6株RV反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1.4 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定.测序结... 详细信息

参考GenBank中发表的猪轮状病毒PRV OSU毒株VP6基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,分别以本实验室分离保存的6株RV反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1.4 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定.测序结果表明:VP6基因全长1320bp,含有一个1194bp的开放阅读框,编码397个氨基酸。序列分析表明,6株GD分离毒株与已发表的10株国内外毒株序列进行核苷酸同源性在80.1%—95.6%之间,其中与中国JL94株的同源性最高为95.6%,与日本代表毒株R-13株的同源性最低为80.1%;氨基酸的同源性在90.7%—99.2%之间,其中与中国JL94株的同源性最高为99.2%,与R-13株的同源性最低为90.7%.6株GDRV分离株间的VP6基因核苷酸同源性为89.0%—100.0%之间,氨基酸同源性在97.5%—99.7%之间.通过核苷酸和氨基酸序列分析比较可知,轮状病毒VP6基因核苷酸同源性差异较大,但氨基酸同源性却很高,说明VP6基因存在较为普遍碱基的突变、插入和缺失现象,但大多数都为无意义突变。核苷酸系统发育进化树结果表明,GD1、GD4、GD5和GD6毒株与轮状病毒JL94毒株亲缘关系较近,GD2和GD3与美国代表毒株BRV033毒株亲缘关系较近,6个毒株同为一个进化群,且同属于A群轮状病毒中的第Ⅰ亚型。

关键词：氨基酸同源性 VP6 分离株克隆及序列分析猪轮状病毒

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不同来源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)调查研究

不同来源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)调查研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：张云飞王红宁张安云高荣王霆邹立扣曾博四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”四川成都望江路29号 610064 四川农业大学动物医学院雅安 625014 四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”四川成都望江路29号 610064

本试验旨在研究异源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones，FQs)的耐药表型和质粒介导FQs耐药基因(PMQR)的特征。2006-2008年从四川、河南等地的规模化猪场、医院及野生动物园分离的141异源大肠杆菌，采用K-B纸片法检测其对奈啶酸... 详细信息

本试验旨在研究异源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones，FQs)的耐药表型和质粒介导FQs耐药基因(PMQR)的特征。2006-2008年从四川、河南等地的规模化猪场、医院及野生动物园分离的141异源大肠杆菌，采用K-B纸片法检测其对奈啶酸(NA)等六种FQs的耐药表型，并运用PCR方法检测PMQR基因：qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr、qepA和qnrD。结果表明：试验菌株对各药物的耐药率分别为：萘啶酸(58.93％)、诺氟沙星(56.25％)、氧氟沙星(54.46％)、恩诺沙星(53.57％)、左旋氧氟沙星(51.79％)和环丙沙星(51.77％)。其中，猪源及野生动物源菌株以对萘啶酸耐药为主，耐药率分别为72.22％和12.50％;人源菌株以对诺氟沙星耐药为主，耐药率为74.29％。PCR检测结果表明，PMQR基因的检出率由高到低依次为aac(6')-Ib-cr(49.65％)、qnrD(23.40％)、qnrS(22.70％)、qnrB(21.28％)、qrtrA(14.89％)及qepA(8.51％)。猪源菌株中aac(6’)-Ib-cr和qnrD检出率高，分别为69.57％和43.47％。aac(6')-Ib-cr和qnrS在人源菌株中分布较普遍，检出率分别为54.29％和37.14％。qnrA、qnrB和qepA在野生动物源菌株中均有一定检出率，分别为4.17％、8.33％和4.17％。本研究首次对不同来源大肠杆菌中六种PMQR基因进行调查研究，为大肠杆菌耐药性的防控提供参考依据。

关键词：大肠杆菌耐药基因耐药表型氟喹诺酮类药物 PCR检测

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小鹅瘟单管巢式PCR诊断方法的建立及初步应用

小鹅瘟单管巢式PCR诊断方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王暖成鲁承杜鑫王中光杜秋明延边大学农学院

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性。高度接触性和败血性传染病,给养鹅业造成了严重危害.该病可从临床症状及流行病学特点作出初步诊断,但确诊需借助病原学检查、血清学方法和分子生物学技术... 详细信息

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性。高度接触性和败血性传染病,给养鹅业造成了严重危害.该病可从临床症状及流行病学特点作出初步诊断,但确诊需借助病原学检查、血清学方法和分子生物学技术。病原学检查和血清学方法均存在不够敏感、检测所需时间长等不足,不能满足临床快速诊断小鹅瘟的需要.而PCR技术具有敏感性高、特异性强等优点,能够较好满足临床快速准确诊断疾病的需要.本试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株全基因序列,针对VP3基因保守区,设计了两对扩增主要结构蛋白VP3基因的特异性引物,对小鹅瘟病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,建立了小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法,扩增出了与预期片段大小相符的长度为406bp的基因片段.特异性试验表明,只有小鹅瘟病毒模板能扩增出特异性条带.敏感性试验表明,当病料中小鹅瘟病毒核酸含量为0.02175fg/μL时,仍可以检测到,出现清晰的特异性片段.应用小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法对延边地区疑似小鹅瘟病死雏鹅80只进行了检测,有典型病理变化的20只病死雏鹅,阳性检出率均为100%(20/20),无典型病理变化的60只病死雏鹅,阳性检出率为93.3%(56/60).由此可见。本实验建立的小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法具有极高的敏感性和特异性且检出率极高,可作为一种有效的临床诊断方法。

关键词：小鹅瘟 GenBank 小鹅瘟病毒 PCR 初步应用

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单抗介导的HI试验对不同H9N2亚型禽流感病毒HA表面抗原变异的研究

单抗介导的HI试验对不同H9N2亚型禽流感病毒HA表面抗原变异的研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：王泽霖刘守川陈少渠陈恩林河南农业大学禽病研究所郑州 450002

利用本实验已建立的4株抗H9亚型AⅣ血凝素单克隆抗体(2A4、F6、H、B4)与1998～2005年间河南农大禽病研究所分离到的25株H9N2亚型毒株进行HI反应。结果显示，25个毒株可以分为二类，第一类23个毒株与H6单抗的HI结果为17～18 log2;与F6单... 详细信息

利用本实验已建立的4株抗H9亚型AⅣ血凝素单克隆抗体(2A4、F6、H、B4)与1998～2005年间河南农大禽病研究所分离到的25株H9N2亚型毒株进行HI反应。结果显示，25个毒株可以分为二类，第一类23个毒株与H6单抗的HI结果为17～18 log2;与F6单抗的HI结果为15～18log2;与A4单抗的结果为16～18 log2;与B4单抗的HI结果在7-11 log2;另一类2个毒株即 A/鸡/河南/A3/98(H9N2)(3＃株)和A/鸡/河南/C4/O2(H9N2)(18＃株)与所有4株单抗都不发生反应。说明在H9N2亚型AⅣ表面抗原上的具有血凝活性的抗体结合位点不止一个，4株单抗可能均作用于血凝素表面同一抗原位点。3＃和18＃毒株的致病性较其它毒株强，可能与该位点的变异或缺失有关。4株单抗分别和5株H9N2做病毒中和试验，发现均无中和活性，说明表面抗原上的血凝活性位点并非就是中和活性位点。本试验的研究结果进一步证实了H9N2亚型AIV血凝素抗原的变异特性和可用HA单克隆抗体来鉴别某些变异毒株，为H9N2亚型AIV血凝素表面抗原结构与功能及变异规律的深入研究以及我国的禽流感H9亚型的疫苗毒株的选择提供了依据。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型 HA蛋白抗原变异单克隆抗体

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小鹅瘟单管巢式PCR诊断方法的建立及初步应用

小鹅瘟单管巢式PCR诊断方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：王暖成鲁承杜鑫王中光杜秋明延边大学农学院吉林龙井 133400

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、高度接触性和败血性传染病，给养鹅业造成了严重危害。该病可从临床症状及流行病学特点作出初步诊断，但确诊需借助病原学检查、血清学方法和分子生物学技... 详细信息

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、高度接触性和败血性传染病，给养鹅业造成了严重危害。该病可从临床症状及流行病学特点作出初步诊断，但确诊需借助病原学检查、血清学方法和分子生物学技术。病原学检查和血清学方法均存在不够敏感、检测所需时间长等不足，不能满足临床快速诊断小鹅瘟的需要。而PCR技术具有敏感性高、特异性强等优点，能够较好满足临床快速准确诊断疾病的需要。本试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株全基因序列，针对VP3基因保守区，设计了两对扩增主要结构蛋白VP3基因的特异性引物，对小鹅瘟病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增，建立了小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法，扩增出了与预期片段大小相符的长度为406bp的基因片段。特异性试验表明，只有小鹅瘟病毒模板能扩增出特异性条带。敏感性试验表明，当病料中小鹅瘟病毒核酸含量为0.02175fg/μL时，仍可以检测到，出现清晰的特异性片段。应用小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法对延边地区疑似小鹅瘟病死雏鹅80只进行了检测，有典型病理变化的20只病死雏鹅，阳性检出率均为100％(20/20)，无典型病理变化的60只病死雏鹅，阳性检出率为93.3％(56/60)，由此可见，本实验建立的小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法具有极高的敏感性和特异性且检出率极高，可作为一种有效的临床诊断方法。

关键词：小鹅瘟 PCR检测 VP3基因临床诊断

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：郑海红孙志朱兴全袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室农业部动物寄生虫病重点实验室华南农业大学兽医学院

殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚.本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位... 详细信息

殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚.本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(CS-B)及其介导的Leader-body结合位置,结果发现PRRSV mRNA分子的转录可使用经典(canonical)及非经典(noncanonical)TRS-B进行.通过对PRRSV感染性克隆pAPRRS进行定点基因突变及其所致拯救病毒的鉴定,以此确定TRS-L和TRS-B突变对亚基因组转录及病毒感染性的影响.结果表明:(1)同时突变TRS-L最后两个CC的全长突变体pLeaderD对MARC-145细胞无感染性,且未产生sgmRNA7转录本;而只突变最后一个C的pLeaderR能拯救出突变病毒,但突变位点在突变病毒系列传代中发生回复突变,由此证明TRS-L 3'的一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有一定修复功能.(2)突变TRS123 3'最后两个碱基的pM7Da或突变TRS9 3'最后两个碱基的pM7Db均能拯救出病毒,而共同含有TRS9和TRS123 3'最后两个碱基突变的pM7DabR不能拯救出病毒,对拯救的突变病毒进行鉴定发现,TRS123突变的拯救病毒在一系列传代中突变碱基回复,而TRS9突变的拯救病毒传代过程中稳定遗传;突变体pM7S3(含有TRS123的三个碱基突变)和pM7Db虽能拯救出活病毒,但突变都使相应的sgmRNA7转录量至零,且vM7S3滴度偏低.由此证明了TRS9和TRS123都可单独承担PRRSV sgmRNA7的转录调控及其3'一级序列对不连续性转录起着重要作用且PRRSV具有修复功能;PRRSV的N蛋白主要来源于sgmRNA7.1的翻译.(3)所有突变病毒的亚基因组中leader-body结合位点碱基均来源于TRS-B,为负链RNA不连续转录模型理论提供直接证据。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 TRS PRRSV 感染性克隆弱毒株碱基突变突变体突变位点亚基因组功能解析

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不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

作者：王霆王红宁张安云高荣张云飞邹立扣四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”四川成都望江路29号 610064 四川农业大学动物医学院雅安 625014 四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”四川成都望江路29号 610064

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种，对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况，并对qnrD基因进行克隆，原核表达。2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株)，沙门氏菌(31... 详细信息

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种，对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况，并对qnrD基因进行克隆，原核表达。2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株)，沙门氏菌(31株)，肺炎克雷伯氏菌(46株)，肠球菌(50株)，奇异变形杆菌(20株)，共288株，采用微量稀释法测定试验菌株对环丙沙星(CIP)等四种喹诺酮类药物的MIC值;运用PCR方法调查qnrD基因的流行、分布情况;将qnrD基因定向克隆到表达载体pET-30b(+)中，转化大肠杆菌感受态BL21(DE3)，经IPTG诱导阳性菌，通过SDS-PAGE检测qnrD基因的表达。试验菌株的总耐药率分别为：沙门氏菌(88.41％)，奇异变形杆菌(82.65％)，肺炎克雷伯氏菌(78.36％)，肠球菌(72.81％)，大肠杆菌(60.25％);qnrD基因的检出率分别为沙门氏菌(64.51％)，肠球菌(38.00％)，大肠杆菌(23.40％)，肺炎克雷伯氏菌(6.52％)，奇异变形杆菌(0％);SDS-PAGE分析表明，重组载体pET-qnrD可成功的在大肠杆菌中表达qnrD蛋白。本研究首次报道了qnrD基因在不同细菌中的流行情况，首次在肠球菌，大肠杆菌，肺炎克雷伯氏菌中发现了qnrD基因，对qnrD基因进行原核表达为后续试验提供了基础材料。

关键词：喹诺酮 qnrD基因耐药表型原核表达细菌菌种

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