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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李德银张彤贾志华吴国娟侯晓林北京农学院动物科学技术学院

连翘酯苷A(EA)是连翘中提取的一种具有生物活性的多酚,中国传统医学中被广泛应用于治疗细菌和病毒感染。在本实验中,通过荧光定量PCR检测IBV病毒N基因的表达变化,我们发现FA能有效抑制已感细胞内子代病毒的繁殖。为了探究其抗病毒的深... 详细信息

连翘酯苷A(EA)是连翘中提取的一种具有生物活性的多酚,中国传统医学中被广泛应用于治疗细菌和病毒感染。在本实验中,通过荧光定量PCR检测IBV病毒N基因的表达变化,我们发现FA能有效抑制已感细胞内子代病毒的繁殖。为了探究其抗病毒的深层机制,测定相关抗病毒基因的变化。结果显示,对于已感细胞,连翘酯苷A能提高其干扰素及促炎因子的表达,FA单独作用于鸡胚成纤维细胞(DF-1)和巨噬细胞(HD11)36h,均能在一定程度刺激干扰素及促炎因子(如NF-κB)的表达。另外,当加入NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)时,病毒对细胞产生的损伤明显加重,FA和PDTC同时作用于感染细胞时,细胞病变减轻。综上,FA能够同时激活干扰素和NF-κB信号通路,抑制细胞内病毒的增殖。

关键词：连翘酯苷A 干扰素 NF-κB

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禽用蜂胶口服液的急性毒性试验研究

禽用蜂胶口服液的急性毒性试验研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：李娇娇李东季辉彭麟江善祥南京农业大学动物医学院

【目的】急性毒性试验是最基础的毒性试验,处在毒理学研究的早期阶段,主要是了解外源化学物急性毒性的强度,并进行分级,初步揭示外源化学物毒作用的性质、毒效应特征及可能的靶器官,探求外源化学物的剂量-反应关系和对人体产生损害的危... 详细信息

【目的】急性毒性试验是最基础的毒性试验,处在毒理学研究的早期阶段,主要是了解外源化学物急性毒性的强度,并进行分级,初步揭示外源化学物毒作用的性质、毒效应特征及可能的靶器官,探求外源化学物的剂量-反应关系和对人体产生损害的危险性,为亚慢性毒性、慢性毒性试验研究以及其他毒理试验提供接触剂量和观察指标选择的依据。本研究旨在探讨蜂胶口服液对小鼠及大鼠口服的急性毒性。【方法】分别以昆明种小鼠及SD大鼠为试验动物,采用改良寇氏法,经口灌胃给药。测定禽用蜂胶口服液的半数致死量(LD)及其95%可信限。【结果】受试蜂胶口服液给小鼠灌胃后,表现为腹部抽搐起伏明显,个别小鼠偶尔会动,但是行动缓慢,走路摇晃,四肢无力,行动迟缓。小鼠经口LD为1589 mg·kg·bw,95%可信限为1425.5～1770.3 mg·kg·bw;大鼠灌胃后表现为,静卧不动,四肢无力,腹部抽搐起伏明显,四肢末端及尾巴呈青紫色;剖检可见胃出血明显,膨大胀气,胃壁变薄变透;十二指肠前段肠管出血明显,后段肠管膨大胀气肠壁变薄。大鼠的经口LD为1633 mg·kg·bw,95%可信限为1467.4～1817.4 mg·kg·bw。【结论】根据化学物急性毒性剂量分级表,该蜂胶口服液为低毒。

关键词：蜂胶口服液急性毒性半数致死量(LD50)

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弓形虫Gra16、Gra24 DNA疫苗对Balb/c小鼠免疫保护力的研究

弓形虫Gra16、Gra24 DNA疫苗对Balb/c小鼠免疫保护力的研究

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：张伟超李龙娇赵俊龙华中农业大学农业微生物国家重点实验室华中农业大学动物科学动物医学学院

致密颗粒蛋白作为弓形虫速殖子胞质内存在的三大细胞器之一,大多在纳虫泡形成的中后期分泌,用于改变纳虫泡内环境,调控弓形虫的生存与繁殖。Gra16与Gra24是致密颗粒蛋白家族中最新发现的可分泌至宿主细胞核内蛋白,主要影响宿主细胞新陈... 详细信息

致密颗粒蛋白作为弓形虫速殖子胞质内存在的三大细胞器之一,大多在纳虫泡形成的中后期分泌,用于改变纳虫泡内环境,调控弓形虫的生存与繁殖。Gra16与Gra24是致密颗粒蛋白家族中最新发现的可分泌至宿主细胞核内蛋白,主要影响宿主细胞新陈代谢的转录及细胞周期的调控,并产生炎性反应。本实验在对Gra16、Gra24免疫原性分析的基础上构建了pEGFP-Gra16、pEGFP-Gra24、pEGFP-Gra24'(截短)三个真核质粒。首先在BHK-21细胞上进行了真核转染,分别在核内检测到GFP荧光验证了Gra16、Gra24的核定位特性;随后的动物免疫实验显示,pEGFP-Gra16、pEGFP-Gra24、pEGFP-Gra24'三组均能引起特异的体液免疫,相较于对照组,IL-12、IFN-γ均有较大幅度的升高,尤以Gra24最显著;攻毒试验结果显示Gra24两个实验组拥有一定的免疫保护力,pEGFP-Gra24'实验组表现最优。研究结果表明Gra24可以作为疫苗候选基因。

关键词：致密颗粒蛋白 GRA16 GRA24 DNA疫苗 IL-12

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旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性

旋毛虫p43与p53核酸疫苗的构建及其免疫保护性

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云庞宇王泽东北农业大学动物医学学院

为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠。于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/只),在攻虫后第7天和第35天剖杀... 详细信息

为探讨旋毛虫p43、p53基因的核酸疫苗对小鼠的免疫保护效果与免疫保护机制,将p43、p53基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,分3次肌肉注射免疫3组昆明小鼠。于三免后2周经口感染旋毛虫肌幼虫(100蚴/只),在攻虫后第7天和第35天剖杀小鼠,计算成虫减虫率、肌幼虫减虫率和繁殖力指数,评估其免疫效果。在各时间点上取小鼠血清用于检测抗体水平和脂肪酸结合蛋白(H-FABP)。结果显示,试验各组成虫减虫率与对照组相比差异显著(P<0.05),LPG及RCI减虫率与对照组相比均差异极显著(P<0.01);IgG抗体水平提高,与PBS组差异显著P<0.05);各组H-FABP检测结果均低于70pg/mL。结果表明旋毛虫p43与p53基因的核酸疫苗具有较好的抗旋毛虫的免疫保护效果,且两核酸疫苗对小鼠心肌无损伤。

关键词：核酸疫苗旋毛虫减虫率 p53 p43 免疫保护性

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基因操作中的高效分子剪刀—ZFN、TALEN、CRISPR

基因操作中的高效分子剪刀—ZFN、TALEN、CRISPR

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：张伟超申邦赵俊龙华中农业大学农业微生物国家重点实验室华中农业大学动物医学院

基因作为遗传物质的主体,在生物体繁殖过程中起着决定性的作用。现代生物学技术中,基因编辑工具的应用旨在通过人为的操作干预基因组的完整性,对其进行插入、缺失、替代的整合。近年来,ZFN、TALEN、CRISPR这三种基因组编辑工具的发现与... 详细信息

基因作为遗传物质的主体,在生物体繁殖过程中起着决定性的作用。现代生物学技术中,基因编辑工具的应用旨在通过人为的操作干预基因组的完整性,对其进行插入、缺失、替代的整合。近年来,ZFN、TALEN、CRISPR这三种基因组编辑工具的发现与应用,极大的提高了基因编辑的可操作性和稳定性。ZFN通过左右3-4个锌指结构域,TALEN通过左右臂各14-20个串联小肽,而CRISPR则通过引入guide-RNA来实现对靶基因的定点特异识别,然后分别通过融合的FokI二聚体、Cas蛋白完成对基因组DNA的切割,诱导DNA双链断裂(DNAdouble-strand break,DSB),最终通过细胞天然修复机制完成基因的插入、缺失、替代等操作。在此过程中,基因组修复主要有两种修复机制——同源重组(HDR)和非同源末端连接(NHEJ)。相对于非同源末端连接的不确定性,同源重组修复机制虽缓慢但精细准确,在基因操作中广泛应用。ZFN、TALEN、CRISPR三项技术作为高效的分子剪刀,各有优劣,且在物种选择上各有特异的偏好。目前这些分子剪刀不仅在人、小鼠、大鼠、斑马鱼等生物上广泛应用,在寄生虫领域,秀丽新杆线虫、疟原虫、弓形虫等模式生物也早己取得了显著成效。

关键词：基因操作同源重组 ZFN TAELN CRISPR DSB 分子剪刀

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牛链球菌的分离与鉴定、药敏实验及生物信息学分析

牛链球菌的分离与鉴定、药敏实验及生物信息学分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：祖菲段纲项勋李浩欣杨志远朱旗代飞燕常华云南农业大学动物科学技术学院

本研究对某动物医院的一头病牛粪样进行细菌分离培养,将细菌进行不同培养基的鉴别培养及生化分析,PCR扩增细菌16S rDNA基因并测序分析构建进化树,并对该菌进行药敏试验分析及生长曲线的测定。试验结果显示,该菌在血琼脂、巧克力琼脂、L... 详细信息

本研究对某动物医院的一头病牛粪样进行细菌分离培养,将细菌进行不同培养基的鉴别培养及生化分析,PCR扩增细菌16S rDNA基因并测序分析构建进化树,并对该菌进行药敏试验分析及生长曲线的测定。试验结果显示,该菌在血琼脂、巧克力琼脂、LB琼脂、BBL琼脂、TPY琼脂、大豆酪蛋白琼脂、麦康凯(含结晶紫)琼脂、麦康凯(不含结晶紫)琼脂、伊红美蓝(含结晶紫)豆能生长出光滑凸起,边缘圆润,大小各异,颜色不同的菌落,而在MRs琼脂、高盐甘露醇琼脂上却不生长;生化鉴定时乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、蛋白胨、葡萄糖磷酸盐胨水(VP)、葡萄糖磷酸盐胨水(MR)、硫化氢、半固体琼脂为阴性,葡萄糖、西蒙氏柠檬酸盐、尿素为阳性,由上述结果初步鉴定此种菌为牛链球菌;进化树的构建进一步证明了分离出的此株菌属于牛链球菌,它与牛链球菌RD09的相似性为99%;药敏试验结果显示牛链球菌对红霉素高度敏感,对强力霉素、卡那霉素极为敏感,对链霉素、新生霉素、复方新诺明、头孢盐松、庆大霉素均敏感,对氯霉素、头孢拉定、阿莫西林耐药;从牛链球菌生长曲线可以看出2-23小时这段时间是牛链球菌的高度繁殖期,23-28小时是牛链球菌的稳定期,28小时以后牛链球菌就开始衰退了。本实验数据为进一步研究牛链球菌的细菌学检测奠定基础。

关键词：细菌培养牛链球菌鉴定 16S rDNA

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中国畜牧兽医学会动物毒物学分会第十三次学术研讨会

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中国农业科技导报 2013年第4期15卷 13-13页

随着社会经济的快速发展,由于环境污染造成生态安全、生物安全、食品安全及饲料安全的形势日益严重。食品及饲料中有毒有害物质的污染导致的突发性毒性事件呈现多发、频发、甚至爆发,对人类和动物的健康造成恶劣影响,已经引起全社会的... 详细信息

随着社会经济的快速发展,由于环境污染造成生态安全、生物安全、食品安全及饲料安全的形势日益严重。食品及饲料中有毒有害物质的污染导致的突发性毒性事件呈现多发、频发、甚至爆发,对人类和动物的健康造成恶劣影响,已经引起全社会的高度关注。为了及时总结我国动物毒物学及相关领域的研究进展,增进同行间的沟通与了解,

关键词：动物毒物学中国畜牧兽医学会学术研讨会学分有毒有害物质社会经济环境污染饲料安全

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沙咪珠利对柔嫩艾美耳球虫内生阶段超微结构的影响

沙咪珠利对柔嫩艾美耳球虫内生阶段超微结构的影响

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：刘利利费陈忠薛飞群张可煜张丽芳王霄旸王米郑文丽肖隧中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫病学重点开放实验室中国农业科学院兽药安全评价与兽药残留研究重点开放实验室

在不同时间点,对人工感染柔嫩艾美耳球虫(***)的鸡只单剂量口服15ppm的沙咪珠利,并利用透射电镜观察其对柔嫩艾美耳球虫内生阶段超微结构的影响,结果发现:在裂殖生殖阶段,裂殖体分裂异常;裂殖子形态不规则,外膜受损,胞质中出现空泡;微... 详细信息

在不同时间点,对人工感染柔嫩艾美耳球虫(***)的鸡只单剂量口服15ppm的沙咪珠利,并利用透射电镜观察其对柔嫩艾美耳球虫内生阶段超微结构的影响,结果发现:在裂殖生殖阶段,裂殖体分裂异常;裂殖子形态不规则,外膜受损,胞质中出现空泡;微线数目减少,棒状体消失,线粒体肿胀,嵴结构模糊,染色质异染色质化。在配子生殖阶段,小配子体外膜和核膜损伤,胞质呈现空泡化;内质网池、高尔基体肿胀;核内染色质高度凝集、深染、边缘化、呈新月状附在核膜周围。大配子体外膜形态不规则,胞质中出现大量的空泡;壁形成体2(WFB2)体积变小,内部颗粒稀疏的;部分WFB2发生融合,内部颗粒发生崩解,出现空泡,壁形成体1(WFB1)异常并不明显。以上数据表明:沙咪珠利对***的裂殖生殖和配子生殖阶段均有作用,它可能是通过干扰虫体的能量代谢,诱导虫体的凋亡,抑制虫体卵囊壁的形成等途径而影响虫体正常发育和繁殖,但是其具体的作用机制还需进一步研究。

关键词：柔嫩艾美耳球虫沙咪珠利微结构

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桑色素中和单增李斯特菌溶血素并抑制吞噬泡内细菌逃逸

桑色素中和单增李斯特菌溶血素并抑制吞噬泡内细菌逃逸

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨会

作者：柳博文王建锋邓旭明吉林大学动物医学学院

单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)属于革兰阳性无芽孢杆菌李斯特菌属,是一种重要的机会致病菌,主要通过食物传播,发病率低,但致死率极高。单增李斯特菌的致病性主要依赖其合成的几种重要毒力因子,如溶血素、磷脂酶、内化素、肌动蛋白... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)属于革兰阳性无芽孢杆菌李斯特菌属,是一种重要的机会致病菌,主要通过食物传播,发病率低,但致死率极高。单增李斯特菌的致病性主要依赖其合成的几种重要毒力因子,如溶血素、磷脂酶、内化素、肌动蛋白、P60蛋白等。其中,单增李斯特菌溶血素(listeriolysin O,LLO)属于胆固醇依赖的成孔毒素家族,它可以特异性地与吞噬泡膜上的胆固醇结合,形成裂解孔,使细菌得以从吞噬泡中逃逸并增殖,这对于病原菌逃离宿主细胞免疫系统是至关重要的,它对于单增李斯特菌毒力的关键作用使之成为理想的抗单增李斯特菌致病力的靶点。黄酮类化合物桑色素(Morin hydrate)是从黄桑木、桑橙树等桑科植物的树皮和许多中草药中提取的一种浅黄色色素,本研究通过溶血实验发现,桑色素可以中和单增李斯特菌培养物上清中LLO介导的成孔活性,从而显著降低其溶血活性,提示桑色素是LLO的拮抗剂。此外,在单核细胞增生李斯特菌与巨噬细胞J774共培养体系内加入不同浓度的桑色素可显著降低单增李斯特菌介导的细胞损伤;另外桑色素也可显著抑制细胞内单增李斯特菌繁殖以及吞噬泡内单增李斯特菌的逃逸。这一研究表明桑色素有望研发为一种具有新型作用机制的抗单增李斯特菌感染的新药物。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 LLO 桑色素

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Metacasapse在弓形虫凋亡过程中的作用

Metacasapse在弓形虫凋亡过程中的作用

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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会

作者：李木子王辉郝攀南汇珠刘晶刘群中国农业大学动物医学院

细胞凋亡是机体生命活动过程中一种基本的生物学现象,也在多种疾病发生过程中发挥重要功能。有多种蛋白参与调控细胞凋亡,其中一类含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspases是凋亡的关键因子。弓形虫没有Caspases,但存在结构和功能与Casp... 详细信息

细胞凋亡是机体生命活动过程中一种基本的生物学现象,也在多种疾病发生过程中发挥重要功能。有多种蛋白参与调控细胞凋亡,其中一类含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspases是凋亡的关键因子。弓形虫没有Caspases,但存在结构和功能与Caspases类似的Metacaspases,后者在植物、真菌及原生生物中具有调控细胞周期和参与细胞凋亡等功能。已有研究发现在体外可通过凋亡诱导剂诱导弓形虫凋亡,虫体表现为典型的细胞凋亡现象。本研究构建了TgMCA基因敲除株及过表达株,通过基因调控株与野生株的比较研究,揭示MCA在弓形虫中的功能。通过生物信息学分析发现弓形虫Metacaspase(TgMCA)具有依赖于半胱氨酸和组氨酸的p20结构功能域,预示着其可能参与虫体凋亡。间接免疫荧光(IFA)结果显示,MCA定位于胞内虫体的细胞质;当虫体处于胞外环境中,其向虫体细胞核聚集,说明其可能进入细胞核发挥功能。当虫体处于胞外缓冲液4小时,通过细胞入侵实验发现基因缺失株虫体活力强于野生株,同时经TUNEL法检测,基因缺失株虫体凋亡率显著降低;过表达株对胞外环境更敏感,凋亡率升高,以上结果证实TgMCA在弓形虫凋亡过程中发挥重要作用。TgMCA基因缺失不影响虫体发育繁殖,但过表达株增殖能力下降,对小鼠的毒力也相应降低;通过IFA观察过表达株处于内二分裂的虫体数量显著多于野生株,这可能由于过表达MCA调控虫体细胞分裂周期造成的。

关键词：弓形虫凋亡 Metacaspase

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