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排序：

鸽新城疫病毒分离鉴定及实验感染鸽的排毒监测

鸽新城疫病毒分离鉴定及实验感染鸽的排毒监测

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张清水李占鸿马富梅李冰心杨秀环苏敬良中国农业大学动物医学院北京动物疫病控制中心

前言鸽新城疫是由1型禽副粘病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病。该病发病急、传播快、死亡率高,给养鸽业造成了极大的危害。本实验室从北京地区发病的商品肉鸽中分离到1株新城疫病毒并对其全基因组序列进行分析,实验感染雏鸽表现... 详细信息

前言鸽新城疫是由1型禽副粘病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病。该病发病急、传播快、死亡率高,给养鸽业造成了极大的危害。本实验室从北京地区发病的商品肉鸽中分离到1株新城疫病毒并对其全基因组序列进行分析,实验感染雏鸽表现出极高的致病性,并通过口咽和泄殖腔持续排毒,引发同居感染。材料和方法病毒分离采集发病鸽肝脏和脑组织,研磨制成20%悬液并用220nm孔径滤膜过滤除菌,接种3枚9日龄SPF鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液进行血凝和血凝抑制实验,鉴定为新城疫病毒后,参照已发表的序列合成引物。利用RT-PCR扩增病毒基因组并进行序列测定和比对分析。雏鸽感染及排毒监测通过滴鼻途径感染鸽子,同时放入未攻毒鸽子作为对照,分别于感染后第2天、4天、6天、8天和10天用灭菌棉拭子采集鸽子咽拭子和泄殖腔拭子,拭子处理后取上清感染鸡胚成纤维细胞(CEF),72h后取CEF细胞上清液进行红细胞凝集实验,通过凝集实验结果确定拭子中病毒有无,同时观察鸽子的发病及死亡情况。采集发病鸽血液,利用血凝抑制试验检测鸽血清中的抗体水平。结果与讨论分离的鸽源新城疫病毒BJ2014株全基因组长度15192nt,属Ⅵ基因型,F蛋白裂解位点符合强毒特征。本实验感染鸽子30只(实验组),未感染同居鸽(对照组)6只。鸽子攻毒2天后即可检测到鸽子排毒,其中实验组咽拭子检出率为57%,泄殖腔拭子的检出率为13%。4天后实验组咽拭子的病毒检出率为100%,泄殖腔拭子的病毒检出率为40%。6天后实验组咽拭子病毒检出率依然为100%,泄殖腔拭子检出率为76%,8天后实验组咽拭子病毒检出率为100%,泄殖腔拭子检出率为88%。对照组于6天时在咽拭子和泄殖腔拭子中检测到病毒。攻毒实验组在攻毒后的第3、4天有几只出现轻微症状,第5天绝大部分攻毒组鸽子出现头颈震颤、翅下垂等神经症状。攻毒后第7天有6只出现死亡,攻毒后第11天,实验组鸽子死亡率达90%。对照组鸽子7、8天时出现神经症状,至11天死亡3只,死亡率为50%,观察至13天,剩余鸽子均未死亡。发病鸽采集血清中的抗体血凝抑制效价较低。通过咽拭子和泄殖腔拭子中病毒的测定可以发现鸽感染新城疫病毒后,第2天就开始排毒,前期病毒排出主要通过口腔、呼吸道途径,消化道途径排毒量较少。感染后期病毒通过消化道途径排出量增加。强毒感染后,第三天即可导致鸽子发病,攻毒11天后的致死率达90%。结论鸽新城疫病毒BJ2014分离株为基因Ⅵ型,实验感染雏鸽48h即开始排毒,开始主要通过口咽排毒,后期口咽和和消化道均排毒。该毒株对雏鸽具有高度的致死性和接触传染性。

关键词：咽拭子检出率鸽新城疫病毒分离鉴定新城疫病毒实验感染

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重组鸡白细胞介素-6/2复合蛋白对鸡T、B淋巴细胞增值活性和T淋巴细胞亚群的影响研究

重组鸡白细胞介素-6/2复合蛋白对鸡T、B淋巴细胞增值活性和T淋巴...

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：李勤楠闫若潜吴志明谢彩华赵雪丽李宁李方方河南科技大学动物科技学院河南省动物疫病预防与控制中心

引言白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）具有促进Th2型细胞分化,刺激T、B淋巴细胞增殖与分化,可作为疫苗佐剂发挥其免疫增强作用;白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可促进T细胞生长与分化,诱导CTL、NK细胞细胞分泌Th1型细胞因子,从... 详细信息

引言白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）具有促进Th2型细胞分化,刺激T、B淋巴细胞增殖与分化,可作为疫苗佐剂发挥其免疫增强作用;白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可促进T细胞生长与分化,诱导CTL、NK细胞细胞分泌Th1型细胞因子,从而提高机体的细胞免疫能力;将IL-2与IL-6联合应用可发挥更强的协同免疫增强作用。本研究前期的研究结果已证明表达纯化的重组鸡白细胞介素-6/白细胞介素-2（重组复合蛋白,rChIL-6-Linker-ChIL-2）在体内外均具有与抗ChIL-6单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性反应的免疫原性,且均具有促鸡外周血T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖活性。本研究在此基础上进一步研究重组复合蛋白应用鸡体后对鸡淋巴细胞亚群的影响,并与重组鸡ChIL-6（rChIL-6）和ChIL-2蛋白（rChIL-2）进行比较,以揭示重组融合蛋白在鸡体内增强细胞免疫和体液免疫功能的作用机理。材料与方法重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2均由河南省动物疫病预防控制中心保存;28日龄SPF鸡由乾元浩郑州生物药厂提供;流式细胞仪（FACS Calibur）为美国BD公司产品;将实验动物分为PBS组、重组复合蛋白组、单一rChIL-6组、单一rChIL-2组、rChIL-6+rChIL-2混合组,于28日龄进行蛋白注射,于接种前（0 dpi）以及接种后的不同时间（dpi）采集一次抗凝血和脾脏。采用MTS法分别测定不同时期各组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）和脾脏B淋巴细胞的增殖活性;采用流式细胞术对不同时期各组鸡外周血T淋巴细胞中CD3CD4、CD3CD8百分含量以及CD4/CD8比值进行检测。结果与讨论结果表明:7 dpi5 dpi,重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2、rCHIL-6+rChIL-2混合蛋白均具有良好的促T、B淋巴细胞增殖活性,重组复合蛋白组和rChIL-6+rChIL-2混合蛋白组促鸡T、B淋巴细胞增殖活性显著优于单一蛋白使用组（P<0.05）,各蛋白接种组在14 dpi1 dpi期间,鸡T、B淋巴细胞的增殖活性曲线达到峰值;重组复合蛋白、rChIL-6、rChIL-2和rChIL-6+RChIL-2混合蛋白在7 dpi1 dpi期间均可显著提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3CD4细胞百分含量、降低CD3CD8细胞的百分含量、提高CD4/CD8比值;7 dpi1 dpi期间,重组复合蛋白组鸡的CD3CD4、CD3CD8细胞含量及CD4/CD8比值与单一蛋白对照组相比差异均显著（P<0.05）;由此可见,重组融合蛋白具有良好的促进T、B淋巴细胞增殖的活性,提高外周血中CD4/CD8比值,增强机体的体液免疫和细胞免疫;重组复合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4/CD8比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于单一rChIL-6蛋白或rChIL-2蛋白;重组复合蛋白在体内发挥了ChIL-6、ChIL-2对细胞免疫和体液免疫功能的协同增强作用。

关键词：复合蛋白白细胞介素重组融合蛋白淋巴细胞亚群

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β-丙内酯在H9N2禽流感灭活疫苗中的应用研究

β-丙内酯在H9N2禽流感灭活疫苗中的应用研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄文科陈春丽韩静芳梁桂益林绮萍严洁珍陈瑞爱广东大华农动物保健品股份有限公司

前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗... 详细信息

前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗安全性和疫苗免疫效力等多个方面进行了研究,为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供参考依据。材料与方法(1)灭活条件的优化:β-丙内酯以不同浓度、不同灭活时间、不同pH值条件下对H9N2鸡胚毒进行4℃灭活,然后37℃水解2h,最后检测灭活效果及灭活前后胚液HA效价。(2)β-丙内酯残留量检测:对灭活后鸡胚液和免疫疫苗后肌肉进行残留量检测。(2)动物免疫试验:按照优化后的灭活条件灭活H9N2的SPF鸡胚毒液和海兰鸡鸡胚毒液,用常规浓度为0.1%甲醛量灭活作对照,然后分别制备成油乳剂灭活苗免疫SPF鸡和广西土鸡,另设生理盐水、大华农商品苗免疫组作对照组,定期检测免疫鸡血清AIV-H9 HI抗体变化情况。结果与分析(1)β-丙内酯灭活条件的优化:试验结果显示β-丙内酯对禽流感H9N2病毒胚液最佳的灭活条件为β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000灭活24h或β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000灭活18h;本实验设定的三个pH值(6.5、7.0、7.5)对病毒灭活效果的影响不明显;β-丙内酯灭活后的胚液HA效价下降在1个滴度以内,甲醛对照组灭活后的胚液HA效价下降为1～2个滴度。(2)残留量检测结果:H9N2鸡胚毒液经β-丙内酯灭活和水解后,鸡胚液和SPF鸡、广西土鸡免疫疫苗肌肉中未检测到β-丙内酯残留,且免疫鸡无异常发生,说明β-丙内酯在灭活后的37℃水浴中完全水解,在疫苗中无残留,对动物机体安全性高。(3)动物免疫试验结果:SPF鸡胚毒液制备的油苗和大华农油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为8log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0～1.5log2之间,优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组。海兰胚毒液制备的油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高的HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为7log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0～2 log2之间,略优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组。结论本研究结果显示β-丙内酯具有对H9N2灭活能力强HA效价影响小、极易水解成对机体无害产物而无残留等优点,以β-丙内酯作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗与甲醛作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗免疫SPF鸡和广西土鸡免疫效果相当,这一结果为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供了参考依据。

关键词： β-丙内酯禽流感灭活疫苗灭活剂

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白在鸡体内最佳使用剂量研究

重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白在鸡体内最佳使用剂量研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：王东方闫若潜吴志明刘梅芬赵雪丽谢彩华王淑娟马震原李勤楠河南省动物疫病预防与控制中心河南科技大学动物科技学院

引言α干扰素（Interferon-α,IFN-α）具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性,可增强机体细胞免疫应答水平。白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可以提高机体的细胞和体液免疫应答水平,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。将I... 详细信息

引言α干扰素（Interferon-α,IFN-α）具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫激活功能活性,可增强机体细胞免疫应答水平。白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）可以提高机体的细胞和体液免疫应答水平,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。将IFN-β和IL-2联合应用可发挥协同抗病毒和免疫增强作用。课题前期研究证明表达成功的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2重组融合蛋白（rChIFN-a-Linker-ChIL-2）在体外具有显著的协同生物学活性。本研究在前期研究的基础上开展重组融合蛋白在鸡体内抗传染性法氏囊病毒（IBDV）的最佳使用剂量研究。通过检测攻毒前后外周血带毒时间、外周血中细胞因子的表达水平及外周血中淋巴细胞亚群等指标的差异以揭示重组融合蛋白在鸡体内抗病毒和免疫增强作用的机理,并筛选重组融合蛋白在鸡体内发挥最佳抗病毒活性的最适剂量。材料与方法重组融合蛋白、重组鸡α干扰素蛋白（rChIFN-α）、IBDV由河南省动物疫病预防控制中心研究和保存;30日龄SPF鸡由乾元浩郑州生物药厂提供;流式细胞仪（FACS CaIibur）为美国BD公司产品。将IBDV LX强毒株人工感染37日龄SPF鸡,同时分别选取在CEF细胞上抗VSV活性单位为200IU、1000IU、3000IU、5000IU的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白采用注射方式进行鸡体内活性比较实验;并观察试验鸡临床症状,检测攻毒前、后（dpc）不同时间鸡体的排毒率、IBDV在不同组织器官的动态分布、外周血带毒时间、外周血中ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChIFN-α、ChIFN-γ细胞因子的表达水平,鸡PBLC和脾脏淋巴细胞的增殖活性及外周血中淋巴细胞亚群等指标。结果与讨论结果表明,不同剂量的重组融合蛋白在鸡体的抗病毒活性存在差异。注射后不同时间,3000IU重组融合蛋白试验组IBD典型症状持续时间、病死率、排毒率、各组织器官带毒率、外周血持续带毒率（28h、20%、22.2%、16.7%、23.5%）等指标均显著低于其他剂量的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白对照组;ChIL-2、ChIL-4、ChIL-6、ChiFN-α、ChIFN-γ五种细胞因子的表达水平均显著高于其他组;12 dpc时,不同实验组鸡的外周血T淋巴细胞、脾脏淋巴细胞增殖活性达到峰值,且3000IU重组融合蛋白实验组鸡的OD490值（0.2654、0.3406）均显著高于其他实验组鸡（p<0.05）;12 dpc5 dpc期间,不同剂量的攻毒实验组鸡的CD4+/CD8+比值均显著低于相同剂量的重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白对照组,其中3000IU的重组融合蛋白攻毒组鸡的CD4+/CD8+比值显著高于其他剂量的攻毒实验组鸡和所有rChIFN-β蛋白对照攻毒实验组。以上各项检测指标表明,重组融合蛋白体内、外抗病毒和免疫增强活性均高于rChIFN-α蛋白对照,且3000IU的重组融合蛋白在鸡体内具有最佳的抗病毒和免疫增强活性。重组融合蛋白在鸡体内以提高外周血中CD3+CD4+细胞的含量,降低CD3+CD8+细胞的含量,使CD4+/CD8+比值大幅升高来增强机体细胞免疫能力。

关键词：鸡α干扰素 IFN 不同剂量重组融合蛋白使用剂量白细胞介素

来源：评论

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H9N2亚型禽流感病毒NA基因的序列分析

H9N2亚型禽流感病毒NA基因的序列分析

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄欣梅李银赵冬敏刘宇卓杨婧韩凯凯江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

引言我国自1994年首次报道鸡感染H9N2亚型AIV以来,该病毒迅速传播至其它地区,目前已成为我国主要的禽流感流行毒株,给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。神经氨酸酶（NA）是流感病毒表面的一种重要糖蛋白,不仅是制备疫苗的重要抗原成分,... 详细信息

引言我国自1994年首次报道鸡感染H9N2亚型AIV以来,该病毒迅速传播至其它地区,目前已成为我国主要的禽流感流行毒株,给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。神经氨酸酶（NA）是流感病毒表面的一种重要糖蛋白,不仅是制备疫苗的重要抗原成分,还是流感治疗药物的作用靶点。NA具有较高的变异性,易发生抗原漂移以及产生耐神经氨酸酶抑制剂的毒株。本文分析了华东地区2008～2013年分离的H9N2亚型AIV的NA基因序列,从分子水平了解本地区H9N2亚型AIV NA基因的变异特点和耐药性情况,为H9N2亚型禽流感的防控提供一定的理论依据。材料与方法（1）病毒:11株H9N2亚型AIV毒株均由本实验室于2008～2013年从江苏、安徽、浙江等省有温和流感症状或无明显病症的家禽中分离,经鉴定为H9N2亚型。（2）引物:参考GenBank上发表的H9N2亚型AIVNA基因序列,设计流感病毒通用反转录引物Uni12和一对用以扩增NA全基因序列的特异性引物。（3）NA基因RT-PCR扩增及测定:用体液病毒DNA/RNA抽提试剂盒提取病毒RNA,以Uni12为反转录引物进行反转录获得cDNA,然后以此cDNA为模板进行PCR扩增。将获取的NA基因与pMD18-T载体连接并转化DH5α感受态细胞,挑选阳性克隆菌送南京金斯瑞公司测序。（4）NA基因序列比较分析:应用DNAStar软件分析NA基因的同源性,并对唾液酸结合位点、蛋白酶活性位点、潜在糖基化位点、抗原决定簇的氨基酸差异进行分析。用MEGA5.05软件进行序列比对,绘制遗传进化树。结果与讨论（1）NA基因系统进化分析:分析结果表明,11株毒株NA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为86.2%9.5%和86.9%9.1%,均属于欧亚分支。其中9株鸡源毒株属于Y280-like亚系,在NA蛋白颈部63～65位点缺失了3个氨基酸;2株鸭源毒株属于G1-like亚系,在颈部39、40位点缺失了2个氨基酸。NA蛋白颈部长度的变化会影响神经氨酸酶的活性,引起病毒复制能力的变化,进而影响病毒的毒力。（2）NA蛋白氨基酸序列分析:11株分离株的NA蛋白在69、146、200、234位点处的N-糖基化位点比较保守,其余的糖基化位点都出现了变异。红细胞结合位点（HB）在431～433位点区域比较保守,但在366～373和399～404位点区域的氨基酸发生了明显的变异。抗原决定簇中的部分氨基酸序列变异也较为活跃,推测与使用疫苗后的抗体选择有关。NA蛋白酶活性位点处的氨基酸非常保守,没有发生与抗神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。结论研究结果表明江苏、安徽、浙江等省养殖鸡群中的H9N2亚型禽流感病毒仍以Y280-like分支较为常见,鸭群中出现G1-like分支应引起人们的注意。NA基因存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。

关键词：禽流感病毒 AIV 糖基化位点序列分析

来源：评论

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牛副流感病毒3型P蛋白磷酸化位点与功能性结构域预测分析

牛副流感病毒3型P蛋白磷酸化位点与功能性结构域预测分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：赵贵民王洪梅何洪彬山东省农业科学院奶牛研究中心

引言牛副流感病毒3型(BPIV3)是引起牛等多种动物急性呼吸道疾病的主要病原。感染BPIV3后可导致机体免疫机能和巨噬细胞功能低下,进而继发细菌或支原体感染,引起严重的肺炎,导致牛呼吸道疾病综合征(BRDC),使死亡率大大增加,严重制约我国... 详细信息

引言牛副流感病毒3型(BPIV3)是引起牛等多种动物急性呼吸道疾病的主要病原。感染BPIV3后可导致机体免疫机能和巨噬细胞功能低下,进而继发细菌或支原体感染,引起严重的肺炎,导致牛呼吸道疾病综合征(BRDC),使死亡率大大增加,严重制约我国乃至世界养牛业的健康发展。副黏病毒P蛋白中因丝氨酸和苏氯酸含量较高,常作为磷酸化位点被病毒感染的宿主细胞内蛋白激酶激活而发生磷酸化,其磷酸化对病毒转录与复制的调控作用是目前研究的热点。解析BPIV3 P蛋白磷酸化作用,可以更好地为抗病毒药物的研制提供策略。材料与方法 BPIV3分离株SD2014为本单位疾病研究室分离保存。利用生物信息学的方法首先比较了副黏病毒不同种属病毒P蛋白氨基酸序列的同源性,然后比对了23株副流感病毒3型的P蛋白序列,预测分析了BPIV3 SD2014毒株保守的磷酸化位点与功能性结构域的对应关系。结果与讨论对副黏病毒P蛋白序列进行同源性比对,发现P蛋白氨基酸从241-709不等,同一属的不同病毒氨基酸数目基本相同,但是呼吸道病毒属的副流感病毒1型P蛋白编码385aa,而3型则编码600aa,相差较大。通过分析发现BPIV3 SD2014毒株P蛋白中可能存在22个潜在的磷酸化位点,按不同蛋白激酶作用类型,将这些磷酸化位点分为PKA、PKB、PKC、cdc2、CKⅠ/CKⅡ、p38MDBK和其他蛋白激酶7个组。将SD2014 BPIV3毒株P蛋白功能结构域进行了预测,4个主要功能结构域PNT、PMD、PCT和PX分别位于1-50 aa、50-271 aa、398-479aa和551-600aa,发现PKC激酶的作用位点贯穿了全部4个功能结构域。本研究发现的磷酸化位点的具体功能还需进一步通过试验验证。副流感病毒的P蛋白对病毒RNA合成是必需的,P蛋白在病毒生长周期内与多种蛋白相互作用。宿主细胞内蛋白激酶对P蛋白的磷酸化作用是P蛋白实现其功能的前提条件,阐明作用于BPIV3 P蛋白的磷酸激酶和其发挥作用的主要磷酸化位点意义重大。结论 PKC激酶的作用位点贯穿于BPIV3 P蛋白的4个功能结构域,特别是在参与P蛋白自身四聚体形成和与L蛋白互作的区域。

关键词：磷酸化位点功能性结构域副黏病毒副流感病毒预测分析

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我国牛羊疫病防控的难点、研究现状和对策

我国牛羊疫病防控的难点、研究现状和对策

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：于力常继涛王芳姜志刚周国辉王海伟杨德成中国农业科学院哈尔滨兽医研究所牛羊传染病研究创新团队

本文阐述当前我国牛羊传染病防控的难点、研究的现状、存在的问题、以及应采取的对策,内容包括重大疫病、新发疫情、人畜共患病、梭菌类疾病、呼吸/消化/繁殖系统疾病。1)口蹄疫病毒的毒力明显增强,加之O型变异株的出现,如果畜群的免疫... 详细信息

本文阐述当前我国牛羊传染病防控的难点、研究的现状、存在的问题、以及应采取的对策,内容包括重大疫病、新发疫情、人畜共患病、梭菌类疾病、呼吸/消化/繁殖系统疾病。1)口蹄疫病毒的毒力明显增强,加之O型变异株的出现,如果畜群的免疫力不坚强或者无免疫力,会导致幼畜发生轻度或高度死亡,这就对疫苗的免疫效力及其免疫覆盖率提出了更高的要求;2013年以来,A型口蹄疫在猪群中流行,不但给A型非免疫的猪群带来严重的危害,非典型感染的A型病毒潜伏在猪群中也成为牛群的持久威胁。2)新发疫情是危害我国牛羊养殖业发展的大敌,需要实时应对、即时研究、及时献策,才能化解危机:荚膜A型巴氏杆菌引起的牛纤维素性化脓性肺炎,是2008年以来对我国养牛业尤其是肉牛业危害最大的传染病,尽快将疫苗推向市场是当务之急;牛leachii支原体病主要通过污染的精液传播,用污染精液繁育的所有新生犊牛发生死亡或被淘汰,一旦发生损失巨大,有效的预防办法是检测精液控制传染源;小反刍兽疫是对养羊业危害最大的疾病,2013年传入我国大部分地区,因及时引进并使用高效的减毒活疫苗得到有效控制,未来的清除计划要求建立该减毒疫苗株与野毒株的鉴别诊断方法;2014年以来,我国许多省和周边国家发生羊痘疫情,是山羊痘减毒活疫苗的效力出现了问题还是流行毒株发生了变化,有待证实。3)牛羊来源人畜共患病的主要难题是牛羊布病和牛结核,关系到人畜健康和食品安全:近年来我国人畜的布病和结核感染呈现明显的上升趋势,已引起广泛的关注,我国和世界上控制和消灭这两种疾病的有效经验是检疫和淘汰;由于我国一些地区牛羊群的布病感染率高,采用检疫淘汰方法难以奏效,因此国家制定政策允许使用布病疫苗;存在的问题是,我国现有疫苗株均残存毒力,而且与野毒株感染的鉴别诊断也缺乏有效性,从免疫预防考虑引进更加安全有效的布病疫苗株是当前的迫切问题;实施检疫淘汰策略的关键是补贴额到位和严格执法,检疫方法的提升可缩短清群计划的时间。4)梭菌类疾病,包括牛羊肠毒血症、羔羊痢疾、羊快疫、羊猝狙、羊黑疫,是由梭状芽孢杆菌属的细菌引起的以毒血症为特征的一类传染病,发病急死亡率高、对牛羊危害严重,当前问题是疫苗的效力和质量需要改进。5)呼吸系统疾病,指牛羊呼吸道病综合征(RDC),牛RDC由BRSV、IBRV、BPIV3和几种继发性细菌感染引起,羊RDC的病原尚不明确。6)消化系统疾病,主要指G6/G10轮状病毒引起的犊牛和羔羊腹泻,已完成G6/G10基因重配二价减毒疫苗的研究,急需产业化并投放市场;犊牛腹泻的另两类主要病原是产毒素性大肠杆菌和冠状病毒,前者用抗生素可有效控制,后者对环境因素高度敏感、不常发生。7)繁殖系统疾病,指引起牛羊流产的传染病,近年来呈明显上升的趋势;除布病外,其他可能的病因包括IBRV、BVDV、几种虫媒病毒(阿卡斑病毒、中山病病毒和茨城病病毒),这些病原在我国流行广泛,与牛羊流产的因果关系尚待确定。8)未来的威胁:国外发生的疯牛病、痒病、蓝舌病8型和施马伦贝格病,一旦传入将对我国牛羊产业造成严重的损失,需严加防范并做好储备性研究。

关键词：传染病野毒株鉴别诊断疫病防控疫苗株人畜共患病现状和对策

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一株鸭源巴泰病毒的分离鉴定

一株鸭源巴泰病毒的分离鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：章丽娇张清水傅光华王俊胡薛英黄瑜何伟勇苏敬良中国农业大学动物医学院福建省农业科学院畜牧兽医研究所华中农业大学动物医学院

引言巴泰病毒属于布尼亚病毒科布尼亚病毒属,于1955年首次从马来西亚的库蚊中分离得到。该病毒广泛分布于亚洲与欧洲,主要经库蚊与按蚊传播,许多脊椎动物、啮齿类动物以及鸟类可为其寄生宿主。该病毒主要感染哺乳动物与人类,可引起发热... 详细信息

引言巴泰病毒属于布尼亚病毒科布尼亚病毒属,于1955年首次从马来西亚的库蚊中分离得到。该病毒广泛分布于亚洲与欧洲,主要经库蚊与按蚊传播,许多脊椎动物、啮齿类动物以及鸟类可为其寄生宿主。该病毒主要感染哺乳动物与人类,可引起发热、病毒性脑炎甚至死亡。我国于1998年首次从云南按蚊中分离到1株巴泰病毒。Liu等报道于2012年从内蒙古牛体内分离到另1株巴泰病毒。2014年4月,我们从浙江某鸭场送检的成年番鸭中分离得到1株巴泰病毒,并对病毒的生物学特性与基因组结构进行了鉴定。材料与方法采集组织样本排除细菌感染后,将感染鸭肝脏、脾脏及脑组织研磨制成20%悬液,过滤除菌后接种9日龄鸭胚,收集感染胚尿囊液接种鸭胚成纤维细胞、BHK-21与Vero细胞观察记录细胞病变。对分离的病毒采用透射电镜观察以及PCR检测等方法进行鉴定。确定为巴泰病毒后,根据文献报道的3株巴泰病毒全基因组序列设计引物,同时采取5'与3'race技术扩增出该病毒的全长序列,利用DNASTAR、MEGA5等生物学软件进行核苷酸与氨基酸序列的比对及进化树分析。结果与讨论病料接种后并未致死鸭胚,收集的尿囊液接种BHK-21与Vero细胞后均于24h左右开始出现相似的细胞病变,感染细胞固缩变圆并逐渐脱落;但接种C6/36细胞后约36h才开始出现病变。而接种鸭胚成纤维细胞病变则比较轻微,感染细胞不出现明显的脱落。细胞培养繁殖动态试验结果表明病毒感染上述四种细胞系后均于24-36h达到繁殖最高峰,其在BHK-21与Vero细胞上的滴度最高,可达107pfu/mL,C6/36细胞次之,鸭胚成纤维细胞最低。感染后48h的细胞超薄切片于透射电镜下观察,于胞浆内可见60-70nm直径的有囊膜病毒粒子。全基因组序列分析表明该分离株基因组全长12253个核苷酸,由S、M、L三个片段组成。S片段长946nt,5'非编码区长176nt(病毒RNA方向),编码区含两个可读框,分别编码含233个氨基酸的核衣壳蛋白N与101个氨基酸的非结构蛋白NS,3'非编码区长68nt。M片段长4437nt,5'和3'非编码区长分别为91nt和41 nt,可读框编码1434个氨基酸的多聚前体蛋白。L片段长6870nt,5'和3'非编码区长分别为108nt和48nt,可读框编码含2237个氨基酸的RNA聚合酶。在S、M和L片段5'端与3'端各存在15～17nt的保守序列,并呈反向互补,有助于病毒的三个片段各自形成环状结构。核苷酸序列系统进化树分析结果表明,该分离株的S片段和L片段均与中国内蒙NM/12株亲缘关系最近,分离株的M片段与Chittoor/IG-20217株(印度,1957)和巴泰病毒原型株MM2222(马来西亚,1955)属同一进化树分支,但与NM/12株亲缘关系相对略远。氨基酸序列进化树分析结果表明分离株的M段与L段均与NM/12株属于同一进化分支,同时发现在氨基酸水平上亚洲地区的巴泰分离株亲缘关系相对较近。结论本研究首次报道从商品鸭中分离到一株鸭源巴泰病毒,全基因组系列分析表明该毒株与我国内蒙古牛源毒株亲缘关系最近。证明我国西南、西北和华东地区均有巴泰病毒分布,其致病性及流行病学意义有待于进一步研究。

关键词：巴泰病毒内蒙古亲缘关系细胞病变分离鉴定

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1～10日龄SPF鸡和商品肉鸡免疫IBD活毒疫苗效果观察

1～10日龄SPF鸡和商品肉鸡免疫IBD活毒疫苗效果观察

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：张渊魁詹先强刘玉云郦晓琼王泽霖郑鹿平福州大北农生物技术有限公司乾元浩生物股份有限公司南京厂河南农业大学禽病研究所

引言为预防鸡传染性法氏囊病通常给雏鸡免疫活毒疫苗,但活毒疫苗常受母源抗体干扰,影响病毒复制、导致免疫失败;如用毒力较强的疫苗免疫,则会引起法氏囊损伤,造成免疫抑制。本研究探讨1～10日龄SPF鸡和商品肉鸡免疫活毒疫苗后3～4周IBD... 详细信息

引言为预防鸡传染性法氏囊病通常给雏鸡免疫活毒疫苗,但活毒疫苗常受母源抗体干扰,影响病毒复制、导致免疫失败;如用毒力较强的疫苗免疫,则会引起法氏囊损伤,造成免疫抑制。本研究探讨1～10日龄SPF鸡和商品肉鸡免疫活毒疫苗后3～4周IBD的抗体水平和攻毒保护,旨在与高效法氏囊灭活联苗进行比较,为生产上准确选用疫苗提供科学依据。材料与方法试验用疫苗:IBD中等毒力NF8活苗由乾元浩生物有限公南京厂提供,批号:20140101,有效期至2015.07.08;IBD复合冻干苗(含高毒力2512株)购自梅里亚有限公司美国精选大药厂,批号:LZ097,有效期至2014.08.06。试验用鸡:1日龄SPF鸡135只,分为3大组,每大组45只;1日龄带有母源抗体的商品肉鸡135只,也分为3大组,每大组45只。上述鸡均在各隔离器中喂养,每大组再分成3个小组,各1、2小组于1、5、10日龄分别免疫NF8和2512活毒疫苗,第3小组不免疫做对照。抗体测定:免前、免后20、25天定期采血测定抗体,IBD微量中和试验按常规方法进行。攻毒试验:免疫后25天,从各免疫组和对照组取出5只扑杀检查法氏囊病变,如未见法氏囊明显病变,则进行攻毒。攻毒时免疫组各取10只,连同的对照鸡10只,经口接种IBDVBC6-85株强毒,每只0.2ml,72小时后剖杀,检查法氏囊病变,判定各组保护率。结果与讨论1、5、10日龄SPF鸡免疫NF8活毒疫苗、复合冻干苗(2512株)后IBD中和抗体上升缓慢,免后25天NF8活毒疫苗组的中和抗体依次为6.5、6.8、7.2(1og2),复合冻干苗(2512株)组的中和抗体依次为5.8、9.5、9.9(1og2),均未达到保护临界水平。因剖解检查NF8免疫组部分鸡法氏囊已偏小,复合冻干苗(2512株)免疫组全部鸡法氏囊已高度萎缩,故未再进行攻毒。1日龄有母源抗体(11.3 log2)的商品肉鸡免疫NF8活毒疫苗、复合冻干苗(2512株)后IBD中和抗体持续下降,5、10日龄商品肉鸡免疫NF8、2512活毒苗抗体先下降,而后略有上升。免疫后25天1、5、10日龄免NF8活毒疫苗组的中和抗体依次为4.6、5.7、6.5(1og2),攻毒保护为0/10、1/10、1/10;免复合冻干苗(2512株)组的抗体依次为7.0、8.0、9.3(1og2),攻毒保护为1/10、1/10、2/10(大部分囊萎缩)。未免疫对照组抗体依次为3.9、4.0、3.91og2,毒保护为0/10、0/10、0/10。结论本实验与以往的实验一样,再次证实(1)中等毒力NF8活苗,尤其是高毒力的复合冻干苗(2512株)免疫1、5、10日龄SPF鸡后,可造成鸡法氏囊的部分/全部萎缩,且抗体上升缓慢,免后25天未能达到免疫临界水平;(2)免疫有母源抗体的商品肉鸡后,因受母源抗体干扰,1日龄免疫组抗体持续下降,5、10日龄免疫组抗体先下降而后略有上升,免后25天未能达到免疫临界水平,攻毒均不能很好保护。

关键词：商品肉鸡冻干苗法氏囊病 SPF IBD 疫苗效果

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牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定

牛病毒性腹泻病毒石河子株的分离与基因型鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：任艳陈创夫乔军杨霞张辉王鹏雁盛金良倪伟石河子大学动物科技学院新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室石河子大学动物科技学院石河子大学生命科学学院

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)不同的基因型在抗原性方面存在差异,使疫苗免疫难以收到预期效果。本实验对分离到的BVDV石河子株和其它石河子分离株进行基因型鉴定,通过对病毒的遗传分类研究,为该病的防治和开发... 详细信息

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)不同的基因型在抗原性方面存在差异,使疫苗免疫难以收到预期效果。本实验对分离到的BVDV石河子株和其它石河子分离株进行基因型鉴定,通过对病毒的遗传分类研究,为该病的防治和开发新的基因工程疫苗提供一定依据。采用免疫学实验、电镜观察、理化特性测定以及PCR技术、同源性比较等方法分离、鉴定一株BVDV石河子分离株,命名为BVDV shz132株,并应用系统发生分析方法鉴定该株与其它石河子分离株Manasi、shihezi148和Letuyi株的基因型。将免疫学鉴定为阳性的样品进行病毒分离,电镜观察分离的BVDV shz132株病毒直径为40nm-60nm,为有囊膜的球形颗粒。理化鉴定结果与参考株BVDV Oregon C24V一致。根据BVDV基因组5′-UTR基因设计引物在发病牛淋巴结、肠道分泌物制备的悬液及其分离的病毒细胞培养物中均扩增得到了大小为267bp的片段。核苷酸同源性分析结果表明BVDV shz132株与BVDV Osloss株的同源性最高(97.5%),BVDV Manasi株等与BVDV NADL株的同源性最高(97.8%);系统发生分析表明上述所有石河子分离株均属于BVDV-Ⅰ型。

关键词：牛病毒性腹泻病毒分离基因型鉴定

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