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排序：

提高妊娠母猪繁殖效率的营养关键技术

提高妊娠母猪繁殖效率的营养关键技术

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中国畜牧兽医学会动物营养分会第七届中国猪营养学术研讨会

作者：吴德四川农业大学动物营养研究所雅安625014

中国母猪生产水平提升空间巨大,每头母猪年提供的上市肥猪数不足15头,仅相当于美国母猪生产水平的70％,更远低于丹麦,其原因在于我国母猪发情率低、有效活产仔数低、泌乳力不足和母猪繁殖寿命短、终生繁殖成绩低.因此,提高中国母猪繁殖... 详细信息

中国母猪生产水平提升空间巨大,每头母猪年提供的上市肥猪数不足15头,仅相当于美国母猪生产水平的70％,更远低于丹麦,其原因在于我国母猪发情率低、有效活产仔数低、泌乳力不足和母猪繁殖寿命短、终生繁殖成绩低.因此,提高中国母猪繁殖效率是当前母猪营养研究的首要任务.本文重点讲述妊娠母猪早期胚胎存活和产仔数提高的关键营养技术.现代妊娠母猪由于高度选育、体型更大、配种年龄小,更容易遭受营养和环境应激等特点,实际生产中提高妊娠母猪早期胚胎存活是改善繁殖力的关键.研究发现,妊娠母猪的营养需要主要依据维持需要和妊娠增重多少进行供给,妊娠增重主要包括胎盘和胎儿增重,不同胎次母猪妊娠增重有差异,特别是第1和2胎母猪的妊娠增重高于其它胎次.研究发现,1.2倍维持需要可显著提高早期胚胎存活和产仔数,其机制主要在于营养一方面影响子宫内环境的稳定,另一方面显著影响胎盘的养分转运效率;妊娠后期妊娠增重要适度,攻胎饲喂量过大,妊娠增重过多会显著降低泌乳期采食量,攻胎饲喂量不足,初生重较低,会显著影响仔猪断奶重和生长育肥猪的生产成绩.新近研究发现,能量来源(饱和和不饱和脂肪酸、碳水化合物类型、蔗糖、葡萄糖和红糖等)和蛋白质来源均会影响繁殖力,进而影响后代的生产成绩.此外,环境(如温度和湿度以及环境应激因子)也是影响妊娠母猪繁殖成绩的重要因素,只有营养与饲养管理技术有效结合,才能有效提高妊娠母猪的繁殖力.同时,本报告也讲述了提高妊娠母猪繁殖力的关键营养技术措施,如一些功能性添加物(如HMB、NCG、甲基供体复合物和纤维等)可显著影响胚胎早期胚胎存活和产仔数、以及泌乳期繁殖成绩及随后生产性能.

关键词：母猪繁殖性能营养关键技术

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永生化猪胎盘滋养层细胞系的细胞鉴定

永生化猪胎盘滋养层细胞系的细胞鉴定

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会

作者：张洪玲黄勇赵晓民童德文西北农林科技大学动物医学院

【目的】滋养层细胞是构成胎盘屏障的重要组成部分,也是某些病原微生物的主要靶细胞。但是,原代滋养层细胞的增殖能力随着传代次数的增加而逐渐降低,限制了某些持续性研究的开展。本研究将携带有人端粒酶逆转录酶(human telomerase reve... 详细信息

【目的】滋养层细胞是构成胎盘屏障的重要组成部分,也是某些病原微生物的主要靶细胞。但是,原代滋养层细胞的增殖能力随着传代次数的增加而逐渐降低,限制了某些持续性研究的开展。本研究将携带有人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)基因的p CI-neo-h TERT质粒导入到原代猪胎盘滋养层细胞内(Porcine placental trophoblast cells,PTCs),建立永生化的猪胎盘滋养层细胞(h TERT-PTCs),为研究猪繁殖障碍相关疾病提供细胞模型。【方法】利用胶原酶消化法、密度梯度离心法、反复贴壁法和消化排除法分离得到猪胎盘滋养层细胞后,分别通过免疫细胞化学技术、Western blot和RT-PCR对h TERT基因转染前后的猪胎盘滋养层细胞的细胞特性进行鉴定,放射免疫技术检测细胞激素分泌功能,软琼脂克隆形成试验和裸鼠致瘤试验检测永生化的猪胎盘滋养层细胞是否具有肿瘤转化特性。【结果】原代PTCs表达胎盘滋养层细胞特异性标志分子-细胞角蛋白7(cytokeratin7,CK-7),细胞贴壁后呈梭形或不规则多边形,具有接触抑制的生长特点,体外培养至第10代以后,细胞生长速度逐渐减慢,并出现以空泡化为主要特征的衰老迹象。将h TERT基因转染到原代细胞内,经G418筛选后,转染h TERT基因的猪胎盘滋养层细胞具有良好的增殖活性,生长速度显著快于原代猪胎盘滋养层细胞,可以连续传50代以上。RT-PCR和TRAP-ELISA检测结果显示,h TERT基因在转染后猪胎盘滋养层细胞内能稳定表达,并且保持着相对较高的端粒酶活性。免疫荧光染色、Western blot和RT-PCR结果显示,原代和转染后第50代猪胎盘滋养层细胞均表达CK-7和上皮细胞特异性黏附分子E-钙粘素,不表达波形蛋白和非经典MHC-Ⅰ分子。放射免疫检测结果显示,转染后的猪胎盘滋养层细胞具有分泌绒毛膜促性腺激素β亚基(CG-β)和胎盘催乳素(PL)的功能,并且与原代细胞相比差异不显著(P>0.05)。软琼脂克隆形成试验和裸鼠致瘤性试验结果表明,转染后的猪胎盘滋养层细胞不具有肿瘤转化特征。【结论】研究结果表明,通过转染外源性的h TERT基因可以使猪胎盘滋养细胞获得永生化,永生化的猪胎盘滋养细胞能够保留与原代滋养层细胞基本一致的关键生物学特性和功能,并且没有获得肿瘤转化特性,符合细胞建系要求,可以作为研究母猪繁殖障碍性疾病致病机制的细胞模型。

关键词：猪胎盘滋养层细胞人端粒酶逆转录酶永生化

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猪SAMHD1抑制高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在MARC-145细胞中的复制

猪SAMHD1抑制高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在MARC-145细胞中的...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：杨莘周艳君单同领姜一峰童武虞凌雪刘飞童光志中国农业科学院上海兽医研究所

2006年,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的出现,对我国的养猪业和养殖户造成了巨大的经济损失。目前,HP-PRRSV仍然是世界范围内防控的重点,并且其仍在持续的进化。最近研究证实,SAMHD1作为一种天然限制性因子,能够阻止HIV-1... 详细信息

2006年,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的出现,对我国的养猪业和养殖户造成了巨大的经济损失。目前,HP-PRRSV仍然是世界范围内防控的重点,并且其仍在持续的进化。最近研究证实,SAMHD1作为一种天然限制性因子,能够阻止HIV-1型病毒在髓源细胞中的复制。然而,SAMHD1的生物学特性还知之甚少。为了探索SAMHD1对PRRSV增殖的影响,本实验通过RACE方法克隆获得猪SAMHD1全基因及其编码序列,并构建了含有其编码序列的真核表达载体。将重组的真核表达载体转染MARC-145细胞,进而感染HP-PRRSV,观察病毒的复制增殖状况。其次,通过不同时间段感染HP-PRRSV,检测病毒在感染过程中对SAM-HD1蛋白的调控关系。猪SAMHD1同样为核内定位蛋白,几乎在所有的组织中均有表达。序列分析发现,其具有明显的遗传进化规律。Western blot、间接免疫荧光(IFA)和实时荧光定量RT-PCR检测发现,MARC-145细胞中过表达SAMHD1蛋白,能够明显抑制病毒的复制;细胞培养上清中病毒TCD50也明显降低。HP-PRRSV病毒在感染MARC-145细胞的不同阶段,SAMHD1的mRNA水平没有明显的变化,只是在感染后期20h-24hSAMHD1蛋白水平出现一定程度的下降。但HP-PRRSV病毒感染PAM细胞后不同时间段,荧光定量RT-PCR的方法检测SAMHD1蛋白mRNA变化发现,随着病毒感染SAMHD1蛋白mRNA水平出现明显的上调趋势;western blot检测发现,SAMHD1蛋白水平变化在感染后12h-24h出现明显的上调。HP-PRRSV在感染PAM细胞后,SAMHD1蛋白出现明显的活化,发挥其抗病毒作用,但病毒的增殖并没有受到影响。HP-PRRSV在感染细胞的过程中能够调控SAMHD1蛋白的活性来抑制其抗病毒作用,从而有利于自身的感染与增殖。本实验中,第一次克隆获得猪SAMHD1全基因序列。病毒滴度测定与westernblot结果分析表明,猪SAMHD1转染MARC-145细胞后能够有效抑制HP-PRRSV的复制,其抗病毒机制及其通路的活化仍需要进一步的探索,SAMHD1可作为一种潜在的抑制PRRSV及其他动脉炎病毒增殖的抗病毒因子。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 MARC-145 SAMHD1 PRRSV

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人工感染PRV后不同时期猪只血清抗体水平及病毒含量变化规律观察

人工感染PRV后不同时期猪只血清抗体水平及病毒含量变化规律观察

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中国畜牧兽医学会兽医内科与临床诊疗学分会第八届代表大会暨学术研讨会

作者：王钊哲王皓然王广龙王晓枫杨亮宇云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

伪狂犬病毒是由疱疹病毒科α亚科中的猪Ⅰ型疱疹病毒所引起的多种家畜、伴侣动物、实验动物和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的高度致死性疫病,带毒猪可通过尿液、鼻分泌物、乳汁及精液持续向外排毒,成为重要的传染... 详细信息

伪狂犬病毒是由疱疹病毒科α亚科中的猪Ⅰ型疱疹病毒所引起的多种家畜、伴侣动物、实验动物和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎为主要症状的高度致死性疫病,带毒猪可通过尿液、鼻分泌物、乳汁及精液持续向外排毒,成为重要的传染源.目前,大多养殖场对该病的防控缺乏科学的依据,以致免疫效果差,疾病得不到有效控制.该试验对12头猪只进行分组(10头试验猪,2头对照猪),试验组猪只人工感染PRV,之后从临床症状、抗体消长规律、病毒含量变化等多方面了解攻毒后0、3、7、14、21、35 d各个阶段血清抗体水平及血液病毒含量的变化规律.结果显示,在攻毒后3～7 d和8～14 d猪只体温达到最高,分别为40.8和41.2℃,显著高于对照组猪只(P＜0.05).日采食量在这2个阶段最低,分别为0.5和1.1 kg.在攻毒后7d时部分猪只出现神经症状,表现为前肢僵直,全身抽搐.抗体检测结果显示,猪只在攻毒后14 d开始逐渐产生抗体,且抗体水平随着攻毒时间呈上升趋势.荧光定量PCR检测结果显示,在攻毒后7d血液中病毒平均拷贝数达到最高值,之后逐渐降低,直至21 d完全检测不到病毒,但在28 d时又有2头检测到病毒,但拷贝量较第7天明显减低(P＜0.05),之后到第35天病毒又再次消失.上述结果说明,病毒在血液中的存在具有一定的反复性,且病毒含量逐渐降低与机体在攻毒14d后逐渐产生抗体有一定关系,这一结果为伪狂犬病的净化防控方案的制订提供了理论基础.

关键词： PRV 体温采食量抗体水平病毒含量

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血清钙检测试剂盒的应用及围产期奶牛低钙血症的调查

血清钙检测试剂盒的应用及围产期奶牛低钙血症的调查

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中国畜牧兽医学会兽医内科与临床诊疗学分会第八届代表大会暨学术研讨会

作者：李启涛孙美涵张义爽徐丹丹孙志鹏陈嘉武瑞黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

目前,我国成年母牛死亡有70％～80％发生在围产期,大多数都与低钙血症有关.鉴于此,该实验室研制了一种快速检测奶牛血清钙的试剂盒,具有快速、简便、经济实惠、低碳环保等优点.该试验利用该奶牛血清钙检测试剂盒与邻甲酚酞络合铜法通过... 详细信息

目前,我国成年母牛死亡有70％～80％发生在围产期,大多数都与低钙血症有关.鉴于此,该实验室研制了一种快速检测奶牛血清钙的试剂盒,具有快速、简便、经济实惠、低碳环保等优点.该试验利用该奶牛血清钙检测试剂盒与邻甲酚酞络合铜法通过对黑龙江地区围产期奶牛发病情况调查研究,旨在寻求奶牛国产期低钙血症的发病规律.选定黑龙江省4个养殖场的2000头繁殖奶牛为研究对象,按照春、夏、秋、冬4个季节进行.每个阶段每个牧场选取20头符合条件的奶牛,对其日粮组成、干物质摄入量、血液相关指标(钙、磷、镁含量)、乳汁相关指标(钙、镁含量)、泌乳量、不同季节、胎次、饲养模式的发病情况进行调查,将该实验室研制的奶牛血清钙检测试剂盒与标准的邻甲酚酞络合铜法进行对比.结果显示,4个牧场均不同程度地发生低钙血症,同一牧场不同阶段调查结果表明,养殖场Ⅰ在第2和第4阶段发病率较高可达10％,养殖场Ⅱ第1阶段发病率为5％,其余阶段发病率为10％,养殖场Ⅲ每个阶段的发病率均为10％,养殖场Ⅳ在第2和第3阶段的发病率为15％,其余2个阶段为10％;同一阶段不同养殖场调查结果表明,第1阶段养殖场Ⅲ和养殖场Ⅳ的发病率相同,为10％且最高,在第2阶段和第3阶段,养殖场Ⅳ的发病率最高,可达15％;第4阶段4个养殖场的发病率相同都是10％.除此以外,低钙血症的发生还与胎次、季节以及饲养模式有关,胎次越多,发病率越高;冬夏2个季节的发病率要略高;日粮中低镁也会间接引起低钙血症;奶牛血清钙检测试剂盒与邻甲酚酞络合铜法的符合率为98.51％,符合检测试剂的要求,可以在兽医临床代替标准方法进行检测.

关键词：血清钙试剂盒应用围产期奶牛低钙血症调查

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构建表达GM-CSF的重组PRRSV

构建表达GM-CSF的重组PRRSV

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：虞凌雪周艳君姜一峰童武童光志中国农业科学院上海兽医研究所

引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染能够延迟宿主产生中和抗体和细胞免疫应答,造成免疫抑制。树突状细胞(DC)作为专业抗原递呈细胞,能够被粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)募集、活化并成熟,进而引发获得性免疫。为了更好地提高... 详细信息

引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染能够延迟宿主产生中和抗体和细胞免疫应答,造成免疫抑制。树突状细胞(DC)作为专业抗原递呈细胞,能够被粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)募集、活化并成熟,进而引发获得性免疫。为了更好地提高PRRSV弱毒苗的免疫水平,本研究拟在PRRSV弱毒疫苗株中构建能够表达猪源GM-CSF的重组PRRSV,为该病的预防和控制提供新的思路。材料和方法以高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒疫苗HuN4-F112株为载体,在其感染性分子克隆的基础上,利用融合PCR法,在ORF1b和ORF2a间插入猪源GM-CSF和PRRSVORF6转录调控序列(TRS6),用限制性内切酶Swa I将重组GM-CSF的PRRSV全基因cDNA克隆线性化,通过体外转录获得病毒RNA。将重组病毒RNA转染BHK-21细胞,并在Marc-145细胞进行病毒拯救。将救获的重组病毒经鉴定后,在Marc-145上连续传代分析其生物学特性和遗传稳定性。结果(1)救获的重组病毒HuN4-F112-GM在感染Marc-145细胞72小时后,即可以观察到明显的细胞病变,IFA检测结果显示引入的猪源GM-CSF能够在感染的细胞中产生特异性荧光,且救获的重组病毒可以被PRRSV N蛋白特异性单抗识别,表明我们成功获得了重组病毒HuN4-F112-GM。(2)对重组病毒HuN4-F112-GM进行遗传稳定性分析结果显示,在连续传至20代时各代次病毒中插入的外源基因GM-CSF均未发生突变、缺失和插入等。(3)绘制第5、10、15、20代重组病毒HuN4-F112-GM的多步生长曲线,结果显示该重组病毒与亲本毒相比生长特性基本一致,表明外源基因GM-CSF的插入未影响病毒复制。结论本研究成功救获了能够表达猪源GM-CSF的重组病毒HuN4-F112-GM,该重组病毒保持了亲本毒的增殖特性,且具有遗传稳定性,为进一步在机体内对重组病毒HuN4-F112-GM进行免疫评价奠定基础。

关键词： CSF 外源基因 PRRSV 重组病毒 GM-CSF

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PRRSV感染的PAM中ISGs表达分析

PRRSV感染的PAM中ISGs表达分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：马改妮刘珂魏建超邵东华邱亚峰马志永中国农业科学院上海兽医研究所

前言猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称蓝耳病,是严重危害我国生猪产业的重大病毒性传染病。猪肺泡巨噬细胞(PAM)是PRRSV最主要的靶细胞。据报道已有数种干扰素刺激基因(ISGs)能够抑制PRRS... 详细信息

前言猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称蓝耳病,是严重危害我国生猪产业的重大病毒性传染病。猪肺泡巨噬细胞(PAM)是PRRSV最主要的靶细胞。据报道已有数种干扰素刺激基因(ISGs)能够抑制PRRSV的复制。本实验对PRRSV感染的PAM中的表达进行了分析。实验方法(1)PAM的分离:选取10头选取40日龄健康断奶小猪,进行CSFV抗原、PPV抗原、PCV2抗原、PRV抗体、PRRSV抗体和抗原的检测。选定阴性健康猪。对猪进行安乐死后,打开胸腔分离肺脏。在超净工作台中,向猪肺脏中灌入灭菌PBS,灌满后再反复抽吸,将肺泡中的PAM冲出。1000rpm离心10min。用培养液重悬细胞,用100um的滤膜过滤细胞,去掉杂质。1000rpm离心10min,培养液重悬细胞,对细胞液进行计数,稀释到5*106个/ml。(2)IFN使用量的筛选:将分离的PAM以没孔106个的数量接种之24孔细胞培养板中,细胞两小时后贴壁,用PBS洗掉不贴壁和死细胞,用100ng/ml、200ng/ml和300ng/ml的猪alfa IFN作用24小时后,接0.1 MOI的PRRSV,作用2h后换1%维持液,24小时后收样,检测病毒复制情况。(3)ISGs表达分析:将分离的PAM以没孔106个的数量接种之24孔细胞培养板中,细胞两小时后贴壁,用PBS洗掉不贴壁和死细胞,用200ng/ml的猪alfaIFN作用24小时后,接0.1 MOI的PRRSV,作用2h后换1%维持液,分别在4h、12h、24h收样。提取RNA,反转录获得cDNA,进行real-timePCR检测,分析ISG15,ISG56,Mx1表达情况和PRRSV复制情况。实验结果用100ng/ml、200ng/ml和300ng/ml的猪alfa IFN作用PAM,检测病毒复制情况,200ng/ml的IFN对PRRSV的抑制作用更明显。猪I型干扰素能够抑制PRRSV的复制,接毒后12h和24h抑制效果明显。接毒组ISG15,SG56,Mx1在接毒后4h的表达量与对照组相比较没有较大的差别。接毒后12h和24h,相比较于对照组,实验组ISG15,SG56,Mx1的表达量差异显著,且12h时的差异更显著。

关键词： PRRSV MOI 病毒复制细胞培养板 PAM

来源：评论

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HBc嵌合PRRSV GP5 CLP候选疫苗的构建及其免疫研究

HBc嵌合PRRSV GP5 CLP候选疫苗的构建及其免疫研究

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：曹佳媛田明尧辛舒崔卓栋金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所

目前,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在全球范围内流行,基因型表现出高度可变性,对疾病的防控产生了巨大的阻碍。现阶段对PRRS的防控主要采取疫苗接种的方式,但存在一定的局限性,不能对猪群提供全面持久的保护,因此积极发展新型疫苗对控... 详细信息

目前,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在全球范围内流行,基因型表现出高度可变性,对疾病的防控产生了巨大的阻碍。现阶段对PRRS的防控主要采取疫苗接种的方式,但存在一定的局限性,不能对猪群提供全面持久的保护,因此积极发展新型疫苗对控制PRRSV感染与流行有着重要的意义。自成功采用乙肝病毒核心蛋白(HBc)作为疫苗载体表达了口蹄疫病毒抗原表位以来,HBc被越来越多的应用于病毒样颗粒(VLPs)疫苗的研制。作为VLPs疫苗载体,HBc具有以下特点:天然条件下能够自我组装成颗粒样结构,插入位点灵活,装配效率高(>95%),可以提呈抗原,能够在多种表达系统中稳定表达等。本研究以HBc为载体表达PRRSV GP5保护性抗原,构建了HBc-GP5表位VLPs候选疫苗,并对其进行小鼠免疫评价。首先根据Escherichia coli(strain K12)密码子偏好性对HBc序列进行密码子优化,并将其克隆至改造的pET-28a原核表达载体中,获得重组质粒pEO-NEW。经SDS-PAGE、Western blot及透射电镜等方法对表达获得的VLPs进行鉴定,结果表明成功诱导表达了HBc蛋白且表达后蛋白能够自主装配成VLPs,为下一步重组疫苗制备提供研究基础。基于所得到的pEO-NEW表达载体,将优化后的GP5基因插入至pEO-NEW载体的免疫显性区(MIR),获得重组质粒pEO-LEORF。通过SDS-PAGE和Western blot方法鉴定重组目的蛋白,结果显示,成功诱导表达GP5蛋白。经透射电镜对其形态进行观察,结果显示,诱导后的重组蛋白能够自主装配成VLPs。以小鼠为模型分析该HBc-GP5 VLPs候选疫苗的免疫原性,利用ELISA进行抗体检测,结果表明其能够诱导机体产生较高的特异抗体水平;对T细胞亚群及细胞因子进行检测结果表明,疫苗免疫组小鼠CD3+CD4+T细胞淋巴细胞亚型数量及IL-4水平显著高于对照组(P<0.05),淋巴细胞刺激指数(SI)及第三次免疫后IFN-γ含量与对照组相比显著提高(P<0.05),说明HBc-GP5表位VLPs候选疫苗能够模拟病毒样颗粒,有效提呈GP5并诱导机体产生体液和细胞免疫,为下一步实验研究提供数据基础。

关键词：候选疫苗 PRRSV GP5 CLP HBc 免疫研究 CLP

来源：评论

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改性埃洛石对玉米赤霉烯酮造成鼠肠道损伤脱毒作用

改性埃洛石对玉米赤霉烯酮造成鼠肠道损伤脱毒作用

引用

中国畜牧兽医学会动物营养分会第七届中国猪营养学术研讨会

作者：刘敏张博儒单安山东北农业大学动物营养研究所哈尔滨150030

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是霉菌毒素的一种,妊娠母体受到ZEN的损伤后对胎儿的生长发育可能造成严重影响.母猪繁殖力与产仔率低,胎儿发育不正常等问题给中国畜牧业带来巨大的生产压力和经济损失.肠道是动物体应对外来毒性物质的第... 详细信息

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是霉菌毒素的一种,妊娠母体受到ZEN的损伤后对胎儿的生长发育可能造成严重影响.母猪繁殖力与产仔率低,胎儿发育不正常等问题给中国畜牧业带来巨大的生产压力和经济损失.肠道是动物体应对外来毒性物质的第一道生理屏障,同时也是首先受到饲粮污染伤害的器官之一.埃洛石(HNTs)作为一种自然产生的纳米材料,自然界中存在量丰富,可以充当生物材料,已应用于生物技术、制药学和医学研究等领域.本试验的目的是首先以妊娠母鼠为研究对象,初步探讨妊娠母体饲喂含有ZEN的日粮对母体以及子代肠道损伤情况及其可能机理;其次以妊娠母鼠为研究对象,研究母鼠饲喂含有ZEN的日粮对其肠道损伤作用、对子代肠道生长发育的影响,以及添加改性埃洛石(MHNTs)的脱毒效果,拟为解决畜牧生产中的实际问题提供理论依据.192只健康妊娠大鼠随机分为4组:ZEN0(对照组)、ZEN50、ZEN100和ZEN150,每组48只,分别饲喂含有ZEN 0.3、48.5、97.6和146 mg/kg饲粮,试验期为妊娠0～7 d.结果表明,妊娠第7d,ZEN对母鼠肠道造成氧化应激损伤(P＜0.05),免疫损伤(P＜0.05),改变肠道绒毛形态结构(P＜0.05),降低肠道结构蛋白claudin-4,occludin以及connexin (Cx) 43的表达(P＜0.05),并且损伤具有剂量相关性.在高ZEN剂量组(ZEN100和ZEN 150)断奶母鼠肠道仍然存在上述损伤现象(P＜0.05),表明妊娠0～7 d饲喂ZEN对母鼠肠道造成的损伤可能持续到断奶阶段.母体摄入高剂量ZEN组(ZEN100和ZEN150)造成子鼠肠道IL-8蛋白表达下降(P＜0.05),表明母体ZEN对断奶子鼠肠道发育造成不良影响.转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)表达量升高(P＜0.05),表明ZEN造成氧化损伤和免疫损伤的机理之一可能是由介导的通路.综上所述,ZEN造成妊娠母体肠道损伤,影响子代肠道发育,且具有剂量相关性.添加MHNTs可以有效缓解ZEN造成的母体肠道损伤和子代肠道发育损伤.

关键词：猪饲料喂养肠道损伤改性埃洛石玉米赤霉烯酮脱毒作用

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PRRSV HB-AG的ORF5与NSP2基因遗传变异分析

PRRSV HB-AG的ORF5与NSP2基因遗传变异分析

引用

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：左奕袁万哲孙继国河北农业大学动物医学院河北省兽医生物技术工程技术研究中心

引言由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已成为危害全球养猪业的重要经济性传染病之一。自2006年以来,高致病性PRRSV的流行和疫情爆发,给我国养猪业造成了巨大经济损失。且国内不断有PRRSV的变异分离株的报... 详细信息

引言由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)已成为危害全球养猪业的重要经济性传染病之一。自2006年以来,高致病性PRRSV的流行和疫情爆发,给我国养猪业造成了巨大经济损失。且国内不断有PRRSV的变异分离株的报道,表明变异毒株适应能力在不断增强,在我国境内流行也逐渐复杂化、扩大化。因此,及时掌握当地PRRSV流行变异情况,对于当地PRRSV的防控有着重要意义。而对ORF5和NSP2基因的遗传变异分析可以一定程度上反应整个病毒基因组的变异情况。本研究以我国分离到的一株高致病性PRRSV为材料,深入研究其ORF5和NSP2基因的遗传变异情况,旨在为今后PRRS的防控提供理论依据。材料与方法用于分析的毒株—PRRSV HB-AG于2014年分离自河北安国地区发生PRRS猪场的病猪脏器样本。根据GenBank已收录的PRRSV VR2333、HB-1a、CH-1a和JXA1等毒株核苷酸序列,通过DNAstar软件分析比较,运用Primer Permier 5软件设计引物,进行基因PCR鉴定以及ORF5、NSP2基因的扩增和序列测定分析。结果与结论本研究通过对分离的HB-AG毒株NSP2和ORF5基因的核苷酸序列进行遗传进化分析,结果表明PRRSV HB-AG株Nsp2编码区存在30个不连续氨基酸的缺失,且其ORF5第137位氨基酸为丝氨酸(S),第13、151位氨基酸为精氨酸(R),因此,本研究分离的毒株为具有强毒特性的高致病性野毒株。其Nsp2编码区和ORF5编码的氨基酸序列存在多处变异,表明该分离株与国内其他地区流行毒株并不一致,而且在本地区产生了新的变异。HB-AG的N-糖基化位点分别位于氨基酸序列的第30、34、44和51位,且其第33位突变为D,与疫苗株JXA1-R一致;此外,其第58、61、104和114位都存在碱基突变,而这些碱基的突变与致病性的关系,目前尚未有报道。HB-AG株属于最新分离,能在一定程度上反应当地最近的流行情况。PRRSVHB-AG与疫苗株JXA1-R同源性高达98%,且其33位的与疫苗株JXA1-R一致,所以该毒株可能是与疫苗毒株发生重组的新毒株。

关键词： PRRSV HB-AG 变异分析基因遗传

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