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槲皮素抑菌作用的体内和体外研究

槲皮素抑菌作用的体内和体外研究

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：滕楠孙丹彤由莹韩春艳李玲 Maria Tabassum Chaudhry 李垚东北农业大学动物营养研究所

槲皮素（quercetin,3,3',4',5,7-五羟基黄酮）及其衍生物是植物界分布最广的黄酮类化合物,广泛存在于植物的花、叶、果实中,也是人类饮食中最主要的生物类黄酮。槲皮素具有抗菌、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多方面药理作用和生物... 详细信息

槲皮素（quercetin,3,3',4',5,7-五羟基黄酮）及其衍生物是植物界分布最广的黄酮类化合物,广泛存在于植物的花、叶、果实中,也是人类饮食中最主要的生物类黄酮。槲皮素具有抗菌、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多方面药理作用和生物活性,其中抑菌活性是近年来的研究热点之一。本研究通过体内、体外试验探索槲皮素对四种禽类易感染细菌的抑菌作用,为完善槲皮素作为功能性添加剂理论提供依据。本研究选取金黄色葡萄球菌、肠球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌作为试验菌株,体内试验选取健康的、体重和产蛋率相近的39周龄海赛白壳蛋鸡240只,分为4组,每组6个重复,每个重复10只鸡。以玉米-豆粕型日粮为基础饲粮,分别在基础饲粮上添加0%、0.02%、0.04%、0.06%的槲皮素,选用特异性培养基培养细菌,进行盲肠菌群数量的测定。体外试验槲皮素浓度为0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol·mL,采用牛津杯法测定受试菌株的抑菌圈直径和最小抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration,MIC）。结果表明,①体内试验中,与对照组相比,三水平槲皮素组四种菌的菌落总数均显著减少（P<0.05）;随着槲皮素添加量的增加,四种菌的菌落总数均显著下降,且0.06%槲皮素组菌落总数最少;②体外试验中,菌液初始浓度不影响抑菌效果;与对照组相比,所有浓度槲皮素对金黄色葡萄球菌、肠球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌的抑菌作用均显著提高（P<0.05）,且随着槲皮素浓度的增加,抑菌能力增强。槲皮素对金黄色葡萄球菌、肠球菌、沙门氏菌和绿脓杆菌的MIC分别为0.0068、0.0066、0.0072、0.0085μmol·mL。综上所述,槲皮素可以有效抑制蛋鸡盲肠内四种禽类易感染细菌的生长繁殖,改善肠道的内环境,且0.06%的槲皮素添加量效果最佳;此外,槲皮素具有较强的体外抑菌活性和广谱抑菌作用,槲皮素的抑菌机制有待进一步研究。本研究结果提示槲皮素具有体内和体外抑菌作用,具有成为新型功能性饲料添加剂的潜力。

关键词：槲皮素体内抑菌体外抑菌

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妊娠后期日粮中添加壳寡糖对母猪繁殖性能和母-仔猪抗氧化能力的影响

妊娠后期日粮中添加壳寡糖对母猪繁殖性能和母-仔猪抗氧化能力的...

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：龙次民吴信范志勇印遇龙谢正军王勇飞中国科学院亚热带农业生态研究所中国科学院亚热带农业生态过程重点实验室湖南省畜禽健康养殖工程技术中心湖南农业大学动物科技学院双胞胎(集团)股份有限公司

壳寡糖(COS)又称低聚葡萄糖胺、低聚氨基葡萄糖等,是壳聚糖降解后的产物,聚合度一般在2～10,目前是自然界中发现的唯一碱性寡糖,研究表明,COS及其衍生物具有清除自由基、提高抗氧化酶活性的功能。母猪妊娠后期胎儿生长加速,会导致母体... 详细信息

壳寡糖(COS)又称低聚葡萄糖胺、低聚氨基葡萄糖等,是壳聚糖降解后的产物,聚合度一般在2～10,目前是自然界中发现的唯一碱性寡糖,研究表明,COS及其衍生物具有清除自由基、提高抗氧化酶活性的功能。母猪妊娠后期胎儿生长加速,会导致母体代谢加快,产生更多的自由基,母体内氧自由基过多而清除剂减少时,易导致胎盘绒毛损伤,尤其对绒毛细胞膜,线粒体膜,导致胎盘功能异常,妊娠期胎儿通过脐带与母体连接,母猪健康水平也直接影响到胎儿的发育。为了研究妊娠后期日粮中添加壳寡糖对母猪繁殖性能和母-仔猪抗氧化能力的影响,本试验选择体重、胎次和预产期一致的健康长×白妊娠母猪16头,随机分为2个处理组,于妊娠第85天开始分别饲喂基础日粮和添加含30 g/t COS。母猪于妊娠110天禁食12 h后前腔静脉采血,分离血清,分娩时每栏选择与平均体重相近的仔猪前腔静脉采血10.0mL,分离血清,然后屠宰,分离肠道刮取黏膜样品。结果显示,妊娠后期母猪日粮中添加COS有缩短母猪产程的趋势(0.05

关键词：壳寡糖母猪仔猪抗氧化

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不同peNDF水平对后备荷斯坦奶牛采食量、采食行为和消化代谢的影响

不同peNDF水平对后备荷斯坦奶牛采食量、采食行为和消化代谢的影响

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：陈青王洪荣扬州大学动物科学与技术学院

粗饲料是反刍动物重要的营养源,占反刍动物日粮的40%0%。粗饲料中的纤维素作为反刍动物的一种必需营养素,有助于唾液的分泌和反刍,缺乏容易引起乳脂含量降低和消化紊乱。多年以来,奶牛营养学界一直将中性洗涤纤维作为表示纤维的主要指标... 详细信息

粗饲料是反刍动物重要的营养源,占反刍动物日粮的40%0%。粗饲料中的纤维素作为反刍动物的一种必需营养素,有助于唾液的分泌和反刍,缺乏容易引起乳脂含量降低和消化紊乱。多年以来,奶牛营养学界一直将中性洗涤纤维作为表示纤维的主要指标,而Mertens的研究显示纤维在反刍动物日粮中不仅具有化学组成的重要性,其物理性状（颗粒大小）对瘤胃发酵、乳脂肪含量及机体代谢和健康状况也有重要影响,并提出了物理有效中性洗涤纤维（peNDF）这一概念。但目前各学者对于奶牛的最适peNDF水平尚存在争议。本文旨在研究不同peNDF水平对后备荷斯坦奶牛采食量、采食行为和消化率的影响,为进一步得出8～10月龄后备奶牛适宜的peNDF水平提供理论依据。试验选择24头8月龄后备中国荷斯坦奶牛母牛,设4个处理组,每组6个重复。采用单因子试验设计,分别进行4个不同水平的peNDF（粗饲料理论切割长度为:1 cm、3 cm、5 cm、7 cm;peNDF水平为23.98%、25.24%、27.27%和29.95%）的日粮处理,试验奶牛统一管理,每天饲喂两次,自由饮水,预试期10天,正试期60天。试验表明:（1）不同peNDF水平对后备奶牛DMI、NDFI和ADFI均无显著影响（P>0.05）;（2）各处理组奶牛的采食时间、反刍时间和咀嚼时间均随peNDF水平的增加而增加,并且不同peNDF水平对奶牛采食时间影响显著（P<0.05）,不同peNDF水平对奶牛反刍时间和咀嚼时间影响不显著（P>0.05）;（3）不同peNDF水平对各处理组奶牛全肠道DM消化率、CP消化率、NDF消化率和ADF消化率存在显著影响（P<0.05）,各营养成分消化率随着peNDF水平的升高呈现先上升后下降的趋势,且peNDF水平为25.24%时各营养成分消化率最高。结论:适宜的peNDF水平可以增强8～10月龄后备奶牛咀嚼,并且提高营养物质消化率。

关键词：后备牛 peNDF 采食量采食行为消化率

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不同能量蛋白水平及性别对湘中黑牛生产性能、胴体品质及肉品质的影响

不同能量蛋白水平及性别对湘中黑牛生产性能、胴体品质及肉品质的...

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：李凌岩祝远魁汪先友何阳曹兵海中国农业大学动物科技学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院湖南天华实业有限公司

本试验旨在研究不同能量、蛋白水平及性别对湘中黑牛生产性能、胴体品质及肉品质的影响。选取47头湘中黑牛(安格斯与湘西黄牛杂交一代,去势公牛23头,母牛24头),分为两个阶段,第一阶段育成期,从6.5月龄开始,所有试验牛在育成期采食同一... 详细信息

本试验旨在研究不同能量、蛋白水平及性别对湘中黑牛生产性能、胴体品质及肉品质的影响。选取47头湘中黑牛(安格斯与湘西黄牛杂交一代,去势公牛23头,母牛24头),分为两个阶段,第一阶段育成期,从6.5月龄开始,所有试验牛在育成期采食同一种饲料,历时184天,然后进入第二阶段育肥期,该阶段采用2×2×2因子,两个能量水平(FDN:70%、80%DM)、两个蛋白水平(CP:11.9%、14.3%DM)、性别(去势公牛、母牛),分为四个营养水平组,高能量低蛋白、高能量高蛋白、低能量低蛋白和低能量高蛋白组。高能量低蛋白组去势公牛5头,母牛6头,其余三个组平均每组12头牛,公牛母牛各半,育肥期146天后屠宰,进行胴体与肉品质测定。结果表明,肉牛的日增重与屠宰体重没有受到日粮能量、蛋白水平及性别的影响。与低能量水平相比,日粮高能量水平在降低动物的干物质采食量(6.76kg vs 7.48 kg DM/d,P<0.01)的同时促进了试验牛胸围的增长(46.1 cm vs 36.8 cm,P<0.01),胴体脂肪(19.9%vs 16.3%,P<0.05),肌间脂肪的沉积(29.9%vs 22.8%DM,P<0.01),提高了高档优质肉块出肉率(39.9%vs 36.5%,P<0.05)。日粮高蛋白水平则提高了屠宰率(53.4%vs 54.9%,P<0.05)。母牛的体长增量小于公牛(9.0 cm vs 8.3 cm,P<0.01),但胴体脂肪高于去势公牛(16.8%vs19.4%,P<0.05)。肉质特性,包括剪切力(3.14 kg)、滴水损失(2.5%)、蒸煮损失(31.5%)、系水力(52.9%)以及脂肪酸、氨基酸等营养风味物质未受日粮能量、蛋白水平和性别这三个因素的影响。结论:湘中黑牛的胴体指标与肌肉化学成分受日粮营养水平及性别影响显著,生长性能、肉质特性及营养风味物质含量未受到能量、蛋白、性别影响。

关键词：能量蛋白性别湘中黑牛生长性能胴体指标肉品质

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禽滑液囊支原体液体培养中pH与活菌浓度关系研究

禽滑液囊支原体液体培养中pH与活菌浓度关系研究

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第十一次全国学术研讨会暨第五届会员代表大会

作者：周锦龙封柯宇吴波良陈峰毕英佐谢青梅华南农业大学动物科学学院

为研究禽滑液囊支原体培养过程中pH与活菌浓度的关系,本实验测定了一株禽滑液囊支原体培养过程中pH值的变化,并用微量颜色变化单位方法测定了其活菌浓度变化。结果表明禽滑液支原体的生长繁殖经历了调整期,对数期,稳定期,和衰亡期,而pH... 详细信息

为研究禽滑液囊支原体培养过程中pH与活菌浓度的关系,本实验测定了一株禽滑液囊支原体培养过程中pH值的变化,并用微量颜色变化单位方法测定了其活菌浓度变化。结果表明禽滑液支原体的生长繁殖经历了调整期,对数期,稳定期,和衰亡期,而pH值随着时间累积呈现持续降低趋势。培养过程活菌浓度上升伴随着pH值的降低,当pH值为6.9的时候浓度达到最高,pH值低于6.9时MS浓度开始下降。这一研究结果能为支原体培养过程中对培养状况的掌握和收获时间确定提供参考。

关键词：禽滑液囊支原体 pH 支原体培养

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饮水中添加酸化剂对肉鸡生产性能、肉品质和肠道健康的影响

饮水中添加酸化剂对肉鸡生产性能、肉品质和肠道健康的影响

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：马秋刚石慧芹赵丽红马改彦张建云计成中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室

试验选取432只1日龄体重均匀、健康AA肉鸡公雏,随机分为4个处理,每个处理18个重复,每个重复5只鸡。A组全程饮用酸化剂;B组1～14天饮用酸化剂,随后7天停用,再7天使用酸化剂,重复直至试验期结束;C组1～14天饮用酸化剂,从第15天起,每天饮... 详细信息

试验选取432只1日龄体重均匀、健康AA肉鸡公雏,随机分为4个处理,每个处理18个重复,每个重复5只鸡。A组全程饮用酸化剂;B组1～14天饮用酸化剂,随后7天停用,再7天使用酸化剂,重复直至试验期结束;C组1～14天饮用酸化剂,从第15天起,每天饮用含酸化剂的水6 h（10 a.m p.m）,直至试验结束;D组为抗生素对照组,饮用正常地下水,饲喂抗生素日粮,其他各组均饲喂基础日粮,试验期42 d,统计平均体重、平均日采食量、平均日增重和料重比。试验期结束后,每个重复选取1只鸡屠宰,测定胸肌和腿肌的肉品质、胃肠道pH、十二指肠食糜消化酶、小肠黏膜形态和盲肠微生物数量。结果表明:（1）A、B、C组21d平均体重和1～21 d平均日增重均低于D组（P<0.05）,A、B组均达到显著水平（P<0.05）,不同处理组之间的平均日采食量和料重比均无显著差异（P>0.05）;（2）A、B、C组分别较D组降低了胸肌24 h pH和腿肌45 min pH（P<0.05）,显著降低肉鸡胸肌肉色L*值（P<0.05）,提高胸肌肉色a**值（P<0.05）,显著降低肉鸡胸肌和腿肌的滴水损失（P<0.05）,降低了肉鸡胸肌蒸煮损失（P<0.05）,对肉鸡腿肌肉色、腿肌蒸煮损失、胸肌和腿肌剪切力、肌内成分均无显著影响（P>0.05）;（3）A、B、C组肉鸡嗉囊和回肠pH均低于D组（P<0.05）,B、C组嗉囊pH显著低于D组（P<0.05）,A、C组回肠pH显著低于D组（P<0.05）,不同处理组间十二指肠消化酶和盲肠微生物数量均差异不显著（P>0.05）。通过饮水添加酸化剂与日粮中添加抗生素对肉鸡生产性能无显著差异,并在一定程度上改善了肉鸡肉品质,饮水添加酸化剂可以替代日粮中添加抗生素应用于肉鸡生产。

关键词：肉鸡酸化剂生产性能肉品质肠道健康

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不同富集培养条件下瘤胃氨生成及蛋白降解菌菌群结构比较分析

不同富集培养条件下瘤胃氨生成及蛋白降解菌菌群结构比较分析

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：申军士何香玉金巍毛胜勇朱伟云南京农业大学动物科技学院消化道微生物研究室

采用体外继代富集培养方法研究不同氮源条件下添加莫能菌素对奶牛瘤胃氨生成及蛋白降解菌菌群结构的影响。试验采用2×2因子设计,即两种氮源[酪蛋白(Cas)和胰酪蛋白胨(Try)]和两种莫能菌素添加水平[0(C)和5μM(M)],配制四种不同的... 详细信息

采用体外继代富集培养方法研究不同氮源条件下添加莫能菌素对奶牛瘤胃氨生成及蛋白降解菌菌群结构的影响。试验采用2×2因子设计,即两种氮源[酪蛋白(Cas)和胰酪蛋白胨(Try)]和两种莫能菌素添加水平[0(C)和5μM(M)],配制四种不同的富集培养基(Cas-C,Cas-M,Try-C,TryM)。以3头安装有瘤胃瘘管的奶牛瘤胃液为接种材料,瘤胃液经四层纱布过滤后,接入到预先预热至39℃的四种富集培养基中,每个处理四个重复,间隔24 h以10%(v/v)的接种量传代一次,连续传代6次,每次传代后立即采集24 h培养物,用于氨氮浓度测定;同时提取第6代培养物DNA,采用PCRDGGE、割胶回收测序及Real-time PCR等分子技术分析富集培养物菌群结构。(结果)结果表明:不同富集培养条件下,培养物氨氮浓度在在第四代达到稳定状态,Try处理组显著高于Cas处理,而添加莫能菌素处理组显著低于未添加处理组;PCR-DGGE分析结果显示不同富集条件下细菌DGGE图谱条带的数目和条带颜色深浅存在较大差异,添加莫能菌素的条带数少于未添加处理条带数;通过对差异条带进行测序,发现莫能菌素敏感细菌主要属于Clostridium,Sporanaerobacter,Peptostreptococcus(Try-C处理特有)等三个属,而抗莫能菌素细菌主要属于Escherichia,Desulfovibrio,Oribacterium等三个属;Real-time PCR结果显示添加莫能菌素显著降低了总菌拷贝数,但不同氮源处理对总菌拷贝数没有影响,高效产氨菌***和***在瘤胃液中均存在低拷贝数量,但***在不同富集培养物中均未检出,而***在在未添加莫能菌素处理组得到富集,并且拷贝数相似。结论:莫能菌素及氮源组成形式可通过影响菌群组成及数量进而影响瘤胃氨的生成,Try-C处理组属Peptostreptococcus中特异性高效产氨菌的存在可能是造成氨浓度高于其他处理的主要原因。

关键词：氨氮菌群结构富集培养瘤胃

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不同水平中草药饲料添加剂对体外瘤胃持续发酵参数的影响

不同水平中草药饲料添加剂对体外瘤胃持续发酵参数的影响

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：祁丽刘守江姜宁张爱忠贾斌黑龙江八一农垦大学动物科技学院

为满足人们对健康食品的需求,本课题组根据中医药原理配制了中草药饲料添加剂,并通过体外瘤胃培养技术研究中草药不同添加剂量对瘤胃发酵参数的影响,为其在生产中推广应用提供参考。试验选用黄芪、蒲公英、女贞子、益母草、板蓝根、刺... 详细信息

为满足人们对健康食品的需求,本课题组根据中医药原理配制了中草药饲料添加剂,并通过体外瘤胃培养技术研究中草药不同添加剂量对瘤胃发酵参数的影响,为其在生产中推广应用提供参考。试验选用黄芪、蒲公英、女贞子、益母草、板蓝根、刺五加、党参、山楂、蛇床子、陈皮、当归等中草药,根据中医药原理,粉碎后配制成粉状的复合中草药制剂。瘤胃液供体动物为12只体重相近、健康的安装永久性瘤胃瘘管的绵羊羯羊,日粮精粗比为3:7。体外培养发酵底物与绵羊日粮相同,经烘干、粉碎过40目筛,中草药添加剂经同样处理后按精补料5%、10%和15%混入基础日粮中,分别替代等量的羊草,每个处理3个重复。Rusitec单外流连续培养系统缓冲液按照McDougll's buffer方法配制。结果表明:各处理组培养液pH无显著差异（P>0.05）,处于6.91～6.98之间,属于正常范围;与对照组相比,各试验组产气量均显著高于对照组（P<0.05）,以中草药添加剂水平为5%时最高;添加量为10%和15%处理组培养液中NH-N浓度显著高于对照组和5%组（P<0.05）;5%和10%处理组培养液中菌体蛋白（BCP）浓度显著高于对照组和15%组（P<0.05）,其中以添加量为10%组最高;NDF、ADF消失率均是以添加量10%组最高。其中10%处理组NDF消失率显著高于其他3组（P<0.05）,ADF消失率显著高于对照组和5%处理组（P<0.05）,与15%组没有显著差异（P>0.05）。综合上述结果,日粮中添加中草药添加剂有利于促进瘤胃内微生物的生长,体有效地改善瘤胃内环境,当添加量为精补料的10%时,可以显著提高培养液中产气量、氨氮浓度、BCP浓度和NDF、ADF消失率（P<0.05）。

关键词：中草药饲料添加剂体外培养瘤胃发酵参数

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家蝇抗菌肽的提取纯化及对凡纳滨对虾抗病力的影响

家蝇抗菌肽的提取纯化及对凡纳滨对虾抗病力的影响

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：李林陈冰孙育平黄燕华王国霞赵红霞齐飞曹俊明广东省农业科学院动物科学研究所广东省畜禽育种与营养研究重点实验室华南农业大学动物科学学院

本试验旨在优化家蝇抗菌肽的提取和纯化方法,研究饲料中添加家蝇抗菌肽对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)成活率及抗白斑综合征病毒能力的影响。家蝇幼虫经超声波诱导刺激、乙酸铵缓冲液浸泡过滤等处理获得匀浆液,通过三次高速离心、... 详细信息

本试验旨在优化家蝇抗菌肽的提取和纯化方法,研究饲料中添加家蝇抗菌肽对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)成活率及抗白斑综合征病毒能力的影响。家蝇幼虫经超声波诱导刺激、乙酸铵缓冲液浸泡过滤等处理获得匀浆液,通过三次高速离心、盐析、水浴等去除组织碎片、大分子蛋白及脂肪获得抗菌肽提取液,经透析、冷冻干燥得到抗菌肽粗提液。采取分光光度法测定粗提液中抗菌肽的浓度;液体比浊法测定粗提液中抗菌肽的抗菌活力。在基础饲料中分别添加40、60、80 mg/kg家蝇抗菌肽粗提液配制3种试验饲料;选取648尾初始体重为2.81±0.02 g的凡纳滨对虾随机分为4组,每组4个重复,每个重复38尾,分别投喂基础饲料和3种试验饲料,饲养试验期为31 d。养殖结束后,各组分别取对虾45尾,分为3个重复,其中1个重复注射0.7%的生理盐水,2个重复注射适宜浓度的白斑综合征病毒提取液,饲养72 h,统计累计死亡率和相对保护率。结果显示,(1)家蝇抗菌肽粗提液中抗菌肽浓度为24.09 mg/mL,抗菌活力为24.2%。(2)与对照组相比,摄食抗菌肽饲料的试验组对虾成活率呈升高趋势,以2000 mg/kg组成活率最高,但各试验组间无显著性差异(P>0.05)。(3)白斑综合征病毒攻毒后72 h,家蝇抗菌肽添加组对虾的累计死亡率显著低于对照12组(P<0.05),相对保护率显著高于对照组(P<0.05),其中3 000 mg/kg组相对保护率达到64.29%。结果表明,本试验优化的提取纯化方法可以获得具有较高抗菌活力的家蝇抗菌肽,家蝇抗菌肽添加到饲料中能够显著提高凡纳滨对虾抵抗白斑综合征病毒的能力。

关键词：家蝇抗菌肽凡纳滨对虾提取纯化相对保护率白斑综合征病毒

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亮氨酸对体外培养奶牛胰腺组织酶分泌的影响

亮氨酸对体外培养奶牛胰腺组织酶分泌的影响

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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第七届中国饲料营养学术研讨会

作者：刘凯杨昕涧刘艳利姚军虎西北农林科技大学动物科技学院

本试验通过体外培养奶牛胰腺组织,探索亮氨酸对胰腺组织酶分泌的影响,确定刺激奶牛胰腺酶表达和分泌的亮氨酸剂量,为研究亮氨酸调节胰腺外分泌功能的分子机制提供前期基础。奶牛屠宰后,立即采集新鲜胰腺样品并迅速送往实验室,KRB培养液... 详细信息

本试验通过体外培养奶牛胰腺组织,探索亮氨酸对胰腺组织酶分泌的影响,确定刺激奶牛胰腺酶表达和分泌的亮氨酸剂量,为研究亮氨酸调节胰腺外分泌功能的分子机制提供前期基础。奶牛屠宰后,立即采集新鲜胰腺样品并迅速送往实验室,KRB培养液清洗,切成1×1 mm小块,称重;将组织小块置于预先准备好的盛有3 mL亮氨酸-KRB溶液的25 mL规格培养瓶中,对照组亮氨酸浓度为0,处理组分别为2.62、5.24、10.48 mg/L,每处理3个重复,于37℃恒温摇床中进行孵育,孵育时间分别为60、120和180 min。孵育结束后吸取上清液检测培养液中α-淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的释放浓度,组织块匀浆后冻存用于测定不同酶的组织浓度。结果发现:孵育时间为0、60和120 min时,α-淀粉酶释放浓度与亮氨酸水平呈先升后降的二次效应关系(P<0.01),同水平亮氨酸作用下α-淀粉酶的释放程度随时间呈先升后降的二次效应(P<0.01)。亮氨酸对α-淀粉酶胰腺组织浓度无显著影响(P>0.05)。随亮氨酸浓度上升,α-淀粉酶总浓度呈先升后降趋势,但二次效应不显著(P>0.05),与孵育时间呈显著二次效应关系(P<0.01)。孵育时间60 min时,亮氨酸组均显著提高α-淀粉酶总浓度,在5.24 mg/mL时达到最大。相比对照组,亮氨酸对糜蛋白酶组织释放浓度虽有提高趋势,但差异不显著(P>0.05)。亮氨酸显著提高胰蛋白酶组织释放浓度(P<0.05)。结论:亮氨酸对奶牛胰腺外分泌功能具有调控作用,可刺激胰腺组织体外酶分泌,尤其是α-淀粉酶。本试验中促进奶牛胰腺酶分泌的最佳亮氨酸浓度为5.24 mg/mL。

关键词：亮氨酸胰腺奶牛体外培养 α-淀粉酶

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