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- 6 篇 生物工程
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主题

24 篇 原核表达
23 篇 序列分析
19 篇 prrsv
16 篇 猪繁殖与呼吸综合...
14 篇 克隆
13 篇 pcr
11 篇 猪流感病毒
10 篇 副猪嗜血杆菌
10 篇 分离鉴定
9 篇 疫苗
9 篇 检测
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8 篇 新城疫病毒
8 篇 分离
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8 篇 防控技术
8 篇 口蹄疫病毒
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机构

27 篇 广西兽医研究所
24 篇 吉林大学
23 篇 华南农业大学
23 篇 军事医学科学院军...
20 篇 广西大学
18 篇 河南农业大学
14 篇 河南省动物疫病预...
11 篇 山东农业大学
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10 篇 青岛农业大学
10 篇 山东省滨州畜牧兽...
10 篇 华中农业大学
9 篇 湖南农业大学
9 篇 中国农业大学
9 篇 四川大学生命科学...
8 篇 南京天邦生物科技...
8 篇 云南农业大学
7 篇 黑龙江八一农垦大...
7 篇 北京市农林科学院...
7 篇 山东绿都生物科技...

作者

23 篇 金宁一
17 篇 李斌
17 篇 梁家幸
17 篇 赵武
16 篇 蒋玉雯
16 篇 黄安国
16 篇 姚瑞英
16 篇 梁保忠
15 篇 沈志强
15 篇 鲁会军
13 篇 丁壮
12 篇 黄伟坚
12 篇 王红宁
11 篇 吴志明
11 篇 闫若潜
11 篇 罗满林
10 篇 杨霞
10 篇 母连志
10 篇 高荣
10 篇 王川庆

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442 篇 中文
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猪传染性胃肠炎病毒河南株S基因的克隆与序列分析

猪传染性胃肠炎病毒河南株S基因的克隆与序列分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：杨霞陈陆董加才常洪涛王新卫王川庆河南农业大学禽病研究所

根据Gen Bank上已发表的TGEV的S基因序列,利用自行设计的一对引物,以TGEV疫苗株和四个河南分离株XZ、NY、YM、XX、KF株的PK-15细胞增殖物为材料,采用RT-PCR技术扩增出S基因,运用PGEM-T和PMD18-T两种载体,通过TA克隆,获得重组质粒PGEM-X... 详细信息

根据Gen Bank上已发表的TGEV的S基因序列,利用自行设计的一对引物,以TGEV疫苗株和四个河南分离株XZ、NY、YM、XX、KF株的PK-15细胞增殖物为材料,采用RT-PCR技术扩增出S基因,运用PGEM-T和PMD18-T两种载体,通过TA克隆,获得重组质粒PGEM-XZ-S、PGEM-NY-S、PGEM-YM-S、PMD-XX-S和PMD-KF-S。经S基因序列测序分析发现,TGEV河南分离株之间的核苷酸同源性为99.0%-99.8%,氨基酸同源性为97.0%-99.0%;和疫苗分离株(YM)的核苷酸同源性为99.0%-99.7%,氨基酸同源性为97.0%-98.5%;和国内毒株相比,四个毒株与SC-Y株氨基酸同源性均在98.5%以上;和国外毒株相比:XZ株与国外的Purdue株和PUR46-MAD核苷酸同源性最高达99.7%。XZ株与PUR46-MAD氨基酸同源性最高达99.0%。说明S基因是高度保守的,也说明不同地方的分离株存在一定的差异。从本实验蛋白疏水区分析结果可以看出该蛋白存在亲、疏水区相间隔的情况,而且可能存在抗原表位,这说明河南分离毒株的S蛋白是一个膜蛋白,与其具有较强的免疫原性和唯一能诱导产生中和抗体的功能相一致,因此河南分离株S蛋白可作分子诊断抗原,以及研制基因工程疫苗和免疫检测试剂盒的重要材料。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒河南株疫苗株 S基因克隆序列分析抗原位点

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我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

我国猪场PCV2a和PCV2b共感染情况的调查与分析

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：翟少伦龙进学韦祖樟张建武岳城禤雄标袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心/猪传染病防治研究室新疆农业大学动物医学学院广西兽医研究所

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战.本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况.我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进... 详细信息

近年来我国猪场中猪圆环病毒2型的阳性率有所增加,给我国的养猪业带来了巨大的挑战.本研究主要是为了调查和分析我国猪2型圆环病毒两型间的共感染情况.我们采用差异PCR方法对2008年到2009年间采集的经普通PCR鉴定为PCV2型阳性的病料进行检测,对差异PCR方法扩增出来的部分PCV2a和PCV2b目的序列进行克隆、测序及分析.通过对70份临床病料的检测,并配合PCR产物测序的验证,结果发现该方法易操作,特异性高,可重复性好,可以鉴别出PCV2a与PCV2b,其中PCV2a株25份(25/70),PCV2b株23份(23/70),PCV2a与PCV2b共感染株22份(22/70),参照PCV2a或PCV2b的标准毒株,序列比对显示,我国的PCV2型毒株大多发生了很大的变异,包括碱基的变化及同源重组.本研究确定了我国猪场存在PCV2a与PCV2b的共感染情况,共感染率为31.4%.共感染机制及共感染是否会促进病毒的重组,是否会加重猪体的病情还需要进一步的研究.

关键词： PCV2a PCV2b 差异PCR 共感染同源重组

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结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌二重实时荧光PCR检测方法的建立

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：谢志勤谢芝勋雷剑明刘加波庞耀珊邓显文谢丽基蓝如束广西兽医研究所广西壮族自治区疾病预防控制中心

目的:建立二重实时荧光定量PCR方法,用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测.方法:根据结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针;对反应条件和试剂... 详细信息

目的:建立二重实时荧光定量PCR方法,用于结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的鉴别检测.方法:根据结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计了结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针;对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重实时荧光定量PCR方法,对建立的实时荧光定量PCR方法的敏感性和特异性进行了检测.应用该方法对保存的临床样品进行二重荧光定量PCR检测。结果:所建立的方法特异性好,对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的检测敏感性均达到10个模板拷贝数,比常规PCR敏感性高100倍;抗干扰能力强,对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测出这两种细菌。对50份PPD检测阳性的牛的临床样品进行二重荧光定量PCR检测,结果结核分枝杆菌阳性的临床样品有6份,牛分枝杆菌阳性的临床样品有1份,其它均为阴性.结论:建立了用于检洲结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的二重荧光定量PCR法,该方法特异、敏感、快速、可定量,对检测鉴别区分结核分枝杆菌和牛分枝杆菌有重要意义。

关键词：结核分枝杆菌牛分枝杆菌二重荧光定量PCR

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我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

我国部分地区猪圆环病毒2型流行毒株的遗传变异分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：郭龙军陆月华危艳武黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通... 详细信息

临床上由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)感染引起的相关疾病日益严重,流行毒株基因不断发生变异,为了了解我国PCV2流行毒株遗传变异情况,本试验对来自全国10个省份不同地区送检的90份病料中分离到19株PCV2流行毒株.通过病毒基因组克隆和测序,将19株病毒分为2个大基因群和3个亚群,基因组组成分别为1766nt、1767nt和1768nt,各占15.8%、73.7%和10.5%.以1767nt毒株为基准,其第39或1039位有1个碱基缺失后突变成1766nt毒株;第1040位有1个碱基插入后突变成1768nt毒株.对19株病毒ORF2编码的Cap蛋白分析发现,有4株病毒编码基因发生了突变,出现了705nt和708nt两种突变型,使ORF2编码的Cap蛋白C末端分别有1和2个氨基酸延伸.本试验选用AccⅠ和FbaⅠ内切酶对19株病毒基因组PCR产物进行了限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),其结果可作为流行毒株分型鉴别手段.研究表明,我国猪群中流行的PCV2以基因组1767nt毒株为主,但也出现了1766nt基因变异毒株。此外,试验也证实上述毒株的ORF2编码Cap蛋白的C末端有突变现象,表明我国PCV2流行毒株呈现多样性。本研究建立的PCR-RFLP方法可为PCV2流行毒株分型提供鉴别手段.

关键词：猪圆环病毒2型流行毒株遗传变异 PCR-RFLP

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猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：蒋大良余兴龙李润成葛猛颜爱李杰刘春红刘俊琦湖南农业大学动物医学院

采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒（Hog Cholera Lapinized Virus HCLV）疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a（+）,构建重组原核表达载体pET-NS3.将pET-NS3转化进大肠杆菌Rosetta（DE3）进行优... 详细信息

采用PCR方法从猪瘟病毒兔化弱毒（Hog Cholera Lapinized Virus HCLV）疫苗株cDNA中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,将其克隆进原核表达载体pET32a（+）,构建重组原核表达载体pET-NS3.将pET-NS3转化进大肠杆菌Rosetta（DE3）进行优化表达,采用SDS-PAGE分析NS3融合蛋白主要以包含体形式表达,分子大小约95 *** Blotting分析表明NS3融合蛋白具有免疫原性.采用Ni亲和层析方法纯化得到NS3融合蛋白（90%）.以纯化的NS3融合蛋白为抗原初步建立了检测CSFV NS3抗体的间接ELISA方法,对221份不同猪群和年龄的猪血清样品进行检测.将检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,结果阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%.实验结果表明:重组原核表达载体pET-NS3构建成功,NS3融合蛋白在大肠杆菌Rosetta（DE3）中成功地表达,建立的间接ELISA检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果有较高一致性.

关键词： CSFV NS3 基因克隆原核表达融合蛋白蛋白纯化免疫印迹间接ELISA

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副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析

副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良湖南农业大学动物医学院

根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个24... 详细信息

根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸.与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较。同源性分别为99.9%和99.8%.序列的5′端有一段18个氨基酸的信号肽,该序列C末端最后10个氨基酸残基:Q-F-Q-F-S-I-G-G-S-F,具有典型革兰氏阴性细菌外膜蛋白特征,对于蛋白定位于细菌外膜有重要意义.以pMDTD15质粒为模板,用PCR的方法扩增副猪嗜血杆菌D15基因,并将其克隆到pET-28a（+）中,构建得到pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta（DE3）后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物.结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为94kDa,融合蛋白能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别,具有反应原性.将表达的D15蛋白免疫昆明小鼠和豚鼠后,具有一定的保护效力.

关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性

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TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：范晴花群义周晓黎董俊艾军叶玲玲广西兽医研究所云南出入境检验检疫局

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabanc virus,AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲一积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病.我国许多省也流行本病,该病的大规膜爆发给畜牧业带来巨... 详细信息

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabanc virus,AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲一积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病.我国许多省也流行本病,该病的大规膜爆发给畜牧业带来巨大经济损失。本研究根据GenBank登录的赤羽病核蛋白基因S RNA核苷酸序列设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测赤羽病病毒的实时荧光定量PCR方法。在本研究中,对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法.特异性试验证实,该方法只能检测到赤羽病病毒,与EHD、BTV、VSV等多种常见的动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性.所制作的标准曲线表明,在5.8×10～7～5.8×10～1拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.994),最少可检测到58个拷贝的阳性质粒,敏感度很高.同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为3.19%和4.23%,重复性极好.本方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3个小时。试验结果表明,本研究所建立的赤羽病病毒实时荧光PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合疫情监测、口岸进出口检验检设的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具,其具有良好的应用前景.

关键词：赤羽病病毒实时荧光定量PCR Taqman荧光探针快速检测

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用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10～1～10～6拷贝/μ... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10～1～10～6拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0%.用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7～10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到10～6拷贝/μL.试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7～11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性.对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在.实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量RT-PCR 体内分布规律

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规模化猪场猪繁殖呼吸综合症与细菌混合感染的诊断防治

规模化猪场猪繁殖呼吸综合症与细菌混合感染的诊断防治

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：周英顺王红宁杨鑫曾博邹立扣张安云徐昌文管中斌四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”

某规模化猪场养猪5000余头2009年4-5月,爆发急性、高热、呼吸系统疾病导致猪大量死亡,其中发病率为40-50%,死亡率20%.对采集死猪肺脏病料、血清6份用RT-PCR方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因进行扩增,结果表明3份为NSP2基因阳性,... 详细信息

某规模化猪场养猪5000余头2009年4-5月,爆发急性、高热、呼吸系统疾病导致猪大量死亡,其中发病率为40-50%,死亡率20%.对采集死猪肺脏病料、血清6份用RT-PCR方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因进行扩增,结果表明3份为NSP2基因阳性,将其编号为SNC01,***03.对SNC01进行测序,结果与genbank中登录得PRRSV毒株进行比较,发现在2930-3020共有90个碱基连续缺失,在3316,3395,3425有分别有6个,3个,6个碱基的缺失.对采集的病死猪肺脏、淋巴、肾脏、心脏等病料分离了2株细菌编号分别为SNC0901和SNC0902时所分离菌进行致病性实验,发现均能够使被攻毒小鼠死亡.应用16SrDNA方法鉴定所分离菌分别为副猪嗜血杆菌和大肠杆菌,对所分离细菌进行17种抗生素的药敏实验,结果表明细菌对头孢噻呋,头孢噻吩,替卡西林/棒酸,头孢氨苄,氨苄西林/舒巴坦敏感,对替卡西林,克林霉素,阿莫西林/棒酸中度敏感,对庆大霉素,林可霉素,丁胺卡那霉素,红霉素,阿莫西林,氨苄西林,土霉素耐药.该猪场为高致病性蓝耳病病毒混合感染副猪嗜血杆菌、大肠杆菌从而导致猪大量死亡。根据诊断结果采取了一系列防治措施,得到了防控经验.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征副猪嗜血杆菌大肠杆菌混合感染

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单抗介导的HI试验对不同H9N2亚型禽流感病毒HA表面抗原变异的研究

单抗介导的HI试验对不同H9N2亚型禽流感病毒HA表面抗原变异的研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王泽霖刘守川陈少渠陈恩林河南农业大学禽病研究所

利用本实验已建立的4株抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体（2A4、F6、H、B4）与1998～2005年间河南农大禽病研究所分离到的25株H9N2亚型毒株进行HI反应.结果显示,25个毒株可以分为二类,第一类23个毒株与H6单抗的HI结果为17～18log2;与F6单抗... 详细信息

利用本实验已建立的4株抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体（2A4、F6、H、B4）与1998～2005年间河南农大禽病研究所分离到的25株H9N2亚型毒株进行HI反应.结果显示,25个毒株可以分为二类,第一类23个毒株与H6单抗的HI结果为17～18log2;与F6单抗的HI结果为15～18log2:与A4单抗的结果为16～18log2;与B4单抗的HI结果在7～11 log2;另一类2个毒株即A/鸡/河南/A/98（HN）(3#株)和A/鸡/河南/C/02（HN）(18#株)与所有4株单抗都不发生反应。说明在H9N2亚型AIV表面抗原上的具有血凝活性的抗体结合位点不止一个,4株单抗可能均作用于血凝素表面同一抗原位点.3#和18#毒株的致病性较其它毒株强,可能与该位点的变异或缺失有关.4株单抗分别和5株H9N2做病毒中和试验,发现均无中和活性,说明表面抗原上的血凝活性位点并非就是中和活性位点.本试验的研究结果进一步证实了H9N2亚型AIV血凝素抗原的变异特性和可用HA单克隆抗体来鉴别某些变异毒株,为H9N2亚型AIV血凝素表面抗原结构与功能及变异规律的深入研究以及我国的禽流感H9亚型的疫苗毒株的选择提供了依据。

关键词：禽流感病毒抗原位点抗原变异

来源：评论

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