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434 篇 农学
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9 篇 医学
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- 1 篇 临床医学
7 篇 工学
- 6 篇 生物工程
- 1 篇 食品科学与工程（可...
6 篇 理学
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主题

24 篇 原核表达
23 篇 序列分析
19 篇 prrsv
16 篇 猪繁殖与呼吸综合...
14 篇 克隆
13 篇 pcr
11 篇 猪流感病毒
10 篇 副猪嗜血杆菌
10 篇 分离鉴定
9 篇 疫苗
9 篇 检测
9 篇 猪
8 篇 混合感染
8 篇 新城疫病毒
8 篇 分离
8 篇 应用
8 篇 猪细小病毒
8 篇 防控技术
8 篇 口蹄疫病毒
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机构

27 篇 广西兽医研究所
24 篇 吉林大学
23 篇 华南农业大学
23 篇 军事医学科学院军...
20 篇 广西大学
18 篇 河南农业大学
14 篇 河南省动物疫病预...
11 篇 山东农业大学
10 篇 南京农业大学
10 篇 青岛农业大学
10 篇 山东省滨州畜牧兽...
10 篇 华中农业大学
9 篇 湖南农业大学
9 篇 中国农业大学
9 篇 四川大学生命科学...
8 篇 南京天邦生物科技...
8 篇 云南农业大学
7 篇 黑龙江八一农垦大...
7 篇 北京市农林科学院...
7 篇 山东绿都生物科技...

作者

23 篇 金宁一
17 篇 李斌
17 篇 梁家幸
17 篇 赵武
16 篇 蒋玉雯
16 篇 黄安国
16 篇 姚瑞英
16 篇 梁保忠
15 篇 沈志强
15 篇 鲁会军
13 篇 丁壮
12 篇 黄伟坚
12 篇 王红宁
11 篇 吴志明
11 篇 闫若潜
11 篇 罗满林
10 篇 杨霞
10 篇 母连志
10 篇 高荣
10 篇 王川庆

语言

442 篇 中文
3 篇 英文

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猪轮状病毒广东分离株VP6基因的克隆及序列分析

猪轮状病毒广东分离株VP6基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：田小艳邓雨修孙华苏润环王东东招丽婵宋延华广东省温氏集团研究院

参考GenBank中发表的猪轮状病毒PRV OSU毒株VP6基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,分别以本实验室分离保存的6株RV反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1.4 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定.测序结... 详细信息

参考GenBank中发表的猪轮状病毒PRV OSU毒株VP6基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,分别以本实验室分离保存的6株RV反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1.4 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定.测序结果表明:VP6基因全长1320bp,含有一个1194bp的开放阅读框,编码397个氨基酸。序列分析表明,6株GD分离毒株与已发表的10株国内外毒株序列进行核苷酸同源性在80.1%—95.6%之间,其中与中国JL94株的同源性最高为95.6%,与日本代表毒株R-13株的同源性最低为80.1%;氨基酸的同源性在90.7%—99.2%之间,其中与中国JL94株的同源性最高为99.2%,与R-13株的同源性最低为90.7%.6株GDRV分离株间的VP6基因核苷酸同源性为89.0%—100.0%之间,氨基酸同源性在97.5%—99.7%之间.通过核苷酸和氨基酸序列分析比较可知,轮状病毒VP6基因核苷酸同源性差异较大,但氨基酸同源性却很高,说明VP6基因存在较为普遍碱基的突变、插入和缺失现象,但大多数都为无意义突变。核苷酸系统发育进化树结果表明,GD1、GD4、GD5和GD6毒株与轮状病毒JL94毒株亲缘关系较近,GD2和GD3与美国代表毒株BRV033毒株亲缘关系较近,6个毒株同为一个进化群,且同属于A群轮状病毒中的第Ⅰ亚型。

关键词：氨基酸同源性 VP6 分离株克隆及序列分析猪轮状病毒

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S2菌苗对奶牛布氏杆菌病防制效果及安全性试验

S2菌苗对奶牛布氏杆菌病防制效果及安全性试验

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：凤英刘晓松牧仁内蒙古农牧业科学院动物医学研究所内蒙古鄂尔多斯市鄂托克前旗农牧业局

2004年内蒙古呼和浩特市地区新建的3个奶牛场,于2005年发生严重流产,作者从流产胎儿中分离到牛型布氏杆菌;7～8月份对3个奶牛场全面进行布病血清学检疫,阳性率分别为36.4%,46.8%,66.2%.根据疫病情况和以往防制布病经验,在疫区和爆发点... 详细信息

2004年内蒙古呼和浩特市地区新建的3个奶牛场,于2005年发生严重流产,作者从流产胎儿中分离到牛型布氏杆菌;7～8月份对3个奶牛场全面进行布病血清学检疫,阳性率分别为36.4%,46.8%,66.2%.根据疫病情况和以往防制布病经验,在疫区和爆发点采取免疫为主的综合性防制措施.免疫组Ⅰ场,阳性牛隔离饲养,流产牛隔离治疗,阳性牛和阴性牛连续3年S菌苗口服免疫,一次免疫即起到基本控制流产作用;免疫组Ⅱ场,阳性牛和阴性牛没有隔离淘汰,与阴性性同群饲养,每年进行S菌苗口服免疫,连续三年免疫后该场布病得到稳定控制;未免疫对照组,未进行免疫,采取以检疫为主,阳性牛隔离淘汰,环境消毒等措施,第四次检疫布病阳性率6.7%,流产率4.2%。从S菌苗对阴性反应奶牛免疫血清抗体消长规律看出,阴性泌乳牛和阴性育成牛免疫后20～30天的血清效价达到1:400,血清抗体在8个月后基本消失.对免疫组Ⅱ场同群饲养的62头泌乳牛免疫前后乳清SAT检测布病抗体,分别为45.2%和21%,但隔离饲养的阴性泌乳牛免疫后乳清SAT检测全部为阴性,因此乳清SAT检测法可作泌乳牛自然感染与免疫的鉴别诊断方法手段之一。布病阴性牛S菌苗口服免疫后,不同时期采集牛奶进行细菌学检菌,培养于布氏杆菌选择性培养基上,均无分离到病原菌,因此,阴性反应牛S菌苗口服免疫后乳品是安全的.

关键词：奶牛布鲁氏菌病 S2菌苗安全性

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不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王霆王红宁张安云高荣张云飞邹立扣四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室” 四川农业大学动物医学院

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种,对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粗介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况,并对qnrD基因进行克隆,原核表达.2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株),沙门氏菌(31株),... 详细信息

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种,对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粗介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况,并对qnrD基因进行克隆,原核表达.2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株),沙门氏菌(31株),肺炎克雷伯氏菌(46株),肠球菌(50株),奇异变形杆菌(20株),共288株,采用微量稀释法测定试验菌株对环丙沙星(CIP)等四种喹诺酮类药物的MIC值;运用PCR方法调查qnrD基因的流行、分布情况;将qnrD基因定向克隆到表达载体pET-30b(+)中,转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测qnrD基因的表达。试验菌株的总耐药率分别为:沙门氏菌(88.41%),奇异变形杆菌(82.65%),肺炎克雷伯氏菌(78.36%),肠球菌(72.81%),大肠杆菌(60.25%);qnrD基因的检出率分别为沙门氏菌(64.51%),肠球菌(38.00%),大肠杆菌(23.40%),肺炎克雷伯氏菌(6.52%),奇异变形杆菌(0%);SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-qnrD可成功的在大肠杆菌中表达qnrD蛋白。本研究首次报道了qnrD基因在不同细菌中的流行情况,首次在肠球菌,大肠杆菌,肺炎克雷伯氏菌中发现了qnrD基因,对qnrD基因进行原核表达为后续试验提供了基础材料。

关键词：喹诺酮 qnrD基因耐药表型原核表达

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用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的研究

用荧光定量RT-PCR法对高致病性PRRSV变异株感染猪体内分布规律的...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：危艳武刘长明张朝霞黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10～1～10～6拷贝/μ... 详细信息

根据GenBank发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株Nsp2基因序列设计一对特异引物,以重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-Green I嵌合荧光染料建立了一种荧光定量RT-PCR方法用于检测该病毒核酸载量,在10～1～10～6拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为R=0.9998,扩增效率为E=0.950,对质粒标准品最低检测限为12.8拷贝/μL,重复性检测的变异系数低于2.0%.用高致病性PRRSV变异毒株人工感染25日龄非免疫仔猪,对不同时间采集的血清进行了病毒核酸定量检测,结果表明病毒血症于攻毒后48 h被检测出,于7～10d达到高峰,其病毒核酸载量能达到10～6拷贝/μL.试验猪临床表现为体温升高至40.5℃以上,持续7～11 d;出现嗜睡、打喷嚏、眼结膜炎、偶见一过性的耳尖发绀、皮肤苍白或有小疱疹、被毛粗糙、消瘦、便秘、后躯无力等临床症状。感染猪发生高热期与毒血症消长规律有一定相关性.对人工感染猪体内病毒分布检测结果表明,以多种脏器均有病毒存在,如扁桃体、淋巴结、心脏、肾脏中含量较高,肝和脾脏和肺次之,脑组织中也检测到病毒存在.实验表明,该方法可用于PRRSV变异毒株核酸定量检测,为该病毒致病性、致病机理、疫苗免疫及诊断等方面的研究提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株荧光定量RT-PCR 体内分布规律

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副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性分析

副猪嗜血杆菌外膜蛋白D15基因的克隆与表达及表达产物的免疫原性...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：朱小宁余兴龙盛益颖李润成罗维葛猛刘俊奇刘春红肖利军将大良湖南农业大学动物医学院

根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个24... 详细信息

根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZBKM01000005,设计一对特异性引物,以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段.将其进行T-A克隆,构建pETD15质粒并进行序列测定和分析.结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸.与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较。同源性分别为99.9%和99.8%.序列的5′端有一段18个氨基酸的信号肽,该序列C末端最后10个氨基酸残基:Q-F-Q-F-S-I-G-G-S-F,具有典型革兰氏阴性细菌外膜蛋白特征,对于蛋白定位于细菌外膜有重要意义.以pMDTD15质粒为模板,用PCR的方法扩增副猪嗜血杆菌D15基因,并将其克隆到pET-28a（+）中,构建得到pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta（DE3）后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物.结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为94kDa,融合蛋白能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别,具有反应原性.将表达的D15蛋白免疫昆明小鼠和豚鼠后,具有一定的保护效力.

关键词：副猪嗜血杆菌外膜蛋白原核表达免疫原性

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靶向PRRSV ORF1b基因shRNA重组腺病毒体内外抑制PRRSV复制

靶向PRRSV ORF1b基因shRNA重组腺病毒体内外抑制PRRSV复制

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李广明李玉峰王先炜王兴龙姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

本研究利用靶向PRRSV ORF1b的2个shRNA重组腺病毒,在MARC-145细胞上观察其抑制PRRSV S1株和SY0608株复制效果,结果表明,与表达突变shRNA的rAd-mP2以及接毒对照组相比,rAd-P2对S1株和SY0608株的复制均具有明显的抑制作用;而rAd-P3对SY060... 详细信息

本研究利用靶向PRRSV ORF1b的2个shRNA重组腺病毒,在MARC-145细胞上观察其抑制PRRSV S1株和SY0608株复制效果,结果表明,与表达突变shRNA的rAd-mP2以及接毒对照组相比,rAd-P2对S1株和SY0608株的复制均具有明显的抑制作用;而rAd-P3对SY0608株的抑制作用不明显.进一步观察rAd-P2在PAM细胞中抑制SY0608株复制效果,结果显示,rAd-P2可以有效抑制PRRSV细胞病变的产生,与对照相比,PRRSV N蛋白以及ORF1b mRNA水平均明显降低（p<0.05）,且该抑制作用具有剂量依赖性,并随时间的延长逐渐减弱。动物试验选取了20头6周龄PRRSV阴性仔猪,分成4组,每组5头,第1和2组分别肌肉注射rAd-P2和rAd-mP2,4×10～9TCID/头,24h后第1～3组肌肉注射SY0608株2×10TCID/头,第4组作为正常对照;攻毒后每天测量体瘟,观察临床症状,攻毒后第1天和第5天采血,测定PRRSV含量,第9天,将所有猪只宰杀,进行肉眼病变和组织病理学观察和肺组织PRRSV real-time PCR检测.结果表明,rAd-P2可以在猪体内有效抑制PRRSV的复制,推迟动物发病3天左右,证明shRNA重组腺病毒在体内外均能有效抑制PRRSV复制,为控制PRRSV感染提供了一种可能的新策略.

关键词：高致病性 PRRSV 重组腺病毒 shRNA

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规模化猪场猪繁殖呼吸综合症与细菌混合感染的诊断防治

规模化猪场猪繁殖呼吸综合症与细菌混合感染的诊断防治

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：周英顺王红宁杨鑫曾博邹立扣张安云徐昌文管中斌四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室”

某规模化猪场养猪5000余头2009年4-5月,爆发急性、高热、呼吸系统疾病导致猪大量死亡,其中发病率为40-50%,死亡率20%.对采集死猪肺脏病料、血清6份用RT-PCR方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因进行扩增,结果表明3份为NSP2基因阳性,... 详细信息

某规模化猪场养猪5000余头2009年4-5月,爆发急性、高热、呼吸系统疾病导致猪大量死亡,其中发病率为40-50%,死亡率20%.对采集死猪肺脏病料、血清6份用RT-PCR方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因进行扩增,结果表明3份为NSP2基因阳性,将其编号为SNC01,***03.对SNC01进行测序,结果与genbank中登录得PRRSV毒株进行比较,发现在2930-3020共有90个碱基连续缺失,在3316,3395,3425有分别有6个,3个,6个碱基的缺失.对采集的病死猪肺脏、淋巴、肾脏、心脏等病料分离了2株细菌编号分别为SNC0901和SNC0902时所分离菌进行致病性实验,发现均能够使被攻毒小鼠死亡.应用16SrDNA方法鉴定所分离菌分别为副猪嗜血杆菌和大肠杆菌,对所分离细菌进行17种抗生素的药敏实验,结果表明细菌对头孢噻呋,头孢噻吩,替卡西林/棒酸,头孢氨苄,氨苄西林/舒巴坦敏感,对替卡西林,克林霉素,阿莫西林/棒酸中度敏感,对庆大霉素,林可霉素,丁胺卡那霉素,红霉素,阿莫西林,氨苄西林,土霉素耐药.该猪场为高致病性蓝耳病病毒混合感染副猪嗜血杆菌、大肠杆菌从而导致猪大量死亡。根据诊断结果采取了一系列防治措施,得到了防控经验.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征副猪嗜血杆菌大肠杆菌混合感染

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4种病原菌免疫富集刷快速检测方法的建立及应用

4种病原菌免疫富集刷快速检测方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：肖成蕊王伟利孟日增孟庆峰宋战昀刘和平蔡阳罗雁非王宁于师宇吉林出入境检验检疫局福建出入境检验检疫局

近年来采用免疫磁珠富集细菌的研究非常热门,本研究以高分子细丝材料做成刷状富集固相载体,原理与效果与免疫磁珠富集细菌相同,并具有可以同时富集不同菌检项目,容易标记、富集后与样液更容易分离、洗涤、处理的优势,建立了一种新型、... 详细信息

近年来采用免疫磁珠富集细菌的研究非常热门,本研究以高分子细丝材料做成刷状富集固相载体,原理与效果与免疫磁珠富集细菌相同,并具有可以同时富集不同菌检项目,容易标记、富集后与样液更容易分离、洗涤、处理的优势,建立了一种新型、快速的检测沙门氏菌、大肠杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌的方法;在固相载体材料的选择上比较了聚乙烯、尼龙和锦纶作为富集刷的性能,优化确定了富集刷的材料及制作工艺。抗四种病原菌的IgG分别与富集刷表面偶联,通过偶联抗体量及偶联时间的优化,最终建立起可同时检测四种病原菌的免疫富集刷快速检测方法。该方法与国家标准检测方法、3M Petrifilm Plates微生物快速检测法进行分离培养鉴定实验比较,结果显示免疫富集刷法与国家标准方法和3M Petrifilm Plates微生物快速检测法的检测结果无显著差异,但可节省一半时间及人力和试剂的成本消耗.对检测添加菌的最低检出线敏感性实验结果表明免疫富集刷法比国家标准检测方法低,但优于3M Petrifilm Plates微生物快速检测法.因此,所建立的病原菌快速检测方法具有快速、敏感、易操作等特点,相关检测技术方法已经获得专利支持.

关键词：免疫富集刷沙门氏菌大肠杆菌单增李斯特菌金黄色葡萄球菌分离鉴定

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鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势

鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张立杰马力杨飞鸽陈卫红北京市兽医生物药品厂

鸡马立克氏病(MD)是一种常见以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病.自1907年发现以来,病毒毒力不断增强。在70年代初期,马立克非致病性火鸡疱疹病毒制备的弱毒活疫苗HVT投入使用,成为世界上第一个也是唯一一个利用疫苗预防肿瘤... 详细信息

鸡马立克氏病(MD)是一种常见以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病.自1907年发现以来,病毒毒力不断增强。在70年代初期,马立克非致病性火鸡疱疹病毒制备的弱毒活疫苗HVT投入使用,成为世界上第一个也是唯一一个利用疫苗预防肿瘤产生的产品。该疫苗的使用,在一定时期内有效的控制MD的蔓延.根据不同血清型毒株的分离鉴定,更多的单苗、联苗、基因工程苗得到了深入研究和应用.但是随着是世界养禽业由散养型步入集约化饲养,各国不同程度出现管理不善、早期感染,疫苗使用方法不当等原因,造成马立克病毒毒力逐年进化,出现了更多的免疫失败事件,与之相适应的疫苗及免疫策略受到了严峻的挑战.本文分析了马立克病毒毒株进化的情况,以及引起病毒毒力进化的原因,对马立克疫苗研制的进展进行了分类概述。提出应从免疫方法、免疫佐剂、遗传抵抗等方面入手,缓解病毒毒力增强的态势,进而减少MD的发生和传播,降低该病给养禽业带来的经济损失。马立克氏病(marek's disease,MD)是由疱疹病毒科、细胞结合性马立克氏病病毒(marek's piseasevirm,MDV)引起的一种高度接触传染性、淋巴组织增生性肿瘤疾病.以患鸡内脏、外周神经、性腺、皮肤及眼出现淋巴样细胞浸润和形成肿瘤为特征.该病是第一个能用疫苗预防的肿瘤性疾病,因此受到了医学界、兽医学界、病毒学界的广泛关注.到目前为止,还没有有效的方法来治疗MD患鸡,仍通过疫苗预防控制该病的发生.近50年来,随着养鸡业的迅速发展,MDV的毒力不断增强,对常规疫苗的抵抗力增加,甚至宿主范围都有所扩大.在大约每十几年发生一次毒力跃迁,与常规疫苗的发展几乎同步.疫苗的研发和使用在病毒毒力进化过程中是否起到推波助澜的作用?如何采取措施缓解病毒毒力的增强?本文对毒力进化以及疫苗研发进展进行了分析和概述,提出了减缓毒力增强的途径.

关键词： MDV 疫苗使用鸡马立克氏病病毒毒力疫苗研究

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猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救

猪圆环病毒2型感染性DNA的构建及体外拯救

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李俊于周徐绍建程凯慧王金宝山东省农业科学院畜牧兽医研究所青岛农业大学

感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外... 详细信息

感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究首次应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将两个PCV2 SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒***-PCV2中含有一个线性化PCV2全基因组,长1767bp,载体中PCV2从496nt开始,其起始位点(Ori)含有保守序列的茎环结构未被破坏;ds-PCV2为单个全基因自连产物。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中含有大量的病毒抗原;提取mRNA后经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。所构建的3种重组质粒均可表达并在体外组装出有感染性的PCV2病毒粒子,拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究在国内首次应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性、疫苗免疫及致病机理研究打下了基础。

关键词：猪圆环病毒2型单拷贝双拷贝自身环化感染性克隆体外拯救

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