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- 6 篇 生物工程
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主题

24 篇 原核表达
23 篇 序列分析
19 篇 prrsv
16 篇 猪繁殖与呼吸综合...
14 篇 克隆
13 篇 pcr
11 篇 猪流感病毒
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10 篇 分离鉴定
9 篇 疫苗
9 篇 检测
9 篇 猪
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8 篇 分离
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8 篇 防控技术
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机构

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24 篇 吉林大学
23 篇 华南农业大学
23 篇 军事医学科学院军...
20 篇 广西大学
18 篇 河南农业大学
14 篇 河南省动物疫病预...
11 篇 山东农业大学
10 篇 南京农业大学
10 篇 青岛农业大学
10 篇 山东省滨州畜牧兽...
10 篇 华中农业大学
9 篇 湖南农业大学
9 篇 中国农业大学
9 篇 四川大学生命科学...
8 篇 南京天邦生物科技...
8 篇 云南农业大学
7 篇 黑龙江八一农垦大...
7 篇 北京市农林科学院...
7 篇 山东绿都生物科技...

作者

23 篇 金宁一
17 篇 李斌
17 篇 梁家幸
17 篇 赵武
16 篇 蒋玉雯
16 篇 黄安国
16 篇 姚瑞英
16 篇 梁保忠
15 篇 沈志强
15 篇 鲁会军
13 篇 丁壮
12 篇 黄伟坚
12 篇 王红宁
11 篇 吴志明
11 篇 闫若潜
11 篇 罗满林
10 篇 杨霞
10 篇 母连志
10 篇 高荣
10 篇 王川庆

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不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

不同细菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrD调查及原核表达研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王霆王红宁张安云高荣张云飞邹立扣四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室” 四川农业大学动物医学院

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种,对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粗介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况,并对qnrD基因进行克隆,原核表达.2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株),沙门氏菌(31株),... 详细信息

本试验旨在调查不同地域采集的不同菌种,对喹诺酮类药物(Quinolones)的耐药表型和质粗介导的喹诺酮耐药基因qnrD的分子流行情况,并对qnrD基因进行克隆,原核表达.2006～2009年从四川、河南等地分离到的大肠杆菌(141株),沙门氏菌(31株),肺炎克雷伯氏菌(46株),肠球菌(50株),奇异变形杆菌(20株),共288株,采用微量稀释法测定试验菌株对环丙沙星(CIP)等四种喹诺酮类药物的MIC值;运用PCR方法调查qnrD基因的流行、分布情况;将qnrD基因定向克隆到表达载体pET-30b(+)中,转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测qnrD基因的表达。试验菌株的总耐药率分别为:沙门氏菌(88.41%),奇异变形杆菌(82.65%),肺炎克雷伯氏菌(78.36%),肠球菌(72.81%),大肠杆菌(60.25%);qnrD基因的检出率分别为沙门氏菌(64.51%),肠球菌(38.00%),大肠杆菌(23.40%),肺炎克雷伯氏菌(6.52%),奇异变形杆菌(0%);SDS-PAGE分析表明,重组载体pET-qnrD可成功的在大肠杆菌中表达qnrD蛋白。本研究首次报道了qnrD基因在不同细菌中的流行情况,首次在肠球菌,大肠杆菌,肺炎克雷伯氏菌中发现了qnrD基因,对qnrD基因进行原核表达为后续试验提供了基础材料。

关键词：喹诺酮 qnrD基因耐药表型原核表达

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靶向PRRSV ORF1b基因shRNA重组腺病毒体内外抑制PRRSV复制

靶向PRRSV ORF1b基因shRNA重组腺病毒体内外抑制PRRSV复制

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李广明李玉峰王先炜王兴龙姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

本研究利用靶向PRRSV ORF1b的2个shRNA重组腺病毒,在MARC-145细胞上观察其抑制PRRSV S1株和SY0608株复制效果,结果表明,与表达突变shRNA的rAd-mP2以及接毒对照组相比,rAd-P2对S1株和SY0608株的复制均具有明显的抑制作用;而rAd-P3对SY060... 详细信息

本研究利用靶向PRRSV ORF1b的2个shRNA重组腺病毒,在MARC-145细胞上观察其抑制PRRSV S1株和SY0608株复制效果,结果表明,与表达突变shRNA的rAd-mP2以及接毒对照组相比,rAd-P2对S1株和SY0608株的复制均具有明显的抑制作用;而rAd-P3对SY0608株的抑制作用不明显.进一步观察rAd-P2在PAM细胞中抑制SY0608株复制效果,结果显示,rAd-P2可以有效抑制PRRSV细胞病变的产生,与对照相比,PRRSV N蛋白以及ORF1b mRNA水平均明显降低（p<0.05）,且该抑制作用具有剂量依赖性,并随时间的延长逐渐减弱。动物试验选取了20头6周龄PRRSV阴性仔猪,分成4组,每组5头,第1和2组分别肌肉注射rAd-P2和rAd-mP2,4×10～9TCID/头,24h后第1～3组肌肉注射SY0608株2×10TCID/头,第4组作为正常对照;攻毒后每天测量体瘟,观察临床症状,攻毒后第1天和第5天采血,测定PRRSV含量,第9天,将所有猪只宰杀,进行肉眼病变和组织病理学观察和肺组织PRRSV real-time PCR检测.结果表明,rAd-P2可以在猪体内有效抑制PRRSV的复制,推迟动物发病3天左右,证明shRNA重组腺病毒在体内外均能有效抑制PRRSV复制,为控制PRRSV感染提供了一种可能的新策略.

关键词：高致病性 PRRSV 重组腺病毒 shRNA

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检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军温士刚武嘉男吴洪丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法。用于检测该病毒感染猪血清中和抗体.该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待... 详细信息

采用杂交瘤细胞融合技术,获得了一株具有分泌抗猪圆环病毒2型(PCV2)中和活性的单克隆抗体,利用该株单抗建立了一种阻断ELISA方法。用于检测该病毒感染猪血清中和抗体.该方法先用病毒多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,然后与待检猪血清抗体及辣根过氧化物酶标记的单抗进行反应,通过测定酶标单抗显示阻断ELISA检测结果。该方法与常规免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)对353份试验猪血清样品进行了平行试验,两种方法检测符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应.用阻断ELISA和血清中和试验检测PCV2血清中和抗体结果表明,两种方法呈显著正相关性(r=0.9970),其敏感性优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品检测结果显示,疫苗接种2 w开始能够检测到病毒中和抗体,4w后血清抗体阳转率达100%;此外,对来自东北3省不同地区送检的703份血清样品进行检测,抗体阳性检出率为73.4%,表明我国养猪场中PCV2感染率较高,该病毒危害严重.本研究建立的阻断ELISA具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV2流行病学调查及血清抗体检测提供了一种有效技术手段.

关键词：猪圆环病毒2型中和抗体检测单克隆抗体阻断ELISA

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鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势

鸡马立克氏病疫苗研究进展及病毒毒力进化态势

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张立杰马力杨飞鸽陈卫红北京市兽医生物药品厂

鸡马立克氏病(MD)是一种常见以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病.自1907年发现以来,病毒毒力不断增强。在70年代初期,马立克非致病性火鸡疱疹病毒制备的弱毒活疫苗HVT投入使用,成为世界上第一个也是唯一一个利用疫苗预防肿瘤... 详细信息

鸡马立克氏病(MD)是一种常见以淋巴组织增生为主要特征的高度接触性传染病.自1907年发现以来,病毒毒力不断增强。在70年代初期,马立克非致病性火鸡疱疹病毒制备的弱毒活疫苗HVT投入使用,成为世界上第一个也是唯一一个利用疫苗预防肿瘤产生的产品。该疫苗的使用,在一定时期内有效的控制MD的蔓延.根据不同血清型毒株的分离鉴定,更多的单苗、联苗、基因工程苗得到了深入研究和应用.但是随着是世界养禽业由散养型步入集约化饲养,各国不同程度出现管理不善、早期感染,疫苗使用方法不当等原因,造成马立克病毒毒力逐年进化,出现了更多的免疫失败事件,与之相适应的疫苗及免疫策略受到了严峻的挑战.本文分析了马立克病毒毒株进化的情况,以及引起病毒毒力进化的原因,对马立克疫苗研制的进展进行了分类概述。提出应从免疫方法、免疫佐剂、遗传抵抗等方面入手,缓解病毒毒力增强的态势,进而减少MD的发生和传播,降低该病给养禽业带来的经济损失。马立克氏病(marek's disease,MD)是由疱疹病毒科、细胞结合性马立克氏病病毒(marek's piseasevirm,MDV)引起的一种高度接触传染性、淋巴组织增生性肿瘤疾病.以患鸡内脏、外周神经、性腺、皮肤及眼出现淋巴样细胞浸润和形成肿瘤为特征.该病是第一个能用疫苗预防的肿瘤性疾病,因此受到了医学界、兽医学界、病毒学界的广泛关注.到目前为止,还没有有效的方法来治疗MD患鸡,仍通过疫苗预防控制该病的发生.近50年来,随着养鸡业的迅速发展,MDV的毒力不断增强,对常规疫苗的抵抗力增加,甚至宿主范围都有所扩大.在大约每十几年发生一次毒力跃迁,与常规疫苗的发展几乎同步.疫苗的研发和使用在病毒毒力进化过程中是否起到推波助澜的作用?如何采取措施缓解病毒毒力的增强?本文对毒力进化以及疫苗研发进展进行了分析和概述,提出了减缓毒力增强的途径.

关键词： MDV 疫苗使用鸡马立克氏病病毒毒力疫苗研究

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共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的攻毒保护效果研究

共表达*** HSP70与PRRSV GP3和GP5重组腺病毒的构建及其对仔猪的...

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李军星李玉峰王先炜王兴龙姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害养猪业的一种重要传染病,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用两个不同连接肽将副猪嗜血杆菌的HSP70和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的结构蛋白GP3/GP5的基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,分别构建了以5×甘氨酸为连接肽的重组腺病毒rAd-HS35和以口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白为连接肽的重组腺病毒rAd-HSA35.通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot可以检测到HSP/GP3/GP5蛋白的表达,证明重组腺病毒可以正确表达目的蛋白.以串联表达GP3/GP5(rAd-GP35)的重组腺病毒和野生型重组腺病毒(wtAd)为对照.研究该重组腺病毒在猪体内诱导免疫应答情况及对同源毒株攻毒的保护效果,结果表明,免疫rAd-GP35,rAd-HS35及rAd-HSA35的猪产生了PRRSV特异性的体液免疫应答,且rAd-HSA35诱导的中和抗体滴度明显高于rAd-GP35免疫组.同时,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪血清中的IFN-γ及IL-4的含量也明显升高.攻毒后,与wtAd和rAd-GP35免疫组相比,rAd-HS35及rAd-HSA35免疫仔猪的临床症状较轻,病毒血症较低,肺部病理变化也较轻.此外,rAd-HSA35诱导的保护效力明显高于rAd-HS35.上述结果表明HSP70与GP3-GP5共表达可以增强PRRSV抗原的诱导的免疫应答并对同源毒株攻毒提供一定的免疫保护.重组腺病毒rAd-HSA35为防治高致病性PRRSV提供了可能。

关键词：高致病性PRRSV 免疫应答 HSP70 重组腺病毒

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口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂DNA疫苗构建及其免疫原性研究

口蹄疫病毒三价复合多表位佐剂DNA疫苗构建及其免疫原性研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：马鸣潇金宁一李昌尹革芬鲁会军李宵中国人民解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室云南农业大学动物科技学院辽宁医学院畜牧兽医学院

本研究以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV 2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMD... 详细信息

本研究以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV 2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,在此基础上,以SEA为基因佐剂,通过分子设计构建了SEA与OAAT融合表达基因。将构建好的表达盒OAAT与SEA融合表达基因克隆至真极表达载体PVAX1 PCMV启动子下游,构建成口蹄疫三价基因佐剂DNA疫苗pEA。经Western blot和IFA检测,目的蛋白在HeLa细胞中获得正确表达。小鼠免疫实验表明,pA和pEA免疫组的血清抗体均能分别与O型、A型和AsiaⅠ抗原反应,与对照组相比差异已显著,且pEA免疫组和灭活疫苗免疫组抗体水平均显著高于pA免疫组;同时pA和pEA免疫小鼠细胞因子IL-2,IFN-γ,IL-4和IL-10较对照组显著提高,且pEA免疫组的IL-2,IFN-γ和IL-4水平明显高于pA免疫组.用O/NY00和Asia1/YNBS/58株FMDV进行豚鼠攻毒免疫保护试验,结果表明O型和Asia1型FMDV二联灭活疫苗免疫组均获得完全保护,pA免疫组均获得2/4保护,pEA免疫组均获得3/4保护,而pVAX1和PBS免疫组完全没有保护。实验结果表明,SEA与OAAT融合表达蛋白具有较好免疫原性,且SEA可以作为DNA疫苗的有效基因佐剂.

关键词：口蹄疫病毒 SEA DNA疫苗

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不同来源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)调查研究

不同来源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)调查研究

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：张云飞王红宁张安云高荣王霆邹立扣曾博四川大学生命科学学院四川大学“动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室” 四川农业大学动物医学院雅安 625014

本试验旨在研究异源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)的耐药表型和质柱介导FQs耐药基因(PMQR)的特征。2006-2008年从四川、河南等地的规模化猪场、医院及野生动物园分离的141异源大肠杆菌,采用K-B纸片法检测其对奈啶酸(... 详细信息

本试验旨在研究异源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)的耐药表型和质柱介导FQs耐药基因(PMQR)的特征。2006-2008年从四川、河南等地的规模化猪场、医院及野生动物园分离的141异源大肠杆菌,采用K-B纸片法检测其对奈啶酸(NA)等六种FQs的耐药表型,并运用PCR方法检测PMQR基因:qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ib-cr、qepA和qnrD.结果表明:试验菌株对各药物的耐药率分别为:萘啶酸(58.93%)、诺氟沙星(56.25%)、氧氟沙星(54.46%)、恩诺沙星(53.57%)、左旋氧氟沙星(51.79%)和环丙沙星(51.77%).其中,猪源及野生动物源菌株以对萘啶酸耐药为主,耐药率分别为72.22%和12.50%;人源菌株以对诺氟沙星耐药为主,耐药率为74.29%。PCR检测结果表明,PMQR基因的检出率由高到低依次为aac(6′)-Ib-cr(49.65%)、qnrD(23.40%)、qnrS(22.70%)、qnrB(21.28%)、qnrA(14.89%)及qepA(8.51%).猪源菌株中aac(6′)-Ib-cr和qnrD检出率高,分别为69.57%和43.47%.aac(6′)-Ib-cr和qnrS在人源菌株中分布较普遍,检出率分别为54.29%和37.14%.qnrA,qnrB和qepA在野生动物源菌株中均有一定检出率,分别为4.17%、8.33%和4.17%。本研究首次对不同来源大肠杆菌中六种PMQR基因进行调查研究,为大肠杆菌耐药性的防控提供参考依据.

关键词：大肠杆菌 FQs PMQR 耐药基因耐药表型

来源：评论

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不同H9N2亚型禽流感病毒株致病力的比较试验

不同H9N2亚型禽流感病毒株致病力的比较试验

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：王泽霖柴丽娜杨大光陈陆河南农业大学禽病研究所

本研究参照NDV评介毒力的方法对1998～2005年间收集的25株H9N2亚型禽流感病毒（主要是河南地区）的致病性进行了比较分析。结果显示:25株H9N2亚型不同毒株间致病性有较大差异,其EID值在10/0.2mL～10/0.2mL之间,ELD值在10/0.2mL～10/0.2m... 详细信息

本研究参照NDV评介毒力的方法对1998～2005年间收集的25株H9N2亚型禽流感病毒（主要是河南地区）的致病性进行了比较分析。结果显示:25株H9N2亚型不同毒株间致病性有较大差异,其EID值在10/0.2mL～10/0.2mL之间,ELD值在10/0.2mL～10/0.2mL之间;MDT/MLD值在66.5h～103.2h之间。从中选出致病力有差异的8个毒株进行了1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）、6周龄鸡静脉接种指数（IVPI）以及8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,结果证明大部分毒株ICPI和IVPI基本上为0,排毒散毒的高峰期在攻毒后第5天到第6天.在25毒株中A/CK/HN/02（H9N2）(18#)和A/CK/HN/A3/98（H9N2）(3#)表现出了比较高的致病性,不仅其EID值最高(分别为10/0.2mL和10/0.2mL)、ELD值最高(分别为10/0.2mL和10/0.2mL),而且鸡胚平均死亡时间也最短（分别为66.5h和69h）。且还出现了1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）(分别为0.238和0.437)和6周鸡静脉内接种指数（IVPI）(分别为和0.34和0.51).在8周龄SPF鸡人工感染排毒试验中3#和18#毒株的排毒量最大,排毒时间也明显长于其它毒株（从第2～9天）.根据以上的试验结果,25株H9N2亚型禽流感病毒致病性强弱大致可以分为3类:致病性偏强、致病性中等、致病性较弱,表明我国H9N2亚型不同毒株致病性有明显差异,呈多态性.

关键词：尿囊液禽流感病毒平均死亡时间比较试验

来源：评论

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13种消毒剂对规模化蛋鸡场环境微生物MIC、MBC测定

13种消毒剂对规模化蛋鸡场环境微生物MIC、MBC测定

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：康润敏王红宁高荣周英顺庞平四川大学“动物疫病与食品安全四川省重点实验室”四川大学生命科学学院四川农业大学四川大学生命科学学院

为评价13种消毒剂(白疫杀、百毒杀、过氧化氢、PVP碘、万仑菌清、新洁尔灭.复合酚、新大卫1、碘伏、84、百毒杀S、百毒强杀、菌毒灭)对规模化鸡舍环境微生物(大肠杆菌8099,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372以及... 详细信息

为评价13种消毒剂(白疫杀、百毒杀、过氧化氢、PVP碘、万仑菌清、新洁尔灭.复合酚、新大卫1、碘伏、84、百毒杀S、百毒强杀、菌毒灭)对规模化鸡舍环境微生物(大肠杆菌8099,金黄色葡萄球菌ATCC 6538,枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC 9372以及环境微生物中的11株大肠杆菌,7株金黄色葡萄球菌与3株枯草芽孢杆)的消毒作用,采用肉汤稀释法进行了药物最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度测定(MBC).结果表明:13种消毒剂药物大肠杆菌的MIC最低的依次为是过氧化氢23.4mR/L,PVP碘39-78.1 mg/L以及碘伏39.0-156.3 mg/L;对大肠杆菌MBC最低的依次为过氧化氢46.8 mg/L,PVP碘39-156.3mg/L和碘伏78.1-156.3 mg/L;对金黄色葡萄球菌的MIC最低依次为PVP碘39-78.1 mg/L,过氧化氢46.8 mg/L以及新洁尔灭和新大卫62.5mg/L;对金黄色葡萄球菌的MBC最低的依次为PVP碘39-78.1mg/L,过氧化氢46.8 mg/L,新大卫62.5 mg/L;对芽孢杆菌的MIC最低依次为新洁尔灭62.5mg/L,新大卫62.5mg/L,PVP碘78.1-156.3 mg/L;对芽孢杆菌的MBC最低依次为新洁尔灭62.5 mg/L,过氧化氢93.6 mg/L,新大卫125mg/L。结论:对于规模化鸡场对大肠杆菌抑菌效果最好的的过氧化氢,对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的是PVP碘,对于枯草芽孢杆菌抑菌效果最好的是新洁尔灭。

关键词：消毒剂最低抑菌浓度最小杀菌浓度

来源：评论

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负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞对CD8+T淋巴细胞的旁位活化效应

负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞对CD8+T淋巴细胞的旁位活化效应

引用

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：李杰石玮边海霞王若张丽张雷孟明王家鑫河北农业大学动物科技学院动物免疫学实验室

目的:探讨在体外条件下负载灭活口蹄疫病毒(FMDV)树突状细胞活化CD8+T细胞的机制.方法:用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白介素-4(rmIL-4)将小鼠外周血单核细胞诱导分化成树突状细胞(MoDCs),以信号阻断法从淋巴结T细胞制... 详细信息

目的:探讨在体外条件下负载灭活口蹄疫病毒(FMDV)树突状细胞活化CD8+T细胞的机制.方法:用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白介素-4(rmIL-4)将小鼠外周血单核细胞诱导分化成树突状细胞(MoDCs),以信号阻断法从淋巴结T细胞制备CD8+T细胞,利用负载FMDV的MoDCs与CD8+T细胞共培养,以FMDV+MoDCs+淋巴结T细胞作为对照,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量.用蛋白酶体抑制剂和溶酶体抑制剂处理MoDCs,2h后再负载灭活FMDV,并与CD8+T细胞共培养,用FMDV+MoDCs+CD8+T细胞和FMDV+MoDCs作对照,用ELISA检测不同时间培养上清液中IFN-γ的含量.结果:在共培养9h,CD8+T细胞的IFN-γ释放量约为淋巴结T细胞IFN-γ释放量的1/6,随后,淋巴结T细胞和CD8+T细胞均产生少量IFN-γ.在FMDV+MoDCs+CD8+T细胞对照组,在共培养至9h-24h,CD8+T细胞释放IFN-γ的量逐渐增多.灭活FMDV负载被lactacystin和氯喹处理的MoDCs(iMoDCs)与CD8+T细胞共培养后9h-12h,CD8+T细胞产生IFN-γ显著减少,共培养至24h,IFN-γ释放显著增多,在36h,CD8+T细胞产生的IFN-γ水平升至最高,与对照组相比有显著的统计学意义。结论:负载灭活FMDV的MoDCs可以活化淋巴结T细胞,并以活化CD4+T细胞为主.而且,负载灭活FMDV的MoDCs既可以交叉提呈途径活化CD8+T细胞,还可通过非MHC-Ⅰ和非MHC-Ⅱ类分子依赖途径激活CD8+T细胞。该发现为研制口蹄疫新型治疗性疫苗开辟了一条新途径。

关键词：树突状细胞口蹄疫病毒抗原提呈旁位活化

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