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中国农业科学院上...
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吉林农业大学
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山东省动物生物工...
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27 篇
殷宏
26 篇
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21 篇
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12 篇
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"任意字段=中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会"
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TLR4/TLR2在感染旋毛虫小鼠中的变化
TLR4/TLR2在感染旋毛虫小鼠中的变化
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
路义鑫
韩彩霞
李巍
李晓云
徐佳
唐颖
刘畅
宋铭忻
东北农业大学动物医学学院 黑龙江哈尔滨150030
Balb/c小鼠经口感染旋毛虫肌幼虫,感染剂量为500蚴/只,感染后0d、4d、7d、14d、21d和28d对小鼠体内Toll样受体和相关细胞因子进行检测.根据GenBank中登录的TLR4、TLR2和管家基因(β-actin)等序列,设计并合成引物,利用Trizol法提取腹腔...
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Balb/c小鼠经口感染旋毛虫肌幼虫,感染剂量为500蚴/只,感染后0d、4d、7d、14d、21d和28d对小鼠体内Toll样受体和相关细胞因子进行检测.根据GenBank中登录的TLR4、TLR2和管家基因(β-actin)等序列,设计并合成引物,利用Trizol法提取腹腔巨噬细胞、心肌和肺中的总RNA,应用半定量RT-PCR方法扩增目的基因TLR4、TLR2并进行条带分析,分析目的基因在三种组织细胞中的相对表达量;同时应用流式细胞术对腹腔巨噬细胞上TLR4的表达量进行检测.在心肌中,TLR4 mRNA在感染后4d、14d和21d显著高于对照组;TLR2 mRNA在E感染后4d和21d显著高于对照组,感染后7d则显著低于对照组.在肺中,TLR4 mRNA在感染后14d显著高于对照组,感染后21d和28d则显著低于对照组;TLR2 mRNA在感染后变化不显著.在其它时间点TLR4和TLR2在心肌和肺中的相对表达与对照组相比均不显著.应用半定量RT-PCR方法检测腹腔巨噬细胞中TLR4和TLR2的相对表达,结果揭示,旋毛虫侵入机体后可通过其抗原来调节机体TLR2和TLR4受体的表达量的变化,这种变化与旋毛虫的生长发育过程及其引起的宿主免疫反应和器官组织损伤相关.
关键词:
兽医学
旋毛虫
流式细胞术
巨噬细胞
免疫反应
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弓形虫IMP1蛋白表达特性及免疫原性研究
弓形虫IMP1蛋白表达特性及免疫原性研究
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
禹海杰
卓洵辉
黄斌
程海卫
陈学秋
杜爱芳
浙江大学动物科学学院动物医学系
杭州310058
本研究旨在探索IMP1在弓形虫不同阶段的表达特性及其免疫原性.通过基因克隆技术以弓形虫RH株为模板成功获得了TgIMP1序列,进行原核表达、纯化,将制备的兔源多克隆抗体用于间接免疫荧光技术对不同时期IMP1蛋白的表达特性进行研究.选取20...
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本研究旨在探索IMP1在弓形虫不同阶段的表达特性及其免疫原性.通过基因克隆技术以弓形虫RH株为模板成功获得了TgIMP1序列,进行原核表达、纯化,将制备的兔源多克隆抗体用于间接免疫荧光技术对不同时期IMP1蛋白的表达特性进行研究.选取20g左右ICR小鼠,随机分为4组,每组20只,分别灌胃生理盐水及含有pcDNA3.1-IMP1、pcDNA3.1-SAG1-IMP1和pcDNA3.1的减毒沙门氏菌),按照每
次
200μi(107cfu)菌液进行免疫.研究结果发现在游离、吸附于细胞表面、入侵中、入侵后及纳虫空泡中的速殖子IMP1均有表达,均被定位于虫体表面,且在有些虫体的顶端表达更为强烈.免疫保护性试验结果表明ZJ111/pcDNA3.1-IMP1、ZJ111/pcDNA3.1-SAG1-IMP1核酸苗具有良好的免疫原性,可以诱导小鼠产生较强的体液及细胞免疫应答,其中IgG2a、IFN-γ水平与对照组比显著上升(p<0.05),动物保护性试验结果表明二价核酸疫苗ZJ111/pcDNA3.1-SAG1-IMP1的免疫保护效果要显著好于单价核酸疫苗ZJ111/pcDNA3.1-IMP1(p<0.05).研究提示TgIMP1可在弓形虫多个阶段进行表达,其核酸疫苗对实验感染弓形虫的小鼠有一定的免疫保护力,为研制抗弓形虫疫苗提供基础和思路.
关键词:
兽医学
弓形虫
免疫原性
蛋白表达
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奶牛场新孢子虫感染及其抗体变化动态初探
奶牛场新孢子虫感染及其抗体变化动态初探
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
杨娜
郝攀
赵现龙
王辉
刘群
中国农业大学动物医学院
北京市海淀区圆明园西路2号100193
本研究选定4个规模化奶牛场,间隔8个月进行3
次
采血,采用NcSRS2-ELISA检测新孢子虫血清抗体,并结合奶牛的年龄、胎
次
、流产史等因素综合分析.其结果是:(1)北京l牛场连续三
次
采样抗体阳性率分别为14.0%、32.5%、16.4%;北京2牛场分别为1...
详细信息
本研究选定4个规模化奶牛场,间隔8个月进行3
次
采血,采用NcSRS2-ELISA检测新孢子虫血清抗体,并结合奶牛的年龄、胎
次
、流产史等因素综合分析.其结果是:(1)北京l牛场连续三
次
采样抗体阳性率分别为14.0%、32.5%、16.4%;北京2牛场分别为15.7%、12.1%、l2.0%;沈阳1牛场分别为8.5%、21.3%、9.4%;沈阳2牛场分别为7.0%、5.8%、8.8%.牛群抗体阳性率在三
次
检测均不同,无明显规律可循,个体牛的抗体滴度处于动态变化.(2)对照牛场档案资料,发现有流产史的奶牛新孢子虫血清抗体平均阳性率为24.3%;无流产史的奶牛新孢子虫血清抗体平均阳性率为11.6%(x2=61.16,P<0.01).妊娠0胎、1胎、2胎、3胎和4胎以上的奶牛新孢子虫血清抗体阳性率分别为10.0%、13.27%、13.81%、22.79%、10.98%和9.94%,妊娠3
次
牛血清抗体阳性率最高.检测结果提示不同季节对牛群新孢子虫抗体阳性率的影响不明显.在三
次
血清抗体检测中,部分奶牛的血清学反应呈波动状态(阳性→阴性或阴性→阳性),说明奶牛体内抗体滴度处于动态变化之中.本研究结果与众多报道一致,新孢子虫感染是我国奶牛流产的主要原因之一,且感染牛体内的抗体水平处于动态变化之中,牛群抗体阳性率可一定程度反映牛群的感染情况,但抗体滴度下降的牛并不意味着感染被清除.
关键词:
奶牛新孢子虫
血清抗体
酶联免疫吸附法
动态变化
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绵羊T淋巴细胞应对捻转血矛线虫感染的基因差异表达分析
绵羊T淋巴细胞应对捻转血矛线虫感染的基因差异表达分析
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
杨怡
周前进
陈学秋
闫宝龙
郭筱璐
马羽洁
张红丽
杜爱芳
浙江大学动物科学学院动物医学系
杭州310058
本研究旨在观察分析绵羊T淋巴细胞参与抵抗捻转血矛线虫感染与免疫应答前后的基因表达差异.通过建立绵羊感染捻转血矛线虫模型,分离感染后0日龄、3-5日龄、25-30日龄和60日龄以后的T淋巴细胞;通过基因芯片技术,比较感染后各日龄之间T淋...
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本研究旨在观察分析绵羊T淋巴细胞参与抵抗捻转血矛线虫感染与免疫应答前后的基因表达差异.通过建立绵羊感染捻转血矛线虫模型,分离感染后0日龄、3-5日龄、25-30日龄和60日龄以后的T淋巴细胞;通过基因芯片技术,比较感染后各日龄之间T淋巴细胞的差异表达基因.结果显示,在感染后3dvs.0d、30 dvs.0d、60dvs.0d、30 d vs.3 d、60 dvs.3 d和60 dvs.30d比较组中,分别获得了853、242、42、1058、805和102个差异表达基因,对它们进行生物信息
学分
析表明:GO分析结果显示差异表达基因功能聚类主要为细胞组分、代谢过程、生物过程调节等,KEGG分析结果显示差异表达基因主要参与信号转导、细胞交流、细胞生长与衰亡、免疫系统过程等途径.对SLC9A3R2、ABCB9、COMMD4、SUGT1、FCER1G、GSK3A、PAK4、SHC1和FCER2等9个特异性表达的重要基因分析显示,它们的功能主要与细胞内稳态维持和免疫反应有关.抗蠕虫感染的重要因子IL-13和galectin-14在感染后60(表达量上升,推测可能与感染后期绵羊彻底清除捻转血矛线虫有关.本研究提供了一系列与绵羊感染捻转血矛线虫后T淋巴细胞反应相关的基因,为进一步探明其免疫应答规律提供了新视角.
关键词:
绵羊捻转血矛线虫
T淋巴细胞
差异表达基因
免疫应答
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莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选
莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
王锦明
罗建勋
殷宏
关贵全
刘军龙
刘爱红
马米玲
牛庆丽
任巧云
杨吉飞
刘志杰
李有全
中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室
甘肃 兰州730046
本研究为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSC...
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本研究为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上.通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库.用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增.结果显示,构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆.测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段(如Hsp90、Rab1b、p200、GAP45、cyp、Histone H2A以及一些膜蛋白和假定蛋白基因),RACE扩增获得了其中8个基因的全长.本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础.
关键词:
兽医学
莫斯巴贝斯虫
基因文库
疫苗筛选
免疫功能
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柔嫩艾美耳球虫EtATPase基因特性的初步研究
柔嫩艾美耳球虫EtATPase基因特性的初步研究
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
李婷
董辉
韩红玉
姜连连
赵其平
朱顺海
孔春林
黄兵
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室
上海200241
本实验室前期构建了柔嫩艾美耳球虫早熟株与母株孢子化卵囊消减cDNA文库,并采用cDNA微阵列技术筛选了早熟株与母株孢子化卵囊的差异表达基因,获得了部分差异ESTs序列.本研究选择其中的一条EST序列,利用RACE技术对该基因全长序列进行了克...
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本实验室前期构建了柔嫩艾美耳球虫早熟株与母株孢子化卵囊消减cDNA文库,并采用cDNA微阵列技术筛选了早熟株与母株孢子化卵囊的差异表达基因,获得了部分差异ESTs序列.本研究选择其中的一条EST序列,利用RACE技术对该基因全长序列进行了克隆,并对其基因保守性、表达量分析、细胞定位、体外抑制等进行了研究.保守性分析表明,从堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫3株早熟株中都能扩增出EtATPase,同源性分析发现其序列相似性高达100%,表明该基因在不同种球虫中高度保守性.定量PCR分析表明,EtATPase基因在未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子4个发育阶段都能表达,尤其在孢子化卵囊中转录拷贝数最高;与各自母株相比,EtATPase基因在堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫3株早熟株的表达量均明显下调.EtATPase基因表达的融合蛋白是包涵体蛋白,分子量大约是23 kDa,Westrn-b-lot分析发现具有良好的抗原性.利用EtATPase重组蛋白制备的多克隆抗体和间接免疫荧光技术发现,E-tATPase基因定位于子孢子的折光体上.体外抑制试验发现,EtATPase基因对球虫子孢子入侵细胞无明显的抑制作用.EtATPase基因与球虫早熟株发育的相关性尚需进一步验证.
关键词:
兽医学
柔嫩艾美耳球虫
阳离子转运
三磷酸腺苷酶
基因文库
序列分析
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莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因的克隆表达与多克隆抗体制备
莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因的克隆表达与多克隆抗体制备
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
王锦明
殷宏
罗建勋
关贵全
刘爱红
任巧云
马米玲
刘志杰
李安岩
李有全
赵帅阳
张浩浩
中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室
甘肃兰州730046
为探讨莫氏巴贝斯虫滑动体的结构组成,该研究拟克隆和表达滑动体的部分组件蛋白,并制备多克隆抗体,为研究巴贝斯虫滑动体的结构功能及作用机制奠定基础.因此本研究利用末端快速扩增技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、my...
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为探讨莫氏巴贝斯虫滑动体的结构组成,该研究拟克隆和表达滑动体的部分组件蛋白,并制备多克隆抗体,为研究巴贝斯虫滑动体的结构功能及作用机制奠定基础.因此本研究利用末端快速扩增技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myo A、actin、aldolase、trap及mic基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX:4T:1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)pLys中用IPTG诱导表达;融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价及反应性.同时应用western blot鉴定了该复合物组件蛋白在天然蛋白中的存在.研究结果显示,获得的莫氏巴贝斯虫gap45、gap50、myoA、actin、aldolase、trap和mic基因的全长分别为664bp、1391bp、773bp、1110bp、1199bp、2254bp和2538bp,开放阅读框长度分别为567bp、1194bp、606bp、1005bp、1074bp、2100bp和2514bp.利用重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效介高于1:25600.而且一些免疫血清能够识别天然蛋白中的组件蛋白.该研究首
次
确定了滑动体在模式巴贝斯虫中的存在,并获得了相关的生物学材料,为后期研究巴贝斯虫滑动体的结构、功能以及巴贝斯虫入侵宿主细胞的机制奠定了基础.
关键词:
兽医学
莫氏巴贝斯虫
滑动体组件
蛋白基因
多克隆抗体
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两种不同来源弓形虫虫株对不同日龄雏鸡的致病性比较
两种不同来源弓形虫虫株对不同日龄雏鸡的致病性比较
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
王帅
严若峰
宋小凯
李祥瑞
赵光伟
王望
谢青
张梦
袁橙
Hassan I.A.
刘欣超
徐立新
南京农业大学动物医学院
南京210095
为探讨弓形虫的致病性与感染日龄的关系,分别利用RH和JS两个虫株的速殖子按照1×108个/羽的剂量腹腔感染7、14、21、28日龄雏鸡,同时设阴性对照组;攻虫后每日观察实验鸡的临床症状,记录每组鸡的死亡情况;利用ELISA方法对各组循环抗...
详细信息
为探讨弓形虫的致病性与感染日龄的关系,分别利用RH和JS两个虫株的速殖子按照1×108个/羽的剂量腹腔感染7、14、21、28日龄雏鸡,同时设阴性对照组;攻虫后每日观察实验鸡的临床症状,记录每组鸡的死亡情况;利用ELISA方法对各组循环抗原和循环抗体进行检测,PCR方法对53天未死亡的鸡进行检测,对急性死亡和53天未死亡的鸡进行病理组织切片,观察病变.结果发现7日龄组雏鸡感染弓形虫后多呈急性死亡,JS株的死亡率(100%)显著高于RH株(70%);14日龄组雏鸡感染后有轻微临床症状,但无死亡;21、28日龄组雏鸡感染JS株和RH株后均未出现临床症状和死亡.各感染组的循环抗原和循环抗体分别在感染后4和11天转为阳性;RH-21,RH-28和JS-28组的循环抗原和循环抗体均早于其他感染组转为阴性.RH-7组存活的鸡以及RH-14,RH-21,JS-14,JS-21组所有被感染的鸡中均检测到弓形虫特异性DNA;RH-28,JS-28组分别有7只和9只鸡检测到弓形虫特异性DNA.研究结果表明雏鸡的日龄对弓形虫的致病性具有重要的影响,且日龄越小,弓形虫的致病性越强;两种不同来源的弓形虫虫株对雏鸡表现出不同的毒力.
关键词:
雏鸡弓形虫病
感染日龄
致病性
病理诊断
临床观察
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捕食线虫性真菌发酵液杀虫作用及胞外蛋白质的性质研究
捕食线虫性真菌发酵液杀虫作用及胞外蛋白质的性质研究
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
王瑞
赵晓慧
杨晓野
杨莲茹
李军燕
李文生
马亚囡
农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古农业大学兽医学院
内蒙古呼和浩特010018
农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古农业大学兽医学院
内蒙古呼和浩特010018
内蒙古神元生物工程股份有限公司
呼和浩特市010010
内蒙古神元生物工程股份有限公司
呼和浩特市010010
为研究捕食线虫性真菌产生的胞外蛋白质的生化性质及其相关杀虫作用,首先应用线虫作诱导剂和液体培养基,发酵培养捕食线虫性真菌,对产生的发酵液经浓缩处理后,测定其中的酶活性并进行杀虫试验;而且对发酵液进行层析纯化,再进行PH、温度...
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为研究捕食线虫性真菌产生的胞外蛋白质的生化性质及其相关杀虫作用,首先应用线虫作诱导剂和液体培养基,发酵培养捕食线虫性真菌,对产生的发酵液经浓缩处理后,测定其中的酶活性并进行杀虫试验;而且对发酵液进行层析纯化,再进行PH、温度、蛋白酶抑制剂试验.结果显示,培养基的组成成分和相关诱导剂能够显著影响捕食线虫性真菌的代谢发酵过程,其发酵液中蛋白酶和磷酸酶活性及杀虫作用显著不同,其中动物
寄生
性线虫诱导的枸椽酸培养基发酵液中蛋白酶和磷酸酶活性最高,线虫作用最强;且证实发酵液还具有杀蝇蛆的功效.从发酵液中纯化出的三种胞外蛋白酶的分子量分别为38KD、63KD、19KD;在PH为6.0~7.0、温度为45~55℃条件下,其活性最高;它们都对酶抑制剂菲罗啉和抑肽素非常敏感,其中38KD的蛋白酶对抑制剂PMSF也很敏感.上述结果为进一步研究捕食性真菌分泌的胞外蛋白酶在杀线虫过程中的作用以及后续对捕食线虫性真菌的化学杀虫机理的研究,提供了重要参考依据.
关键词:
兽医学
捕食线虫性真菌
发酵液
胞外蛋白质
杀虫作用
来源:
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羊巴贝斯虫临潭株(莫氏巴贝斯虫系统进化组)棒状体相关蛋白1基因座序列与结构分析
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
作者:
牛庆丽
Claire Bonsergent
关贵全
殷宏
Laurence Malandrin
INRA
UMPR1300 BiologyEpidemiology and Risk Analysis in Animal HealthBP 40706F:44307 NantesFrance
家畜疫病病原生物学国家重点实验室
甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所 甘肃兰州730046
本研究测定了临潭株棒状体相关蛋白的多基因家族的基因序列及基因座结构.结果显示临潭株的棒状体相关蛋白(rap-1)基因座复杂的基因结构。1),存在三种rap-1基因类型(rap-1a,rap-1b and rap-1c);2),rap-1a和rap-1b包含多个基因拷贝;3),rap...
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本研究测定了临潭株棒状体相关蛋白的多基因家族的基因序列及基因座结构.结果显示临潭株的棒状体相关蛋白(rap-1)基因座复杂的基因结构。1),存在三种rap-1基因类型(rap-1a,rap-1b and rap-1c);2),rap-1a和rap-1b包含多个基因拷贝;3),rap-1a基因存在基因多态性,包含两种rap-1a基因类型(命名为:rap-1a 61和rap-1a 67)同源性为95.7%,每个rap-1a类型又包含两个变异体亚型;4),rap-1a61-1和rap-1a 61-2之间的多态性是有限的,仅存在三个核苷酸位点的变异;5),rap-1a 67-1和rap-1a 67-2之间,从1270bp到rap-1a67-1基因末端存在8个核苷酸变异位点,因此产生了两种有细微差异的蛋白;6),两类rap-1a基因在基因座中的比率为:1 rap-1a 67,1 rap-1a 61-1和1 rap-1a61-2;7),不同的rap-1基因类型被三类转录间隔区分开;8),rap-1a基因被rap-1b基因间隔开;9),Rap-1c位于基因组的终点.全长基因座大概为31kb,包含6个rap-1a基因,5个rap-1b基因和1个rap-1c基因.上述多基因家族的基因序列及基因座结构的测定为羊巴贝斯虫的深入研究及防控提供一定的理论依据.
关键词:
羊巴贝斯虫
棒状体相关蛋白1
基因座结构
序列分析
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