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T=题名（书名、题名），A=作者（责任者），K=主题词，P=出版物名称，PU=出版社名称，O=机构（作者单位、学位授予单位、专利申请人），L=中图分类号，C=学科分类号，U=全部字段，Y=年（出版发行年、学位年度、标准发布年）

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AND代表“并且”；OR代表“或者”；NOT代表“不包含”；(注意必须大写,运算符两边需空一格)

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作者

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15 篇 马米玲
15 篇 关贵全
15 篇 罗建勋
13 篇 党志胜
13 篇 刘爱红
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12 篇 杨光友
12 篇 蔡建平
12 篇 廖党金
11 篇 沈永林
10 篇 景志忠
10 篇 杜爱芳
10 篇 刘明远
10 篇 宁长申
10 篇 谢明权
10 篇 高金亮
10 篇 张龙现

语言

219 篇 中文
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镰形扇头蜱中新基因RhHp1的分离、克隆与表达

镰形扇头蜱中新基因RhHp1的分离、克隆与表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：龚海燕周金林周勇志中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所

从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺eDNA 文库的100个EST(Expressed Sequenoe Tag)序列中选取一个带有polyA 尾的序列。根据序列设计5’RACE(Rapid Amplification of cDNAEnds)引物,(GSP15’-CCGAGTCCAGGOTAATAA-3’,GSP2:5’-CCGGTAAGTCCTGAGTAACCTCCAAGT-3’,nestedGSP:5’-GACCAGAAAGACTAAGACCTCCAAGTT-3’),经5’RACE 得到此序列的全长基因,命名为RhHpl,现已登录GeneBank(AY550980),基因全长1823 bp,开放阅读框(ORF)为152l bp,从110 bp至1631 bp,编码506个氨基酸,此基因所编码的蛋白序列无信号肽.RhHpl 基因在核苷酸水平上与GeneBank 中的其它序列几乎无同源性;在氨基酸水平上,与其它序列的同源性也较小,与一种蜘蛛(Nephila)的claVipes(AAF36089)同源性最高,为14.580%。RhHpl 基因的大部分表达序列(表达引物:上游(Ker-E-F):5’-GAATTCCATTACGGCCGGGGTCTITCT-3’,下游(Ker-E-R):5’-GCGGCCGCATGCACTATGGTCTTCACACC-3’),经Sac I 和HindⅢ酶切后,连接于pET28a 载体并克隆至表达茵BL21,lmM IPTG 诱导表达,产生分子量约为46kD 的重组rRhHpl 蛋白,蛋白以不溶性包涵体形式存在。His Bind(?)Puri6eation Kit 纯化目的蛋白,经BCA Prote Assay kit 测定,纯化后的rRhHpl 蛋白浓度为500μg/ml。将变性、纯化和体外复性得到rRhHpl 蛋白三次免疫新西兰兔,收集相应的兔抗血清进行Westemblot 分析,结果发现rRhHpl 蛋白可特异性地与兔血清抗体结合,表明RhHpl 基因的重组表达产物具有一定的免疫原性。RT(Reverse Transcription)-PcR分析,RhHpl 基因在镰形扇头蜱各发育阶段的表达丰度存在差异。上述结果暗示RhHpl 基因可在原核体系中表达,表达产物具有一定的免疫活性。此基因的其它功能尚在进一步研究中。

关键词：克隆与表达新基因镰形扇头蜱 RhHp1

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日本血吸虫(中国大陆株)新基因SjPP的研究

日本血吸虫(中国大陆株)新基因SjPP的研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：姚利晓林矫矫傅志强朱传刚李浩蔡幼民中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农科院上海家畜寄生虫病研究所上海动物生物技术研究中心农业部动物寄生虫学重点开放实验室

血吸虫病是一种危害严重的人兽共患病。早期的研究发现东方田鼠是我国血吸虫病流行区唯一一种感染日本血吸虫后不致病的哺乳动物,且这种抗性是先天的,可遗传的.利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA 表达文库,获... 详细信息

血吸虫病是一种危害严重的人兽共患病。早期的研究发现东方田鼠是我国血吸虫病流行区唯一一种感染日本血吸虫后不致病的哺乳动物,且这种抗性是先天的,可遗传的.利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA 表达文库,获得5个EST 片段:mfs-1、mfs-2、mfs-3、mfs-4和mfs-5(登录号分别为BE974942、BE974943、BE974944、BE974945,BE974946).利用5′RACE 技术和电子克隆技术,获得mfs—5的全长基因序列,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kDa,等电点为5.51。序列分析显示该基因为尚未报道的日本血吸虫新基因,其编码序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPV 等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%,故将该基因命名为SjPP。构建该基因的重组表达载体pET28a(+)/SjPP和核酸疫苗pCMV—Script/SjPP,在BALE/c小鼠免疫保护实验中,重组蛋白pET28a(+)/sjPP 诱导的减虫率、粪便减卵率分别是18.18%、32.23%,DNA 疫苗诱导的相应值为26.77%、31.91%,两者都诱导了部分免疫保护作用.

关键词：日本血吸虫东方田鼠丝/苏氨酸蛋白磷酸酶免疫保护作用

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河南省猪隐孢子虫病流行病学调查及人工感染试验

河南省猪隐孢子虫病流行病学调查及人工感染试验

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：闫文朝宁长申张龙现梁宏德康凯刘红英刘光辉河南农业大学牧医工程学院河南农业大学牧医工程学院河南农业大学牧医工程学院河南农业大学牧医工程学院汝州市畜牧局河南农业大学牧医工程学院河南农业大学牧医工程学院

猪隐孢子虫在公共卫生方面具有重要意义。为了掌握河南省猪隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染情况,用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查了郑州、许昌、漯河和禹州等地区6个猪场共417份粪样,并在国内首次进行了固始品种雏鸡和昆明系... 详细信息

猪隐孢子虫在公共卫生方面具有重要意义。为了掌握河南省猪隐孢子虫(Cryptosporidium)的感染情况,用饱和糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法调查了郑州、许昌、漯河和禹州等地区6个猪场共417份粪样,并在国内首次进行了固始品种雏鸡和昆明系小白鼠和长大二元杂交仔猪的动物交叉感染试验。结果为:根据形态大小初步定为小球隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum),平均感染率为10.95%,20日龄以前的仔猪感染率为0,21～40日龄的的仔猪感染率为12.20%,41～60日龄的仔猪感染率为21.19%;从自然感染猪体内分离的隐孢子虫卵囊不感染5日龄的固始品种雏鸡和18日龄正常的昆明系小白鼠,但是能感染免疫抑制小白鼠,对4日龄的仔猪有较强的感染性,并且出现严重的拉稀、脱水等症状。石蜡切片和HE 染色结果显示,猪源隐孢子虫寄生在小白鼠的十二指肠、空肠和回肠以及仔猪的盲肠、结肠和直肠。

关键词：河南猪隐孢子虫人工感染

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鸡艾美耳球虫3-1E基因的克隆与表达

鸡艾美耳球虫3-1E基因的克隆与表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：周建民汪明中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(***,Et GS)和堆型艾美耳球虫青海株(*** QH,Ea QH)孢子化卵囊的子孢子中提取的总RNA 扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原3-1E 基因(Et GS 3-1E 和Ea QH3-1E)。将Et GS 3-1... 详细信息

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(***,Et GS)和堆型艾美耳球虫青海株(*** QH,Ea QH)孢子化卵囊的子孢子中提取的总RNA 扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原3-1E 基因(Et GS 3-1E 和Ea QH3-1E)。将Et GS 3-1E与原核表达载体pGEX-6P1连接,构建了的pGEX-3-1E 原核表达质粒,并获得融合蛋白的高效表达和纯化。序列分析表明:Et GS 3-1E 和Ea QH 3-1E 的ORF 均为513个碱基,共编码171个氨基酸。Et GS 3-1E 的蛋白分子量为18.5 KDa,Ea QH 3-1E 的蛋白分子量为18.6 KDa。ORF 比较,Et GS3-1E 与文献报道的Ea3-1E 比较,共有2个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为98.8%,有1个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为99.4%;Ea QH 3-1E 与文献报道的Ea 3-1E 比较,共有4个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为97.7%,有3个氨基酸变异,氨基酸同源性为98.3%;Et GS 3-1E与Ea QH 3-1E 比较,有3个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为98.2%,有2个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为98.8%。获得了Et GS 3-1E 融合蛋白的高效表达和纯化,表达率达43.2%。

关键词：鸡球虫 3-1E 克隆表达

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毒害艾美耳球虫广东株微线蛋白-2基因的克隆及序列分析

毒害艾美耳球虫广东株微线蛋白-2基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：蔡建平谢明权覃宗华艾哈迈德彭新宇魏文康吴惠贤 Nyala大学兽医学院广东省农科院兽医研究所在广东省农科院兽医研究所在 Nyala大学兽医学院广东省农科院兽医研究所在广东省农科院兽医研究所在广东省农科院兽医研究所在

根据已报道的柔嫩艾美耳球虫(豪顿株)微线蛋白-2(EtMIC-2(Ht))的cDNA 序列设计特异性引物,以孢子化12h 的***(广东株)卵囊总RNA 为模板,用RT-PCR 方法首次成功克隆了*** 广东株微线蛋白-2(EnMIC-2(Gd))的cDNA。EnMIC-2(Gd)的cDNA 全长11... 详细信息

根据已报道的柔嫩艾美耳球虫(豪顿株)微线蛋白-2(EtMIC-2(Ht))的cDNA 序列设计特异性引物,以孢子化12h 的***(广东株)卵囊总RNA 为模板,用RT-PCR 方法首次成功克隆了*** 广东株微线蛋白-2(EnMIC-2(Gd))的cDNA。EnMIC-2(Gd)的cDNA 全长1126bp,其中第44-1069位是该基因的阅读框架(ORF),共编码342个氨基酸,两端为非编码区。比较EnMIC-2(Gd)与EtMIC-2(Ht)的核苷酸序列,二者同源性为99.7%(1123/1126),三个变异全部位于阅读框架之内,即第71、207和1017位EtMIC-2-Ht 为C、A 和T,而EnMIC-2(Gd)在相应位置分别为T、T 和C。比较根据核苷酸序列推导的氨基酸序列,上述的三个核苷酸变异有两个导致了所编码氨基酸的改变,其中第71位的变异为无义突变,第207位的变异导致所编码氨基酸由天门冬酰胺(D)变为缬氨酸(V),而第1017位的变异则导致甘氨酸(G)变换为缬氨酸(V)。EnMIC-2(Gd)与EtMIC-2(Ht)所编码氨基酸序列同源性为99.42%(340/342)。这提示微线蛋白在种间具保守性,有可能作为抗原同时诱导针对多种球虫的免疫保护。

关键词：柔嫩艾美耳球虫微线蛋白-2 克隆序列

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猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

猪附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：付媛刘琴刘恩勇郑海红周艳琴姚宝安江涛王金苹赵俊龙华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北省动物血防站湖北华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学动物医学院华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

根据已报道的猪附红细胞体基因组的序列设计了一对引物,建立了特异性的聚合酶链式反应(PCR),扩增片段大小为782bp,然后将扩增产物测序,测序结果与Genebank 上猪的附红细胞体序列进行同源性比较,同源性达到99%。特异性试验表明只有猪的... 详细信息

根据已报道的猪附红细胞体基因组的序列设计了一对引物,建立了特异性的聚合酶链式反应(PCR),扩增片段大小为782bp,然后将扩增产物测序,测序结果与Genebank 上猪的附红细胞体序列进行同源性比较,同源性达到99%。特异性试验表明只有猪的附红细胞体DNA 可以扩增出特异性条带,而其他健康猪血液、弓形虫、猪伪狂犬病毒、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌样品没有扩增出该条带,表明该试验是特异性的。利用建立的PCR 方法对湖北省的14个猪场的100份血样进行了PCR 检测,结果有8个猪场为阳性,阳性率最高的达到83.3%。猪附红细胞体病PCR 诊断方法的建立为进一步进行猪附红细胞体病的研究奠定了基础。

关键词：猪附红细胞体病 PCR

来源：评论

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柔嫩艾美耳球虫甘肃株CDPK基因的克隆、表达及其对球虫感染的免疫保护

柔嫩艾美耳球虫甘肃株CDPK基因的克隆、表达及其对球虫感染的免疫...

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：周建民汪明中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院

在球虫卵囊孢子化最后时,柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)钙调域蛋白激酶(calmodulin-domain protein kinases,CDPK)表达量增加,且与集中于寄生虫顶部的丝状结构相连,当寄生虫进入宿主细胞时,EtCDPK 就停留在寄生虫进入宿主细胞膜... 详细信息

在球虫卵囊孢子化最后时,柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)钙调域蛋白激酶(calmodulin-domain protein kinases,CDPK)表达量增加,且与集中于寄生虫顶部的丝状结构相连,当寄生虫进入宿主细胞时,EtCDPK 就停留在寄生虫进入宿主细胞膜的部位,提示Et CDPK在Et 入侵宿主细胞时起着关键性的作用.本研究应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(*** GS,Et GS)孢子化卵囊的子孢子中提取总RNA 扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原CDPK 基因。将Et GS CDPK 基因与原核表达载体pGEX-6P1连接,构建了的pGEx-CDPK 原核表达质粒,并获得高效表达,表达率达35.4%.利用GST 抗体,对表达的蛋白经Western Blotting 分析表明,表达的蛋白为目的蛋白。表达的融合蛋白经GST 柱纯化获得纯化的CDPK 融合蛋白。序列分析表明:Et GS CDPK 与文献报道的Et CDPK 比较,共有5个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为99.6%,有5个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为98%.将纯化的CDPK 融合蛋白免疫鸡,7日龄首免,14日龄时二免,免疫方法为胸肌多点注射,免疫剂量为100μg/只/次,21日龄时经口攻击感染*** 甘肃株孢子化卵囊,剂量为3万个/只;每日观察并记录鸡只精神状态、死亡情况,28日龄对所有鸡只进行剖杀,称重、进行盲肠病变记分、分离盲肠中的球虫卵囊、计数各组的OPG。试验结果表明,CDPK 免疫组与红对照组相比,卵囊产量下降75%,病变记分下降43%,提高相对增重率(CDPK 免疫组为95%,红对照组为81%),从综合保护效果抗球虫指数ACI 来看,ACI 值为157,试验结果说明CDPK 融合蛋白对鸡球虫感染有一定的免疫保护作用,可作为鸡球虫基因工程苗的候选基因.

关键词：鸡球虫 CDPK 克隆表达免疫保护

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GC02鸡球虫疫苗免疫效果的观察

GC02鸡球虫疫苗免疫效果的观察

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：顾有方蔡汉乔陈会良鲍广刚刘德义安徽技术师范学院安徽技术师范学院安徽技术师范学院安徽技术师范学院安徽技术师范学院

试验研究了GC02鸡球虫疫苗免疫预防鸡球虫病的效果.试验一选择100只肉杂鸡,饲养至21日龄时,随机分为A、B、C、D 四组,其中A 组免疫肉鸡球虫疫苗,B 组免疫GC02鸡球虫疫苗,C 组为不免疫攻虫组,D 组为不免疫不攻虫组,A、B 组于21日龄口服... 详细信息

试验研究了GC02鸡球虫疫苗免疫预防鸡球虫病的效果.试验一选择100只肉杂鸡,饲养至21日龄时,随机分为A、B、C、D 四组,其中A 组免疫肉鸡球虫疫苗,B 组免疫GC02鸡球虫疫苗,C 组为不免疫攻虫组,D 组为不免疫不攻虫组,A、B 组于21日龄口服免疫球虫苗,A、B、C 三组于28日龄时口服接种1 x 10～5个孢子化卵囊攻虫,于36日龄捕杀A、B、C、D 组全部鸡只,以比较肉鸡球虫疫苗与GC02鸡球虫疫苗的预防效果.结果表明两种球虫疫苗均能有效的抗雏鸡艾美耳球虫感染,且是安全有效的.试验二选择100只肉杂鸡,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ五组.研究了GC02鸡球虫疫苗不同免疫次数的保护作用,Ⅰ组于14日龄免疫GC02鸡球虫疫苗(4000个卵囊),Ⅱ组分别于7日龄(4000个卵囊)、21日龄(8000个卵囊)免疫GC02鸡球虫疫苗,Ⅲ组分别于7日龄(4000个卵囊)、14日龄(8000个卵囊)、21日龄(12000个卵囊)免疫GC02鸡球虫疫苗,Ⅳ组为不免疫攻虫组,Ⅴ组为不免疫不攻虫组,于28日龄时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组均口服接种1×10～5个孢子化卵囊攻虫,36日龄捕杀全部鸡只,观察GC02鸡球虫疫苗不同免疫次数的免疫效果。结果表明:2次免疫的效果优于1次免疫和3次免疫,2次免疫能有效的控制球虫病的发生,对雏鸡有明显的促生长作用.

关键词：鸡鸡球虫病球虫疫苗免疫效果免疫次数

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Elmerla necatrix:Selection and characteristics of a“postcocious”line

Elmerla necatrix:Selection and characteristics of a“postcoc...

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者： DONG Hui SUO XunWANG Ming TENG Ke-dao(a.Shanghai Institute of Domestic Animal Parasitology,CAAS,Shanghai 200232,China b.Parasitology Laboratory,College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100094,China)

A“postcocious”line of *** was selected by repeated passages of oocysts that werelately collected from faeces of previously infected *** with the parent strain,the“postcocious”line had the following characteristics:the peak production of oocysts was two days later;the dimension of eleven endogenous development stages was larger,the reproductive capacity and theimmunogenicity was higher.

关键词： Coccidia Eimeria necatrix Selection Characteristics Postcocious line

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鸡球虫3-1E和CDPK核酸疫苗的研制及其免疫保护效果

鸡球虫3-1E和CDPK核酸疫苗的研制及其免疫保护效果

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：周建民汪明中国农业大学动物医学院中国农业大学动物医学院

应用本实验室克隆的鸡IFN-γ基因、鸡柔嫩艾美耳球虫甘肃株3-1E 和CDPK 基因,单独或串连于真核表达质粒pcDNA3.1/Zeo(+),成功构建了单价、双价和三价的真核重组质粒:pcI、pcC、pcE、pcCE、pcCI、pcEI、pcCEI 等7种。通过脂质体转染试剂... 详细信息

应用本实验室克隆的鸡IFN-γ基因、鸡柔嫩艾美耳球虫甘肃株3-1E 和CDPK 基因,单独或串连于真核表达质粒pcDNA3.1/Zeo(+),成功构建了单价、双价和三价的真核重组质粒:pcI、pcC、pcE、pcCE、pcCI、pcEI、pcCEI 等7种。通过脂质体转染试剂盒将pcE 和pcC 真棱重组质粒转染入BHK 细胞,收集对数生长期的细胞,提取细胞的总RNA,反转录之后使用特异性引物进行PCR 扩增,检测质粒在细胞中的转录情况,琼脂糖电泳检测到各自的特异性条带,说明pcE 和pcC 真核重组质粒可在真核细胞中诱导表达蛋白。采用MTT 法对构建的真核表达质粒进行了淋巴细胞转化试验,研究表明,在一免后7天,各免疫组淋转水平均有不同程度的提高,在二免后7天和感染后7天,各免疫组淋转水平有显著性提高,说明随着免疫时间的延长及加强免疫后,各免疫组具有较强的诱导鸡的细胞免疫反应的能力。通过对pcE 和pcC 免疫组肌肉组织基因组DNA 的提取、总RNA 的提取,反转录、PCR 鉴定结果表明,核酸疫苗至少可在体内存在并持续表达1个月。对所构建的真核表达质粒进行了球虫感染鸡的免疫保护研究,在每次核酸疫苗免疫鸡只前对注射部位进行25%蔗糖的预处理,间隔一周两次免疫,二免后7天攻击3×10～4个Et GS 卵囊,7天后杀鸡观察免疫组的保护效果。结果表明,免疫组与感染对照组相比,均可降低卵囊产量(54.76～80.95%)、降低病变值(35～57.5%)、提高相对增重率(83.41～103.06%),综合抗球虫指数(ACI)达到或接近中等(142.41～171.09)的抗球虫效果。

关键词：核酸疫苗球虫基因克隆免疫保护

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