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主题

19 篇 柔嫩艾美耳球虫
14 篇 elisa
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12 篇 dna
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机构

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22 篇 四川农业大学
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5 篇 中国农业科学院上...
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作者

21 篇 杨光友
21 篇 王淑贤
20 篇 古小彬
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17 篇 张龙现
15 篇 殷宏
15 篇 张守发
15 篇 谢跃
14 篇 关贵全
14 篇 罗建勋
14 篇 贾立军
13 篇 齐萌
13 篇 付彦
12 篇 宁长申
11 篇 菅复春
11 篇 吕敏娜
11 篇 吴彩艳
11 篇 戚南山
11 篇 孙铭飞
11 篇 廖申权

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长角血蜱MLP基因的克隆、表达及反应原性分析

长角血蜱MLP基因的克隆、表达及反应原性分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：沈辉柴慧萍刘光远田占成谢俊仁罗金中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室

目的对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选得到部分MLP基因序列,同源性比对发现该基因与肩突硬蜱MLP基因的核苷酸序列相似性达87.9%,相关研究文献表明MLP能够参与细胞骨架形成、细胞分化、基因表达调控及信号转导等一系列... 详细信息

目的对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库进行免疫学筛选得到部分MLP基因序列,同源性比对发现该基因与肩突硬蜱MLP基因的核苷酸序列相似性达87.9%,相关研究文献表明MLP能够参与细胞骨架形成、细胞分化、基因表达调控及信号转导等一系列广泛的生物学功能。本实验以长角血蜱MLP重组亚单位疫苗对兔体进行免疫,观察了该重组蛋白免疫兔体后的抗蜱免疫保护效应,为研制长角血蜱的分子疫苗奠定基础。方法利用5'RACE技术克隆该基因的5'端未知序列,从而获得该基因完整的开放阅读框。将MLP编码区亚克隆后连接到pGEX4T-1原核表达载体中进行表达,表达重组蛋白经MagneGSTTM纯化系统纯化后作为抗原,用兔抗长角血蜱卵及成蜱多克隆抗体作为一抗进行免疫印迹分析,以确定其反应原性。结果MLP的开放阅读框长为321bp,编码106个氨基酸残基,经原核表达后获得与预测蛋白大小一致的目的蛋白,GST融合重组蛋白预期分子量为37KDa。Western-blot显示兔抗长角血蜱卵及成蜱血清能够识别该重组表达蛋白,之后采用亚单位疫苗免疫兔体的方式观察该重组蛋白免疫兔体后的抗蜱免疫保护效应。结论MLP可产生很好的免疫反应,可作为抗蜱疫苗的候选抗原。

关键词：长角血蜱重组蛋白免疫保护效应反应原性分析 MLP

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柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶的克隆与原核表达

柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶的克隆与原核表达

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：孟祥龙廖申权戚南山吴彩艳吕敏娜李国清孙铭飞广东省农业科学院兽医研究所华南农业大学兽医学院

鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)的一种或几种原虫寄生于鸡肠道黏膜细胞所引起的疾病,可造成巨大经济损失。鸡球虫病的控制手段主要依靠抗球虫药的使用,但抗药性问题的日益严重限制了现有抗球虫药物的广泛应用,迫使人们寻找新的药物靶标... 详细信息

鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)的一种或几种原虫寄生于鸡肠道黏膜细胞所引起的疾病,可造成巨大经济损失。鸡球虫病的控制手段主要依靠抗球虫药的使用,但抗药性问题的日益严重限制了现有抗球虫药物的广泛应用,迫使人们寻找新的药物靶标。糖酵解途径是鸡球虫体内代谢的重要途径,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)为糖酵解的末端酶,在机体能量供应中发挥重要的作用,是厌氧时丙酮酸代谢的唯一酶。研究发现项复门原虫的裂殖子阶段、子孢子阶段,LDH为能量转化的关键酶,直接调控着整个原虫的发育情况,也是原虫在宿主体内发育的重要阶段和致病阶段。LDH是研发新的抗球虫药物的潜在靶标。本研究通过生物信息学方法,注释了柔嫩艾美尔球虫(***)乳酸脱氢酶(LDH)的基因序列,运用分子生物学技术成功克隆了EtLDH的ORF序列(966 bp)。构建了EtLDH-pET-32a(+)及EtLDH-pcold I重组质粒,并进行诱导表达,经SDS-PAGE检测,获得重组表达蛋白(53 kDa)。本研究结果将为新的抗球虫药物靶标研究打下基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫抗球虫药物鸡球虫病原核表达乳酸脱氢酶

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上海原水中隐孢子虫和贾第虫污染源追踪及对人致病性研究

上海原水中隐孢子虫和贾第虫污染源追踪及对人致病性研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：冯耀宇赵旭坤陈家旭周晓农李娜王琳 Lihua Xiao 华东理工大学资源与环境工程学院中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 Centers for Disease Control and Prevention AtlantaGA 30333USA

目前所有对污染水的隐孢子虫来源及其对人致病性的基因分型研究只在发达国家开展过。本研究中,我们从上海收集了50个原水水样,并采用美国环境保护总署的1623标准方法进行研究。为了找到一种经济有效的方法取代1623方法中的过滤步骤,我... 详细信息

目前所有对污染水的隐孢子虫来源及其对人致病性的基因分型研究只在发达国家开展过。本研究中,我们从上海收集了50个原水水样,并采用美国环境保护总署的1623标准方法进行研究。为了找到一种经济有效的方法取代1623方法中的过滤步骤,我们同时采用了碳酸钙絮凝的方法(CCF)对水样进行浓缩。采用1623方法,发现50个原水样品的32%的样品为隐孢子虫阳性,18%的样品为贾第虫阳性;而采用CCF进行浓缩,发现22%的样品为隐孢子虫阳性,10%的样品为贾第虫阳性。将CCF浓缩和PCR检测结合,发现隐孢子虫的检出率(28%)和采用1623方法结果相近。对所有水样进行基因分型发现17个样品为隐孢子虫阳性,其中安氏隐孢子虫阳性样品为14个,猪隐孢子虫7个,贝氏隐孢子虫2个,火鸡隐孢子虫1个和人隐孢子虫1个。因此,家畜,尤其是牛和猪是上海原水中的主要污染源,并且在该区域原水中的大部分卵囊都不能感染人。用CCF方法进行浓缩并结合PCR进行基因分型可用于对水中隐孢子虫污染检测,并且该方法具有比常规过滤-显微镜镜检方法成本低的优势。

关键词：隐孢子虫基因分型总大肠菌群大肠埃希氏菌阳性率阳性样品污染源

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抗急性弓形虫病药物疗效的研究

抗急性弓形虫病药物疗效的研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：曾艳波朱顺海韩红玉董辉姜连连赵其平马卫娇程军黄兵中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室

为了筛选治疗动物弓形虫病的有效药物,本研究选择了9种药物进行抗急性弓形虫疗效初步评价。在此基础上深入评价了已选最佳药物磺胺氯吡嗪的抗弓形虫效果,比较了不同剂量磺胺氯吡嗪和各剂量组分别与乙胺嘧啶复配后的抗弓形虫疗效。用刚... 详细信息

为了筛选治疗动物弓形虫病的有效药物,本研究选择了9种药物进行抗急性弓形虫疗效初步评价。在此基础上深入评价了已选最佳药物磺胺氯吡嗪的抗弓形虫效果,比较了不同剂量磺胺氯吡嗪和各剂量组分别与乙胺嘧啶复配后的抗弓形虫疗效。用刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株速殖子,按5 000个/只腹腔接种小鼠,接种24 h后,通过灌服方式给药,连续治疗5 d,接种后观察到40d后结束实验,评价平均存活时间、半数死亡时间和存活率等各项指标得出疗效。结果在多种药物比较实验中,三字球虫粉(SPZ 250 mg/kg)组的平均存活时间、半数死亡时间、存活率明显高于感染不用药组和其他药物治疗组(P<0.05),表现出良好抗虫效果。另外,不同剂量及复配结果显示:磺胺氯吡嗪(250mg/kg)组和磺胺氯吡嗪(350mg/kg)+乙胺嘧啶(15mg/kg)组,分别保护了58.33%和54.55%的小鼠免于发病死亡,并大大推迟了半数死亡时间,与其他各剂量组、复配组及感染不用药对照组呈现显著性差异(P<0.05),且磺胺氯吡嗪按250 mg/kg的灌服效果最好。本研究筛选出了对小鼠感染弓形虫有明显治疗效果的抗动物弓形虫药物磺胺氯吡嗪以及最佳治疗剂量,为深入评价该药用于治疗动物弓形虫病奠定了基础。

关键词：急性弓形虫病死亡时间

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蜱虫携带(感染)弓形虫的调查研究

蜱虫携带(感染)弓形虫的调查研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：周勇志曹杰张厚双周金林中国农业科学院上海兽医研究所

弓形虫宿主谱广,包括哺乳动物、鸟类、冷血动物等,国外偶有节肢动物感染弓形虫的报道,但缺乏实验验证。蜱,俗称蜱虫,是一种吸血性节肢动物,它们侵袭人、哺乳动物、鸟类、爬行类,甚至两栖类,广泛分布于世界各地。蜱的危害不仅是作为动物... 详细信息

弓形虫宿主谱广,包括哺乳动物、鸟类、冷血动物等,国外偶有节肢动物感染弓形虫的报道,但缺乏实验验证。蜱,俗称蜱虫,是一种吸血性节肢动物,它们侵袭人、哺乳动物、鸟类、爬行类,甚至两栖类,广泛分布于世界各地。蜱的危害不仅是作为动物常见的外寄生虫,更重要的是作为许多人和动物重要疾病的传播媒介。为了深入研究弓形虫感染的流行病学特征,探讨重要媒介节肢动物硬蜱在弓形虫流行病学上的意义,本研究对野外采集的硬蜱样本,进行了弓形虫529bp基因的PCR检测和序列分析,发现硬蜱体内可以检测到弓形虫的特有基因片段,阳性率在12%左右。表明自然条件下,硬蜱体内存在感染或者携带弓形虫的事实。为了进一步研究硬蜱携带或感染弓形虫的情况,我们在实验条件下,以长角血蜱和亚洲璃眼蜱为对象,通过显微注射方法,让蜱感染带绿色荧光标记的弓形虫,结果发现,感染后3天、5天、7天、10天、15天、20天、30天等不同时间段内均可检测到弓形虫基因。感染30天后仍然可在蜱体内组织内观察到带绿色荧光的弓形虫,研磨后的蜱组织接种小鼠可使小鼠感染弓形虫死亡,并在小鼠腹腔含有大量绿色荧光弓形虫,显示弓形虫可在蜱体内长时间存活,并保持感染性。上述结果表明,蜱虫作为广泛分布的媒介节肢动物,在弓形虫流行病学上具有重要意义,应在弓形虫综合防治研究上引起高度重视。

关键词：弓形虫流行病绿色荧光

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巨型艾美耳球虫南通株与上海株间的交叉保护力试验

巨型艾美耳球虫南通株与上海株间的交叉保护力试验

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：孙文瑶姜慧婕张艳许金俊陶建平扬州大学兽医学院

本课题组在2003年从江苏、上海、安徽、山东、广东、福建等地田间及美国产球虫病疫苗中分离和建立了十一株巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima),在对这十一株的免疫原性以及各虫株间的交叉保护力研究时,发现***上海株(SH)与南通株(NT)的抗... 详细信息

本课题组在2003年从江苏、上海、安徽、山东、广东、福建等地田间及美国产球虫病疫苗中分离和建立了十一株巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima),在对这十一株的免疫原性以及各虫株间的交叉保护力研究时,发现***上海株(SH)与南通株(NT)的抗原谱不同,其中SH株的抗原谱窄,对其他株缺乏交叉保护力或交叉保护力弱,而NT株抗原谱广,对其他株(包括SH株)均有交叉免疫保护力。本试验的目点是分别以平均增重与病变记分减少率和卵囊减少率等为指标,通过*** NT株与SH株间的交叉保护力试验,观察这2株***在实验室保存6年、经鸡体传代近10代后,其免疫原性特征是否发生变化,为研究*** NT株与SH株间差异表达基因奠定基础。用*** NT株和*** SH株每鸡免疫接种2 500个、2周后每鸡攻击10×10～4个孢子化卵囊时,同源株攻击试验组鸡的平均增重与对照组相近(P>0.05),病变记分减少率分别为79.55%与88.46%;*** NT株免疫、*** SH株攻击时,试验鸡的平均增重与对照组相近(P>0.05),病变记分减少率为71.15%;*** SH株免疫、*** NT株攻击时,试验鸡的平均增重与对照组间有显著差异(P<0.05),病变记分减少率仅为36.36%。用*** NT株和SH株免疫接种100个、攻击100个孢子化卵囊时,同源株攻击后的卵囊减少率分别为100%与97.56%;*** NT株免疫、*** SH株攻击时的卵囊减少率为80.98%;*** SH株免疫、***株攻击时的卵囊减少率为41.20%。结果显示:2株球虫对同源株攻击均能产生有效的保护力,*** NT株对*** SH株有交叉保护力,*** SH株对*** NT株无交叉保护力;这2株***的免疫原性特征没有随虫株在实验室的传代和保存而发生改变。

关键词：巨型艾美耳球虫孢子化卵囊减少率交叉保护

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柔嫩艾美耳球虫癸氧喹酯耐药株的实验室诱导

柔嫩艾美耳球虫癸氧喹酯耐药株的实验室诱导

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：潘虹林瑞庆舒丽程田刘国昌翁亚彪华南农业大学兽医学院

目前抗球虫药的应用仍是控制鸡球虫病的主要手段,但由于长期及不合理地使用抗球虫药物,几乎所有使用过的抗球虫药都有耐药虫株的出现,而且球虫对新药产生耐药性的时间缩短,耐药性问题日趋严重,因此,鸡球虫的耐药性是当前养禽业所面临的... 详细信息

目前抗球虫药的应用仍是控制鸡球虫病的主要手段,但由于长期及不合理地使用抗球虫药物,几乎所有使用过的抗球虫药都有耐药虫株的出现,而且球虫对新药产生耐药性的时间缩短,耐药性问题日趋严重,因此,鸡球虫的耐药性是当前养禽业所面临的一个迫切需要解决的理论和实践研究的难题。癸氧喹酯(Decoquinate)是20世纪60年代由英国May-Baker公司研制首先合成,其广谱抗球虫活性,使之成为预防和治疗鸡球虫病效果较好的一种喹啉类药物,可用于防治鸡的柔嫩、毒害、堆型、巨型和布氏艾美耳球虫等引起的球虫病。癸氧喹酯在国内的推广应用时间不长,临床应用显示对各种球虫具有较好的疗效,但其耐药性问题国外已有报道,Williams(2006)首次在英国对艾美耳属7个种对癸氧喹酯耐药性田间试验进行了追踪,试验结果表明,虽然临床球虫病不明显,但这几个种都对喹氧喹酯有不同程度的耐药性,因此球虫对癸氧喹酯的耐药性问题应引起重视。此外,Lee等报道球虫对癸氧喹酯容易产生耐药性,因此本研究选择癸氧喹酯在实验室进行柔嫩艾美耳球虫(Eimeriatenella)耐药株的诱导试验,采用药物浓度递增法,以90mg/kg癸氧喹酯为起始诱导浓度连续传代,以病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫指数(POAA)和抗球虫指数(ACI)3项指标综合判定耐药性,经9次传代,成功地诱导出对900mg/kg癸氧喹酯具有完全抵抗力的耐药虫株,为进一步研究球虫耐药的分子机理提供材料。

关键词：癸氧喹酯耐药性球虫病柔嫩艾美耳球虫耐药株

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堆型艾美耳球虫cSZ1基因在卡介苗中的表达及免疫保护效果研究

堆型艾美耳球虫cSZ1基因在卡介苗中的表达及免疫保护效果研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：苑淑贤姚新华任科研张西臣曹利利李建华吉林省畜牧兽医科学研究院吉林大学

目的构建堆型艾美耳球虫长春地方株pMV361-cSZ1重组质粒并在BCG诱导表达rBCG,及检测免疫保护效果。方法提取型艾美耳球虫长春地方株RNA,在Genbank(序列号:AY513879)中查找堆型艾美耳球虫cSZ1基因,设计引物,P1:5'-GCG CAG CTG ATG GG... 详细信息

目的构建堆型艾美耳球虫长春地方株pMV361-cSZ1重组质粒并在BCG诱导表达rBCG,及检测免疫保护效果。方法提取型艾美耳球虫长春地方株RNA,在Genbank(序列号:AY513879)中查找堆型艾美耳球虫cSZ1基因,设计引物,P1:5'-GCG CAG CTG ATG GGT GAA GAG GCT GATACT CA-3',P2:5'-GCG ATC GAT TTA GAA GCC GCC CTG GTA CAG-3'。根据克隆的需要,在每个引物分别引入了相应的限制性内切酶识别序列及保护性碱基,设计了PvuⅡ和ClaⅠ酶切位点。建立RT-PCR反应体系,扩增出cSZ1基因,将cSZ1基因片段克隆到PMD18-T-载体中,经PCR和酶切及其测序鉴定后,将cSZ1基因和pMV361载体用内切酶PvuⅡ和ClaⅠ,经T4DNA连接,转化到DH5a。将阳性重组质粒pMV361-cSZ1,电转化到BCG中,经热诱导高效表达,rBCG(pMV361-cSZ1)经SDS-PAGE和Western-blot进行鉴定。然后用rBCG(pMV361-eSZ1)经滴鼻、口服和颈部皮下接种7日龄雏鸡,通过对比试验,对抗球虫指数、体液免疫水平和细胞免疫水平检测,结果试验表明,构建的堆型艾美尔球虫rBCG(pMV361-cSZ1)疫苗,通过滴鼻方式接种雏鸡,免疫保护最佳,为研究高效球虫重组卡介苗疫苗提供了理论依据和试验数据。

关键词：堆型艾美耳球虫免疫保护效果卡介苗

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柔嫩艾美尔球虫热休克蛋白70增强微线蛋白2抗球虫感染保护作用的研究

柔嫩艾美尔球虫热休克蛋白70增强微线蛋白2抗球虫感染保护作用的...

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：张蕾马立平刘任强张云飞张守平胡春梅宋猛汪明中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室

(目的)本研究的目的是研究柔嫩艾美尔球虫热休克蛋白70(EtHSP70)对球虫亚单位疫苗微线蛋白2(EtMIC2)的免疫增强作用。(方法)首先克隆并表达了EtHSP70和EtMIC2重组蛋白;本研究分为体外和体内实验两个部分。体外实验:用重组EtHSP70、重组E... 详细信息

(目的)本研究的目的是研究柔嫩艾美尔球虫热休克蛋白70(EtHSP70)对球虫亚单位疫苗微线蛋白2(EtMIC2)的免疫增强作用。(方法)首先克隆并表达了EtHSP70和EtMIC2重组蛋白;本研究分为体外和体内实验两个部分。体外实验:用重组EtHSP70、重组EtMIC2、EtHSP70联合EtMIC2刺激鸡胚成纤维细胞(CEF),然后用荧光定量PCR方法检测TLR2、TLR4及先天性免疫相关细胞因子的表达水平;体内实验:75只AA肉鸡分成5组,分别给予EtHSP70、EtMIC2、EtHSP70联合EtMIC2,设红白对照。免疫两次后攻虫,剂量为30,000个孢子化球虫卵囊/只鸡。然后记录各组增重,感染后第7天进行盲肠病变记分,收集感染后第10天的血清,并且在感染后3、6、10天杀鸡分离盲肠上皮间淋巴细胞,用荧光定量PCR的方法检测不同时间各组IL-12和IFN-γ的表达差异。(结果)体外结果显示EtHSP70能够显著刺激CEF上调表达TLR2、TLR4和IL-12,且能够显著提升EtMIC2刺激先天性免疫的能力。体内实验结果显示EtMIC2联合EtHSP70能够显著提高增重,降低粪便卵囊数,提升血清中抗球虫抗体水平,而且能产生高水平的IL-12和IFN-γ。(结论)本研究证明了EtHSP70具有提升球虫亚单位疫苗EtMIC2保护性的作用,可能成为亚单位疫苗的候选免疫增强剂。

关键词：柔嫩艾美尔球虫抗球虫微线蛋白热休克蛋白

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石家庄地区鸡柔嫩艾美耳球虫对5种药物的耐药性研究

石家庄地区鸡柔嫩艾美耳球虫对5种药物的耐药性研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：孟令慧刘义伟蒋禄峰秦建华赵月兰包永占河北农业大学动物科技学院河北农业大学中兽医学院

为研究石家庄地区柔嫩艾美耳球虫(***)对氯羟吡啶、莫能菌素、地克珠利、托曲珠利和磺胺氯吡嗪钠的耐药性,本试验选择70只14日龄雏鸡,随机分成7组,每组10只,设5个感染用药组、1个感染不用药组和1个不感染不用药组,感染组每只鸡口服5... 详细信息

为研究石家庄地区柔嫩艾美耳球虫(***)对氯羟吡啶、莫能菌素、地克珠利、托曲珠利和磺胺氯吡嗪钠的耐药性,本试验选择70只14日龄雏鸡,随机分成7组,每组10只,设5个感染用药组、1个感染不用药组和1个不感染不用药组,感染组每只鸡口服5×104个孢子化球虫卵囊,于感染后第八天将各组鸡只剖杀。以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对盲肠卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)4项指标综合判定,并对试验期间的鸡群逐只称重。结果显示,莫能菌素用药组ROP32.73%,PLS3.70%,POAA35.90%,ACI113.88,呈完全耐药;氯羟吡啶用药组ROP24.15%,PLS37.04%,POAA.56.41%,ACI157.52,呈重度耐药;托曲珠利用药组ROP64.11%,PLS33.33%,POAA74.36%,ACI151.95,呈重度耐药;磺胺氯吡嗪钠用药组ROP14.39%,PLS0%,POAA105.13%,ACI140.41,呈中度耐药;地克珠利用药组ROP10.54%,PLS62.96%,POAA73.36%,ACI172.95,呈无耐药性。地克珠利用药组比其它用药组增重差异显著(P<0.05),与空白对照组差异不显著(P>0.05)。提示石家庄地区应减少或暂时使用莫能菌素。氯羟吡啶和托曲珠利,可以联合使用磺胺氯吡嗪钠和地克珠利,来预防和控制柔嫩球虫的爆发。

关键词：鸡柔嫩艾美耳球虫 ROP 地克珠利 PLS 磺胺氯吡嗪钠耐药性石家庄地区

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