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384 篇 会议

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主题

19 篇 柔嫩艾美耳球虫
14 篇 elisa
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12 篇 dna
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9 篇 弓形虫
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机构

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28 篇 华南农业大学
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22 篇 四川农业大学
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6 篇 农业部动物临床诊...
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作者

21 篇 杨光友
21 篇 王淑贤
20 篇 古小彬
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15 篇 殷宏
15 篇 张守发
15 篇 谢跃
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14 篇 罗建勋
14 篇 贾立军
13 篇 齐萌
13 篇 付彦
12 篇 宁长申
11 篇 菅复春
11 篇 吕敏娜
11 篇 朱兴全
11 篇 吴彩艳
11 篇 戚南山
11 篇 孙铭飞

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捻转血矛线虫H11基因胞外区段在毕赤酵母中的表达

捻转血矛线虫H11基因胞外区段在毕赤酵母中的表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：李镝锐汪明中国农业大学动物医学院国家动物原虫实验室

H11是捻转血矛线虫肠黏膜上一种跨膜糖蛋白,其生化提取物具有良好的免疫保护作用,保护率达90%以上,免疫持续期可达23周。但是天然H11含量低,分离纯化过程复杂,难以用于疫苗生产。H11基因在大肠杆菌中及昆虫细胞表达产物的免疫保护力远... 详细信息

H11是捻转血矛线虫肠黏膜上一种跨膜糖蛋白,其生化提取物具有良好的免疫保护作用,保护率达90%以上,免疫持续期可达23周。但是天然H11含量低,分离纯化过程复杂,难以用于疫苗生产。H11基因在大肠杆菌中及昆虫细胞表达产物的免疫保护力远不及天然抗原。原因也许是在大肠杆菌及昆虫细胞系统中寄生虫抗原没有被正确地糖基化修饰。巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)具有对外源蛋白质的糖基化修饰作用,是表达糖蛋白的良好宿主。(目的)为了验证毕赤酵母是否可以正确地糖基化修饰H11基因,酵母表达产物能否获得高保护力,(方法)我们将包含捻转血矛线虫H11基因抗原表位的胞外区(415-2919bp)亚克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA后,通过大提质粒pPicZaA/H11获得高浓度(5mg/m1)质粒,把pPicZaA/H11及空质粒对照pPicZaA质粒10u1分别用2kv电击方法转化到最新制备的巴斯德毕赤酵母菌株GS115感受态细胞(90u1)中,电击后迅速加入冷的山梨醇。之后通过在含1000ng/ml浓度的Zeocine抗生素的YPD平板筛选出重组子单克隆,重组酵母经细胞裂解液破壁、提取基因组DNA进行PCR分析,用诱导剂甲醇诱导后经RT-PCR及利用抗组氨酸标签抗体进行Western blot分析重组菌体,并在诱导后每隔24小时收集菌液直到120小时,通过SDS-PAGE比较蛋白表达量。(结果)通过基因组PCR及RT-PCR检测重组体基因组及mRNA均含有H11胞外区片段,通过Western blot分析重组蛋白大小约100Kd,表明捻转血矛线虫H11胞外区在巴斯德毕赤酵母中实现了表达,并且验证在96h达到最大表达量。(结论)本实验利用巴斯德毕赤酵母成功表达了捻转血矛线虫H11基因胞外区835个氨基酸,为研究H11在酵母表达系统中表达产物的免疫保护力及H11糖基化修饰对免疫保护力的影响奠定了基础。

关键词：捻转血矛线虫糖基化修饰 H11 巴斯德毕赤酵母胞外区

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左咪唑、噻嘧啶、芬苯达唑、伊维菌素和多拉菌素对西氏贝蛔虫幼虫杀灭效果观察

左咪唑、噻嘧啶、芬苯达唑、伊维菌素和多拉菌素对西氏贝蛔虫幼虫...

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：梁艺男李德生王承东谢跃王淑贤杨光友四川农业大学动物医学院中国保护大熊猫研究中心

西氏贝蛔虫(Baylisascaris schroederi)是大熊猫体内最常见的寄生虫,对野生及圈养大熊猫危害很大,采用药物驱虫是目前控制圈养大熊猫蛔虫病的主要措施。本实验采用西氏贝蛔虫卵感染小白鼠,以小白鼠为模型,观察了左咪唑、噻嘧啶、芬苯达... 详细信息

西氏贝蛔虫(Baylisascaris schroederi)是大熊猫体内最常见的寄生虫,对野生及圈养大熊猫危害很大,采用药物驱虫是目前控制圈养大熊猫蛔虫病的主要措施。本实验采用西氏贝蛔虫卵感染小白鼠,以小白鼠为模型,观察了左咪唑、噻嘧啶、芬苯达唑、伊维菌素和多拉菌素对西氏贝蛔虫幼虫的杀灭效果,为大熊猫临床用药的选择提供参考。实验共分1 2组,每组10只小白鼠,用实验室内人工培养的西氏贝蛔虫感染性虫卵通过灌胃的方法感染小白鼠,每只小白鼠感染1000个虫卵。在感染虫卵后第3天和第15天分别采用左咪唑(Levomisole)、噻嘧啶(Pyrantel)、芬苯达唑(Fenbendazole)、伊维菌素(Ivermectin)和多拉菌素(Doramectin)进行驱虫,给药后通过剖检小白鼠,统计其内脏、脑、肌肉中的幼虫回收数量,计算各给药组小鼠体内的幼虫减虫率。供试5种药物对西氏贝蛔虫幼虫的杀灭效果为:左咪唑(10mg/kg体重,注射):感染虫卵后第3天给药西氏贝蛔虫幼虫的减虫率为78.14%,感染第15天给药幼虫减虫率为64.40%。芬苯达唑(10mg/kg体重,喂服):感染虫卵后第3天给药西氏贝蛔虫幼虫的减虫率为96.71%,感染第15天给药幼虫减虫率为86.65%。噻嘧啶乳剂(10mg/kg体重,喂服):感染虫卵后第3天给药西氏贝蛔虫幼虫的减虫率为84.43%,感染第15天给药幼虫减虫率为75.65%。伊维菌素(0.2mg/Kg,注射):感染虫卵后第3天给药西氏贝蛔虫幼虫的减虫率为95.81%%,感染第15天给药幼虫减虫率为87.70%。多拉菌素(0.3mg/kg体重,注射):感染虫卵后第3天给药西氏贝蛔虫幼虫的减虫率为91.02%,感染第15天给药幼虫减虫率为82.46%%。实验结果表明在供试的5种药物中,以芬苯达唑、伊维菌素和多拉菌素对西氏贝蛔虫幼虫的杀灭效果较好。

关键词：减虫率噻嘧啶伊维菌素左咪唑多拉菌素杀灭效果

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犬隐孢子虫病流行病学调查及其分子遗传特征分析

犬隐孢子虫病流行病学调查及其分子遗传特征分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：齐萌董和平胡霖王荣军菅复春宁长申张龙现河南农业大学牧医工程学院

为了解犬隐孢子虫流行情况、传播动态及其人兽共患风险评估,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南省郑州地区宠物犬和四川成都、简阳和雅安地区犬进行调查。于2006年6月至2009年5月在郑州地区共采集犬新鲜粪便样本770份,29份镜检呈阳性,总感染... 详细信息

为了解犬隐孢子虫流行情况、传播动态及其人兽共患风险评估,采用饱和蔗糖溶液漂浮法对河南省郑州地区宠物犬和四川成都、简阳和雅安地区犬进行调查。于2006年6月至2009年5月在郑州地区共采集犬新鲜粪便样本770份,29份镜检呈阳性,总感染率为3.8%,其中宠物医院犬、宠物犬场犬和宠物市场感染率分别为1.0%、7.0%和4.5%(p<0.01);隐孢子虫感染率随犬年龄增长呈逐渐递减趋势(P<0.01);雌雄犬感染率分别为3.4%和4.2%(p>0.05)。于2009年11月至2010年7月在四川部分地区共采集犬新鲜粪便样本494份,21份镜检呈阳性,总感染率为4.3%,其中成都、简阳和雅安地区犬感染率分别为1.4%、8.0%和6.5%(p<0.01);以365d以上犬感染率最高,为6.3%,0-90d、91-180d和181-365d感染率分别为3.5%、2.5%和1.9%(p<0.01)。基于18S rRNA基因位点对50个隐孢子虫阳性样本进行PCR扩增,对其产物分别用SspⅠ酶和VspⅠ酶进行RFLP分析,结果显示均为犬隐孢子虫(Cryptosporidium canis),选取不同采样点的20份阳性样本进行测序,在NCBI核酸序列数据库搜索同源序列,利用Clustal X1.81、Phylip3.67和DNAstar5.0生物学软件对序列进行比对、同源性分析及构建分子进化树,发现20个阳性样本均为***。本研究结果表明,不同地区和年龄段犬隐孢子虫情况存在差异,感染虫种均为***,对人类健康具有潜在威胁性,为进一步开展犬隐孢子虫分子流行病学和人兽共患传播途径的研究提供了参考数据。

关键词：隐孢子虫病人兽共患流行病学调查宠物犬分子遗传特征分析

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捻转血矛线虫感染诱导宿主T淋巴细胞基因表达谱的差异分析

捻转血矛线虫感染诱导宿主T淋巴细胞基因表达谱的差异分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：杨怡周前进闫宝龙陈学秋张红丽杜爱芳浙江大学动物科学学院浙江大学动物预防医学研究所

捻转血矛线虫感染健康宿主后,宿主主要依靠T淋巴细胞对其进行免疫应答。为阐明宿主T淋巴细胞参与抵抗捻转血矛线虫感染与免疫应答的分子机制,我们通过使用基因芯片对捻转血矛线虫感染0日龄、3-5日龄(四期幼虫发育阶段)、25-30日龄(成虫... 详细信息

捻转血矛线虫感染健康宿主后,宿主主要依靠T淋巴细胞对其进行免疫应答。为阐明宿主T淋巴细胞参与抵抗捻转血矛线虫感染与免疫应答的分子机制,我们通过使用基因芯片对捻转血矛线虫感染0日龄、3-5日龄(四期幼虫发育阶段)、25-30日龄(成虫开始大量产卵的阶段)、60日龄以后(确定线虫在宿主体内已通过免疫逃避稳定寄生和繁殖)宿主T淋巴细胞的基因表达谱进行了高通量筛选和比较分析,获得了感染前后T淋巴细胞差异表达的基因,并对这些基因进行了生物信息学分析和功能筛选分类。初步研究结果发现感染前后的差异表达基因一部分与细胞代谢相关,各日龄之间比较,细胞复制分裂和物质运输分泌等相关基因都有不同程度的上调或下调,这很可能与感染后T淋巴细胞维持细胞内环境的稳定有关。另一部分基因与免疫反应相关,其中3-5日龄与0日龄、25-30日龄与0日龄、60日龄以后与0日龄、25-30日龄与3-5日龄比较,Th2免疫应答相关基因表达量上调,这可能是由感染初期虫体对宿主刺激的不断增大而导致。60日龄以后与3-5日龄、60日龄以后与25-30日龄比较,Th2免疫应答相关基因表达量有所下降,这可能是因为虫体在宿主体内稳定寄生后Th2免疫应答降低。根据芯片的初步分析结果,我们可以判断宿主在感染后T淋巴细胞表达谱的变化主要有细胞代谢和Th2免疫应答相关基因。实验后期我们将对获得的差异表达基因做表达量的曲线描绘,以进行进一步的分析和系统性的研究,希望能为阐明宿主的免疫应答规律和线虫的免疫逃避机制提供依据。

关键词：捻转血矛线虫免疫应答相关基因免疫逃避基因表达谱淋巴细胞差异分析

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肝片吸虫囊蚴感染小鼠后AAMΦ中脂肪滴及其相关蛋白的定位与分布

肝片吸虫囊蚴感染小鼠后AAMΦ中脂肪滴及其相关蛋白的定位与分布

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：罗洪林王豪举谌剑波周容琼周作勇张文韬郭智莉周雪梅西南大学动物科技学院预防兽医学重庆市重点建设实验室西南大学荣昌校区动物医学系

目的阐明肝片吸虫感染小鼠后选择性巨噬细胞(AAMΦ)中脂肪滴及其相关蛋白的定位与分布,为后续研究AAMΦ的功能奠定基础。方法以肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型(WT)及其IL4R(?)基因敲除小鼠(IL4R(?)KO)和C57BL/6小... 详细信息

目的阐明肝片吸虫感染小鼠后选择性巨噬细胞(AAMΦ)中脂肪滴及其相关蛋白的定位与分布,为后续研究AAMΦ的功能奠定基础。方法以肝片吸虫囊蚴为感染源,经口分别感染雌性BALB/c野生型(WT)及其IL4R(?)基因敲除小鼠(IL4R(?)KO)和C57BL/6小鼠后获取巨噬细胞,并设立人工巯基醋酸盐诱导巨噬细胞对照组进行体外培养。用荧光定量PCR检测AAMΦ的标记蛋白Relm(?)和Ym1以确定其激活状态。采用特异性抗体对所获取的巨噬细胞细胞质染色后用共聚焦显微镜摄取不同时间点从不同小鼠体内获取的巨噬细胞染色后的图片,并记录其荧光强度。结果Relm(?)和Ym1基因在IL4R(?)基因敲除小鼠和巯基醋酸盐诱导小鼠巨噬细胞中均表达,但在IL4R(?)基因敲除小鼠表达的量显著下降。脂肪滴分布在TeM(?)和FeM(?)的细胞质中,被染色成绿色且呈圆形。同时发现脂肪滴分布形式多样,大小不一,既有单个分布也能成蔟分布。IL4R(?)基因敲除BALB/c Te M(?)细胞中的脂肪滴阳性率比野生型BALB/c中的显著增加,但FeM(?)细胞中的脂肪滴阳性率却比野生型BALB/c中显著下降。围脂蛋白A的分布模式和荧光强度在TeM(?)和FeM(?)中无显著差异。脂肪分化相关蛋白的荧光强度在IL-4Rα基因敲除小鼠FeM(?)中有所增强,而在TeM(?)无显著差异。结论肝片吸虫囊蚴感染可诱导机体产生AAMΦ,这种AAMΦ的脂肪滴分布形式多样,其中的围脂蛋白A与脂肪滴呈非共同相连形式分布在细胞质中,而脂肪分化相关蛋白均位于脂肪滴的表面。

关键词：肝片吸虫囊蚴相关蛋白基因敲除小鼠 AAM

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鸡IL-17A在球虫感染过程中的作用

鸡IL-17A在球虫感染过程中的作用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：张蕾张云飞马立平胡春梅胡艳欣汪明中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室北京 100193

目的：本研究旨在鸡IL-17A在球虫感染过程中的作用。　　方法：首先，我们用荧光定量PCR的方法研究了感染柔嫩艾美尔球虫后盲肠上皮间淋巴细胞(IELs)中IL-17A表达相关基因的表达。为了证明鸡IL-17A在柔嫩艾美尔球虫感染过程中的作用，... 详细信息

目的：本研究旨在鸡IL-17A在球虫感染过程中的作用。
　　方法：首先，我们用荧光定量PCR的方法研究了感染柔嫩艾美尔球虫后盲肠上皮间淋巴细胞(IELs)中IL-17A表达相关基因的表达。为了证明鸡IL-17A在柔嫩艾美尔球虫感染过程中的作用，我们用本实验制备的抗鸡IL-17的多抗，重组表达的IL-17在球虫感染前1天、感染后第2、4、6天对鸡进行静脉注射，然后在感染后第7天检测各实验组平均增重、粪便卵囊数以及盲肠IELs中细胞因子的表达变化。此外本实验还运用组织病理学和免疫组化的方法研究了各实验组的炎性细胞浸润以及盲肠病变的情况。
　　结果：结果表明，柔嫩艾美尔感染能够诱导高水平的IL-17A应答相关的STAT3、IL-23R、IL-6、TGF-p和IL-17A;抗体阻断实验表明，阻断了鸡IL-17A能够显著提升感染鸡的增重，减少粪便卵囊的排除。而注射了鸡IL-17A的实验组增重显著降低，卵囊产量也有相应的增加。盲肠IELs的细胞因子的定量检测也表明注射了抗鸡IL-17A抗体组能够产生较高水平的IL-12和IFN-γ。组织病理学结果表明，抗体阻断组的炎性细胞浸润减少，盲肠中虫卵数也显著降低;免疫组化的结果从蛋白水平上证明了抗体阻断组的IL-17水平显著降低。
　　结论：结果提示，鸡IL-17A可能在球虫感染的过程中扮演着加剧病理损伤的角色，IL-17A抗体中和方法能够有效地降低球虫感染造成的损伤。

关键词：柔嫩艾美尔球虫抗体阻断感染过程基因表达制备方法

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利用巴贝斯虫临潭株裂殖子蛋白作为抗原的ELISA方法的建立

利用巴贝斯虫临潭株裂殖子蛋白作为抗原的ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：关贵全 A.CHAUVIN H.ROGNIAUX 罗建勋殷宏 E.MOREAU 家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所 Ecole Nationale Veterinaire de Nantes UMR INRA/ENVN 1300 BioEpARAtlanpoleLa ChantrerieBP 40706F-44307 Nantes Cedex 03France Ecole Nationale Veterinaire de Nantes UMR INRA/ENVN 1300 BioEpAR AtlanpoleLa ChantrerieBP 40706F-44307 Nantes Cedex 03France UR1268 Biopolyme `res Interactions Assemblages Plate-Forme BIBS INRAF-44300 NantesFrance 家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所

巴贝斯虫临潭株是一株从野外采集的青海血蜱饥饿成蜱感染的绵羊体内分离的弱致病性的小反刍动物的巴贝斯虫,根据18S rRNA基因序列,其与莫氏巴贝斯虫具有较近的亲缘关系。本研究利用业已建立的体外培养系统,自培养上清中收集游离的裂殖子... 详细信息

巴贝斯虫临潭株是一株从野外采集的青海血蜱饥饿成蜱感染的绵羊体内分离的弱致病性的小反刍动物的巴贝斯虫,根据18S rRNA基因序列,其与莫氏巴贝斯虫具有较近的亲缘关系。本研究利用业已建立的体外培养系统,自培养上清中收集游离的裂殖子,通过反复冻融和超声裂解技术,获得可溶性的裂殖子抗原。然后对该可溶性裂殖子抗原作为诊断用ELISA抗原的可行性进行分析,通过Western blot和ELISA检测,该抗原与羊的巴贝斯虫临潭株和天祝株具有较强的反应原性,而与感染我国羊的其它梨形虫(羊的巴贝斯虫河北株、宁县株与新疆株、吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫)和无形体基本没有交叉反应;应用198份已知背景的阴性血清对该ELISA的的特异性进行评价,当抗体比率界定为30%时,ELISA的特异性为95.5%。用才自5只实验感染的绵羊的血清对该ELISA进行评价,结果显示高水平的抗体在感染后1-2周产生,而且高水平的抗体可以持续8个月以上。用该ELISA检测了采自我国甘肃省甘南藏族自治州临潭、卓尼和夏河县的放牧绵羊的974份血清,结果显示,其血清阳性率分别为82.38%、66.04%和46.67%,三个县的平均血清阳性率为66.84%。最后对该可溶性裂殖子蛋白进行分析,Westem blot结果显示,该可溶性蛋白中,至少有9个不同分子量大小的抗原于巴贝斯虫临潭株和天祝株具有较强的反应,其分子量分别为171,140,92,74,48,45,35,33和32 kDa,并从中挑选出与动物感染后6-9天的血清具有较强反应性的3个抗原进行LC-MS/MS分析,鉴定出10个巴贝斯虫蛋白,并获得了这10个蛋白的部分多肽序列。

关键词：巴贝斯虫 ELISA

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Treatment and prevention of natural heartworm(Dirofilaria immitis)infections in red pandas(Ailurus fulgens)with selamectin and ivermectin

Treatment and prevention of natural heartworm(Dirofilaria im...

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者： Lan Jingchao~(a1),Fu Yan~(b1),Yang Zhi~a,Zhang Zhihe~a,Wang Chengdong~a,Luo Li~a,Liu Li~a,Gu Xiaobin~b,Wang Shuxian~b,Peng Xuerong~c,Yang Guangyou~(b*) a Chengdu Research Base of Giant Panda Breeding,Chengdu 610081,China b Department of Parasitology,College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Ya'an 625014,China c Department of Chemistry,College of Life and Basic Science,Sichuan Agricultural University,Ya'an 625014,China.

10 of 48 red pandas in the Chengdu Research Base of Gian:Panda Breeding,Sichuan province, China,died in 2006 after prolonged periods of depression,weight loss,and mucocutaneous membrane *** the postmortem examination,live heartworms were found in right ventricles and pulmonary arteries of all 10 *** and ivermectin was used for clinical prophylaxis in the red pandas from December 2006 to November 2010.A gradual decrease in morbidity and mortality was observed during this *** a consequence of the prophylaxis program,dirofilariosis did not occur in the red pandas at the Chengdu Research Base during the 2010 year.

关键词： red Ailurus fulgens)with selamectin and ivermectin Dirofilaria immitis)infections in red pandas Treatment and prevention of natural heartworm

来源：评论

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Development of the loop-mediated isothermal amplification assay for Giardia lamblia from dogs

Development of the loop-mediated isothermal amplification as...

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者： Li Jie,Wang Peiyuan,Zhang Ping,Liu Yuanjia,Guo Jianchao, Meng Xianglong,Li GuoQing~* College of Veterinary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou 510642 China

To establish a sensitive and rapid detection method for Giardia lamblia from dogs,two specific primer pairs for loop-mediated isothermal amplification(LAMP) were designed and synthesized according to the sequence of EF1αgene(AF069570) available in GenBank,then a LAMP assay for detecting Giardia lamblia was constructed and the reaction conditions of LAMP were optimized,and sensitivity and specificity tests were carried *** results showed that the products amplified by LAMP from Giardia lamblia were distinctive ladder-like bands in agarose gel electrophoresis,and the green fluoreseence in colorable reaction and that the objective bands occurred by restriction enzyme *** detecting sensitivity was 0.01ng/μL and was shown 10 times more sensitive than *** specificity test proved that the detection tube of Giardia lamblia was positive in eolorable reaction,while Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Cryptosporidium as the comparisons were all *** suggested that LAMP was a sensitive,specific and rapid method which was suitable for detection of Giardia lamblia.

关键词： Development of the loop-mediated isothermal amplification assay for Giardia lamblia from dogs

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巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建与分析

巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建...

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：刘丹丹李建梅韩宏晓王尚尚曹李琴许金俊陶建平扬州大学兽医学院

为了探索巨型艾美耳球虫上海株和南通株球虫在免疫原性上差异的分子基础,分别以上海株未孢子化卵囊cDNA为试验组,南通株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,或相反,以南通株未孢子化卵囊cDNA为试验组,上海株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,分别构建了... 详细信息

为了探索巨型艾美耳球虫上海株和南通株球虫在免疫原性上差异的分子基础,分别以上海株未孢子化卵囊cDNA为试验组,南通株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,或相反,以南通株未孢子化卵囊cDNA为试验组,上海株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,分别构建了2个抑制性消减文库。随机从两个消减文库中挑取阳性克隆,用接头引物Nest PCR primer 1和Nest PCR primer 2R进行PCR扩增,经PCR鉴定显示,上海株和南通株未孢子化卵囊消减cDNA文库的重组率分别为95%(284/300)和89%(231/261),差异基因片段大小分布在0.25 kb～1.0 kb之间。随后,用地高辛标记方法制备了4种探针,即上海株消减组cDNA探针、上海株未消减组cDNA探针和南通株消减组cDNA探针、南通株未消减组cDNA探针。分别用同源株消减组探针和异源株未消减组探针对同一克隆进行检测,筛选差异表达克隆。在被检测的515个克隆(上海株284个,南通株231个)中,共获得86个差异表达克隆,其中上海株63个,南通株23个。对差异表达克隆测序和同源性比对,共获得10个重叠群(Contigs),其中上海株6个,南通株4个。通过BLAST分析,上海株的6个contigs中5个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因;南通株的4个contigs中3个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因。最后,选取6个差异表达基因,根据其序列分别设计引物,进行RT-PCR检测,结果发现这些基因在两个虫株内均有表达;随后又从RT-PCR验证的6个差异表达基因中选取2个基因,重新设计引物进行实时定量PCR验证,结果显示这2个差异表达基因在SH株和NT株中确实存在着表达量上的差异。

关键词：孢子化卵囊巨型艾美耳球虫差异表达基因免疫原性

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