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文献类型

234 篇 会议

馆藏范围

234 篇 电子文献
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日期分布

学科分类号

220 篇 农学
- 216 篇 兽医学
- 4 篇 畜牧学
- 2 篇 作物学
- 1 篇 水产
6 篇 医学
- 3 篇 基础医学(可授医学...
- 2 篇 临床医学
- 1 篇 公共卫生与预防医...
2 篇 理学
- 2 篇 生物学
2 篇 工学
- 1 篇 仪器科学与技术
- 1 篇 农业工程
- 1 篇 食品科学与工程（可...
1 篇 文学
- 1 篇 中国语言文学
1 篇 管理学
- 1 篇 工商管理

主题

16 篇 旋毛虫
12 篇 基因克隆
11 篇 免疫保护
11 篇 艾美耳球虫
9 篇 隐孢子虫
8 篇 序列分析
7 篇 兽医学
7 篇 原核表达
7 篇 流行病学调查
6 篇 免疫筛选
6 篇 克隆
6 篇 寄生虫
6 篇 绵羊
6 篇 附红细胞体病
6 篇 基因表达
6 篇 cdna文库
6 篇 猪
6 篇 鸡球虫病
5 篇 生活史
5 篇 新生幼虫

机构

28 篇 中国农业大学
17 篇 河南农业大学
10 篇 华南农业大学
9 篇 广东省农科院兽医...
8 篇 中国农业科学院兰...
8 篇 南京农业大学
8 篇 扬州大学
8 篇 法国食品卫生安全...
7 篇 中国农业科学院兰...
7 篇 解放军军需大学
6 篇 四川省畜牧科学研...
5 篇 瑞典微生物与肿瘤...
5 篇 家畜疫病病原生物...
5 篇 广西大学
5 篇 四川农业大学
5 篇 青海省畜牧兽医科...
5 篇 nyala大学
5 篇 吉林农业大学
5 篇 浙江大学
5 篇 华中农业大学

作者

21 篇 汪明
15 篇 张龙现
13 篇 刘明远
12 篇 宁长申
12 篇 付宝权
12 篇 罗建勋
11 篇 殷宏
11 篇 蔡建平
11 篇 吴秀萍
11 篇 原丽红
11 篇 关贵全
10 篇 菅复春
10 篇 陶建平
10 篇 齐萌
10 篇 p.boireau
10 篇 张亚兰
10 篇 李莲瑞
9 篇 覃宗华
9 篇 陈启军
9 篇 谢明权

语言

224 篇 中文
10 篇 英文

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排序：

陕西珍稀野生动物抢救饲养研究中心动物寄生虫种类的调查研究

陕西珍稀野生动物抢救饲养研究中心动物寄生虫种类的调查研究

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：于三科李学钊林青宋军科潘广林西北农林科技大学动物医学院陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心

2007-2009年对陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心饲养的部分珍稀野生动物进行了寄生虫种类的调查研究。对中心内饲养的5头羚牛(Budorcas taxicolor)、1只金丝猴(Rhinopithecus roxellana)、1只大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)、4只斑羚... 详细信息

2007-2009年对陕西省珍稀野生动物抢救饲养研究中心饲养的部分珍稀野生动物进行了寄生虫种类的调查研究。对中心内饲养的5头羚牛(Budorcas taxicolor)、1只金丝猴(Rhinopithecus roxellana)、1只大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)、4只斑羚(Naemorhedus goral)、1只野猪(Sus scrofa)、4只鬣羚(Capricornis sumatraensis)、7只狼(Canis lupus)、21只孔雀(Pav pavo)、1只狍子(capreolus capreolus)和2只黑熊(Selenarctos thibetanus)进行了寄生虫学检查。应用饱和盐水漂浮法、沉淀法、沉淀-漂浮法以及蠕虫学完全剖检法等方法进行检查,结果表明这10种动物除黑熊没有找到寄生虫外,其余的寄生虫感染率均为100%,其感染强度不均匀,最少的粪检中每张涂片仅发现1个寄生虫卵或卵囊,最多的则可达647个。所获标本及虫卵或卵囊经鉴定共有15种,其中原虫1种、吸虫2种、绦虫1种、线虫12种。隶属8目14科14属。它们是艾美耳球虫(Eimeria spp.)、捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)、粗纹食道口线虫(Oesophagostomum asperum)、羊仰口线虫(Bunostomum trigonocephalum)、毛首线虫(Trichocephalussp.)、印度槽盘吸虫(Ogmocotyle indica)、矛形歧腔吸虫(Dicrocoeliam lanceatum)、贝氏莫尼茨绦虫(Moniezia benedeni)、施氏贝蛔虫(Ascaris schroederi)、野猪后圆线虫(Metastronglus apri)、猪蛔虫(Ascaris suum)、犬弓首蛔虫(Toxocara canis)、异刺线虫(Heterakis sp.)、鸽蛔虫(Ascaridia columbae)、毛细线虫(Capillaria sp.)。

关键词：珍稀野生动物大熊猫金丝猴羚牛寄生虫

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实时荧光PCR检测旋毛虫方法的建立与初步应用

实时荧光PCR检测旋毛虫方法的建立与初步应用

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：宋铭忻袁金钱路义鑫张子群东北农业大学动物医学学院黑龙江出入境检验检疫局

根据本实验室前期扩增的各旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计了一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了实时荧光PCR检测旋毛虫的方法。该方法只能在各旋毛虫隔离种DNA样本中检测到荧光信号,对小鼠... 详细信息

根据本实验室前期扩增的各旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计了一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了实时荧光PCR检测旋毛虫的方法。该方法只能在各旋毛虫隔离种DNA样本中检测到荧光信号,对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等DNA检测,不出现非特异性荧光信号;最小检出量为1.32×102拷贝数和10-5条旋毛虫,建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X+19.70,相关系数R2=0.9984,扩增效率为95%;对平行复管检测,组内变异系数为1.11%(n=20),同一组不同浓度梯度样本(n=9)间隔30d重复检测,结果无显著性差异;对人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠肌肉可在攻虫14d后100%检出,对送检狗肉样品可从压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63个狗肉样本中敏感地检出8个阳性。

关键词：检测旋毛虫实时荧光PCR

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刚地弓形虫代谢分泌抗原对山羊IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4表达水平的影响

刚地弓形虫代谢分泌抗原对山羊IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4表达水...

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：芦赟张燕丽曹丽艳王艳华苟惠天付宝权李文卉张德林甘肃业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃业大学动物医学院

为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免癌后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及... 详细信息

为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免癌后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊血清,用ELISA法检测IFN-γ、INF-α、IL-2、IL-4的表达水平。结果显示,各免疫组免疫后IFN-γ、INF-α、IL-2、IL-4的含量分别为175.40～215.60、89.95～253.80、230.40～301.50、39.20～54.20pg/ml,而免疫前分别为14.00～18.75、30.91～42.20、10.75～18.30、20.40～24.60pg/ml,对照组分别为16.50～36.56、37.75～58.20、11.50～21.75、21.61～27.60pg/ml,免疫组在免疫后体内IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量明显升高,均显著高于对照组(P<0.05)。表明,E/SA可引起IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4水平的升高,说明E/SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。

关键词：刚地弓形虫代谢分泌抗原干扰素-γ 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-2 白细胞介素-4

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猪病原抗原免疫识别关键分子基因结构与多样性研究

猪病原抗原免疫识别关键分子基因结构与多样性研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：景志忠莫斯科冯海燕李玩生王生富房永祥陈国华曾爽贾怀杰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

机体获得性免疫主要与抗原递呈细胞(APCs)和T、B淋巴细胞上的许多免疫识别关键分子如MHC、T细胞受体(TCR)和CD4/8分子等密切相关,本研究以中国合作猪的这些分子为对象,在核酸水平分析其基因组、功能分子基因结构及其多样性,探讨与病原... 详细信息

机体获得性免疫主要与抗原递呈细胞(APCs)和T、B淋巴细胞上的许多免疫识别关键分子如MHC、T细胞受体(TCR)和CD4/8分子等密切相关,本研究以中国合作猪的这些分子为对象,在核酸水平分析其基因组、功能分子基因结构及其多样性,探讨与病原抗原复杂性的统一。(1)、克隆和鉴定了猪MHCⅠ、MHCⅡ类分子的12个完整基因组序列和14个全长基因,包括SLA-1、2、3和DRA、DQA、DQB、DRB基因等。基因组序列分析发现经典SLAⅠ和Ⅱ类含有1个5′UUR、8个外显子(SLAⅠ类)、4个外显子(DRA和DQA)/5个外显子(DQB)/6个外显子(DRB)和1个3′UTR,具有十分丰富的遗传多样性。基因间的差异主要存在于与抗原肽结合部位有关的部分序列,其他部位序列相对比较保守。(2)、分别克隆和鉴定了猪TCR的α、β、γ和δ链基因,分别获得其36、34、8、5个转录本,均含有特异性识别、结合抗原的V区、D/J区和C区,主要差异在V区,表现出明显的遗传多态性,与pMHC-Ag的多样性相对应。(3)、克隆鉴定了CD4基因、CD8α/β链基因,在基因序列上均含有胞外区、跨膜区和胞浆区基因结构,其中胞外区含有编码识别和结合pMHCⅡ/Ⅰ-Ag的序列结构。

关键词：合作猪 SLAⅠ/Ⅱ类分子 T细胞受体 CD4/8分子多样性

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隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的克隆及原核表达

隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白CP41基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：于慧珠陈兆国岳城米荣升夏延富中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海动物生物技术研究中心新疆农业大学动物医学学院湖南农业大学动物医学学院

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T载体并进行序列测定,以GenBank登录的微小隐孢子虫CP41基因序列为参照,... 详细信息

为克隆和表达编码隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype)卵囊壁蛋白CP41基因,以隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA为模板,RT-PCR扩增CP41基因,克隆到pMD 18-T载体并进行序列测定,以GenBank登录的微小隐孢子虫CP41基因序列为参照,进行同源性比对。将鉴定正确的序列亚克隆到pGEX-5x-3原核表达载体,构建重组质粒pGEX-5x-3-CP41,转化BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IFTG)诱导表达并复性纯化包涵体蛋白。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白,Western blot分析该重组蛋白的免疫活性。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列比较,同源性为90.50%,氨基酸序列同源性为87.57%。重组质粒转化菌在IPTG诱导下以包涵体形式高效表达,表达的融合蛋白大小约为46 ku,Western blot分析显示,纯化复性后的重组蛋白可被辣根过氧化物酶标记的抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)单克隆抗体、隐孢子虫兔基因型(Cryptosporidium rabbit genotype)感染兔血清特异性识别。ELISA检测结果表明,该蛋白3次免疫SPF兔后,血清特异性抗体达到较高水平,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫原性和免疫反应性。

关键词：隐孢子虫鼠基因型卵囊壁蛋白 CP41 克隆原核表达

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上海地区猪隐孢子虫感染调查及虫种鉴定

上海地区猪隐孢子虫感染调查及虫种鉴定

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：陈兆国米荣升于慧珠夏延富胡义彬郝言明李艳李正锋石耀军林矫矫中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室

为调查上海地区猪隐孢子虫感染情况及感染虫种,应用Sheather's蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法对上海市6个区的10个猪场进行了为期2年半的猪隐孢子虫病流行病学调查,利用PCR-RFLP对分离的隐孢子虫核糖体小亚基(SSU)RNA基因进行扩增,对... 详细信息

为调查上海地区猪隐孢子虫感染情况及感染虫种,应用Sheather's蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法对上海市6个区的10个猪场进行了为期2年半的猪隐孢子虫病流行病学调查,利用PCR-RFLP对分离的隐孢子虫核糖体小亚基(SSU)RNA基因进行扩增,对扩增产物进行序列测定和系统发育进化分析。共检测2 194份粪样,结果阳性676份,阳性率达30.8%。10个猪场中9个发现隐孢子虫,其中阳性率最高的达80%,最低的为14.0%。猪隐孢子虫感染多发生在2月龄以内的幼龄仔猪,10-19日龄仔猪隐孢子虫阳性率较低,随着日龄的增长,隐孢子虫阳性率迅速增高,在30-39日龄达到最高峰,此后,随着仔猪日龄的增长,隐孢子虫阳性率开始逐渐下降,90-180日龄未发现隐孢子虫感染。连续13个月的追踪调查发现,猪隐孢子虫以冬季和春季感染率最高,秋季次之,夏季最低。PCR-RFLP及SSU rRNA基因部分序列分析发现,上海南汇某猪场猪感染的是隐孢子虫猪基因型Ⅱ(Cryptosporidium pig genotypeⅡ),宝山某猪场和嘉定某猪场猪感染的是猪隐孢子虫(***)。研究结果表明上海地区猪场普遍存在隐孢子虫感染,不同场、不同季节、不同日龄仔猪隐孢子虫的感染率存在明显差异。

关键词：猪隐孢子虫上海流行病学调查

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华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选

华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：吴秀萍高丽芳张玲邓洪宽刘相叶叶春艳王子见王学林王峰刘明远吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室法国食品卫生安全局

为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP载体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区（镇赉县）家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA,反转录合... 详细信息

为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因,首先利用λZAP载体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库:即从我国东北疫区（镇赉县）家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫,采用Trizol Reagent提取其总RNA,Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA,反转录合成第1链cDNA及第2链cDNA,用CHROMASPIN-400柱离心层析纯化后,与载体λZAP Express连接,体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库。文库容量为1.5x10～6 pfu,重组率为99%,插入片段长度在0.4-2.0 kb之间,扩增文库的滴度为1.5x10 pfu/mL。然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选:以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针,从2.0x10～5个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因,对筛选出的强反应原性克隆进行测序,利用相关分子生物学软件进行序列分析。共获得41个阳性克隆,测序结果分析表明,这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种,即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因。本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定理论基础和实验依据。

关键词：华支睾吸虫成虫 cDNA文库筛选抗原基因

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弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫猪T细胞亚群的影响

弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫猪T细胞亚群的影响

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：蔡志杰王艳华付宝权李文卉芦赟曹丽艳张燕丽张德林中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃业大学动物医学院

为了研究弓形虫代谢分泌抗原疫苗对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后2周、免疫后4周、感染后1周及... 详细信息

为了研究弓形虫代谢分泌抗原疫苗对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后2周、免疫后4周、感染后1周及感染后2周采取仔猪外周血,用流式细胞仪对各试验组外周血中CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行检测,用IHA对抗弓形虫抗体水平做检测。结果表明,弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫仔猪后,免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞水平与特异性抗体效价与对照组相比均有大幅度升高;感染后1周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值较感染前不同程度降低,感染后2周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值上升至免疫后水平,CD8+水平下降,感染后特异性抗体效价进一步升高。因此,弓形虫代谢分泌抗原疫苗能够提高仔猪外周血CD3+、CD4+及CD8+T淋巴细胞的百分数和特异性抗体滴度。

关键词：弓形虫代谢分泌抗原 T细胞亚群抗体水平

来源：评论

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上海地区不同动物源隐孢子虫感染调查及种型鉴定

上海地区不同动物源隐孢子虫感染调查及种型鉴定

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：陈兆国米荣升于慧珠夏延富胡义彬郝言明李艳李正锋林矫矫陈永军石耀军王赞江袁耀明张连军沈莉萍刘佩红沈辉中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海光明荷斯坦牧业有限公司上海市动物疫病预防控制中心上海市闵行区动物疾病预防控制中心

为了解上海地区不同动物隐孢子虫感染情况及感染虫种,建立小鼠、兔隐孢子虫实验动物模型。从上每市不同区县采集宠物犬、鸽子、黄牛、山羊、鹌鹑、梅花鹿、黑天鹅及实验动物新西兰白兔、东方田鼠、昆明系小鼠、大鼠粪便,采用Sheather... 详细信息

为了解上海地区不同动物隐孢子虫感染情况及感染虫种,建立小鼠、兔隐孢子虫实验动物模型。从上每市不同区县采集宠物犬、鸽子、黄牛、山羊、鹌鹑、梅花鹿、黑天鹅及实验动物新西兰白兔、东方田鼠、昆明系小鼠、大鼠粪便,采用Sheather's蔗糖飘浮法和改良抗酸染色法进行检查。利用PCR-RFLP对部分动物粪便中分离的隐孢子虫核糖体小亚基(SSU)RNA基因进行扩增,对扩增产物进行序列测定和系统发育进化分析。结果发现,鸽子、黑天鹅、大鼠粪便中未发现隐孢子虫;其它被调查动物均发现存在隐孢子虫感染,其中宠物犬、山羊、鹌鹑、梅花鹿、兔子、东方田鼠、实验小鼠的阳性率分别为1.5%、26.3%、63.3%、36.6%、8.5%、54.5%、2.9%;此外,检查的1头黄牛也为阳性。对小鼠、兔子、山羊、鹌鹑源隐孢子虫进行分子鉴定和序列进化树分析,发现上海地区实验小鼠感染的是隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mouse genotype);兔源隐孢子虫虫种为隐孢子虫兔基因型(Cryptosporidium rabbit genotype);山羊感染的是隐孢子虫鹿基因型(Cryptosporidium cervine genotype);鹌鹑感染的是火鸡隐孢子虫(Cryptosporidium meleagridis)。鼠、兔源隐孢子虫成功感染本种动物,昆明系小鼠接种鼠源隐孢子虫后,最短潜伏期为3d,最长转阴时间为8周;新西兰白兔感染兔源隐孢子虫后15d左右就不再排卵囊。

关键词：上海动物隐孢子虫感染 18S rRNA基因 PCR-RFLP,种,基因型

来源：评论

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巨型艾美球虫gam56基因的分段原核表达及其产物的免疫保护效果

巨型艾美球虫gam56基因的分段原核表达及其产物的免疫保护效果

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会

作者：许金俊姜慧婕陶建平彭昊张艳孙文瑶扬州大学兽医学院

已报道的7种鸡球虫中,巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)具有较强的致病性和免疫原性,对其他种类球虫也能产生交叉保护力。配子体是鸡球虫体内生活史中的一个重要发育阶段,利用三种从配子体提取纯化的56、82和250 ku抗原组成的亚单位苗Cox... 详细信息

已报道的7种鸡球虫中,巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)具有较强的致病性和免疫原性,对其他种类球虫也能产生交叉保护力。配子体是鸡球虫体内生活史中的一个重要发育阶段,利用三种从配子体提取纯化的56、82和250 ku抗原组成的亚单位苗CoxAbic现已商品,临床应用效果良好。本研究以*** NT株纯化的配子体提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT-PCR技术扩增出gam56基因全编码区cDNA片段,并克隆到pGEM-Teasy载体和测序。根据测序结果设计引物,扩增gam56基因两段含丰富抗原表位的编码区片段,克隆到原核表达质粒pGEx-6P-1谷胱甘肽-S-转移酶基因的下游,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-gam56-1和pGEX-6P-1-gam56-2。经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳鉴定证实,gam56基因的2个片段在大肠杆菌中得到了融合表达,融合蛋白分子量分别约为44 Ku和38 Ku。以可溶性的GST-gam56-2融合蛋白为免疫原,设立高、中、低(1.0、0.5、0.25 mg)3个剂量,单独或使用弗氏完全佐剂,于5日龄、12日龄和19日龄对雏鸡进行3次免疫,同时设立未免疫未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,在26日龄时用5×10～4个***孢子化卵囊进行攻毒,8 d后扑杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率等指标进行统计分析,比较免疫保护效果。结果显示:就相对增重率而言各免疫组较未免疫攻毒组的要高27.6%以上,各免疫组之间稍有差异但不显著(P>0.05);就卵囊减少率指标而言,各免疫组较未免疫攻毒组均有不同程度减少,但是均小于75%。GST-gam56-2融合蛋白对于***感染具有一定的免疫保护效力,可用于亚单位疫苗的研制。

关键词：巨型艾美球虫 gam56基因重组蛋白保护效果

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