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4 篇 江苏省农业科学院...
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鸡新城疫耐热糖玻璃活疫苗的初步研究

鸡新城疫耐热糖玻璃活疫苗的初步研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：吕芳卢宇王佳佳郝政林赵艳红邓碧华张金秋陈德祥侯继波江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

选用海藻糖、明胶、PVP等成分配制耐热保护剂,采用梯度真空干燥方法,将鸡新城疫病毒La Sota株进行泡沫干燥,通过37℃10d耐老化试验筛选到配方T5的病毒滴度损失为0.2 Lg;NDV-T5泡沫干燥疫苗经DSC测定配方玻璃化转变温度Tg为56.45℃,扫描... 详细信息

选用海藻糖、明胶、PVP等成分配制耐热保护剂,采用梯度真空干燥方法,将鸡新城疫病毒La Sota株进行泡沫干燥,通过37℃10d耐老化试验筛选到配方T5的病毒滴度损失为0.2 Lg;NDV-T5泡沫干燥疫苗经DSC测定配方玻璃化转变温度Tg为56.45℃,扫描电镜观察可见较为规则的片状结构;NDV-T5在各温度耐热性能均较好,2℃～8℃保存24个月,25℃保存15个月、37℃保存5个月,病毒含量下降≤1.0 Lg;将不同保存温度的NDV-T5泡沫干燥疫苗免疫1月龄雏鸡,鸡只均能在免后14d产生抗体,与现有商品疫苗效力相当.

关键词：鸡新城疫病毒耐热糖玻璃活疫苗真空泡沫干燥疗效评价

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禽源高产流感疫苗株rH5N3的拯救及其免疫原性研究

禽源高产流感疫苗株rH5N3的拯救及其免疫原性研究

引用

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：刘明张云潘蔚绮刘春国刘超南杨涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学生命技术学院哈尔滨150030

H5N1亚型高致病性禽流感给我国以及东南亚地区的养禽业造成了巨大的经济损失,疫苗免疫接种是控制本病流行的最有效手段.本研究采用RT-PCR技术分别扩增了鹅源高产禽流感病毒的6条内部基因片断,近期分离的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因... 详细信息

H5N1亚型高致病性禽流感给我国以及东南亚地区的养禽业造成了巨大的经济损失,疫苗免疫接种是控制本病流行的最有效手段.本研究采用RT-PCR技术分别扩增了鹅源高产禽流感病毒的6条内部基因片断,近期分离的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因以及N3亚型参考毒株的神经氨酸酶基因,分别构建了8个基因的转录与表达载体,利用反向遗传学技术拯救出了全部基因,且都来自于禽源的重组流感病毒疫苗株rH5N3.通过对血凝素基因连接肽处的4个碱性氨基酸(R-R-K-K)基因缺失,消除了HA基因的毒力相关序列,拯救出的rH5N3病毒对鸡和鸡胚均无致病性,鸡胚尿囊液的HA效价1∶2048,比亲本病毒产量提高8倍.疫苗免疫鸡后2周即可检出HI抗体,免疫后4周左右HI抗体水平最高,鸡免疫后18周应然保持高水平的HI抗体.以rH5N3制备的油乳剂灭活苗免疫不论是对于国内早期分离的禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96还是近期分离的A/Goose/HLJ/QFY/04都能够产生良好的免疫保护作用,免疫鸡攻毒后不排毒、不发病、不死亡.

关键词：禽流感病毒反向遗传学 H5N1亚型重组疫苗株免疫原性灭活苗免

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新生仔猪大肠杆菌性腹泻K88ac-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗实验室生产工艺研究

新生仔猪大肠杆菌性腹泻K88ac-ST1-LTB三价基因工程灭活疫苗实验...

引用

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：卫广森许崇波王文成李尚波王卓苗玉和中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730000 大连大学生物工程学院辽宁大连116000 辽宁省益康生物制品厂辽宁辽阳111000

对构建的表达K88ac-ST1-LTB融合蛋白的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)进行了各项实验室试验.结果1～10代菌种染色特性、培养特性、生化特性、质粒遗传、目的蛋白表达、免疫原性等遗传稳定,基础种子代次暂定为1～10代;菌种保存试验确... 详细信息

对构建的表达K88ac-ST1-LTB融合蛋白的重组菌株BL21(DE3)(pXK88acST3LT5)进行了各项实验室试验.结果1～10代菌种染色特性、培养特性、生化特性、质粒遗传、目的蛋白表达、免疫原性等遗传稳定,基础种子代次暂定为1～10代;菌种保存试验确定,甘油保存菌种在-20℃保存期为2年,冻干保存菌种在-20℃保存期暂定为3年;最小免疫剂量测定结果每只小鼠的最小免疫剂量为0.1mL,每头妊娠母猪的最小免疫剂量为2.5mL;制备的5批实验室产品均安全有效,安全和效力检验证实本动物和小鼠之间有着良好的平行关系,可以用小鼠作为本疫苗的安检、效检模型;试验中本疫苗保存18个月,仍具有良好的效力,保护率达80﹪以上,为了保证疫苗质量,并考虑疫苗在保存和应用中的各种不确定因素,将本疫苗的保存期暂定为12个月.为了进一步验证疫苗的安全性和有效性,于不同地区进行了田间试验,免疫妊娠母猪650头,产仔7156头,总保护率为98.24﹪,试验证明本疫苗安全性良好,新生仔猪通过母源抗体被动免疫可有效地预防大肠杆菌性腹泻的发生.

关键词：新生仔猪大肠杆菌性腹泻重组菌株基因工程灭活疫苗融合蛋白

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双抗体夹心ELISA检测坦布苏病毒方法的建立及初步应用

双抗体夹心ELISA检测坦布苏病毒方法的建立及初步应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：谢星星李银李祥瑞赵冬敏黄欣梅韩凯凯刘玉卓南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

以鹅坦布苏病毒JS804毒株制备的多克隆抗体为捕获抗体,抗鹅坦布苏病毒NS1蛋白的单克隆抗体4A9作为检测抗体,建立了检测坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法.该方法的最佳反应条件为:兔抗鹅坦布苏病毒多克隆抗体的最适稀释度为1∶1600,单克... 详细信息

以鹅坦布苏病毒JS804毒株制备的多克隆抗体为捕获抗体,抗鹅坦布苏病毒NS1蛋白的单克隆抗体4A9作为检测抗体,建立了检测坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法.该方法的最佳反应条件为:兔抗鹅坦布苏病毒多克隆抗体的最适稀释度为1∶1600,单克隆抗体的最适稀释度为1∶160,样品反应时间为1h,酶标羊抗鼠二抗工作浓度为1∶5000,以OD450nm≥0.245作为阳性判定标准.该方法的板间、板内重复性变异系数小于10％,病毒最低检测量为386.25 TCID50/0.1 mL,与NDV、AIV、IBV、DHV和GPV无交叉反应.应用该方法与RT-PCR方法同时检测22份临床样品,符合率达到86.36％.结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于坦布苏病毒的快速检测.

关键词：鹅坦布苏病毒单克隆抗体双抗体夹心酶免疫吸附测定效果评估

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鸡大肠杆菌1型菌毛蛋白结构基因(pil A)表达载体构建及表达产物免疫原性

鸡大肠杆菌1型菌毛蛋白结构基因(pil A)表达载体构建及表达产物免...

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会

作者：戴鼎震甘黎明冯秀丽刘洪珍王晓丽夏兴霞江苏省农业科学院兽医研究所南京210014 南京农业大学动物医学院南京2100014 盐都县兽医站盐都224055

根据发表的鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因序列,在其同源区设计合成了一对引物,经PCR扩增,从鸡大肠杆菌GL7分离株(O78)染色体扩增到大小约551bp的DNA片段,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ同时酶切所扩增的外源基因片段和pET-32a(+)载体,再将酶... 详细信息

根据发表的鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因序列,在其同源区设计合成了一对引物,经PCR扩增,从鸡大肠杆菌GL7分离株(O78)染色体扩增到大小约551bp的DNA片段,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ同时酶切所扩增的外源基因片段和pET-32a(+)载体,再将酶切产物连接,并将连接产物转化到受体菌DH5α中.经SalⅠ和BamHⅠ双酶切、鉴定、筛选到重组质粒F15pilA/pET-32a(+).再将此质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,筛选获得重组菌株BL21(DE3-F15pilA/pET32a(+)).经IPTG诱导,用SDS-PAGE检测表达产物,结果表明重组蛋白的大小与理论数据大小符合.用间接ELISA和Westernblot也再次证实表达产物为菌毛蛋白.用提取的重组菌毛蛋白制成油乳剂疫苗,免疫3周龄健康罗曼小公鸡,每雏皮下注射0.5ml(含表达蛋白200μg).隔离饲养至7周龄,分别用同源菌株GL7(O78)和YR10(O18)经后胸气囊攻毒,同时设未免疫攻毒对照.结果表明,O78和O18免疫攻毒组死亡率为16.7﹪和27.3﹪;O78和O18的未免疫攻毒对照组死亡率分别是83.33﹪和91.67﹪.免疫鸡在气囊、心包及肝脏的病理变化比非免疫鸡显著轻微.结果表明鸡大肠杆菌1型菌毛pilA基因表达产物制成灭活油乳剂疫苗免疫鸡体具有良好的免疫原性.

关键词：鸡大肠杆菌病大肠埃希氏菌 1型菌毛 pilA基因基因表达产物灭活疫苗免疫原性

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兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的表达及鉴定

兔出血症病毒衣壳蛋白N端携带双串联卵清蛋白T细胞表位嵌合体的表...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：张燕胡波宋艳华范志宇魏后军姜平王芳南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA CD8+T细胞表位(ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性.通过分子生物... 详细信息

在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA CD8+T细胞表位(ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性.通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257aa-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因.利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN.经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成.结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒.本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础.

关键词：兔出血症病毒衣壳蛋白双串联卵清蛋白细胞表位嵌合体疫苗研制

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传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％.为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,两个病毒株基因组... 详细信息

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群中分离到两株传染性法氏囊病病毒(IBDV),分别命名为QL和ZZ-11,对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％.为分析该毒株的分子生物学特征,对其全基因组序列进行了测定,两个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp.病毒演化分析结果显示两个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96.8％～98.1％和96.9％～98.4％,处在IBDV超强毒株分支上;而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89.7％～90.4％和90.0％～90.7％,位于弱毒株分支上.IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明,QL和ZZ-11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S,七肽基序为SWSASGS,均符合超强毒株的分子特征;而B节段777-782位核苷酸序列为GGTGCC,没有KpnⅠ酶切位点,具有弱毒株的序列特点.以上分析结果表明,QL和ZZ-11为IBDV自然重配株,A节段源于超强毒株,而B节段源于弱毒株.

关键词：鸡传染病法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

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gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：欧阳伟朱向东王永山王永强潘群兴毕振威王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京 210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSV... 详细信息

为了探讨gga-miR-21对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,定向克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中,获得重组慢病毒表达质粒pL-miR-21.将pL-miR-21和3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG混合物共转染293FT细胞,获得含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21.用VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得了过表达gga-m iR-21的细胞株DF-miR-21,用qRT-PCR检测gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高了60％.将IBDV接种到DF-miR-21细胞,在96 h后,病毒滴度为10475 TCID50/0.1 mL,而正常DF-1细胞的病毒滴度为108.75 TCID50/0.1mL.用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组B片段上具有gga-miR-21的结合靶点.将IBDV感染的DF-miR-21细胞,用western-blot分析,VP1蛋白的表达量较正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异.本实验结果表明:细胞gga-miR-21可抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上(VP1蛋白的合成)而不是在转录水平上(VP1mRNA的转录)实现的.

关键词：鸡传染病法氏囊病病毒小分子核糖核酸表达系统病毒复制

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传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备其抗病毒活性分析

传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备其抗病毒活性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：夏兴霞欧阳伟王永山诸玉梅潘群兴毕振威王晓丽吴晓悠董晨红江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

以传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLP)重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得7株分泌抗IBDV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞.用间接免疫荧光试验(IFA)和病毒中和试验(VN)分别测定MAb的特异性和抗病... 详细信息

以传染性法氏囊病病毒(IBDV)病毒样颗粒(VLP)重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得7株分泌抗IBDV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞.用间接免疫荧光试验(IFA)和病毒中和试验(VN)分别测定MAb的特异性和抗病毒活性,杂交瘤细胞株2C8分泌的MAb具有较高的抗IBDV活性,培养上清液中的抗体中和效价为210,诱生BALB/c小鼠腹水中的抗体中和效价达到107,抗体亚类为IgG1κ.将2C8-MAb制成注射液,经肌肉注射,在12h内,鸡血液循环中的鼠源MAb达到高峰,半衰期至少可持续14d.在IBD预防试验中,注射2C8-MAb的鸡可抵抗IBDV强毒感染.在IBD治疗试验中,对IBDV强毒感染发病鸡用2C8-MAb治疗,存活率为60％(18/30),第21 d检测法氏囊组织IBDV全部为阴性;而非治疗对照组,发病鸡的存活率只有20％ (6/30),第21 d检测存活鸡法氏囊组织IBDV全部呈阳性.本试验结果表明,高中和活性的2C8-MAb对IBD具有良好的预防及治疗效果,能够显著降低死亡率,并且MAb治疗康复鸡不带毒.

关键词：鸡传染病法氏囊病病毒单克隆抗体抗病毒活性

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21世纪畜禽疫病发生特点和防制战略

21世纪畜禽疫病发生特点和防制战略

引用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十一次兽医病理学、第十次动物病理生理学学术研讨会

作者：龙塔程相朝洛阳农业高等专科学校洛阳农业高等专科学校

本文针对21世纪规模化养殖业的发展状况及当前畜牧生产中存在的问题,阐述了畜禽疫病发生与流行的主要特点,并提出21世纪畜禽疫病的防制对策要从提高执法力度,贯彻“预防为主”,健全和完善畜禽疫病防疫体系,重视环境因素.加强兽药和生物... 详细信息

本文针对21世纪规模化养殖业的发展状况及当前畜牧生产中存在的问题,阐述了畜禽疫病发生与流行的主要特点,并提出21世纪畜禽疫病的防制对策要从提高执法力度,贯彻“预防为主”,健全和完善畜禽疫病防疫体系,重视环境因素.加强兽药和生物制品管理,加强畜禽传染病防制研究,等6个方面提高动物疫病综合防制能力.

关键词：畜禽疫病特点防制

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