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200 篇 会议
2 篇 期刊文献

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200 篇 农学
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2 篇 医学
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- 1 篇 临床医学
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- 1 篇 医学技术（可授医学...

主题

12 篇 单克隆抗体
11 篇 序列分析
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9 篇 prrsv
8 篇 猪圆环病毒2型
8 篇 猪繁殖与呼吸综合...
8 篇 表达
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6 篇 鉴定
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5 篇 分离鉴定
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4 篇 猪流感病毒
4 篇 新城疫病毒
4 篇 分离
4 篇 病毒拯救
4 篇 rt-pcr
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机构

29 篇 中国农业科学院哈...
23 篇 东北农业大学
15 篇 华南农业大学
14 篇 中国农业科学院哈...
12 篇 中国农业科学院哈...
10 篇 中国农业科学院哈...
9 篇 新疆农业大学
7 篇 中国农业科学院哈...
6 篇 南京农业大学
6 篇 中山大学
5 篇 黑龙江八一农垦大...
5 篇 吉林农业大学
5 篇 中国农业科学院上...
4 篇 莱阳农学院
3 篇 河南科技大学
3 篇 延边大学
3 篇 青岛农业大学
3 篇 军事医学科学院军...
3 篇 中国农业科学院哈...
3 篇 哈尔滨维科生物技...

作者

15 篇 冯力
15 篇 孙东波
14 篇 时洪艳
14 篇 刘长明
13 篇 陈建飞
13 篇 危艳武
9 篇 陈化兰
9 篇 张超范
9 篇 童光志
8 篇 孔宪刚
8 篇 袁婧
8 篇 张朝霞
8 篇 刘胜旺
8 篇 毕英佐
8 篇 谢青梅
8 篇 佟有恩
8 篇 马静云
7 篇 陈峰
7 篇 仇华吉
7 篇 吴东来

语言

192 篇 中文
10 篇 英文

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猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育与鉴定

猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明张超范危艳武谭斌陆月华谷守林中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床表现为断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,用猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代,培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞传25代后毒价显... 详细信息

从临床表现为断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,用猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代,培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞传25代后毒价显著提升,第35代毒价可达105.6TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明:病毒感染细胞后抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈点式分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,单粒子直径约为17nm;病毒基因组由1768核苷酸构成,与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用剂量为2mL的病毒细胞培养物,接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型的PMWS临床症状。该研究结果为开展PCV2的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型毒株培育分离鉴定

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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析

表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙元祁巧芬梁冰冰成丹李娜于墨洋王宇飞刘霓虹朱庆虎仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

本研究旨在构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗。通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2,测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blot检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用兔化弱毒... 详细信息

本研究旨在构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗。通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2,测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blot检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用兔化弱毒疫苗进行攻击,攻毒后3d取其脾脏,用荧光定量RT-PCR检测兔化弱毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5周抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2免疫兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到猪瘟兔化弱毒RNA,而野生型腺病毒免疫家兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测出大量病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。这表明rAdV-E2可望发展成为猪瘟疫苗的候选疫苗。

关键词：猪瘟病毒 E2基因重组腺病毒免疫原性家兔

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2005年～2006年黑龙江省部分地区健康野鸟NDVF基因分子特征

2005年～2006年黑龙江省部分地区健康野鸟NDVF基因分子特征

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘怀然李东伟刘培欣刘胜旺华育平孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北林业大学野生动物资源学院

将2005年～2006年分离自黑龙江省扎龙自然保护区和哈尔滨周边地区健康野鸟体内的14株新城疫病毒(NDV),通过鸡胚成纤维细胞(CEF)克隆纯化后,每株病毒选择3～4个病毒克隆用于F基因部分核苷酸片段扩增、PCR产物序列测定,并进行进化分析。根... 详细信息

将2005年～2006年分离自黑龙江省扎龙自然保护区和哈尔滨周边地区健康野鸟体内的14株新城疫病毒(NDV),通过鸡胚成纤维细胞(CEF)克隆纯化后,每株病毒选择3～4个病毒克隆用于F基因部分核苷酸片段扩增、PCR产物序列测定,并进行进化分析。根据F基因47～420nt片段构建的分子进化树分析表明,可将其中13/14株野鸟NDV归于基因Ⅶd亚型,具有该型毒株典型的F蛋白裂解位点,属于我国目前流行的优势基因型毒株,与上世纪90年代分离自我国的鸡、水禽、珍禽基因Ⅶd亚型NDV核苷酸序列同源性在93%～97.3%之间。1/14株野鸟NDV属于基因Ⅲ型,与代表毒株Mutkeswar间核苷酸和氨基酸同源性均为100%。健康野鸟携带的Ⅶ亚型和基因Ⅲ型NDV,与目前优势NDV流行毒株和中等毒力疫苗毒株亲源关系相近,表明野鸟与家禽、水禽携带的NDV可以相互传染,对家禽构成巨大潜在威胁,提示加强野鸟NDV的监控及流行病学研究的紧迫性和重要性。

关键词：新城疫病毒黑龙江省健康野鸟基因型

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猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株S基因的克隆、序列分析及线性抗原表位区的鉴定

猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株S基因的克隆、序列分析及线性抗原表位...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙东波冯力陈建飞时洪艳佟有恩刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因,序列比对结果表明:PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96～97%、96～87%、96～... 详细信息

以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因,序列比对结果表明:PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96～97%、96～87%、96～41%、94～02%和93～93%,氨基酸序列的同源性分别为96.17%、95.88%、96.10%、92.36%和92.05%;分子进化树分析结果显示,PEDV CH/JL株S基因与JS毒株S基因亲缘关系最近,处于同一群。利用DNAstar Protean程序预测了PEDV CH/JL株S蛋白一个抗原表位区(83～276aa),将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后转化*** BL21(DE3)感受态细胞,在终浓度110mmol/L的IPTG诱导下获得了表达,Western blot结果显示,预测的抗原表位区GST融合蛋白能与猪流行性腹泻病毒多克隆抗血清反应,提示该抗原表位区含有线性抗原表位。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因序列分析线性抗原表位区

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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华东北农业大学哈药集团中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室/慢病毒及马病课题组

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量... 详细信息

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:12800、1:25600、1:819200、1:51200和1:409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性。该研究为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：袁婧刘长明魏萍危艳武张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学动物医学院

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA),... 详细信息

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA),用于病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中抗原检测。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h检测到抗原阳性细胞,于60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,以腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR法检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。DIFA为PRRSV的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感和特异的检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光抗原检测

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番鸭呼肠孤病毒S14株M基因组的克隆与序列分析

番鸭呼肠孤病毒S14株M基因组的克隆与序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张云郭东春耿宏伟刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室东北农业大学生命科学院

利用RT-PCR方法首次全基因克隆了番鸭呼肠孤病毒S14株M1,M2和M3基因并进行序列分析,M1,M2和M3核苷酸长度分别为2 283 nt、2 155 nt和1 996 nt,它们编码的氨基酸长度为μA(732 aa)、μB(676 aa)和μNS(635 aa),其中S14 M2基因比禽呼肠孤... 详细信息

利用RT-PCR方法首次全基因克隆了番鸭呼肠孤病毒S14株M1,M2和M3基因并进行序列分析,M1,M2和M3核苷酸长度分别为2 283 nt、2 155 nt和1 996 nt,它们编码的氨基酸长度为μA(732 aa)、μB(676 aa)和μNS(635 aa),其中S14 M2基因比禽呼肠孤病毒缺失3个核苷酸。同时S14的M1和M2的5'末端分别为5'-ACUUUU和5'-UCUUUU,与禽呼肠孤病毒的5'末端5'-GCUUUU不同,S14株M1,M2和M3的3'末端序列UCAUC-3'与多数鸭、禽和哺乳动物的3'末端序列相同,S14株编码μA, μB和μNS基因序列分析表明:它们与禽呼肠孤病毒在核苷酸水平的同源性在72.9%～73.9%,67.1%～69.6%和69.4%～70.8%;推导的氨基酸水平同源性在85.3%～86.2%,75.0%～76.5%和78.4%～79.8%;根据番鸭和禽呼肠孤病毒M组基因的系统进化树分析表明:番鸭和禽呼肠孤病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 M1、M2和M3基因 μA, μB和μNS蛋白系统进化分析

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：谭斌刘长明危艳武张超范冉多良刘永刚陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室新疆农业大学动物医学院

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法,研制成PRRSV-IPMA试剂盒。对试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等指标进行了试验,并与进口试剂盒进行了对比。用IPMA法检测PRRS... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法,研制成PRRSV-IPMA试剂盒。对试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等指标进行了试验,并与进口试剂盒进行了对比。用IPMA法检测PRRSV试验接种猪血清抗体,第一周抗体检出率为50%,于第二周起抗体检出率为100%,未接种病毒对照组猪血清抗体检测均呈阴性。组装的PRRSV-IPMA试剂盒与国外IDEXX-ELISA试剂盒对42份血清进行平行检测的符合率为83.3%。用本试剂盒对黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场520份血清和6个发病猪场送检的80份血清进行了PRRS抗体检测,8/13猪场抗体阳性率大于50%,2/13猪场为阴性;6个发病场抗体阳性率分布在57.1%～100%;PRRS对我国猪群危害严重。PRRSV-IPMA试剂盒可为流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供一种可靠的技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) 抗体检测试剂盒

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H3亚型猪流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术

H3亚型猪流感病毒的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：谢青梅冀君曹永长马静云李少璃张祥斌陈峰毕英佐华南农业大学动物科学学院中山大学生命科学学院

本研究建立一种简便、灵敏而又特异的环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification Method,RT-LAMP)用于H3亚型流感病毒的检测。根据GenBank中注册的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因保守区的序列,设计一组对应HA序列6个... 详细信息

本研究建立一种简便、灵敏而又特异的环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification Method,RT-LAMP)用于H3亚型流感病毒的检测。根据GenBank中注册的H3N2亚型猪流感病毒(SIV)HA基因保守区的序列,设计一组对应HA序列6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP反应体系,优化LAMP反应条件,等温扩增反应条件为65℃保温60min。扩增后产物可用核酸染色剂SYBRⅠ进行鉴定,检测结果可视(阴性为橙黄色,阳性偏绿色);同时用特异性内切酶KpnⅠ进行酶切鉴定。用已建立的RT-LAMP技术检测临床样品,检测结果与病毒分离、RT-PCR方法符合率均达到100%。RT-LAMP技术整个检测过程只需1h～2h,不需要PCR仪和成像系统,仅需要一恒温水浴锅即可完成试验。通过特异性、敏感性试验,验证了建立RT-LAMP技术可以作为一种操作简单,灵敏性、特异性高的检测H3亚型猪流感病毒的技术。

关键词： H3亚型猪流感病毒 HA RT-LAMP

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猪囊尾蚴金标快速诊断试纸条的研制

猪囊尾蚴金标快速诊断试纸条的研制

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张少华才学鹏骆学农景志忠李克生蒋韬中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃省医学科学研究院生物技术中心

为建立一种简便快速适于基层推广应用的猪囊尾蚴抗体检测工具,本研究以胶体金颗粒标记纯化的猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白,将兔抗TSOL18-IgG和TSOL18抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上,研制出猪囊尾蚴病快速诊断试纸条。... 详细信息

为建立一种简便快速适于基层推广应用的猪囊尾蚴抗体检测工具,本研究以胶体金颗粒标记纯化的猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白,将兔抗TSOL18-IgG和TSOL18抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上,研制出猪囊尾蚴病快速诊断试纸条。用该试纸条对16头份人工攻虫感染猪进行猪囊尾蚴抗体检测,同时与剖检计数法和全囊抗原ELISA作对比,结果试纸条法与剖检计数法和全囊抗原ELISA的相对敏感性分别为80.0%和75.0%。试纸条在4℃可存放12个月,检测结果稳定,重复性好。本试验证明,建立的金标试纸条法操作简单、快速敏感、稳定性好,可用于猪囊尾蚴病的诊断和筛查。

关键词：猪囊尾蚴病重组TSOL18蛋白胶体金试纸条

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