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200 篇 会议
2 篇 期刊文献

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200 篇 农学
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2 篇 医学
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- 1 篇 临床医学
- 1 篇 公共卫生与预防医...
- 1 篇 医学技术（可授医学...

主题

12 篇 单克隆抗体
11 篇 序列分析
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9 篇 prrsv
8 篇 猪圆环病毒2型
8 篇 猪繁殖与呼吸综合...
8 篇 表达
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6 篇 鉴定
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5 篇 分离鉴定
5 篇 间接elisa
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4 篇 猪流感病毒
4 篇 新城疫病毒
4 篇 分离
4 篇 病毒拯救
4 篇 rt-pcr
4 篇 基因型

机构

29 篇 中国农业科学院哈...
23 篇 东北农业大学
15 篇 华南农业大学
14 篇 中国农业科学院哈...
12 篇 中国农业科学院哈...
10 篇 中国农业科学院哈...
9 篇 新疆农业大学
7 篇 中国农业科学院哈...
6 篇 南京农业大学
6 篇 中山大学
5 篇 黑龙江八一农垦大...
5 篇 吉林农业大学
5 篇 中国农业科学院上...
4 篇 莱阳农学院
3 篇 河南科技大学
3 篇 延边大学
3 篇 青岛农业大学
3 篇 军事医学科学院军...
3 篇 中国农业科学院哈...
3 篇 哈尔滨维科生物技...

作者

15 篇 冯力
15 篇 孙东波
14 篇 时洪艳
14 篇 刘长明
13 篇 陈建飞
13 篇 危艳武
9 篇 陈化兰
9 篇 张超范
9 篇 童光志
8 篇 孔宪刚
8 篇 袁婧
8 篇 张朝霞
8 篇 刘胜旺
8 篇 毕英佐
8 篇 谢青梅
8 篇 佟有恩
8 篇 马静云
7 篇 陈峰
7 篇 仇华吉
7 篇 吴东来

语言

192 篇 中文
10 篇 英文

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含MDV gB CTL表位与鸡HSP108融和蛋白基因的合成及原核表达

含MDV gB CTL表位与鸡HSP108融和蛋白基因的合成及原核表达

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：邱亚峰葛菲菲曹瑞兵周斌马志永陈溥言中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室上海市动物疫病预防控制中心南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

为了进行新型MD疫苗的开发,开展了融合蛋白基因合成的工作。利用RT-PCR从鸡肝脏中,扩增出约2.4ku的鸡HSP108基因,测序比较发现该基因的序列与GenB ank上发表的序列的同源性约为99%。在体外,将MDV gB CTL表位与鸡HSP108融合在一起,构建... 详细信息

为了进行新型MD疫苗的开发,开展了融合蛋白基因合成的工作。利用RT-PCR从鸡肝脏中,扩增出约2.4ku的鸡HSP108基因,测序比较发现该基因的序列与GenB ank上发表的序列的同源性约为99%。在体外,将MDV gB CTL表位与鸡HSP108融合在一起,构建融合蛋白基因gBHSP108,将该融合蛋白基因克隆入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-gBHSP108,将该重组载体转化*** BL21,经1.0mmol/LIPTG诱导,SDS-PAGE分析发现,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。将包涵体溶解于8mol/L的尿素中,利用His·Bind试剂盒获得纯化的蛋白。Western blot分析表明,针对MDV gB CTL表位的多抗可以与融合蛋白发生特异性的反应,说明该融合蛋白获得了成功表达。本研究为下一步探讨该融合蛋白的免疫学作用以及该融合蛋白基因的真核表达奠定基础。

关键词： CTL表位原核表达融合蛋白基因热休克蛋白

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猪圆环病毒2型IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明张超范危艳武张朝霞袁婧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),用于猪圆环病毒2型(PCV2)血清抗体检测。对IPMA反应条件进行了优化,并组装成诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测PCV2人工感染猪血清,于感染后第3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),用于猪圆环病毒2型(PCV2)血清抗体检测。对IPMA反应条件进行了优化,并组装成诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测PCV2人工感染猪血清,于感染后第3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),同设对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月,对其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中PCV2污染相当严重。试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒

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鹅副粘病毒BZ02株F、HN基因的克隆及分子特性分析

鹅副粘病毒BZ02株F、HN基因的克隆及分子特性分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：肖跃强沈志强杨春富韩玲管宇刘吉山山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司

RT-PCR扩增获得与F、HN基因大小分别一致的特异性片段,克隆至pMD18-T载体并鉴定正确后进行测序。序列分析表明,所扩增F基因ORF(开放阅读况)为1662bp,HN基因ORF为1716bp,分别编码533和571个氨基酸残基,F蛋白裂解位点氨基酸残序列为112R-R... 详细信息

RT-PCR扩增获得与F、HN基因大小分别一致的特异性片段,克隆至pMD18-T载体并鉴定正确后进行测序。序列分析表明,所扩增F基因ORF(开放阅读况)为1662bp,HN基因ORF为1716bp,分别编码533和571个氨基酸残基,F蛋白裂解位点氨基酸残序列为112R-R-Q-K-R-F117,与强毒株特征相符。进化树显示,该毒株属于基因Ⅶd亚型,该型第101位和121位氨基酸残基分别是K(赖氨酸)和V(缬氨酸),而本毒株第121位进化为D(天冬氨酸);与Lasota、Mukteswar、F48E9、SF02株F蛋白核苷酸序列同源性分别为84.1%、86.7%、86.7%、97.7%,氨基酸同源性分别为87%、90.2%、90.8%、97.1%;与Mukteswar、F48E9、SF02株HN蛋白核苷酸序列同源性分别为85.5%、84.8%、99.1%,氨基酸同源性分别为89.3%、90.2%、98.8%;通过与国内报道的鹅副粘病毒F和HN基因序列进行分析,该毒株与YG97株的同源性均最高,分别为98.7%和99.6%,表明该BZ02株鹅副粘病毒可能进化来源于YG97。

关键词：鹅源副粘病毒 RT-PCR F基因 HN基因遗传进化

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致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

致病性猪伪狂犬病病毒PRV-JF株的分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张超范刘长明危艳武刘霓虹中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。分离株经细胞培养传代,... 详细信息

从临床疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑组织病料中,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染,采用无PCV1污染的猪肾细胞系(PK-15)分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育一株细胞培养适应毒,命名为PRV-JF株。分离株经细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第24代毒价达108.5TCID50/mL。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PRV阳性血清中和。电镜负染观察到病毒粒子呈椭圆或圆形外观,无囊膜的病毒粒子直径约110nm～150nm,有囊膜的成熟病毒粒子直径约150nm～180nm。PCR鉴定该毒株含有gE基因,其序列与GenBank登录的7株PRV同源性为97.7～100%。用不同剂量病毒培养物接种家兔于24h～72h内全部死亡。研究表明,PRV-JF分离株对易感动物具有高致病性,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究奠定基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒强毒株分离鉴定

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鹅源Ⅰ型禽副粘病毒JG97株HN基因的克隆与遗传分析

鹅源Ⅰ型禽副粘病毒JG97株HN基因的克隆与遗传分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘梅戴亚斌周生徐玲霞李文良冯太兰赵宝华中国农业科学院家禽研究所扬州市畜牧兽医站

根据GenBank中公开的鸡新城疫病毒(NDV)基因序列合成了一对引物,通过RT-PCR扩增出了鹅源Ⅰ型禽副粘病毒(APMV-1)JG97株的血凝素-神经氨酸酶基因(HN)基因。将扩增产物克隆到pGEM-T载体中,并进行了序列测定。扩增的基因片段含一个完整的、... 详细信息

根据GenBank中公开的鸡新城疫病毒(NDV)基因序列合成了一对引物,通过RT-PCR扩增出了鹅源Ⅰ型禽副粘病毒(APMV-1)JG97株的血凝素-神经氨酸酶基因(HN)基因。将扩增产物克隆到pGEM-T载体中,并进行了序列测定。扩增的基因片段含一个完整的、长1716bp的HN基因阅读框,编码的571个氨基酸中含有13个Cys残基和5个潜在的糖基化位点。同源性分析结果表明JG97株与SF02、GD/1/98/Go、JS/1/97/Go、JS/2/98/Go、JS/5/01/Go、NA-1、SD/5/04/Go和ZJ/1/00/Go等8个毒株的HN基因和氨基酸同源性分别为96.3%～98.2%和97.0%～98.9%,而与F48E9株分别为84.8%和89.8%,与LaSota株分别为82.1%和86.9%,表明JG97株与我国其它鹅源APMV-1毒株的亲缘关系较近,它们可能具有共同的来源,但与经典NDV毒株间差异较大。此外,鹅源APMV-1毒株HN蛋白中有6个独特的氨基酸变异,另有14个仅与Taiwan95和VOL95株共有的氨基酸变异。

关键词：鹅 Ⅰ型禽副粘病毒 HN基因遗传分析

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鸭瘟强毒株和疫苗毒株对诱导雏鸭肝脏IFN-αmRNA表达的动态定量研究

鸭瘟强毒株和疫苗毒株对诱导雏鸭肝脏IFN-αmRNA表达的动态定量研...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：杨发龙谢秀兰汤承景波岳华西南民族大学生命科学与技术学院川北医学院四川农业大学

本研究旨在探讨不同毒力的鸭瘟病毒(DPV)感染对机体IFN-αmRNA表达水平的影响,为DPV的感染与免疫机制提供理论依据。采用real-time PCR对DPV弱毒株及强毒株接种雏鸭肝脏中的IFN-α mRNA表达水平及病毒荷载量进行动态定量检测,结果显示,... 详细信息

本研究旨在探讨不同毒力的鸭瘟病毒(DPV)感染对机体IFN-αmRNA表达水平的影响,为DPV的感染与免疫机制提供理论依据。采用real-time PCR对DPV弱毒株及强毒株接种雏鸭肝脏中的IFN-α mRNA表达水平及病毒荷载量进行动态定量检测,结果显示,弱毒株能引起IFN-α mRNA在肝脏中快速、持续高水平表达,与空白对照相比,在接种后3h上升4倍,9h达到峰值(18.5倍),12h～144h保持在7.8～12.6倍之间,显著抑制了弱毒株的复制增殖,病毒荷载量较低,表现出感染的自限性;而强毒株只能引起IFN-α mRNA在肝脏中短时间、低水平表达,在感染后72h才达到峰值,为空白对照的4.1倍,持续至132h,以后迅速下降,至144h(濒死时)仅为2.0倍,致使强毒株在肝脏中快速增殖,病毒荷载量与鸭瘟的发病过程密切相关。这些结果提示鸭瘟弱毒株能诱导肝细胞高水平表达IFN-α mRNA,有助于机体建立有效的免疫保护,而强毒株可能通过某种机制抑制IFN-α的表达,利于其建立感染。本研究结果为进一步阐明鸭瘟病毒感染与免疫的分子机制提供了有用的基础数据。

关键词：鸭鸭瘟病毒α干扰素 mRNA 荧光定量PCR

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猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

猪圆环病毒1型血清抗体IPMA检测方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：黄立平刘长明危艳武张朝霞陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的检测。对IPMA抗原反应板的制备、被检血清稀释倍数、酶标抗体及底物显色液等进行了系统试验。用IPMA法对已知PCV1和PCV2参考阳性血清进行试验表明,血清稀释倍数≥1:100可消除两种病毒间存在的低水平交叉反应。该方法与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA检测符合率为88.9%,与其它几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、辽宁等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%、80.5%。PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。本研究建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,可为PCV1流行病学调查及血清抗体检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒1型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测

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重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘春国刘明刘大飞李洪涛杨涛孙恩成杜金玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室东北农业大学动物医学学院黑龙江八一农垦大学动物科技学院

为评价不同佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以利用反向遗传操作技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒疫苗株为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTMISA 70M VG(简称70M)和MontanideTMISA 206 VG(简称206)三种佐剂制备的灭活... 详细信息

为评价不同佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以利用反向遗传操作技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒疫苗株为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTMISA 70M VG(简称70M)和MontanideTMISA 206 VG(简称206)三种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡免疫攻毒试验。结果表明国产矿物油佐剂组与70M佐剂组都能对SPF鸡100%保护,206佐剂组仅能保护40%SPF鸡不死亡;从抗体水平上比较发现70M佐剂组稍好于国产矿物油佐剂组,但两组差异不显著,而两组与206佐剂组差异极显著。该三种佐剂组免疫鸭均能够诱导产生较高的抗体水平,70M佐剂组优于国产矿物油佐剂组和206佐剂组,但三者差异不显著。用70M系的8种佐剂MontanideTMISA 70 essaiMi(i=1-8)(简称70Mi)佐剂乳化的疫苗免疫SPF鸡,结果表明70M佐剂组效果最好,攻毒后免疫鸡不排毒、不发病、不死亡,统计学分析显示70M佐剂组与所有70Mi佐剂组差异均显著。试验结果表明70M佐剂可以作为新型疫苗佐剂用于流感疫苗的制备。

关键词：禽流感 H5N1亚型细胞苗佐剂

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弓形虫野毒株ROP5蛋白基因的克隆、表达及反应原性研究

弓形虫野毒株ROP5蛋白基因的克隆、表达及反应原性研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：乔军杨松涛高玉伟秦川华育平王立刚刘丹王玮周明夏咸柱军事医学科学院军事兽医研究所中国农业科学院兰州兽医研究所中国医学科学院实验动物研究所东北林业大学野生动物资源学院黑龙江东北虎林园

目的克隆和表达弓形虫虎源野毒株ROP5蛋白基因。方法运用RT-PCR技术从弓形虫感染虎腹水中扩增出ROP5基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。结果该基因全长1650bp,编码549... 详细信息

目的克隆和表达弓形虫虎源野毒株ROP5蛋白基因。方法运用RT-PCR技术从弓形虫感染虎腹水中扩增出ROP5基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析,并将目的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达。结果该基因全长1650bp,编码549个氨基酸。其中前24个氨基酸构成信号肽序列。与GenB ank中报道的RH株相比,有12个核苷酸有差异,导致7个氨基酸发生改变,两者核苷酸和推导氨基酸序列的同源性分别为99.2%和98.9%。转化重组质粒pETROP5的大肠杆菌BL21(DE3)在IPTG的诱导下,可表达出分子量为64.8ku的重组蛋白,并且能与弓形虫抗体发生血清学反应,表达量占菌体蛋白的15.6%。结论成功克隆和表达了弓形虫野毒株ROP5蛋白基因,表达的重组蛋白具有良好的反应原性。

关键词：弓形虫野毒株 ROP5基因表达反应原性

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实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究

实时定量PCR对猪圆环病毒2型感染猪体内病毒分布规律的研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：危艳武刘长明袁婧黄立平张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-GreenⅠ嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数R2=0.997... 详细信息

根据发表的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列设计了一对特异引物,并以克隆重组质粒作为阳性标准品,采用SYBR-GreenⅠ嵌合荧光染料建立了一种用于检测PCV2的实时定量PCR方法。该方法在107～101范围内具有良好的线性关系,相关系数R2=0.997,扩增效率E=0.920,对质粒标准品检测下限值为8.2拷贝/μL,检测变异系数低于2.0%;该方法与常规PCR及过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),其敏感性提高103倍以上。用本法对PCV2人工感染猪心、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结等组织中病毒核酸载量检测结果表明,多种脏器均可检测到病毒,但以腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏中病毒含量较高,表明病毒主要在免疫器官增殖,导致淋巴细胞耗损。用实时定量PCR对来自国内不同地区的28份临床发病猪病料进行病毒DNA定量检测,有半数以上病例病毒载量持在109～10拷贝/g数量级。实时定量PCR可用于PCV2核酸定量检测,为该病毒体内外定量检测提供了一种技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型实时定量PCR 病毒体内分布规律

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