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200 篇 会议
2 篇 期刊文献

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202 篇 电子文献
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200 篇 农学
- 196 篇 兽医学
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- 1 篇 林学
2 篇 医学
- 1 篇 基础医学(可授医学...
- 1 篇 临床医学
- 1 篇 公共卫生与预防医...
- 1 篇 医学技术（可授医学...

主题

12 篇 单克隆抗体
11 篇 序列分析
10 篇 原核表达
9 篇 prrsv
8 篇 猪圆环病毒2型
8 篇 猪繁殖与呼吸综合...
8 篇 表达
6 篇 克隆
6 篇 鉴定
5 篇 猪流行性腹泻病毒
5 篇 猪瘟病毒
5 篇 分离鉴定
5 篇 间接elisa
4 篇 混合感染
4 篇 猪流感病毒
4 篇 新城疫病毒
4 篇 分离
4 篇 病毒拯救
4 篇 rt-pcr
4 篇 基因型

机构

29 篇 中国农业科学院哈...
23 篇 东北农业大学
15 篇 华南农业大学
14 篇 中国农业科学院哈...
12 篇 中国农业科学院哈...
10 篇 中国农业科学院哈...
9 篇 新疆农业大学
7 篇 中国农业科学院哈...
6 篇 南京农业大学
6 篇 中山大学
5 篇 黑龙江八一农垦大...
5 篇 吉林农业大学
5 篇 中国农业科学院上...
4 篇 莱阳农学院
3 篇 河南科技大学
3 篇 延边大学
3 篇 青岛农业大学
3 篇 军事医学科学院军...
3 篇 中国农业科学院哈...
3 篇 哈尔滨维科生物技...

作者

15 篇 冯力
15 篇 孙东波
14 篇 时洪艳
14 篇 刘长明
13 篇 陈建飞
13 篇 危艳武
9 篇 陈化兰
9 篇 张超范
9 篇 童光志
8 篇 孔宪刚
8 篇 袁婧
8 篇 张朝霞
8 篇 刘胜旺
8 篇 毕英佐
8 篇 谢青梅
8 篇 佟有恩
8 篇 马静云
7 篇 陈峰
7 篇 仇华吉
7 篇 吴东来

语言

192 篇 中文
10 篇 英文

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我国海关从越南旅客行李中截获H5N1 HPAIV

我国海关从越南旅客行李中截获H5N1 HPAIV

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：李雁冰林志雄施建忠齐巧玲田国彬邓国华李泽君王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术重点实验室

目的对广州出入境检验检疫局从越南旅客行李中查获的禽蛋表面H5亚型禽流感病毒(AIV)荧光PCR阳性冲洗物中分离鉴定的3株H5N1亚型AIV(VN1,VN2,VN3)的病毒特征进行系统研究。方法静脉接种指数(IVPI)测定、水禽鼻腔感染实验、BALB/c鼠鼻腔... 详细信息

目的对广州出入境检验检疫局从越南旅客行李中查获的禽蛋表面H5亚型禽流感病毒(AIV)荧光PCR阳性冲洗物中分离鉴定的3株H5N1亚型AIV(VN1,VN2,VN3)的病毒特征进行系统研究。方法静脉接种指数(IVPI)测定、水禽鼻腔感染实验、BALB/c鼠鼻腔感染、序列测定与分析。结果静脉接种指数(IVPI)及序列分析表明其对鸡呈高致病力(HPAI),鼻腔感染SPF鸭,不引起临床症状,VN1和VN3感染后第3天可在鸭的多种脏器复制,而VN8只在肺中存在,3周后感染及同居鸭血清均可监测到HI抗体。相同剂量鼻腔感染非免疫鹅后,引起鹅死亡,病毒在鹅多脏器中复制,但喉头和泄殖腔两开放途径不向环境排毒。BALB/C鼠的感染实验表明其对鼠呈低致病力(MLD50>6.2log EID50)。序列分析及遗传演化显示其与1997年香港禽流感事件中引起禽和人死亡的病毒CK/HK/285/97、HK483、等病毒高度同源(97.1%～100%)。结论香港-97'类似病毒仍然存在于自然界中,因其对水禽的低致病力容易被忽视,但其存在具有巨大的潜在威胁。

关键词：禽蛋表面冲洗物 H5荧光PCR阳性分离鉴定香港-97'类似病毒

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以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒通用转移载体的构建及鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：王艳丽李俊辉姜永萍夏俊裴磊冉多良陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室新疆农业大学动物医学院

禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用,转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和... 详细信息

禽痘病毒作为活载体已经得到广泛的应用,转移栽体的构建是重组禽痘病毒构建的重要环节。本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt两个报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅠ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt的效果,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到此载体构建了转移载体pSY681-gfp-gpt-HA,应用TransIT-LT1 Transfection Reagent将此转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化构建了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、Western blot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达AIV HA蛋白的重组禽痘病毒r-FPV-gpt-gfp-HA9。

关键词：重组禽痘病毒绿色荧光蛋白黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶 HA基因

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禽呼肠孤病毒δNS和P17非结构蛋白作为ELISA鉴别诊断抗原的研究

禽呼肠孤病毒δNS和P17非结构蛋白作为ELISA鉴别诊断抗原的研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：谢芝勋秦春香谢丽基刘加波庞耀珊邓显文谢志勤广西兽医研究所

采用已构建好的PGEX-4T-1-δNS和PGEX-4T-1-P17质粒,原核表达了禽呼肠孤病毒(ARV)的两个非结构蛋白δNS和P17,将这两个蛋白进行包涵体纯化后作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9.3μg/mL和11.5μg/mL... 详细信息

采用已构建好的PGEX-4T-1-δNS和PGEX-4T-1-P17质粒,原核表达了禽呼肠孤病毒(ARV)的两个非结构蛋白δNS和P17,将这两个蛋白进行包涵体纯化后作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9.3μg/mL和11.5μg/mL;一抗血清的稀释度都是1:200;HRP酶标二抗羊抗鸡IgG稀释度为1:5000。初步建立了能检测ARV感染的δNS-ELISA、P17-ELISA方法,此外以δNS、P17两蛋白按以上确定的条件同时包被,建立δNS-P17-ELISA。然后分别用δNS-ELISA、P17-ELISA以及δNS-P17-ELISA三种方法对接种过ARV活病毒或灭活疫苗的33份SPF鸡血清进行检测,并分析其检测结果,结果表明以非结构蛋白建立的三种ELISA方法均能区分ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的抗体,进一步对这三种方法进行敏感性、特异性以及Excel分析比较,表明δNS-P17-ELISA方法能更有效的区分ARV感染与灭活疫苗免疫抗体。

关键词：禽呼肠孤病毒原核表达包涵体纯化间接ELISA

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猪圆环病毒2型Cap蛋白与白细胞介素-2重组腺病毒的构建与鉴定

猪圆环病毒2型Cap蛋白与白细胞介素-2重组腺病毒的构建与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：潘群兴何孔旺王永山黄克和江苏省农业科学院兽医研究所南京农业大学

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap),其中Cap含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。IL-... 详细信息

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合症的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap),其中Cap含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因。IL-2是重要的细胞因子佐剂,能够增强疫苗的免疫效果。本研究利用PCR技术将PCV2 Cap蛋白基因和IL-2-Cap串联基因分别克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-Cap和rAd-IL-2-Cap。测定其TCID50为1010.6/mL,1010.2/mL。利用RT-PCR、IFA、间接ELISA、Wester blot等方法以及IL-2ELISA试剂盒分别检测猪圆环病毒2型Cap蛋白和IL-2的体外表达情况,结果证明了两基因在腺病毒中获得了表达。该研究为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。

关键词： PCV Cap蛋白白细胞介素重组腺病毒

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miRNA表达载体的构建与抑制禽流感病毒(AIV)复制的研究

miRNA表达载体的构建与抑制禽流感病毒(AIV)复制的研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孟庆文刘丹秦红刚李文超曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心新疆农业大学动物医学学院

miRNA是一类内源性的长约21nt～25nt的短序列非编码单链RNA,可以通过部分互补或者完全互补结合到目的靶mRNA,以诱发蛋白质翻译抑制(翻译抑制子)或者介导目的mRNA的降解调节基因表达。根据这一特性,设计靶向禽流感病毒的miRNA编码序列,... 详细信息

miRNA是一类内源性的长约21nt～25nt的短序列非编码单链RNA,可以通过部分互补或者完全互补结合到目的靶mRNA,以诱发蛋白质翻译抑制(翻译抑制子)或者介导目的mRNA的降解调节基因表达。根据这一特性,设计靶向禽流感病毒的miRNA编码序列,使之与靶mRNA完全互补。将其克隆到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建单个或多个串联miRNA表达载体,分别为pcDNA6.2/NP、pcDNA6.2/PA、pcDNA6.2/PB2、pcDNA6.2/PA+NP和pcDNA6.2/PA+NP+PB2。鉴定正确后,将重组质粒转染MDCK细胞,禽流感病毒A/Goose/Guangdong1/96(H5N1)感染细胞。荧光显微镜判断转染效率,血凝(HA)试验和Real-timeRT-PCR检测抑制效果。荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达60%;试验血凝(HA)试验结果表明,重组质粒均能抑制流感病毒的复制,以pcDNA6.2/PA+NP+PB2的抑制效果最佳,它们抑制流感病毒增殖的能力分别62.5%、50%、62.5%和75%、81%;Real-timeRT-PCR结果表明,多个miRNA串联起来比单个miRNA有较高的抑制流感病毒复制的效果。

关键词： miRNA 串联表达病毒抑制 AIV

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几种中国鸡传染性支气管炎致弱毒株对流行毒株CK/CH/LDL/97I的保护作用评价

几种中国鸡传染性支气管炎致弱毒株对流行毒株CK/CH/LDL/97I的保...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张晓楠李成仁王钰刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北农业大学黑龙江八一农垦大学

本研究选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110和tl/CH/LDT3/03F120和1株同种毒株CK/CH/LDL/97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,... 详细信息

本研究选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110和tl/CH/LDT3/03F120和1株同种毒株CK/CH/LDL/97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK/CH/LDL/97Ⅰ与其他病毒的基因型关系。证明CK/CH/LDL/97Ⅰ属于有别于其它IBV毒株的一个独立的基因群。在此基础上,通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临床症状、病理变化观察以及气管和肾脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK/CH/LDL/97Ⅰ的免疫效力。结果显示,同种致弱毒株对CK/CH/LDL/97Ⅰ强毒的攻击可提供100%的免疫保护,临床和病毒分离均为阴性。异种毒株tl/CH/LDT3/03F120可提供100%的临床保护,但呼吸道病毒检出率达50%,表明对呼吸系统的保护效果不好。异种毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110免疫组临床发病率为50%,气管样品病毒检出率为100%。免疫保护。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因交叉保护同种异种

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猪圆环病毒2型分子标记毒株的构建及生物学特性研究

猪圆环病毒2型分子标记毒株的构建及生物学特性研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘长明危艳武张超范谭斌陆月华孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗... 详细信息

以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalⅠ制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株。采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原,其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致。鉴于新病毒基因组内插入一个SalⅠ酶切位点,可用限制性片断长度多态性分析法可与野生型病毒相鉴别。新毒株经细胞连续传80代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达107.0TCID50/mL。取第60代病毒培养物经肌肉和滴鼻途径接种35日龄抗体阴性仔猪4头,接种后表现出体温升高、进行性消瘦、被毛粗糙及体表淋巴结肿胀症状,迫杀后多种脏器中均能检测到病毒抗原与核酸。研究表明,利用感染性分子克隆手段构建带有遗传标记的PCV2新毒株,为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、分子诊断等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型遗传标记病毒生物学特性

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猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪瘟病毒等混合感染的调查与分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪瘟病毒等混合感染的调查与分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：王连想马静云谢青梅陈峰薛春宜曹永长毕英佐于康震华南农业大学动物科学学院中山大学生命科学学院中国兽医药品监察所

从华南地区PRRSV(NSP21594-1680缺失)阳性的23个规模场、42个个体养殖场和15个散养户,随机采集发病、同群猪血清197份、组织样品115份,调查猪群个体感染PRRSV情况,并对核酸阳性样品进行CSFV、PRV、PCV2、SIV检测,调查PRRSV与这些病毒混... 详细信息

从华南地区PRRSV(NSP21594-1680缺失)阳性的23个规模场、42个个体养殖场和15个散养户,随机采集发病、同群猪血清197份、组织样品115份,调查猪群个体感染PRRSV情况,并对核酸阳性样品进行CSFV、PRV、PCV2、SIV检测,调查PRRSV与这些病毒混合感染情况。结果表明:312份样品中224份PRRSV(NSP21594-1680缺失)核酸阳性,阳性率71.79%;PRRSV(NSP21594-1680缺失)核酸阳性样品中CSFV、PRV、PCV2核酸阳性样品分别为12份、2份、35份,阳性率分别为5.35%、0.89%、15.6%;80个场(群)均未检测到SIV核酸的存在。25个场(群)存在病毒混合感染,其中PRRSV/CSFV、PRRS/PRV、PRRSV/PCV2二重感染和PRRSV/CSFV/PCV2、PRRSV/PRV/PCV2三重感染猪场(群)百分率分别为5%、1.25%、21.25%和2.5%、1.25%。PRRSV(NSP21594-1680缺失)是造成猪场(群)重大损失的直接原因,并可与CSFV、PRV、PCV2等病毒出现混合感染,与PCV2混合感染比率较高。

关键词： PRRSV CSFV PCV2 PRV SIV 混合感染

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氢氧化铝纳米颗粒对鸡新城疫抗原的免疫佐剂效应

氢氧化铝纳米颗粒对鸡新城疫抗原的免疫佐剂效应

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：汤承黄兴杨发龙李明义范根成岳华西南民族大学四川省高等院校重点建设实验室成都农业科技职业学院中国动物卫生与流行病学中心

纳米颗粒因其吸附或包裹的抗原形成的复合物能迅速被巨噬细胞吞噬而显示出良好的疫苗佐剂效应。为评价纳米氢氧化铝对鸡的佐剂效应及机理,以新城疫病毒为抗原,制备纳米氢氧化铝和常规氢氧化铝佐剂灭活疫苗,分别免疫20日龄雏鸡,比较了免... 详细信息

纳米颗粒因其吸附或包裹的抗原形成的复合物能迅速被巨噬细胞吞噬而显示出良好的疫苗佐剂效应。为评价纳米氢氧化铝对鸡的佐剂效应及机理,以新城疫病毒为抗原,制备纳米氢氧化铝和常规氢氧化铝佐剂灭活疫苗,分别免疫20日龄雏鸡,比较了免疫后2d～24d的抗体滴度和外周淋巴细胞CD4、CD8分子mRNA的表达水平。结果显示,纳米氢氧化铝佐剂组抗体滴度在免疫后第10d达到峰值,为6.67±0.58,免疫保护期超过9d,常规氢氧化铝佐剂组抗体滴度在免疫后第10d达到峰值,为4.33±0.58,免疫保护期小于7d;与常规铝佐剂组相比,纳米铝佐剂组免疫后4d～17d的CD4以及10d～17d的CD8分子mRNA的表达水平显著提高,在峰值时后者的表达量为前者的2.0、1.9倍。本研究表明,纳米氢氧化铝佐剂能辅佐鸡体产生比常规氢氧化铝佐剂更为强烈的体液免疫和细胞免疫。

关键词：氢氧化铝纳米颗粒佐剂新城疫抗原 HI抗体 CD4 CD8 鸡

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猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：张朝霞刘长明危艳武袁婧黄立平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7... 详细信息

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化。制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%(143/150),特异性为91.2%(31/34),敏感性为96.5%(112/116);与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

关键词：猪圆环病毒2型重组蛋白间接ELISA 抗体检测试剂盒

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