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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会通知

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畜牧兽医学报 2005年第3期36卷 215-215,229页

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SYBR Green Ⅰ模式荧光RT-PCR检测新城疫病毒

SYBR Green Ⅰ模式荧光RT-PCR检测新城疫病毒

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：弋英陈继明孙承英鲍恩东王志亮农业部动检所山东青岛266032 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 农业部动检所山东青岛266032 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

针对新城疫病毒(NDV)F基因保守区内的核苷酸序列设计1对引物,用此对引物和标准NDV毒株(含NDV强毒和弱毒)的RNA为模板,建立并优化SYBRGreenⅠ模式荧光RT-PCRNDV检测方法.待测样品扩增产物的Tm值和阳性对照的Tm值相差在2℃范围之内判为阳... 详细信息

针对新城疫病毒(NDV)F基因保守区内的核苷酸序列设计1对引物,用此对引物和标准NDV毒株(含NDV强毒和弱毒)的RNA为模板,建立并优化SYBRGreenⅠ模式荧光RT-PCRNDV检测方法.待测样品扩增产物的Tm值和阳性对照的Tm值相差在2℃范围之内判为阳性.此法比文献报道的普通RT-PCR法更敏感,但是仍低于鸡胚接种分离病毒法。

关键词：新城疫病毒荧光RT-PCR检测核苷酸序列 NDV毒株

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检测H1～15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

检测H1～15禽流感病毒亚型的DNA芯片初步研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：王秀荣于康震刘丽玲乔传玲石锐孙凯孔宪刚陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究.通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒.从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片.待检病毒样品用TrozolLS提取RNA,反转录过... 详细信息

对流感病毒14个血凝素亚型的基因芯片检测技术进行了初步研究.通过RT-PCR克隆禽流感病毒血凝素基因片段,获得重组质粒.从重组质粒扩增大约500bp的DNA片段,浓缩后点到氨基化玻璃载体上,制成芯片.待检病毒样品用TrozolLS提取RNA,反转录过程中用Cy5标记样品cDNAs.将标记样品与芯片杂交,扫描芯片上待检样品与芯片上捕捉探针的结合位点,杂交信号与预期设想一致.结果显示,DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV血凝素亚型鉴别诊断方法。

关键词：禽流感病毒基因芯片检测血凝素亚型鉴定 RT-PCR 鉴别诊断

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伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gC基因全序列的克隆与分析

伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gC基因全序列的克隆与分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：娄高明敖敬群廖筱萍王珣章韶关学院英东生物工程学院广东韶关512005 中山大学生物防治国家重点实验室

根据伪狂犬病病毒Becker株的gC基因序列,设计并合成了1对特异性引物,通过PCR方法从我国伪狂犬病病毒代表毒株Fa株的基因组DNA中扩增到了1条约1.6kb的片段.将PCR扩增产物纯化后克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌,筛选阳性重组质粒.通过... 详细信息

根据伪狂犬病病毒Becker株的gC基因序列,设计并合成了1对特异性引物,通过PCR方法从我国伪狂犬病病毒代表毒株Fa株的基因组DNA中扩增到了1条约1.6kb的片段.将PCR扩增产物纯化后克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌,筛选阳性重组质粒.通过酶切鉴定,初步证明重组质粒pMD18-T-FC包含PCR扩增产物.将此重组质粒进行测序并与报道的gC基因序列比较,确证重组质粒pMD18-T-FC含有PRVFa株gC基因.此区段与PRVBecket株gC基因的DNA序列同源性为94.7％,推导的氨基酸序列同源性为92.2％.蛋白结构域分析显示PRVFa株gC糖蛋白具有典型的膜蛋白结构特征。

关键词：伪狂犬病病毒 gC基因 PCR扩增基因克隆基因序列

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猪瘟病毒黑龙江流行株的分离鉴定(黑龙江地区猪瘟病原检测)

猪瘟病毒黑龙江流行株的分离鉴定(黑龙江地区猪瘟病原检测)

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：杨林赵德明王秀荣中国农业大学动物医学院北京100094 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

作为养猪业的大敌,已肆虐百年以上,有关CSF的研究也已开展多年,使其在一定程度上得到有效控制.但值得注意的是,近些年来,世界各养猪国家流行的CSF在流行病学、临床症状和病理变化等方面出现了一些新的变化,CSF防治出现了许多新情况.根... 详细信息

作为养猪业的大敌,已肆虐百年以上,有关CSF的研究也已开展多年,使其在一定程度上得到有效控制.但值得注意的是,近些年来,世界各养猪国家流行的CSF在流行病学、临床症状和病理变化等方面出现了一些新的变化,CSF防治出现了许多新情况.根据我们近年对黑龙江省部分养猪场和养猪户的调查表明,该省因猪瘟引起的直接死亡或因猪瘟的隐性感染并发其它传染病引起的间接死亡占总死亡数的25％左右.许多猪场虽然按计划实行了疫苗免疫,在免疫过的猪群中仍时有猪瘟疫情发生,但许多变化不如过去典型.究其原因,可能与猪瘟病毒出现了新的变异株等因素有关.这些变异株的存在可导致免疫失败,也可引起新生仔猪的免疫耐受.一旦出现猪瘟病毒的持续性感染,在此地区相当长的时间内难以控制猪瘟的发生.特别使对猪瘟传播、演变及病毒的遗传变异情况在分子水平上还缺乏了解.因此,有必要对现阶段猪瘟的流行情况进行调查,分离出流行的猪瘟病毒毒株,为猪瘟的防治奠定理论基础。

关键词：猪瘟病毒流行株分离鉴定病原检测疫苗免疫免疫耐受

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不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

不同致病力禽流感病毒的细胞生长特性

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培... 详细信息

究用2个不同亚型的AIV感染Madin-Darbycaninekidney(MDCK)细胞,通过观察细胞病变、红细胞凝集实验、间接免疫荧光等探讨不同致病力禽流感病毒(AIV)在MDCK细胞上的生长特性;同时取这2株不同浓度(10-2～10-7)AIV在MDCK上培养72h的细胞培养上清0.1mL接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,37℃孵育48h～72h,无菌收获尿囊液,再做红细胞凝集实验.结果显示:这2个亚型AIV感染MDCK细胞后,血凝价(HA)最高为27,表现为较低的红细胞凝集活性,高致病力禽流感病毒(HPAIV)红细胞凝集活性较低致病力禽流感病毒(LPAIV)出现的要早一些;上述2个亚型AIV的MDCK培养上清接种鸡胚48～72h后,HA较高,在25.5～210之间,而且HPAIV-A/Goose/Guangdong/1/96高于LPAIV-A/Turkey/England/N28/73.这2株AIV均可致MDCK细胞发生病变,但病变程度和病变出现的时间不同,A/Goose/Guangdong/1/96[H5N1]感染MDCK细胞后3d可见明显病变,A/Turkey/England/N28/73[H5N2]感染MDCK细胞后4～5d可见明显病变;2个亚型不同浓度(10-2～10-7)AIV的间接免疫荧光结果均为阳性.以上结果表明HPAIV和LPAIV可致MDCK细胞病变,但红细胞凝集活性较低,接种鸡胚后红细胞凝集活性显著提高.

关键词：禽流感病毒 MDCK细胞红细胞凝集活性间接免疫荧光

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检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立

检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会

作者：李艳仇华吉王秀荣张守发朱庆虎李娜李国新童光志延边大学农学院吉林龙井133400 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 延边大学农学院吉林龙井133400 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用... 详细信息

GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法.应用该方法从猪瘟兔化弱毒株和猪瘟强毒石门株基因组中扩增出了大小分别为447bp和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447bp和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的细胞培养物以及正常细胞基因组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性.该方法可以检测出0.04pg的病毒RNA.对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似猪瘟弱毒.用限制性片段长度多态性(RFLP)对15份病料、猪瘟兔化弱毒株和石门株的RT-nPCR产物进行分析,发现石门株和14份黑龙江省强毒样品的扩增产物中均能被ApaⅠ切开,而猪瘟兔化弱毒株和1份黑龙江省弱毒样品无此识别位点,但有1个BanⅡ识别位点.从14份样品中抽检7份,对NS5B基因进行种系发生分析表明,它们均接近于石门株.本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测猪瘟病毒感染并把强毒和弱毒区分开,有助于减少未感染的免疫猪被误杀的可能,降低经济损失.

关键词：猪瘟病毒聚合酶链式反应限制性片段长度多态性基因组序列鉴别诊断

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中国畜牧兽医学会优秀论文奖

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动物保健 2005年第6期 16-16页

2005年5月22～23日，备受畜牧兽医学术界瞩目的中国畜牧兽医学会2005年学术年会在山东济南隆重召开，本届年会以养猪生产和疾病控制技术为主题，展现了我国猪业的主要科技成果。同时召开了第二届中国国际兽医兽药技术博览会暨畜禽展览... 详细信息

2005年5月22～23日，备受畜牧兽医学术界瞩目的中国畜牧兽医学会2005年学术年会在山东济南隆重召开，本届年会以养猪生产和疾病控制技术为主题，展现了我国猪业的主要科技成果。同时召开了第二届中国国际兽医兽药技术博览会暨畜禽展览会、小动物医学分会成立大会暨学术报告会、畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会。

关键词：中国畜牧兽医学会中国国际兽医兽药技术博览会 2005年论文学术报告会学术研讨会学术年会控制技术养猪生产科技成果成立大会生物技术学术界展览会第二届小动物学分免疫畜禽

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复合益生菌发酵非常规饲料对肥育猪生产的影响

复合益生菌发酵非常规饲料对肥育猪生产的影响

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低碳经济与高效养殖——第六次全国饲料营养学术研讨会暨动物营养学分会成立三十周年大会

作者：刘瑞丽陈小莲卢永红徐建雄上海交通大学农业与生物学院上海海洋大学水产与生命学院上海市兽医生物技术重点实验室上海市农业科学院畜牧兽医研究所

本文研究了非常规饲料经复合益生菌发酵的品质的变化,并且进行了饲养试验,探讨了复合益生菌发酵非常规饲料对肥育猪生产性能、消化性能、抗氧化应激能力和免疫性能的影响。(方法)将豆粕、酒糟粉、菜籽粕和血粉按一定比例混合,加入5%的... 详细信息

本文研究了非常规饲料经复合益生菌发酵的品质的变化,并且进行了饲养试验,探讨了复合益生菌发酵非常规饲料对肥育猪生产性能、消化性能、抗氧化应激能力和免疫性能的影响。(方法)将豆粕、酒糟粉、菜籽粕和血粉按一定比例混合,加入5%的发酵液,调水分35%左右,用锡箔袋密封,30℃恒温培养箱中发酵,经0、3、6、10、15天后对样品的各项指标进行测定。然后,试验选择65kg左右的三元杂交<正>本文研究了非常规饲料经复合益生菌发酵的品质的变化,并且进行了饲养试验,探讨了复合益生菌发酵非常规饲料对肥育猪生产性能、消化性能、抗氧化应激能力和免疫性能的影响。(方法)将豆粕、酒糟粉、菜籽粕和血粉按一定比例混合,加入5%的发酵液,调水分35%左右,用锡箔袋密封,30℃恒温培养箱中发酵,经0、3、6、10、15天后对样品的各项指标进行测定。然后,试验选择65kg左右的三元杂交

关键词：复合益生菌发酵饲料生长性能消化性能抗氧化免疫性能

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鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定

鸭β-防御素9单克隆抗体的制备和鉴定

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低碳经济与高效养殖——第六次全国饲料营养学术研讨会暨动物营养学分会成立三十周年大会

作者：李子瑞邵昱昊韩宗玺刘晓丽刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室

禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因此,需... 详细信息

禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因此,需要寻找一种灵敏度高,准确性好,特异性强的检测方法。单克隆抗体的制备无疑是最好的选择。而关于鸭AvBD9蛋白的单抗制备国内外尚未见到报道。本研究首先<正>禽抗菌肽属β-防御素类,为防御素三大亚类(α、β、θ)之一,在禽的先天性免疫和获得性免疫中均发挥重要作用。目前为止,禽β-防御素的研究与检测还仅停留在转录水平上,检测的灵敏度和准确性都不是很高,而且检测手段也相当繁琐。因此,需要寻找一种灵敏度高,准确性好,特异性强的检测方法。单克隆抗体的制备无疑是最好的选择。而关于鸭AvBD9蛋白的单抗制备国内外尚未见到报道。本研究首先

关键词：鸭抗菌肽重组鸭β-防御素9蛋白单克隆抗体

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