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120 篇 会议
2 篇 期刊文献

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主题

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10 篇 表达
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6 篇 禽流感
6 篇 单克隆抗体
5 篇 免疫
5 篇 核酸疫苗
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4 篇 原核表达
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机构

13 篇 中国农业科学院哈...
12 篇 南京农业大学
11 篇 中国农业科学院哈...
9 篇 东北农业大学
6 篇 农业部动物检疫所...
6 篇 中国农业科学院哈...
6 篇 解放军军事医学科...
5 篇 军事医学科学院军...
5 篇 江西农业大学
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4 篇 上海市农业科学院...
4 篇 中国农业大学
4 篇 扬州大学
4 篇 农业部动物检疫所
3 篇 韶关学院
3 篇 农业部动物检疫所...
3 篇 解放军军事医学科...
3 篇 华中农业大学
3 篇 云南省热带亚热带...

作者

18 篇 王志亮
10 篇 陈化兰
8 篇 王秀荣
7 篇 于康震
7 篇 孔宪刚
7 篇 童光志
6 篇 刘雨田
6 篇 鲍恩东
6 篇 金宁一
6 篇 刘思国
6 篇 王春来
6 篇 吴晓东
6 篇 夏咸柱
5 篇 郑颖
5 篇 杨美峰
5 篇 邱薇
5 篇 刘胜旺
5 篇 李作生
5 篇 李江
5 篇 张秀华

语言

119 篇 中文
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猪圆环病毒2型重组Cap蛋白在昆虫杆状病毒中的表达

猪圆环病毒2型重组Cap蛋白在昆虫杆状病毒中的表达

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：刘长明陆月华张超范刘焕章中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学研究中心中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学研究中心

猪圆环病毒2型(PCV2)基因组包含2个开放阅读框架(ORFS),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap)。为了在昆虫细胞表达Cap蛋白,本研究采用PCR扩增PCV2-ORF2编码基因,将PCR产物插入到昆虫杆状病毒转移载体上,经酶... 详细信息

猪圆环病毒2型(PCV2)基因组包含2个开放阅读框架(ORFS),其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒衣壳蛋白(Cap)。为了在昆虫细胞表达Cap蛋白,本研究采用PCR扩增PCV2-ORF2编码基因,将PCR产物插入到昆虫杆状病毒转移载体上,经酶切反应及DNA序列分析得到验证。重组质粒与昆虫杆状病毒线性基因组混合,转染到昆虫细胞(Sf-21)进行基因重组,经3次病毒蚀斑克隆,获得高效表达Cap蛋白的重组杆状病毒,毒价可达1.28×108 pfu/ml。采用SDS-PAGE凝胶电泳分析表明,重组Cap融合蛋白分子量为32.8 kDa,占总蛋白含量的17.2%。免疫印迹试验分析表明,重组Cap蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,证明该重组蛋白具有良好的免疫活性反应。本研究为进一步进行该病毒分子诊断、亚单位疫苗以及分子生物学等研究奠定了基础。

关键词：猪圆环病毒2型重组衣壳蛋白杆状病毒表达

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表达传染性支气管炎病毒S1基因重组禽痘病毒的构建

表达传染性支气管炎病毒S1基因重组禽痘病毒的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：田占成孙永科王云峰智海东刘胜旺王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681-IBVS1。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBV... 详细信息

将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681-IBVS1。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBV Sl蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有x-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明,获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传,间接免疫荧光和Western-blot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90 ku的具有免疫学活性的IBVS1糖蛋白。

关键词：传染性支气管炎病毒重组鸡痘病毒 Sl基因

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牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达

牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：张秀华刘思国宫强王春来王牟平彭永刚沈国顺郭洋郭设平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所沈阳农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体pET30a(+)的KpnI/EcoRI位点,构建重组表达质粒rpET64,转化到大肠杆菌DE3内,... 详细信息

以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体pET30a(+)的KpnI/EcoRI位点,构建重组表达质粒rpET64,转化到大肠杆菌DE3内,以IPTG进行诱导,终浓度为1mmol/L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的rMPB64融合蛋白相对分子量为30.4kD,与实测相符。牛分枝杆菌rMPB64的成功表达为牛结核病的诊断及新型疫苗的研究奠定了基础。

关键词：牛分枝杆菌 mpb64基因克隆表达

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禽流感H5、H9二价灭活疫苗(H5N1 Re-1株,H9N2 Re-2株)研究及应用

禽流感H5、H9二价灭活疫苗(H5N1 Re-1株,H9N2 Re-2株)研究及应用

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：田国彬李雁冰施建忠冯菊艳孙项南礼源于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

本研究利用已经构建的高度致弱、具有高度鸡胚适应性以及具有广泛抗原针对性的重组禽流感H5N1亚型种毒Re-1株和H9N2亚型种毒Re-2株为种毒,研制出新型禽流感H5、H9二价灭活疫苗。该疫苗免疫鸡无任何不良反应,免疫效果确实。免疫后7d产生... 详细信息

本研究利用已经构建的高度致弱、具有高度鸡胚适应性以及具有广泛抗原针对性的重组禽流感H5N1亚型种毒Re-1株和H9N2亚型种毒Re-2株为种毒,研制出新型禽流感H5、H9二价灭活疫苗。该疫苗免疫鸡无任何不良反应,免疫效果确实。免疫后7d产生可检测的HI抗体;免疫后14 d 100%抵抗H5强毒致死性攻击;免疫后21 d至210 d天产生并保持坚强免疫保护力,H5强毒和H9亚型病毒攻击后免疫鸡不出现临床症状,并阻止病毒从呼吸道和消化道排泄;免疫后44周,H5和H9 HI抗体仍大于4 log2。2℃-8℃条件下保存,该灭活疫苗有效期可达一年半。实验室研究、区域试验结果均表明,该疫苗是当前用于我国禽流感疫病预防的安全、高效、无副作用的理想疫苗。

关键词：禽流感 H5N1 H9N2 二价灭活疫苗

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鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：包晓玮王笑梅高宏雷付朝阳张厚双彭志伟中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本研究以传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5’端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurate RT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA。序... 详细信息

本研究以传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5’端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurate RT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA。序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5,,3,端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,,基因组B节段全长共2 843个核苷酸,包括5,、3端的非编码区和一个开放阅读框。将IBDV-Gx株的A节段全长基因组及B节段全长基因组分别克隆入PMD-18载体,构建成PMD-A、PMD-B两个带有T7启动子的重组质粒。两个重组质粒线性化后,进行体外转录然后共电转染于鸡胚成纤维细胞37℃培养72 h并传代。收获细胞培养物传代后分别用RT-PCR、间接免疫荧光、蚀斑试验等方法进行鉴定,结果用RT-PCR扩增出了VP3及VP5基因片段,间接免疫荧光检测到了特异性的荧光抗体,蚀斑试验结果计算蚀斑形成单位为3×103PFU/mL。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒 Gx株全长cDNA 感染性分子克隆

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H7亚型高致病性禽流感病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立

H7亚型高致病性禽流感病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

用纯化的H7亚型禽流感病毒灭活后多次免疫山羊采血分离血清制备包被抗体,以自制的H7亚型特异性单克隆抗体作为一抗,建立了检测H7亚型流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。经实验证明ELISA最适工作条件的如下:羊血清1:1000倍稀释(1μg/m... 详细信息

用纯化的H7亚型禽流感病毒灭活后多次免疫山羊采血分离血清制备包被抗体,以自制的H7亚型特异性单克隆抗体作为一抗,建立了检测H7亚型流感病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。经实验证明ELISA最适工作条件的如下:羊血清1:1000倍稀释(1μg/mL);单抗1:40000倍稀释(1μg/mL);酶标抗体最适工作浓度1:5 000;单抗作用时间1.5 h;酶标抗体作用时间1.5 h。通过统计学检验证明建立的检测方法有良好的重复性、特异性和稳定性。

关键词： H7亚型禽流感抗原捕获ELISA

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禽流感病毒H9与H5亚型血凝素基因的分子鉴别

禽流感病毒H9与H5亚型血凝素基因的分子鉴别

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：黄兵马秀丽王莉莉李玉峰刘玉山陈溥言山东省农业科学院家禽研究所山东省农业科学院家禽研究所山东省农业科学院家禽研究所山东省农业科学院家禽研究所山东省农业科学院家禽研究所南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究。参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579 bp和177 bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别。该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、... 详细信息

建立简便的一步法RT-PCR检测方法,对禽流感病毒(AIV)的血凝素(HA)分型进行了研究。参照AIV的HA基因序列设计了1对引物,对H9和H5亚型AIV的扩增产物大小分别为579 bp和177 bp,很容易通过凝胶电泳进行辨别。该引物与EDSV、NDV、IBV、IBDV、REV、REOV及SPF鸡肌肉组织的核酸无交叉反应,对Genebank收录的部分毒株HA序列的互补性分析结果进一步核实了检测引物的特异性。敏感性分析发现,从50 pg的AIV总RNA中亦能检测到目的条带。这些结果表明,此次利用1对引物建立的一步法RT-PCR简便适用,可以在一个反应管中同时将H9和H5亚型AIV进行快速检测和分型。同时,两个亚型的扩增产物均包含了裂解位点在内的HA基因序列,可通过测序推导出氨基酸顺序以判定H5或H9亚型禽流感病毒的潜在毒力。

关键词：禽流感病毒血凝素基因一步法RT-PCR 分型

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H5亚型高致病性禽流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

H5亚型高致病性禽流感病毒抗原捕捉ELISA诊断方法的建立

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：曲站红邓国华王桂芹郝婧张立春田国斌于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室全国畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室

本实验利用已制备禽流感H5亚型的单抗,通过对ELISA反应各步最佳工作条件的确定,建立了以多抗作为包被抗体,单抗作为一抗的ELISA诊断方法,对各个工作组分的工作条件作了优化,各个工作组分的最佳工作条件为:羊血清:1:1 600倍稀释(1μg/mL)... 详细信息

本实验利用已制备禽流感H5亚型的单抗,通过对ELISA反应各步最佳工作条件的确定,建立了以多抗作为包被抗体,单抗作为一抗的ELISA诊断方法,对各个工作组分的工作条件作了优化,各个工作组分的最佳工作条件为:羊血清:1:1 600倍稀释(1μg/mL);单抗1:10 000稀释(1μg/mL);酶标抗体最适工作浓度为1:5 000倍稀释;一抗反应时间1.5 h;酶标抗体作用时间1.5 h。并经特异性试验、敏感性试验的统计学证明该方法特异性、敏感性良好,可以用于H5亚型高致病力禽流感病毒的诊断。

关键词：禽流感病毒 H5亚型 ELISA

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犬腺病毒基因疫苗及实验免疫研究

犬腺病毒基因疫苗及实验免疫研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：邱薇范泉水李作生郑颖杨美峰尹惠琼王双印李江夏咸柱成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所成都军区联勤部军事医学研究所解放军军事医学科学院军事兽医研究所

根据犬腺病毒纤突基因的核苷酸序列设计并合成了一对引物,以CAV-2弱毒疫苗株的DNA为模板,对纤突基因进行PCR扩增,PCR产物经纯化与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒pTCAV-F,然后用BamH I和HindⅢ双酶切,回... 详细信息

根据犬腺病毒纤突基因的核苷酸序列设计并合成了一对引物,以CAV-2弱毒疫苗株的DNA为模板,对纤突基因进行PCR扩增,PCR产物经纯化与T载体进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选反向插入的重组质粒pTCAV-F,然后用BamH I和HindⅢ双酶切,回收1.8 Kb的目的片段后与同样双酶切的真核表达载体pcDNA3连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选重组质粒pcCAV-F,并进行了序列测定。5只9月龄CAV抗体阴性的犬分别接种不同剂量的pcCAV-F及空质粒,8w接种一次,每次接种前采血,测定血清效价,在第三次接种4w后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7d及14 d时采血,测定血清效价。接种pcCAV-F疫苗的犬攻毒后除一只发病外,其余不发病,而接种空质粒的对照犬则全部发病,说明所构建的核酸疫苗(pcCAV-F)能对犬产生较好的免疫保护。

关键词：核酸疫苗犬腺病毒纤突基因免疫研究

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具有HI活性的抗H7亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

具有HI活性的抗H7亚型流感病毒特异性单克隆抗体的研制

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会

作者：邓国华张立春李雁冰王桂芹曲站红于康震陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室中国畜牧兽医总站中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生生物技术国家重点实验室

以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳... 详细信息

以H7N2亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Hebei/01/03(H7N2)(HB103)作为免疫原,浓缩纯化后免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,融合阳性细胞用血凝抑制(HI)方法进行检测,阳性细胞株经三代克隆纯化后,获得2株能稳定分泌抗血凝素特异性Hl单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4CB、BBA。两株杂交瘤细胞株产生的小鼠腹水和细胞培养液上清的HI滴度分别是213、211和27、28。与其他具有血凝活性的禽类病毒以及其他14个HA亚型的禽流感病毒的交叉HI试验表明:这两三株单抗具有良好的禽流感病毒亚型特异性;与其他H7亚型流感病毒分离株的HI试验和中和试验证实这三株单抗具有良好的交叉性和中和活性。该亚型特异性单克隆抗体的研制成功为H7亚型禽流感病毒的疫情病原学快速诊断提供了物质基础。

关键词：禽流感 HI 单克隆抗体

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