以小鼠脑组织cDNA文库为模板用PCR扩增C1qA、C3a和C3b等补体组分的cDNA序列,克隆到细菌双杂交载体pBT中获得重组诱饵质粒pBT-C1qA、pBT-C3a和pBT-C3b,分别与本实验室已经构建的猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的全基因...
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以小鼠脑组织cDNA文库为模板用PCR扩增C1qA、C3a和C3b等补体组分的cDNA序列,克隆到细菌双杂交载体pBT中获得重组诱饵质粒pBT-C1qA、pBT-C3a和pBT-C3b,分别与本实验室已经构建的猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的全基因组细菌双杂交文库中的膜蛋白、分泌蛋白、蛋白酶和肽酶等pTRG重组质粒共转化大肠杆菌XL1-Blue MRF' Kan菌株,进行细菌双杂交实验,系统筛选和鉴定SS2的补体结合蛋白.目前,已经筛选到候选C1qA、C3a和C3b的补体结合蛋白2个、4个和1个,正在进行相互作用验证和互作结构域的鉴定.C4、C6、C3aR、C5aR、FH等补体的结合蛋白也在筛选之中.这些补体结合蛋白的鉴定对深入研究SS2的补体逃逸机制奠定了的基础.
为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot 结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫...
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为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot 结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬茵体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有"KTPAE-R"保守序列,对应于*** SH29755株和SH0165株的469位～475位的氨基酸残基.对OppA氨基酸序列比对结果表明***与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1％～74.5％,本研究结果为进一步研究***感染的病原学诊断建立了良好的基础.
禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是2001年发现的导致鸡大肝大脾病或肝炎脾大综合症的主要病原,主要引起30～72周龄的蛋鸡和种鸡的死淘率升高(1-4％)和产蛋率下降(20％～40％).此外,该病毒引起的亚临床感染在鸡群中也非常普遍,当...
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禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是2001年发现的导致鸡大肝大脾病或肝炎脾大综合症的主要病原,主要引起30～72周龄的蛋鸡和种鸡的死淘率升高(1-4％)和产蛋率下降(20％～40％).此外,该病毒引起的亚临床感染在鸡群中也非常普遍,当饲料或外界环境等因素发生改变时导致鸡群发病.目前,由于仍然没有一个合适有效的禽HEV体外培养系统,因此该病毒的诊断和防控仍然存在问题.
VI产生短暂的抗体，因此抗原V区可以作为禽HEV血清学诊断的主要靶抗原区。另外，通过动物实验，ORF2蛋白的aa476~513和as 513~570区域包含两个中和抗原表位，两个表位可以延缓禽HEV感染鸡只后的排毒。而在抗原V区，针对两个抗原表位的单抗也可以体外捕获禽HEV，预示抗原V区中也可能存在着中和抗原表位。上述禽ITV的ORF2蛋白抗原表位的分析为禽HEV诊断抗原的设计及其免疫反应机制研究奠定了基础。
本研究构建一种新型电化学免疫传感器用于检测H5N1亚型禽流感病毒.利用氧化石墨烯(GO)负载H5N1亚型禽流感病毒多克隆抗体(PAb-H5N1)及牛血清白蛋白(BSA)作为信号放大材料.结果表明:以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学免疫传感器的灵敏度比不用此纳米复合物作为信号放大的高256倍.以PAb-H5N1-GO-BSA纳米复合物作为信号放大材料构建的电化学免疫传感器对H5N1亚型禽流感病毒的检测限为:2-15 HA unit/50μL,检测线性范围为:2-15～2-8 HA unit/50μL.此传感器特异性好,灵敏度高,在病原微生物快速检测领域具有良好的应用前景.
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