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主题

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7 篇 单克隆抗体
7 篇 分离鉴定
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5 篇 生物学特性
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4 篇 基因检测
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机构

28 篇 中国农业科学院哈...
13 篇 西北农林科技大学
10 篇 东北农业大学
8 篇 南京农业大学
7 篇 黑龙江八一农垦大...
5 篇 中国农业科学院兰...
5 篇 扬州大学
5 篇 广西壮族自治区兽...
4 篇 江苏省农业科学院...
4 篇 中国农业科学院上...
4 篇 江苏省农业科学院...
4 篇 中国农业科学院哈...
4 篇 华中农业大学
3 篇 青岛农业大学
3 篇 中国农业科学院哈...
3 篇 北京市农林科学院...
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2 篇 广东省兽医公共卫...
2 篇 广东省农业科学院...
2 篇 福建省农业科学院...

作者

12 篇 周恩民
10 篇 童光志
7 篇 谢志勤
7 篇 范晴
7 篇 谢芝勋
7 篇 谢丽基
7 篇 邓显文
7 篇 庞耀珊
7 篇 刘加波
7 篇 罗思思
6 篇 郑浩
5 篇 陈化兰
5 篇 单同领
5 篇 童武
5 篇 王永山
5 篇 刘长明
5 篇 仇华吉
5 篇 柳金雄
5 篇 欧阳伟
4 篇 陈洪岩

语言

128 篇 中文
1 篇 英文

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排序：

PEDV N蛋白的原核表达与ELISA方法的建立

PEDV N蛋白的原核表达与ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：孔宁潘溪童武李国新郑浩周恩民单同领童光志中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室上海200241 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室上海200241 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

为建立猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA检测方法,本研究从新分离PEDV流行株(JS-2013)中扩增其N基因,并将N基因克隆至pColdⅠDNA原核表达载体中,构建pColdⅠDNA-N重组质粒,经过IPTG诱导表达可知该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为5... 详细信息

为建立猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA检测方法,本研究从新分离PEDV流行株(JS-2013)中扩增其N基因,并将N基因克隆至pColdⅠDNA原核表达载体中,构建pColdⅠDNA-N重组质粒,经过IPTG诱导表达可知该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为52 *** blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性.将纯化的N蛋白作为包被抗原建立PEDV ELlSA检测方法,并且对各种检测奈件进行优化,优化后确定N蛋白的最佳包被量为2 μg/mL,最佳包被条件为37℃包被2h,封闭最佳条件为5％脱脂乳37℃封闭2h,最佳血清稀释度为1∶200,血清最佳孵育时间为37℃孵育20 min,二抗最适稀释度为1∶40 000,临界值为0.28.本试验初步建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法,并为进一步研制PEDV的ELISA抗体检测试剂盒及血清学调查奠定了良好的基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白原核表达间接酶联免疫吸附测定抗体检测

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北方地区犬细小病毒分离鉴定与VP2基因序列分析

北方地区犬细小病毒分离鉴定与VP2基因序列分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：仇铮张晓战李志杰刘大飞刘春国郭冬春刘培欣田进曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150001

犬细小病毒(CPv)是一种感染犬和野生犬科动物而导致急性接触性传染病的重要病原,对中国乃至世界的养犬业造成了较大的危害,为此在初生幼犬的免疫程序中免疫犬细小病毒病是必不可少的. 本研究旨在探讨犬细小病毒(CPV)在北方城市(北京... 详细信息

犬细小病毒(CPv)是一种感染犬和野生犬科动物而导致急性接触性传染病的重要病原,对中国乃至世界的养犬业造成了较大的危害,为此在初生幼犬的免疫程序中免疫犬细小病毒病是必不可少的. 本研究旨在探讨犬细小病毒(CPV)在北方城市(北京市、吉林省和黑龙江省)的流行和变异情况，将临床上经胶体金试纸检测为阳性的病犬直肠棉拭子21份处理后接种猫肾传代细胞(F81细胞)，分离到2株病毒，对其进行了血凝试验(HA)、半数组织培养物感染剂量(TCID50)的测定，理化性质鉴定，提取分离株DNA并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其一特异性片段和VP2全序列，并与Genbank上登录的CPV毒株进行比对。虽然本研究分离到的2株分离株均为CPV-2a型，但CPV抗原位点的变异性强，所以加强对北方地区CPV流行株的研究甄别工作是切实可行而且完全必要的，对于现代养犬业健康发展具有十分重要的现实意义，同时也为CPV新型疫苗的研发打下基础。

关键词：犬细小病毒分离鉴定基因序列变异性

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牛疱疹病毒1型gE基因在杆状病毒表达系统pFB-LIC-Bse内的表达

牛疱疹病毒1型gE基因在杆状病毒表达系统pFB-LIC-Bse内的表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：黄秀芬姜良王天坤张林波李永清北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097 吉林农业大学生物学院吉林长春130118 昌平区动物预防疫病控制中心北京102200 吉林农业大学生物学院吉林长春130118

为获得具有生物活性的牛疱疹病毒1型(BHV-1)病毒囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV-1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.5 kb的gE基因片段,再将gE基因克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-L1C-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE.将pFB-gE转化到杆... 详细信息

为获得具有生物活性的牛疱疹病毒1型(BHV-1)病毒囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV-1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.5 kb的gE基因片段,再将gE基因克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-L1C-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE.将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH 10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE.将该重组杆粒的DNAE转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒.Westem blot及间接免疫荧光试验(IFA)分析结果显示,重组杆状病毒在SF9中表达了分子量大小约为43 ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与鼠抗His标签单克隆抗体和鼠抗BHV-1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性.本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定基础.

关键词：牛疱疹病毒1型囊膜糖蛋白杆状病毒表达系统基因表达

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DDX19参与PRRSV复制及在NLRP3介导的炎症反应中的功能

DDX19参与PRRSV复制及在NLRP3介导的炎症反应中的功能

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：李江南李园园胡亮黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

炎症反应在机体天然免疫和获得性免疫中有重要作用.NLRP3介导的炎症小体通过激活caspase-1,促进白介素-18(IL-18)、白介素1β(IL-1β)等细胞因子的分泌介导炎症病理的发生.发现高致病蓝耳病病毒(HP-PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后能形... 详细信息

炎症反应在机体天然免疫和获得性免疫中有重要作用.NLRP3介导的炎症小体通过激活caspase-1,促进白介素-18(IL-18)、白介素1β(IL-1β)等细胞因子的分泌介导炎症病理的发生.发现高致病蓝耳病病毒(HP-PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后能形成NLRP3介导的炎症小体,激活caspase-1和增强IL-1β的分泌,但HP-PRRSV如何激活炎症反应小体的形成机制还不是很清楚. 在本研究中，发现PRRSV的RNA能激活NLRP3炎症小体。利用抗猪斑点样蛋白ASC 的单克隆抗体做免疫沉淀并用质谱分析免疫沉淀蛋白，发现DDX19是HP-PRRSV介导NLRP3炎症小体的一个新的组分，参与NLRP3炎症小体的形成。DDX19与NLRP3相互作用，不与ASC和caspase-1作用。深入的研究发现，DDX19还是一个RNA结合蛋白，能与PolyI:C和PRRSV的RNA结合。进一步研究发现，DDX19能识别PRRSV的RNA，可能通过NLRP3激活caspase-1，促进IL-1β的分泌。令人感兴趣的是，发现DDX19与PRRSV的NSP2和NSP10相互作用，直接参与PRRSV复制复合体的形成。利用siRNA敲低和过表达试验，发现DDX19的蛋白水平与PRRSV的复制相关。根据以上试验结果，认为DDX19A参与PRRSV复制并在NLRP3介导的炎症反应中有重要的作用。

关键词：猪病蓝耳病病毒炎症反应免疫学基因复制炎性小体

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基于iTRAQ定量蛋白质组学技术的鸭疫里默氏杆菌差异蛋白质组学研究

基于iTRAQ定量蛋白质组学技术的鸭疫里默氏杆菌差异蛋白质组学研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：袁建丰李林林孙敏华董嘉文向荣胡奇林广东省农业科学院动物卫生所广东广州510640 广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

病原菌的致病作用是多种毒力因子参与下的病原菌-宿主相互作用的动态过程.一般来说,由于环境条件的显著差异,病原菌在体内外所表达的蛋白质是明显不同的,相信这些差异表达的蛋白质与病原菌的致病作用密切相关.因此,研究病原菌致病相关... 详细信息

病原菌的致病作用是多种毒力因子参与下的病原菌-宿主相互作用的动态过程.一般来说,由于环境条件的显著差异,病原菌在体内外所表达的蛋白质是明显不同的,相信这些差异表达的蛋白质与病原菌的致病作用密切相关.因此,研究病原菌致病相关的蛋白质差异表达谱,对于阐明病原菌的致病机制以及寻找潜在的药物靶标和疫苗靶分子具有非比寻常的意义. 本研究小组在前期的研究工作中发现铁离子是鸭疫里默氏杆菌重要的生长因子，能调控该菌毒力因子在宿主体内的特异性表达，对鸭疫里默氏杆菌的致病作用起着至关重要的作用。基于上述研究结论，本项目拟在体外营造限铁环境来模拟病原菌体内感染条件，采用自动化、高通量的iTRAQ鸟枪法蛋白质组学技术对限铁和丰富铁环境中鸭疫里默氏杆菌蛋白质组进行比较分析，以期寻找新的、潜在毒力因子，并建立与鸭疫里默氏杆菌致病作用相关的蛋白质组。

关键词：鸭疫里默氏杆菌差异蛋白质组学鸟枪法

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表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对小鼠的免疫原性研究

表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：马良王琪田美杰王喜军翟洪月于文会葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克... 详细信息

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克隆到载体pBRN-FL-Pmel上,构建了表达狂犬病病毒糖蛋白重组新城疫病毒全长cDNA克隆pBRN-FL-ERA-GP.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,拯救重组病毒***-PCR检测证实重组病毒rLa-ERA-GP基因组中含有GP基因;western blot和IFA检测结果均表明GP基因在新城疫载体中得到了正确、稳定的表达;大剂量接种BALB/c小鼠不会引起小鼠发病和生长阻滞,并能诱导出高水平ERA特异中和抗体反应;加强免疫后可有效抵御致死剂量RV街毒对BALB/c小鼠的攻击.重组病毒rLa-ERA-GP有望成为防制狂犬病更加安全、有效的,新型重组基因工程活载体疫苗.

关键词：狂犬病病毒反向遗传操作系统重组新城疫病毒糖蛋白表达活载体疫苗免疫原性

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌"茵影"疫苗免疫效力评价

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌"茵影"疫苗免疫效力评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：李刚崔宁周泷谢芳张艳禾王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点试验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病.本实验首先将已经制备好的胸膜肺炎放线杆菌菌影(... 详细信息

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的以肺出血、坏死和纤维素性渗出为主要病变的高度接触性传染病,国内主要使用灭活疫苗预防和控制本病.本实验首先将已经制备好的胸膜肺炎放线杆菌菌影(水相)与佐剂MONTANIDETM ISA 760VG(油相)混合,制备成油乳剂的菌影疫苗(5×109 CFU/mL).颈部肌肉注射免疫3-4周龄的健康仔猪,二免后用胸膜肺炎放线杆菌血清1型和7型强毒菌株通过滴鼻途径进行攻毒实验.同时设未免疫阴性对照组.根据临床症状、抗体水平、攻毒后仔猪的存活率以及肺脏病理变化综合评价胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗的免疫保护效果。结果表明，肌肉注射胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗可以激发动物体内产生较高滴度的抗体，二免后10夭100倍稀释血清抗体效价达到1.701±0.116，与对照组差异显著(p＜0.05)。攻毒后仔猪体温变化不明显，一般稳定在39.8℃以下。对APP1型和7型的攻毒保护率均达到80％，肺部病变不明显，远远好于对照组。本研究制备的胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗是新型的基因工程疫苗，具有良好的应用前景。

关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌茵影疫苗免疫效力评价

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乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究

乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：郑旭晨郑浩郭亦非刘飞梁超童武单同领于海童光志中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了探求乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主茵中不稳定遗传的影响因子,本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1 bp～2913 bp为研究对象,分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用.在5'端,分析片段中潜在的原核启动子... 详细信息

为了探求乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主茵中不稳定遗传的影响因子,本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1 bp～2913 bp为研究对象,分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用.在5'端,分析片段中潜在的原核启动子序列,通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段;在3'端,通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区,获得3'末端不同的cDNA片段.将各片段克隆入pCRBluntⅡ-TOPO载体,转化大肠杆菌,于37℃条件下培养.结果显示,片段73 bp～2913 bp、97 bp～2913 bp、355 bp～2913 bp及1 bp～933 bp、1 bp～1275 bp能够在转化茵中稳定遗传;含有其它片段39 bp～2913 bp、54 bp～2913 bp及1 bp～1800bp、1 bp～1971bp的重组细菌不能在37℃条件下生长;片段1 bp～1600bp虽然能够在转化菌中传代,但是出现不规律突变.以上结果表明,软件所预测各原核启动子片段中,基因组73 bp至118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关,且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响;在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列.

关键词：猪乙型脑炎病毒遗传不稳定性基因克隆潜在启动子活性区域毒性蛋白编码序列位置

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鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆的构建

鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：文辉强武永淑张晓娜廉传江赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨 150001

以鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)FJ/2011分离株基因组为模板,构建带遗传标记的双拷贝串联基因组感染性克隆(pEGFP-2DuCV).应用分子生物学技术,以GenBank数据库中本实验室测得的DuCV全基因组序列(登录号KF726087)为模板,以DuCV ORF1... 详细信息

以鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)FJ/2011分离株基因组为模板,构建带遗传标记的双拷贝串联基因组感染性克隆(pEGFP-2DuCV).应用分子生物学技术,以GenBank数据库中本实验室测得的DuCV全基因组序列(登录号KF726087)为模板,以DuCV ORF1中的EcoRI酶切位点(GAATTC代替GAGTTC)为上下游引物5'端,经PCR反应得到DuCV全基因组,克隆构建于pMD 18-T载体中得到pMD-DuCV.以pMD-DuCV为模板,分别设计两对引物(引物位置不变,引物一的上下游分别含有XhoI和EcoRI位点,引物二的上下游分别含EcoRI和HindⅢ位点),分别经PCR反应得到两个DuCV全基因组,PCR产物分别用自带酶切、pEGFP-C1载体由XhoI和HindⅢ酶切后,三片段回收连接后得到双拷贝DuCV串联基因组感染性克隆pEGFP-2DuCV.经鸡胚成纤维细胞系(DF-1)与鸡马立克病毒肿瘤淋巴细胞系(MDCC-MSB1)体外转染试验验证,转染后12h均可观察到EGFP发出较强的绿色荧光.体外转染后验证病毒蛋白的表达、病毒传代以及超微形态学观察等是下一步进行病毒拯救研究重点.

关键词：鸭圆环病毒双拷贝串联基因组感染性克隆

来源：评论

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几种猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的比较与应用

几种猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的比较与应用

引用

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：张志慧刘长明危艳武吴洪丽黄立平李胜斌刘建波张辉王一平刘丹国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了比较5种猪圆环病毒2型(PCV2)ELISA抗体检测试剂盒的质量,本研究采用IPMA法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和及阴性血清30份对这些试剂盒的敏感性、特异性及符合率进行比较.结果显示,这5种试剂盒的敏感性为74.0％～96.0％,特异... 详细信息

为了比较5种猪圆环病毒2型(PCV2)ELISA抗体检测试剂盒的质量,本研究采用IPMA法标定不同PCV2抗体效价的阳性血清50份和及阴性血清30份对这些试剂盒的敏感性、特异性及符合率进行比较.结果显示,这5种试剂盒的敏感性为74.0％～96.0％,特异性为83.3％～96.7％,符合率为77.5％～96.3％,其中以竞争ELISA试剂盒和Ingenasa公司的试剂盒质量最好.此外,本研究采用竞争ELISA试剂盒对PCV2疫苗免疫猪血清抗体检测表明,疫苗免疫21 d后抗体阳性率达50％,免疫28 d抗体阳性率达100％;对PCV2人工感染猪血清抗体检测显示,病毒接种后第28 d抗体阳性率为30.0％,第42 d阳性率为100％;对临床送检猪血清抗体检测表明,PCV2抗体阳性率介于45.0％～76.5％.本研究通过对5种PCV2抗体检测试剂盒比较及应用显示竞争ELISA试剂盒可以作为检测PCV2疫苗免疫及临床感染猪血清抗体的有效方法.

关键词：猪圆环病毒2型酶免疫吸附测定抗体检测试剂盒

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