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血根碱恢复耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素敏感性的作用及机制研究

血根碱恢复耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素敏感性...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：马强陈诗奇王嗣涵王梓乐张帅孙博彦覃麟茜杨柳江海洋中国农业大学动物医学院

[目的]为揭示天然产物血根碱(Sanguinarine,SAN)恢复耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)对β-内酰胺类抗生素敏感性的内在机制。[材料与方法]通过药敏试验了解金葡菌分离株的耐药情况;借助计... 详细信息

[目的]为揭示天然产物血根碱(Sanguinarine,SAN)恢复耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)对β-内酰胺类抗生素敏感性的内在机制。[材料与方法]通过药敏试验了解金葡菌分离株的耐药情况;借助计算化学手段开展基于β-内酰胺酶BlaZ的分子特征分析及天然产物抑制剂的高通量虚拟筛选,并结合协同抗菌试验进行确证;利用分子模拟、荧光淬灭及等温滴定量热技术(ITC)分析相互作用;结合透射电镜(TEM)进行细菌形态学观察;以荧光定量PCR (qRT-PCR)方法明确SAN所影响的基因及调控通路。[结果与讨论]结果显示:金葡菌分离株对青霉素类药物具有最为突出的耐药率,青霉素(100%),氨苄西林(82.61%)。同时,对菌株携带的β-内酰胺酶BlaZ进行克隆表达及分子特征分析,可知SER70、LYS73及ASN132等催化水解腔中的残基具备高度保守性并参与β-内酰胺类药物的水解。此外,浓度为2～4μg/mL的SAN能使标准株MRSA 33591及分离株对氨苄西林的最小抑菌浓度(MIC)降低约16倍。SAN也可与BlaZ的LYS73和TYR105等残基键合而产生互作,在长达1200 ns的全原子动力学模拟中表现出持续的稳定性。等温滴定量热技术测定可知,SAN与β-内酰胺酶BlaZ存在直接的结合活性。值得注意的是,TEM观察发现SAN可显著影响MRSA细胞壁的组织和交联,即在2～4μg/ml的SAN浓度下,存在PBP2a蛋白的MRSA菌株细胞壁出现明显的粗糙和散乱,呈缺乏交联的形貌,而敏感菌株(MSSA)细胞壁并未发生上述显著变化,且在qRT-PCR试验结果中获得一致性发现,表明SAN可通过影响PBP2a依赖及非依赖途径扰动MRSA细胞壁的稳态。综上,本研究中的天然产物血根碱可通过多重生物学效应恢复MRSA菌株的药物敏感性,包括影响β-内酰胺酶BlaZ和PBP2a的水平及功能,破坏细胞壁合成及代谢稳态等方面,可为MRSA菌株的防控和耐药性的缓解提供有效的策略。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌血根碱 β-内酰胺类抗生素 β-内酰胺酶细胞壁

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复合亚氯酸钠泡腾片的消毒效果及其对菌群结构的影响研究

复合亚氯酸钠泡腾片的消毒效果及其对菌群结构的影响研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：吕珍林张旭财曾振灵熊文广广东省兽药研制与安全评价重点实验室/国家兽药安全评价(环境评估)实验室/国家兽医微生物耐药性风险评估实验室/华南农业大学兽医学院

引言集约化水产养殖模式伴随着更频繁的疾病发生,给水产养殖业造成了重大的经济损失。水产消毒是预防和控制水产动物疾病的重要措施,还能去除一定量的抗生素耐药细菌(ARB)和抗生素耐药基因(ARGs)。本试验评价复合亚氯酸钠泡腾片的消毒效... 详细信息

引言集约化水产养殖模式伴随着更频繁的疾病发生,给水产养殖业造成了重大的经济损失。水产消毒是预防和控制水产动物疾病的重要措施,还能去除一定量的抗生素耐药细菌(ARB)和抗生素耐药基因(ARGs)。本试验评价复合亚氯酸钠泡腾片的消毒效果,分析其对ARB和ARGs的去除作用和对养殖水体菌群结构的影响,旨在为实际生产用药提供依据。方法按照《水产养殖用消毒剂药效试验技术指导原则》的要求筛选中和剂,并通过悬液定性、定量杀灭细菌试验,探究不同因素对复合亚氯酸钠泡腾片消毒效果的影响,最后研究其在现场消毒的应用效果。结果实验室试验结果表明得出1%硫代硫酸钠溶液可作为复合亚氯酸钠泡腾片溶液中和剂。复合亚氯酸钠泡腾片溶液的杀菌效果随着有效浓度的升高、作用时间的延长而增强;温度(4～40℃)和pH(2～10)对杀菌效果无明显影响,随着有机物浓度的提高,杀菌率也随之下降。模拟现场消毒试验结果显示当有效浓度为3 mg/L时,作用120 min,对爱德华氏菌ATCC15947的杀灭率达99.99%;作用10min,对嗜水气单胞菌ATCC35654的杀灭率达100%。现场消毒试验结果显示用量为200片/亩时,作用30min对自然菌的杀灭率达100%。以携带抗生素耐药基因sul1和tet(A)的大肠杆菌作为指示菌研究复合亚氯酸钠泡腾片溶液对其的去除效果。综合表明,随着投入浓度的增大,ARB的去除数量增大,细菌膜损伤的比例也随之增大,作用1h时,去除ARB数量可达4.2-logio CFU/mL;而随着浓度的增大,ARGs的去除效果并没有显著的变化。将相同来源的养殖水体分装至养殖水箱,随机分成对照组和试验组,试验组加入3mg/L的复合亚氯酸钠泡腾片,消毒1h和3h后采集样本进宏基因组测序。结果显示,与对照组相比,有益菌属Lactobacillus和Cetobacterium相对丰度升高,但Enterococcus和Pseudomonas等带有条件致病菌的菌属相对丰度也随之升高。结论复合亚氯酸钠泡腾片消毒剂消毒效果良好,能够有效去除ARB和ARGs,对养殖水体菌群结构具有一定的改良作用。

关键词：亚氯酸钠消毒效果抗生素耐药菌抗生素耐药基因菌群结构

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甲霜灵对映体在乌鳢体内的立体选择性药代动力学和残留消除规律研究

甲霜灵对映体在乌鳢体内的立体选择性药代动力学和残留消除规律研...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：周豪张媚玉单奇黄河清郑光明尹怡中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部水产品质量安全风险评估实验室

[目的]甲霜灵（metalaxyl）是一种手性酰胺类杀菌剂,广泛用于预防和治疗真菌感染引起的各种淡水鱼类疾病。甲霜灵两个对映体（R-甲霜灵和S-甲霜灵）在毒性和生物活性上具有显著差异,但在水产养殖中仍以外消旋体形式使用。本文基于优化... 详细信息

[目的]甲霜灵（metalaxyl）是一种手性酰胺类杀菌剂,广泛用于预防和治疗真菌感染引起的各种淡水鱼类疾病。甲霜灵两个对映体（R-甲霜灵和S-甲霜灵）在毒性和生物活性上具有显著差异,但在水产养殖中仍以外消旋体形式使用。本文基于优化的甲霜灵对映体分离分析方法,分别研究了外消旋体甲霜灵和高活性对映单体R-甲霜灵给药后,两个对映单体在乌鳢体内的立体选择性药代动力学和残留消除特征,为该手性兽药在临床上的合理使用提供理论依据。[方法]试验乌鳢共150尾（体重300 g左右）,随机分为两组,分别用外消旋体甲霜灵（9 mg/L）和单一对映体R-甲霜灵（4.5 mg/L）药浴2 h。于给药后不同时间点采集血浆和组织（肌肉、肝脏和肾脏）样品。血浆样品用0.1%甲酸乙腈沉淀蛋白、离心,上清液过膜上机分析。组织样品用0.1%甲酸乙酸乙酯萃取,正己烷除脂,氮气吹干后,残渣用流动相复溶,过膜上机分析。采用EnantioPak?Y1R手性色谱柱（150 mm×4.6 mmi.d.,5μm）进行对映体分离,以乙腈-水-甲酸（75/25/0.1,v/v/v）为流动相进行等度洗脱,甲霜灵-D6为内标,在正离子模式下进行多反应监测分析。采用WinNonlin软件的非房室模型进行拟合,分别计算R-甲霜灵和S-甲霜灵的药代动力学参数。[结果]外消旋体甲霜灵给药时,R-甲霜灵和S-甲霜灵的药代动力学参数如下:达峰浓度(C)分别为4.76μg/mL和5.70μg/mL,药时曲线下面积（AUC）分别为25.4μgh/mL和32.1μgh/mL,消除半衰期(t)分别为20.8 h和25.4h。甲霜灵在组织中的浓度依次为肾脏>肝脏>肌肉,并且在三种组织中S-甲霜灵的浓度都高于R-甲霜灵。R-甲霜灵给药时,在血浆和组织中均未检测到S-甲霜灵,表明甲霜灵在乌鳢体内未发生对映体之间的转化;R-甲霜灵的药代动力学参数C、AUC和t分别为4.21μg/mL、22.0μgh/mL和17.1 h。[结论]甲霜灵在乌鳢体内的消除具有立体选择性,R-甲霜灵消除更快;并且甲霜灵在乌鳢体内不会发生对映体之间的转化。鉴于此,临床上使用高效低毒的R-甲霜灵代替外消旋体甲霜灵可能是更好的选择。

关键词：甲霜灵对映体乌鳢立体选择性药代动力学残留消除规律

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三代长读宏基因组测序揭示蛋鸡粪便中高流行耐药基因的遗传背景

三代长读宏基因组测序揭示蛋鸡粪便中高流行耐药基因的遗传背景

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：彭凯王志强李瑞超扬州大学兽医学院

宏基因组测序技术的快速发展,使得在不培养条件下进行微生物群落菌群结构及耐药基因组成的研究成为可能。传统的二代短读宏基因组测序,通常需要进行组装分析,忽略了大部分微生物的基因组信息;而三代长读宏基因组测序可以从单分子DNA的...

宏基因组测序技术的快速发展,使得在不培养条件下进行微生物群落菌群结构及耐药基因组成的研究成为可能。传统的二代短读宏基因组测序,通常需要进行组装分析,忽略了大部分微生物的基因组信息;而三代长读宏基因组测序可以从单分子DNA的角度对复杂微生物群落中的遗传信息进行全面解析,逐渐成为宏基因组学研究的高效技术手段。本研究从河南省4个不同饲养日龄的规模蛋鸡养殖场分别采集了30份粪便样品,每3个样品等量混匀,对混合后的粪便样本进行了宏基因组提取,每个鸡场选取4-6个样本进行三代宏基因组测序;使用Centrifuge软件对三代宏基因组数据进行物种注释及丰度计算;以NCBI AMRfinder和ISFinder为比对数据库,使用Blastn对宏基因组中耐药基因及插入序列进行查找,并以每Gb数据中耐药基因的总拷贝数为单位进行耐药基因定量;使用PCoA进行组间物种、耐药基因、插入序列丰度的差异分析,并通过普鲁克分析确定物种组成与耐药基因的关联;通过LEfSe分析确定组间样品的差异物种及耐药基因;使用Plasflow进行携带耐药基因的单分子DNA序列的遗传定位分析;使用R语言脚本进行单分子水平的耐药基因与插入序列的关联分析;构建NCBI非冗余质粒数据库,进行宏基因组中耐药质粒序列的查找分析。不同生长时期的蛋鸡粪便微生物群落构成在门、属、种水平均存在显著差异,不同生长时期的蛋鸡粪便中耐药基因丰度均处于较高水平（3085-5202 gc/Gb）,但存在明显的组成结构差异,且耐药基因组成差异受菌群结构的影响较为显著（M=0.177,p<0.001）,粪便物种多样性越丰富,携带的相应的耐药基因越多样;单分子DNA序列遗传环境分析发现,变形菌门细菌中的耐药基因多由质粒携带,而厚壁菌门细菌中的耐药基因由质粒、染色体共同携带,质粒携带的耐药基因与染色体携带的耐药基因存在明显差异,且质粒携带的耐药基因种类更丰富;共现分析表明,与其他耐药基因或插入序列共发生频率较高的耐药基因通常具有较高的丰度;部分样品中高流行耐药基因的发生与广宿主小质粒的流行显著相关。本研究首次从三代宏基因组的角度对处于不同生长时期蛋鸡的粪便菌群及耐药基因流行特征进行了研究,并通过单分子分析解析了粪便菌群中高丰度耐药基因的遗传背景,为控制畜禽养殖生产中耐药基因的传播提供了新见解。

关键词：

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赤芍对MRSA引起细胞焦亡的抑制作用及机制

赤芍对MRSA引起细胞焦亡的抑制作用及机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：高毅玖黄筱琳赵筱蒙薛喜博孙英健北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室

[引言]金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性菌,可以分泌多种毒素,激活多种细胞并诱导产生大量炎性因子引起细胞焦亡。中药赤芍具有抗炎、抗损伤等多种药理作用,体内实验表明赤芍可以降低金葡菌感染时炎性因子IL-1β的表达,从而降低细胞炎性... 详细信息

[引言]金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性菌,可以分泌多种毒素,激活多种细胞并诱导产生大量炎性因子引起细胞焦亡。中药赤芍具有抗炎、抗损伤等多种药理作用,体内实验表明赤芍可以降低金葡菌感染时炎性因子IL-1β的表达,从而降低细胞炎性反应。本文探究中药赤芍对金葡菌感染***926细胞诱导细胞焦亡的作用及内在机制。[材料与方法]CCK-8法检测细胞活性;检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量;Hochest 33324/PI荧光染色;Western blot检测细胞焦亡关键蛋白GSDMD、caspase-1、caspase-4、casepase-5;炎性因子IL-1β、IL-18表达情况。[结果与讨论]以1×10～4 CFU/mL MRSA ST-59感染***926细胞建立血管内皮细胞焦亡模型。结果可见,***926细胞活性显著降低、细胞LDH释放量、PI阳性细胞率、GSDMD-NT表达量显著升高,说明MRSA ST-59感染时细胞活性降低,GSDMD被切割活化,在细胞膜穿孔,诱导细胞焦亡。WB检测结果表明IL-1β、IL-18表达量显著升高,说明MRSA ST-59感染可以诱导内皮细胞释放大量炎性因子,诱导后续炎症反应。检测细胞焦亡相关通路蛋白caspase-1、4、5发现,caspase-1表达量无显著性差异;caspase-4、5表达量较对照组显著增加,说明MRSA ST-59并非通过caspase-1介导的经典通路诱导焦亡,而是通过caspase-4、5非经典通路诱导细胞焦亡。分别以500、1000、2000μg/mL赤芍干预MRSA ST-59感染的***926细胞,结果显示,***926细胞活性、LDH释放量、PI阳性细胞率均随赤芍提取物浓度升高而增加,且存在显著性差异,说明赤芍干预可显著减轻细胞膜损伤,使细胞活性呈剂量依赖性升高。WB检测结果可得GSDMD-NT、IL-1β、IL-18表达量均呈现剂量依赖性下降,说明赤芍提取物可以减轻GSDMD被切割的程度,减少金葡菌诱导的GSDMD-NT活化,抑制细胞膜穿孔程度,进而剂量依赖性减少细胞焦亡的发生,降低金葡菌感染导致的炎症因子释放,减轻炎症反应的发生。细胞焦亡非经典通路蛋白caspase-4、5的表达量降低,说明赤芍通过抑制caspase-4、5的活化,从而通过干预非经典通路抑制细胞焦亡的发生。[结论]赤芍提取物可以抑制GSDMD活化,抑制IL-1β及IL-18的产生,通过抑制非经典细胞焦亡通路,降低MRSA ST-59对*** 926的损伤,维护内皮细胞屏障的结构完整性,从而促进机体对于金葡菌感染的天然免疫,避免产生大规模炎性风暴达到减轻机体炎症反应及损伤的目的。

关键词：赤芍细胞焦亡 MRSA EA.hy926

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产CTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌在新疆动物上的流行特点

产CTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌在新疆动物上的流行特点

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：王芋丹王昊蕊王磊队森·木拉力别克苏战强谢金鑫米晓云佟盼盼新疆农业大学动物医学学院新疆畜牧科学院/新疆动物疫病研究重点实验室兽医研究所

在动物上大量使用抗菌药物导致细菌产生耐药性,可通过食物链或与伴侣动物的接触而传递给人类,给临床治疗细菌性感染带来困难,若不加以控制,会给人类带来严重的疾病负担和经济负担。产CTX-M的菌株,不仅会对β-内酰胺类抗生素表现耐药,还... 详细信息

在动物上大量使用抗菌药物导致细菌产生耐药性,可通过食物链或与伴侣动物的接触而传递给人类,给临床治疗细菌性感染带来困难,若不加以控制,会给人类带来严重的疾病负担和经济负担。产CTX-M的菌株,不仅会对β-内酰胺类抗生素表现耐药,还会携带其他耐药表型,近些年,在人和动物上中均有检出携带CTX-M且同时对多黏菌素耐药的菌株。多黏菌素是一种多肽类抗生素,被称为治疗革兰氏阴性菌的"最后一道防线"。为探究产CTX-M且对多黏菌素耐药大肠杆菌（***）在新疆动物上的流行特点。采用PCR方法得到新疆猪、牛、羊、骆驼、马、鸡、鹅、鸽、犬和猫源产CTX-M ***分离株,采用K-B纸片法对产CTX-M ***进行多黏菌素敏感性检测。对产CTX-M且对多黏菌素耐药***进行药物敏感性检测,并利用PCR方法检测相应的耐药基因;通过滤膜接合试验对产CTX-M且对多黏菌素耐药***耐药表型的水平转移进行研究。148株产CTX-M ***中bla,76.4%;bla,20.3%;2.7%同时携带bla和bla;未检出bla。148株产CTX-M ***中有40株对多黏菌素耐药（除牛源）,这些多黏菌素耐药***对氨苄西林、阿莫西林、复方新诺明、头孢曲松、四环素、链霉素、头孢噻肟和庆大霉素的耐药率为82.5%～100%;对氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、阿奇霉素、阿米卡星和头孢吡肟耐药率为20.0%～67.5%;对哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁和亚胺培南的耐药率为2.5%～10.0%,40株受试菌均为多重耐药,且以八重（13/40,32.5%）耐药居多,九重（8/40,20.0%）和六重（4/40,10.0%）耐药次之。40株受试株中,其他各耐药基因的检出情况,mcr-1,12.5%;bla,60%;floR,70%;tetA,55%;tetG,17.5%;sul2,37.5%;sul1,17.5%;aadA1,35%;strA,32.5%;aac,17.5%;未检出mcr2～10、bla、bla、strB和tetE。40株受试菌均可同时水平转移头孢噻肟和多黏菌素耐药表型至受体菌J53。产CTX-M且对多黏菌素耐药***在新疆动物上均呈现多重耐药表型,携带多种耐药基因,其携带的头孢噻肟和多黏菌素耐药表型可能由未知基因编码定位在未知质粒上且具备水平转移的能力,应当谨慎使用β-内酰胺类和黏菌素药物,以期减缓耐药性的发展。

关键词：产CTX-M大肠杆菌多黏菌素耐药流行特征动物新疆

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发酵黄芪和生药黄芪中皂苷及黄酮类化合物含量检测

发酵黄芪和生药黄芪中皂苷及黄酮类化合物含量检测

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：秦哲李建喜李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/甘肃省中兽药工程技术研究中心/甘肃省新兽药工程重点实验室/农业农村部兽用药物创制重点实验室

膜荚黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.)经分离自鸡消化道的益生菌M9发酵,冻干制成发酵黄芪。临床研究表明,1%发酵黄芪连续60天添加于黄羽肉鸡日粮,具有促生长和提高饲料利用率的效果。化学成分分析研究表明,黄芪经发酵后多糖...

膜荚黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.)经分离自鸡消化道的益生菌M9发酵,冻干制成发酵黄芪。临床研究表明,1%发酵黄芪连续60天添加于黄羽肉鸡日粮,具有促生长和提高饲料利用率的效果。化学成分分析研究表明,黄芪经发酵后多糖含量及得率分别提高84.92%和59.34%。目的:本研究检测了发酵黄芪和生药黄芪中皂苷及黄酮类化合物含量,为建立发酵黄芪质量标准提供理论依据。材料与方法:称取含等量黄芪的发酵黄芪和生药黄芪粗粉,用20倍量80%乙醇于80℃回流提取2h,醇提液制成浸膏。采用香草醛-硫酸法于544nm处测定吸光度,绘制黄芪甲苷标准曲线,检测发酵黄芪和生药黄芪醇提浸膏中皂苷含量。参照2020版《中国药典》(一部)黄芪有效成分含量测定方法,应用高效液相色谱法分别检测发酵黄芪和生药黄芪中黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量。结果与讨论:实验结果表明,发酵黄芪和生药黄芪浸膏收率分别为40.26%和38.77%,黄芪皂苷提取率分别为5.58%和6.54%。取适量浸膏溶于50倍量纯水,上样于AB-8大孔树脂柱,用4倍柱体积80%乙醇洗脱,测定出生药黄芪皂苷和发酵黄芪皂苷的动态吸附量为32.6171 mg/g和26.2467 mg/g,80%乙醇对AB-8吸附的发酵黄芪皂苷的洗脱率可达81.23%。高效液相色谱法测定发酵黄芪、生药黄芪中黄芪甲苷含量分别为0.049%和0.087%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为0.030%和0.040%。含有等量黄芪的发酵黄芪和生药黄芪中黄芪甲苷的含量分别为0.063%和0.087%,毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为0.038%和0.040%。发酵前后毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量差异不显著,而发酵后黄芪甲苷的含量降低了27.6%。结论:综合高效液相色谱法检测黄芪甲苷含量结果与醇提浸膏中黄芪皂苷含量检测结果发现,黄芪经发酵后皂苷类成分含量有所降低,推测微生物在发酵过程中利用皂苷类成分进行生物转化或者部分皂苷类成分在高温或弱酸性发酵环境中发生降解,具体机制有待进一步探究。实验结果可为发酵黄芪产品的质量控制提供参考。

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金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法研究

金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：沈悦许颖于洋黄显会华南农业大学兽医学院

[目的]反刍动物的细菌性肺炎,细菌性肠炎以及其他全身性感染疾病发生率较高,金霉素作为广谱抗生素,广泛用于兽医临床中动物疾病的防控。但金霉素在瘤胃中会对瘤胃细菌多样性及菌群组成结构产生影响,从而可能导致动物不反刍、瘤胃鼓胀,... 详细信息

[目的]反刍动物的细菌性肺炎,细菌性肠炎以及其他全身性感染疾病发生率较高,金霉素作为广谱抗生素,广泛用于兽医临床中动物疾病的防控。但金霉素在瘤胃中会对瘤胃细菌多样性及菌群组成结构产生影响,从而可能导致动物不反刍、瘤胃鼓胀,消化障碍等一系列不良的反应。本研究通过提供一种金霉素过瘤胃颗粒质量评价控制方法,建立合适的体外溶出评价标准,制定对应的溶出限度,减少药物对瘤胃菌群的影响,控制金霉素过瘤胃颗粒的产品工艺与质量。[方法]按照《中华人民共和国兽药典》溶出度测定法第一法(篮法),将称取好的金霉素过瘤胃颗粒和金霉素预混剂(以金霉素本品计约各10 mg),分别投于干燥的转篮内,每个溶出杯分别加入1000 mL pH1.2盐酸缓冲液、pH6.8磷酸缓冲液进行体外溶出试验;其中,pH1.2盐酸缓冲液溶出介质模拟真胃环境,pH6.8磷酸缓冲液模拟瘤胃环境。溶出条件设定为为37℃,100转/min。分别在对应时间点对溶出液和滤渣进行取样,溶出液经过滤后取续滤液;滤渣用少量水冲洗2次,滤干。将滤渣转移至50 mL容量瓶中,加2 mol/L的盐酸溶液2 mL浸润,然后用0.01 mol/L盐酸溶液稀释至刻度,置于磁力搅拌器上搅拌30分钟,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液,注入高效液相色谱仪,记录色谱峰,计算释放度。在pH1.2盐酸缓冲液的取样时间点为2小时;在pH6.8磷酸缓冲液的取样时间为5小时。本研究采用C18 (4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为水:2 mol/L磷酸溶液:N,N-二甲基甲酰胺=700:20:280,紫外检测波长:365 nm,柱温:35℃,流速:1.0 mL/min,进样量:10μL。[结果]将pH1.2盐酸缓冲液溶出介质中溶出度大于85%,pH6.8磷酸缓冲液溶出介质中溶出度低于25%设为溶出限度,金霉素过瘤胃颗粒在模拟瘤胃液(pH6.8磷酸缓冲液)中,5小时内的体外释放度不超过25%(7.40%),金霉素预混剂的释放度达70.37%;在模拟真胃液(pH1.2盐酸溶液)中,金霉素过瘤胃颗粒2小时内释放度大于85%(99.62%),金霉素预混剂的释放度达99.51%。故金霉素预混剂不具备过瘤胃的效果,而满足以上溶出限度的金霉素过瘤胃颗粒具有良好的过瘤胃效果。[结论]金霉素过瘤胃颗粒在瘤胃环境中几乎不释放,在真胃环境中完全释放,可避免药物提前释放对瘤胃菌群的影响,保护瘤胃环境。本研究制定的溶出限度可用于金霉素过瘤胃颗粒的质量控制和工艺分析,为金霉素过瘤胃颗粒的研制和体外处方筛选提供了合理的方法参考。

关键词：金霉素颗粒剂过瘤胃质量评价

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基于分子对接虚拟筛选方式筛选猪TLR7的潜在激动剂

基于分子对接虚拟筛选方式筛选猪TLR7的潜在激动剂

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：刘畅李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业农村部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室

[目的]Toll样受体7 （Toll-like receptor 7,TLR7）要参与单链RNA的识别,在胞内病原体感染中发挥作用。TLR7激动剂能够促进免疫细胞成熟,刺激宿主免疫应答,间接发挥抗病毒作用,还表现出一定的抗菌和抗肿瘤活性。因此,本研究目的在于通... 详细信息

[目的]Toll样受体7 （Toll-like receptor 7,TLR7）要参与单链RNA的识别,在胞内病原体感染中发挥作用。TLR7激动剂能够促进免疫细胞成熟,刺激宿主免疫应答,间接发挥抗病毒作用,还表现出一定的抗菌和抗肿瘤活性。因此,本研究目的在于通过计算机虚拟筛选的方式筛选猪TLR7的潜在激动剂,以期为畜禽免疫增强剂的开发提供研究基础,为动物免疫抑制性疾病的预防或治疗提供新的思路,同时为物种特异性TLR7激动剂的筛选、设计提供依据。材料与方法由于PDB数据库中没有可用的猪TLR7结构,因此通过Swiss-model在线平台进行同源建模,预测其三维结构。配体库选择MCE活性库Specs HTS Compounds Library（包含208 518个化合物）,对受体和配体进行前期处理后,在Schr?dinger软件中进行分子对接,分子对接委托MCE公司完成。根据分子对接的打分排名,保留Top200化合物进行进一步筛选。根据Lipinski规则和配体与受体之间的结合能对Top200化合物进行筛选,保留符合Lipinski规则且结合能为负值的化合物并进行聚类分析,对获得的分子簇进行ADMET性质预测,选择口服吸收率高、毒性小的化合物,分析与受体之间的相互作用,初步获得潜在的猪TLR7激动剂。上述操作在Discovery Studio软件中完成。结果与讨论根据分子对接的打分及排名,保留了Top 200的化合物,其中符合Lipinski规则且结合能<0的化合物共有107个。对上述107个化合物进行聚类,得到10个小分子。对这10个化合物进ADMET性质预测,发现这些化合物的吸收率均在95%以上,其中3个化合物的血脑屏障通透性较好,3个化合物可能具有细胞色素CYP26D酶抑制作用,4个化合物可能具有肝毒性。选择吸收率高、毒性低的6个化合物,分析其与受体之间的相互作用方式。受体的GLN 354、VAL 355、PHE 408、LEU 558*、THR 587*、IEL 586、HIS 559*、LYS 432、PHE 408、LEU 558*、TYR 356、TYR351等氨基酸残基参与相互作用（*表示TLR7同源二聚体的B链）,与配体之间主要通过氢键、范德华力以及疏水相互作用等非键相互作用结合。结论基于分子对接虚拟筛选技术,对化合物进行筛选和ADMET性质预测,初步获得6个口服吸收率高、毒性小的化合物,可能是潜在的猪TLR7激动剂。

关键词：虚拟筛选分子对接猪TLR7 激动剂免疫增强剂

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中国鸡源沙门氏菌中喹诺酮类耐药基因qnr的分布和遗传特征分析

中国鸡源沙门氏菌中喹诺酮类耐药基因qnr的分布和遗传特征分析

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：陈杨刘理慧郭雅丽储锦华王邦娟隋雨欣程古月华中农业大学农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(武汉) 华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品兽药残留检测重点实验室

引言质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr在肠杆菌科的流行和传播已引起全世界的广泛关注。qnr基因不仅会导致细菌对喹诺酮类药物敏感性下降,还有利于细菌选择出更高水平的耐药突变。到目前为止,尚无我国大规模关于鸡源沙门氏菌中qnr基因的... 详细信息

引言质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr在肠杆菌科的流行和传播已引起全世界的广泛关注。qnr基因不仅会导致细菌对喹诺酮类药物敏感性下降,还有利于细菌选择出更高水平的耐药突变。到目前为止,尚无我国大规模关于鸡源沙门氏菌中qnr基因的流行和遗传特征的研究。材料方法我们通过PCR检测2020-2021年分离自中国12个省的养殖场、屠宰场和市场的265株鸡源沙门氏菌中qnr基因的流行情况;通过细菌抗菌药敏感性试验检测56株qnr阳性沙门氏菌的耐药谱;通过接合转移试验检测可发生水平转移qnr阳性菌株;通过全基因组学测序分析47株qnr阳性非克隆株沙门氏菌的分子特征。结果结果表明,qnr基因的总体流行率为21.13%(56/265),不同地区的流行率不同。仅检测到qnrS和qnrB基因,其中qnrS基因的流行率(19.25%,51/265)高于qnrB基因的流行率(1.89%,5/265)。43株(76.79%) qnr阳性的沙门氏菌具有多重耐药性,超过70%的菌株对四环素、复方新诺明和氟苯尼考具有耐药性。在47个非克隆菌株中,London (n=9,19.15%)、Agona和Kentucky (n=8,17.02%)是最普遍的血清型;ST 115 (n=9,19.15%)、ST 13和ST 198 (n=8,17.02%)是最普遍的MLST型;Col440I (34.04%,16/47)、IncHI2和IncHI2A (19.14%,9/47)是最普遍的质粒复制子。IncHI2和IncHI2A复制子可能含有相对较高的抗生素和重金属抗性基因。10株沙门氏菌可以发生接合转移,其中有4株含有IncHI2和IncHI2A复制子。此外,在43个qnrS1阳性菌株、1个qnrS2阳性菌株和3个qnrB6菌株中分别发现了6个、1个和2个不同的遗传环境。其中qnrS1基因的遗传环境与ISKpn19密切相关,与分离源无关。讨论总体来说,中国鸡源沙门氏菌中qnr的流行以qnrS型为主,qnr阳性沙门氏菌多呈多重耐药性,与其携带的多种抗性基因有关,且部分携带qnr基因的质粒可以发生转移,因此需要对qnr阳性沙门氏菌进行持续监测,并制定相关措施控制其流行和传播。

关键词： qnr基因沙门氏菌氟喹诺酮耐药性鸡生产链

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