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淫羊藿多糖抑制小鼠卵泡细胞凋亡

淫羊藿多糖抑制小鼠卵泡细胞凋亡

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：张越芮荣南京农业大学动物医学院

目的:卵泡由居于核心的卵母细胞及周围的颗粒细胞和卵泡膜组成,卵泡是卵巢的基本功能单位,兼有内分泌(产生类固醇类激素,如孕酮、雌激素等)和外分泌(产生卵子)功能。淫羊藿多糖(Epimedium Polysaccharides,EPS)是中药淫羊藿的主要活性... 详细信息

目的:卵泡由居于核心的卵母细胞及周围的颗粒细胞和卵泡膜组成,卵泡是卵巢的基本功能单位,兼有内分泌(产生类固醇类激素,如孕酮、雌激素等)和外分泌(产生卵子)功能。淫羊藿多糖(Epimedium Polysaccharides,EPS)是中药淫羊藿的主要活性成分之一,本试验旨在研究淫羊藿多糖对小鼠卵泡细胞凋亡的作用,以期了解淫羊藿多糖影响卵泡发育的机理,为哺乳动物卵泡发育调控与传统中药的开发利用提供实验参考。材料与方法:6周龄健康雌性小鼠随机分为3组,2个试验组每天分别灌服0.1 mL(6和8 mg)EPS,对照组小鼠每天灌服0.1 mL生理盐水,连续灌服7 d,称量各组小鼠体重和相关内脏质量,计算体增重和内脏指数;分离并收集各组小鼠卵巢卵泡细胞,流式细胞仪检测各组卵泡细胞凋亡率,并检测凋亡基因(Bax)和抗凋亡基因(Bcl-2)mRNA表达。结果:(1)淫羊藿多糖各组小鼠灌药后体重和体增重与对照组相比无统计学差异,试验组小鼠的内脏器官指数与对照组相比也无显著差异,表明淫羊藿多糖对小鼠体增重及内脏器官指数无明显影响;(2)与对照组相比,淫羊藿多糖处理组卵泡细胞早期凋亡率均显著下降,8 mg淫羊藿多糖组卵泡细胞晚期凋亡率却显著增高;灌服淫羊藿多糖试验组小鼠卵泡细胞总凋亡率较对照组均有所降低,灌服6 mg淫羊藿多糖组的总凋亡率较对照组有显著下降(P<0.05);(3)RT-PCR检测表明,试验组卵泡细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax比值均较对照组升高,其中6 mg组卵泡细胞Bcl-2/Bax基因相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。结论:连续7 d灌服0.1 mL(6 mg)淫羊藿多糖可明显抑制小鼠卵巢卵泡细胞凋亡,这一作用与其对Bcl-2/Bax基因表达的影响有关。

关键词：小鼠淫羊藿多糖卵泡细胞凋亡

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Plk1 inhibition leads to a failure of mitotic division during the first mitosis in pig embryos

Plk1 inhibition leads to a failure of mitotic division durin...

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：张子霄 Changchao Chen Panpan Cui Yaya Liao Yue Zhang Lingyun Yao Rong Rui 剧世强 College of Veterinary Medicine Nanjing Agricultural University

Materials and Methods:This study was conducted to investigate the dynamic distribution and possible roles of Polo-like 1 kinase(Plk1)during the first mitosis process in early porcine embryo *** immunofluorescence and confocal microscopic imaging technique combined with western blot were used to study the dynamic expression and subcellular localization of the Plk1 ***,a selective Plk1 inhibitor GSK461364 was used to evaluate the potential roles of Plk1 during this special

关键词： GSK Plk1 inhibition leads to a failure of mitotic division during the first mitosis in pig embryos

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Phosphorylation of H3S10 is essential for chromosome condensation in porcine embryos during the first mitotic division

Phosphorylation of H3S10 is essential for chromosome condens...

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：陈长超 Zixiao Zhang Panpan Cui Yaya Liao Yue Zhang Lingyun Yao Rong Rui 剧世强 College of Veterinary Medicine Nanjing Agricultural University

Materials and Methods:In this study,the subcellular localization and possible roles of H3S10ph were evaluated in the first mitotic cell cycle progression of porcine embryos using western blot,indirect immunofluorescence and barasertib(H3S10ph upstream regulator Aurora-B inhibitor)***:H3S10ph exhibited a dynamic localization pattern and was localized to chromosomes from

关键词： Phosphorylation of H3S10 is essential for chromosome condensation in porcine embryos during the first mitotic division cycle

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某规模化猪场母猪淘汰情况调查与原因分析

某规模化猪场母猪淘汰情况调查与原因分析

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：吴先潮申艳辉冷博瑾周之龙刘森林黎文娟袁安文湖南农业大学动物医学院

主动淘汰母猪可维持母猪群合理的胎次结构、保证母猪群高产、稳产,提高猪场经济效益;母猪被动淘汰率过高将影响猪场生产的稳定,增加养殖成本。为探明影响广东省某规模化猪场母猪繁殖寿命原因,我们采用临床观察、实地跟踪记录和数据记录... 详细信息

主动淘汰母猪可维持母猪群合理的胎次结构、保证母猪群高产、稳产,提高猪场经济效益;母猪被动淘汰率过高将影响猪场生产的稳定,增加养殖成本。为探明影响广东省某规模化猪场母猪繁殖寿命原因,我们采用临床观察、实地跟踪记录和数据记录系统数据等进行调查分与析,结果如下:2015年5月至2016年2月,该场母猪月均存栏1350头,其间共淘汰母猪485头,猪场淘汰率为35.93%。由于该场建场不足3年,该场母猪主动淘汰率为0,被动淘汰率为100%。不同月份中母猪淘汰头数有所不同,而10月份淘汰的母猪数最多,比例为4.87%;12月份母猪淘汰数次之,比例为4.52%;2月份淘汰母猪数最少,比例为2.41%。在各淘汰原因中,因繁殖障碍、子宫内膜炎、肢蹄病、死亡和其他原因淘汰的比例分别为:25.57%、42.47%、7.01%、19.67%和5.98%;因子宫内膜炎和繁殖障碍淘汰的母猪比例为68.04%,占淘汰母猪总数的一半以上,为该场母猪淘汰的主要原因;而子宫内膜炎为该场母猪淘汰的最主要原因。在各胎次淘汰的母猪中,以3胎和4胎母猪淘汰的比例最大,占到母猪淘汰总数的55.06%,超过半数以上;其中3胎母猪淘汰最多,占31.55%。5胎母猪淘汰的最少,仅占6.80%。在母猪死亡情况调查中,因急性胃肠胀气、产后高烧、难产及子宫脱、消化道出血、长期不食和其他原因死亡的母猪,占母猪死亡总数的比例分别为28.26%、15.22%、30.43%、5.43%、14.04%和7.61%;母猪因难产及子宫脱死亡比例最高,急性胃肠胀气次之。通过调查与分析后发现,该场全年无重大疫情发生,影响母猪淘汰的因素主要为非传染性因素;该场母猪淘汰率为35.93%,均为被动淘汰,淘汰率偏高;母猪子宫内膜炎和繁殖障碍为影响该场母猪淘汰的主要原因;因此,做好母猪子宫内膜炎和繁殖障碍的防治工作,对提高该场母猪繁殖寿命具有重要意义。

关键词：规模猪场母猪淘汰

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小鼠冻胚移植后代及其子代的部分生物学特性分析

小鼠冻胚移植后代及其子代的部分生物学特性分析

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：徐伟超顾剑洁葛蓉刘丽均徐平芮荣南京农业大学动物医学院中科院上海实验动物中心

目的:以C57BL/6J（B6）小鼠作为研究对象,对胚胎冷冻-解冻移植后所获小鼠及其后代（子一代）的部分生物学特性与正常繁育的小鼠进行比较,旨在探讨胚胎冷冻对C57BL/6J小鼠冷冻胚胎移植后代及其子代的体重增长和血液生化等部分生物学指标... 详细信息

目的:以C57BL/6J（B6）小鼠作为研究对象,对胚胎冷冻-解冻移植后所获小鼠及其后代（子一代）的部分生物学特性与正常繁育的小鼠进行比较,旨在探讨胚胎冷冻对C57BL/6J小鼠冷冻胚胎移植后代及其子代的体重增长和血液生化等部分生物学指标的影响。方法:试验分为3组,试验组Ⅰ为冷冻-解冻胚胎移植组,B6小鼠体外受精所获2细胞胚胎,采用EFS法冷冻保存,解冻后移植到受体ICR小鼠输卵管内,得到冷冻胚胎后代包括30只雄鼠,20只雌鼠;试验组Ⅱ为冻胚移植所得的小鼠成熟后经自然交配得到的子一代,包括26只雄鼠和17只雌鼠;对照组为正常饲养和自然交配所得的子代,雌雄小鼠各20只。3组小鼠均养至16周龄,每周定时测定体重;至16周龄时采血,测定各组小鼠血清生化值,并进行分析比较。结果:冻胚移植所获小鼠（试验组Ⅰ）初生重和1～16 w平均体重均显著高于对照组（P<0.01）;而其后代（试验组Ⅱ）小鼠则有所不同,其中雄鼠除12～14周龄外,其他周龄均与对照组无显著差异,雌鼠9周龄与11周龄体重显著高于对照组（P<0.05）,12～16周龄极显著高于对照组（P<0.01）。试验组Ⅰ小鼠除AST、TP、Ca和TG等项目与对照组无显著差异外,其余项目均发生了显著或极显著的上调或下调。试验组Ⅱ小鼠仅AST、TP和Ca与对照组无显著差异,其余项目与对照组相比均发生显著或极显著上调或下调。结论:冷冻对胚胎移植所得个体及其子代的体重增长和血清生化均有一定的影响。

关键词：小鼠胚胎冷冻保存体重血清生化指标

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Xbp1对小鼠颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的调控作用

Xbp1对小鼠颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的调控作用

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：王楠赵璠靳亚平西北农林科技大学动物医学院

目的:卵泡的发育和闭锁是卵泡发生过程中的两个重要生理现象,对维持卵巢正常的生理功能起到至关重要的作用。卵泡的生长发育包括卵泡中颗粒细胞的增殖、分化和周期控制。而卵泡闭锁则起始于颗粒细胞的凋亡,颗粒细胞的凋亡最终导致卵泡... 详细信息

目的:卵泡的发育和闭锁是卵泡发生过程中的两个重要生理现象,对维持卵巢正常的生理功能起到至关重要的作用。卵泡的生长发育包括卵泡中颗粒细胞的增殖、分化和周期控制。而卵泡闭锁则起始于颗粒细胞的凋亡,颗粒细胞的凋亡最终导致卵泡的闭锁。同时,颗粒细胞产生的类固醇激素等,对卵泡的生长发育也起着重要作用。而现阶段越来越多的研究结果表明内质网应激在卵泡生长发育闭锁过程中有一定的作用,但具体机制还不很清楚。X盒结合蛋白(XBP1)是非折叠蛋白应答途径(unfolded protein response,UPR)信号途径的重要调节因子,广泛参与细胞分化、增殖、凋亡等多种信号途径。研究XBP1对小鼠颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌作用具有重要意义。材料与方法:本研究对小鼠卵巢颗粒细胞在体外进行了分离培养,通过免疫组化、RNA干扰、western blot、荧光定量PCR、ELISA、流式细胞术和免疫荧光等技术对XBP1在小鼠颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的作用进行了研究。结果:本部分实验成功构建了shRNA慢病毒干扰载体,并且筛选出最佳干扰质粒,为了鉴定其干扰效果,小鼠颗粒细胞经慢病毒转导后,测定其干扰效率在80%左右。结果显示XBP1干扰后颗粒细胞雌激素的分泌显著下降。通过检测相关基因的表达发现,芳香化酶基因Cyp19a1表达显著降低。同时,XBP1干扰后通过抑制cyclinA1、cyclin B1的表达阻滞细胞周期。但是,在正常体外培养条件下,细胞凋亡率没有显著变化。结论:本研究的结果表明XBP1通过对颗粒细胞的生长及相关基因的调控而影响颗粒细胞雌激素的分泌,阻滞细胞周期,对小鼠颗粒细胞起到重要作用,为进一步研究卵泡发育及排卵提供了理论依据。

关键词：颗粒细胞 XBP1 RNA干扰

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程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎Hba-α蛋白分布和差异表达的研究

程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎Hba-α蛋白分布和差异...

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：刘迪倪和民顾美超王力红盛熙晖齐晓龙王相国郭勇北京农学院动物科学技术学院/兽医学(中医药)北京市重点实验室

据报道,生存在南极零度以下极寒环境中的抗冻鱼(notothenioid fish),其血细胞数量显著减少,Hb的含量也明显降低。绝大多数南极抗冻鱼的Hb为单体形式,而不是脊椎动物Hb通常的四聚体结构,这暗示了低浓度的Hba-α本身可能具有一定的抗冻功... 详细信息

据报道,生存在南极零度以下极寒环境中的抗冻鱼(notothenioid fish),其血细胞数量显著减少,Hb的含量也明显降低。绝大多数南极抗冻鱼的Hb为单体形式,而不是脊椎动物Hb通常的四聚体结构,这暗示了低浓度的Hba-α本身可能具有一定的抗冻功能。本实验选用10～12周龄性成熟,体重为28 g左右的ICR系雌性小鼠,利用超数排卵法,于见栓d5上午8点从子宫中回收正常孵化囊胚,并通过构建小鼠延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎。分别对程序化冷冻前后的2种胚胎进行confocal和WesternBlot检测,分析Hba-α蛋白在各组胚胎上的分布和表达情况。confocal结果表明,在程序化冷冻前后的小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中均存在Hba-α蛋白的分布表达,充分表明Hba-α在早期胚胎发育过程中具有重要作用。Western blot分析结果显示,程序化冷冻前后正常孵化囊胚Hba-α蛋白的表达变化差异不显著,说明对于正常孵化并即将进入着床窗口期的小鼠胚胎,低温刺激对其Hba-α蛋白的表达调控并未产生实质性的影响。冷冻前小鼠休眠胚胎与程序化冷冻前后的正常孵化囊胚相比,其Hba-α蛋白表达量均显著下调,表明低水平Hba-α蛋白含量可能有利于休眠胚胎抵御冷冻打击。冷冻后休眠胚胎的Hba-α蛋白表达量显著低于其他各组,表明处于休眠状态的胚胎时刻关注自身所处环境的变化,即便是微小的改变都会使其内部调节机制迅速做出相应的反应。本研究表明,Hba-α基因对于胚胎在冷冻刺激下发生的自身调控具有不可忽视的作用。胚胎Hba-α蛋白的下调可能在一定范围内增强胚胎的抗冻性,这一作用的具体机制尚不清楚,需在下一步的探究实验中加以分析和阐明。

关键词：小鼠正常孵化囊胚休眠胚胎程序化冷冻 Hba-α蛋白

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β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫的表达研究

β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫的表达研究

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：刘晓慧齐晓龙常迪盛熙晖王相国倪和民郭勇李秋明北京农学院动物科学技术学院

β-catenin作为一种黏附分子,1980年由德国细胞生物学家Walt Birchmeier最先发现。已有研究表明,β-catenin上调表达能够增强细胞与细胞之间的黏附作用,使细胞不易发生侵袭和转移。对小鼠子宫组织中β-catenin的表达、分布情况已有研究... 详细信息

β-catenin作为一种黏附分子,1980年由德国细胞生物学家Walt Birchmeier最先发现。已有研究表明,β-catenin上调表达能够增强细胞与细胞之间的黏附作用,使细胞不易发生侵袭和转移。对小鼠子宫组织中β-catenin的表达、分布情况已有研究,但针对反刍动物子宫组织中β-catenin在转录水平表达的研究未见报道。本试验选用1～2岁身体健康、生产性能良好、体重相近的乌珠穆沁母羊30只作为研究对象,采用同期发情法,母羊发情当天记为0天,并在发情后的第10、12、14、16、18天分别收集相应着床部位的子宫组织,提取子宫内膜组织中的总RNA,对各时期样品中β-catenin mRNA的表达情况进行荧光定量PCR及半定量PCR检测。2种检测结果均显示β-cateninmRNA的表达量在发情后10～18天呈现先减少后增加的波动趋势。不同时期子宫β-catenin mRNA在10～18天呈现先减少后增加的波动趋势,其中第10天β-catenin mRNA的表达量最大,显著高于其他4个时间点,第12天显著降低,之后相对保持恒定,到第18天又显著升高,该变化与绵羊发情过程中体内孕激素的浓度变化相一致,β-catenin mRNA的表达量在第10天最高,第12天开始显著降低,随后表达量出现下降的趋势。在发情过程中,孕酮分泌水平在发情周期的最后会出现一个峰值,结果中从第16天开始到第18天β-catenin mRNA表达量显著升高,这与孕酮变化相协调。本研究表明,β-catenin在人工诱导发情绵羊子宫组织中呈现先减少然后增加的波动变化趋势,同时也证实了β-catenin在周期发情绵羊子宫中的表达可能受孕酮诱导调控这一猜想。

关键词：绵羊 β-catenin 子宫荧光实时定量PCR 半定量PCR

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转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)及其药效学研究

转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)及其药效学研...

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中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：成勇陆睿宋绍征陈思姜磊何正义徐晟扬州大学兽医学院

自上世纪以来,血栓性疾病一直是危害人类健康和生命安全的头号因素,溶栓疗法是目前临床上使用最广泛而有效的一种治疗方法,而且溶栓药物已经历了三代发展。重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是一种丝氨酸蛋白酶,能够高效特异地溶解血栓,属的... 详细信息

自上世纪以来,血栓性疾病一直是危害人类健康和生命安全的头号因素,溶栓疗法是目前临床上使用最广泛而有效的一种治疗方法,而且溶栓药物已经历了三代发展。重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是一种丝氨酸蛋白酶,能够高效特异地溶解血栓,属的第三代溶栓药物。本研究构建了rhPA乳腺特异性表达载体,应用到转基因兔制备一种新颖、高效的溶栓药物。相关研究方法和结果如下:在获得rhPA表达兔(1mg/mL)以上的基础上,应用3株自制的高效价小鼠单克隆抗体制备亲和层析柱。通过离心脱脂、饱和硫酸铵沉淀、超滤及透析等兔乳前处理,获得粗纯品。将C4株抗体与CNBr activated Bestarose 4FF偶联来制备免疫亲和层析柱。0.75mol/L硫酸铵斗40%丙二醇的TE缓冲液(pH7.9)洗脱获得半纯品。Sephedex75凝胶过滤纯化目标蛋白,获得纯度96%-99%rhPA。与阿替普酶对照品相比,圆二色谱分析显示,该纯化产物与阿替普酶有相似的二级结构;FAPA测定纯化产物rhPA的体外溶栓比活性,其值高达约214倍,远远高于阿替普酶溶栓药。纯品经去内毒素处理后,分别以0.3mL/只小鼠腹腔注射角叉菜胶诱导的尾部血栓小鼠,结果显示以不同的"给药"浓度0.1mg/只剂量组、0.4mg/只剂量组、1.6mg/只剂量组及阿替普酶、生理盐水对照组对小鼠进行溶栓试验,结果显示rhPA各剂量组能有效消除小鼠尾部血栓。结果表明,转基因兔表达产物rhPA能够能够从兔奶中分离纯化出来;纯化产物具有高回收率、高纯度、高生物活性,体内外溶栓试验显示rhPA具有较阿替普酶更好的疗效。同时表明已经建立一套比较完备的转基因动物制药下游技术体,这在国内外尚未见报道,为以后大量生产新型溶栓药物提供了新的思路,也为后期进一步临床试验奠定了基础。

关键词：血栓 t-PA 乳腺上皮细胞转基因兔比活性 PR-mAb 纯化

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牦牛β-casein 5'UTR侧翼序列启动子序列分析

牦牛β-casein 5'UTR侧翼序列启动子序列分析

引用

中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会

作者：贡继尚张全伟马友记张勇赵兴绪甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃农业大学生命科学技术学院

为了研究牦牛β-casein 5'侧翼序列启动子区域功能的研究,通过利用RepeatMasker version、CENSOR software和Regulatory Sequence Analysis Tools(RSAT)等生物信息学软件对牦牛β-casein启动子区域进行了分析,根据NCBI提供的基因登... 详细信息

为了研究牦牛β-casein 5'侧翼序列启动子区域功能的研究,通过利用RepeatMasker version、CENSOR software和Regulatory Sequence Analysis Tools(RSAT)等生物信息学软件对牦牛β-casein启动子区域进行了分析,根据NCBI提供的基因登陆号牦牛β-casein GenBank accession ***005394461与牛β-casein GenBank accession ***559864.1进行了比对,发现牦牛β-casein转录起始点位于基因组145,965bp处;序列区域内重复序列包含多个long interspersed nuclear element(LINE)和short interspersed nuclear element(SINE),包含已知的调控位点有AP 1,C/EBP,CTF/NF1,CTF/NF1 half,GR half,MGF,DS1&SS,PMF,PRL和YY1等位点;主要的特异转录因子结合位点包含SOX/SRY-sex/testis determinig and related HMG box factors(SORY),Homeodomain transcription factors(HOMF),Brn POU domain factors(BRNF)和Paraloghox genes 1-8 from the four hox clusters A,B,C,D(HOXF),Lim homeodomain factors(LHXF),Homeobox transcription factors(HBOX),for Octamer binding protein(OCT1)和Cart-1(cartilage homeoprotein 1)(CART);对于能特异结合乳腺组织的转录因子位点包含human and murine ETS1 factors(ETSF),fork head domain factors(FKHD),STAT,glucocorticoid responsive and related elements(GREF),Brachyury gene,mesoderm developmental factor(BRAC),Twist subfamily of class B bHLH transcription factors(HAND)和estrogen response elements(EREF)。通过MEME软件分析牦牛和其他六种不同物种的β-casein启动子近端区域,发现具有三个位点高度保守,并且三个位点包含DS1&SS,CTF/NF1,CTF/NF1-half和GR-half等转录因子位点。这些转录因子在哺乳期可能对调节酪蛋白基因表达发挥促进或者抑制作用从而进行一系列的精密调控。关于酪蛋白基因上游富集位点的作用研究相对匮乏,他们作为进一步评估奶蛋白基因表达的作用起到一个重要的信息来源的。近端启动子在不同物种的比较分析显示在反刍动物物种中高度保守,但是在骆驼β-casein上游区域(14 bp--195 bp)之间有一段区别于其他物种的插入序列,表明物种形成过程中发生适应性变化。

关键词：启动子序列 casein 5'UTR 侧翼序列

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